鸡胚原始生殖细胞的分离和鸡鸭嵌合体的制备研究

探索了 12～ 17期鸡胚血液中的原始生殖细胞 (PGCs)迁移数量变化规律 ,将其在液氮中冷冻保存。并以Fi coll密度梯度离心、MiniMACS磁气分离、滤膜 3种方法对PGCs进行分离 ,结果发现 ,12～ 17期血液中均有PGCs存在 ,13期达到高峰 (4 7 1± 10 5 )个·μL-1,在血液中比例为 0 0 12 6 %。冷冻保存 3个月后解冻成活率达 80 %以上。3种分离方法所得的分离效果分别为 95 7%、39 2 %、6 3 0 % ;纯度为 2 7 5 %、8 4%、3 1%。将分离的原始生殖细胞以微注射法转移至 14～ 15期麻鸭胚胎中制备了鸡鸭种间嵌合体 ,获得 8只雏鸭 (8/ 110 )。以鸡W特异性DNA探针原位杂交法在早期鸭胚性腺中检测到鸡原始生殖细胞 ,嵌合率达 84 2 % (16 / 19)。表明鸡原始生殖细胞能够迁移定居到鸭胚性腺中 。

鸡胚原始生殖细胞的分离和鸡鸭嵌和体的制备

探索了鸡胚 12～ 17期血液中的原始生殖细胞 (PGCs)迁移数量变化规律 ,将其在液氮中冷冻保存。并以Ficoll密度梯度离心、MiniMACS磁气分离、滤膜三种方法对PGCs进行分离 ,结果发现 12～ 17期血液中均有PGCs存在 ,13期达到高峰约 4 7 1± 10 5个 /μl,在血液中比例为 0 0 12 6 %。冷冻保存 3个月后解冻成活率达 80 %以上。三种分离方法所得的分离效果分别为 95 7%、39 2 %、6 3 0 % ,纯度为2 7 5 %、8 4 %、3 1%。将分离的原始生殖细胞以微注射法转移至 14～ 15期麻鸭胚胎中制备了鸡鸭种间嵌和体 ,获得 8只雏鸭 (8/110 )。以鸡W染色体探针原位杂交法在早期鸭胚性腺中检测到鸡原始生殖细胞 ,嵌和率达 84 2 % (16 /19)。表明鸡原始生殖细胞能够迁移定居到鸭胚性腺中 ,并有可能增殖分化成有功能的配子。