轮状病毒NASBA检测研究

轮状病毒是世界范围内流行性胃肠炎暴发的重要病因。以患者粪便为样抽提轮状病毒RNA,在轮状病毒VP7高保守基因区段上设计引物,运用核酸序列依赖的扩增(NASBA)法进行检测,变性琼脂糖凝胶电泳和Northern杂交验证。NASBA预期的特异性产物为392bp,并在仅以目标核酸为模板或在浓度高达1μg/μL的非特异性核酸存在的混合模板中,均有清晰的目标带产生,表现出了很高的特异性。其灵敏度和RT-PCR相同甚至更高,可检测到50pg的核酸,并且当反应时间为3h时检测灵敏度最高。NASBA法扩增效率高、灵敏度高、快速易操作,尤其适用在基层单位推广应用。

利用NASBA技术检测草莓斑驳病毒

依赖核酸序列的扩增(Nucleic acid sequence based amplification,NASBA)技术是以cDNA为中介体在等温条件下直接扩增单链RNA特异序列的核酸扩增技术,研究探索利用NASBA技术检测草莓斑驳病毒(Strawberry mottle virus,SMoV)。在对14个SMoV分离物序列分析的基础上,设计和筛选出适于SMoV检测的NASBA引物。NASBA检测SMoV的适宜反应温度为40℃。在9份草莓样品上检测SMoV的结果显示,NASBA检测结果与RT-PCR的检测结果一致,这表明初步建立了利用NASBA技术检测SMoV的技术体系。这是利用NASBA检测SMoV的首次报道。

一种基于NASBA技术的新型快速肠道病毒检测方法的应用研究

目的:基于核酸等温扩增技术(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)荧光分子信标探针检测技术,进行肠道病毒的快速检测与辅助诊断。方法:根据Genebank上肠道病毒5′端非编码区序列,设计特异性引物与捕获探针,应用纳米技术对商品化磁珠进行偶联,NASBA方法进行扩增,NucliSens读数仪检测,荧光定量RT-PCR方法进行验证,同时验证NASBA方法的特异性、灵敏度和重复性。结果:该方法对肠道病毒具有高度特异性,与RSV等呼吸道相关病毒均无交叉反应,反应体系具有很高的稳定性。结论:本研究应用的肠道病毒NASBA检测方法特异、灵敏、快速简便,适用于肠道病毒的日常监测和爆发疫情的应急诊断。

应用NASBA定量检测HCV RNA的研究进展

NASBA(nucleicacidsequence basedamplification)即核酸序列依赖性扩增法 ,是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异性核苷酸序列等温扩增的RNA新技术。反应在 42℃进行 ,可在 2h内将RNA模板扩增约 10 9倍。

NASBA快速检测禽流感H5亚型病毒

采用建立的依赖核酸序列的扩增(Nucleicacidsequencebasedamplification,NASBA)对禽流感病毒3株H5亚型、1株H1、H3、H6亚型、3株禽流感H9亚型、5株不同宿主来源的新城疫病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、SPF鸡胚尿囊液及禽流感(H9)疫苗、新城疫疫苗、传染性法氏囊病疫苗、传染性支气管炎疫苗进行检测,结果NASBA(H5试剂)仅检测到禽流感病毒H5亚型,表明方法的特异性强。采用已知禽流感病毒A/Chicken/HK/1000/97(H5N1)的鸡胚尿囊液(ELD5010-7.5/mL),经10倍连续稀释,将经典的鸡胚病原分离法和NASBA进行比较,二种方法的灵敏度相当。用A/Chicken/HK/1000/97(H5N1)病毒人工感染SPF鸡、商品鸡,采用NASBA和病原分离法同时对人工感染鸡的粪拭子、血液进行了动态检测;采集感染死亡鸡的组织脏器,共检测了101个组织脏器,两种方法的符合率为90%(87/97)。

猪传染性胃肠炎病毒NASBA检测方法的建立

为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)NASBA的检测方法,本研究利用BioEdit和BlastN,根据GenBank中猪TGEV的S基因保守序列设计引物,建立了扩增TGEV的NASBA检测技术。利用该方法建立的反应体系在41℃反应2h即可得到有效扩增。实验结果表明:该方法对TGEV进行扩增获得约200bp特异性目的条带,而对CSFV、PRRSV、PCV-2、PPV、PEDV和ST细胞扩增结果均为阴性。NASBA的灵敏度高于普通RT-PCR,与病毒分离方法相当,可检测到5pg的核酸。该方法为TGEV的早期诊断提供了新途径。

核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)概述

随着分子牛物学技术的快速发展,体外核酸扩增技术己逐步应用于科研和临床.最近几年才兴起的核酸序列依赖性扩增法(Nuleic and sequerce based amplipicain,NASBA)同传统的实验方法相比有灵敏性高,特异性强,快速,高通量等优点,而倍受中外学者的青睐.本文就NASBA方法作一综述.……

鸭病毒性肝炎病毒NASBA检测方法的建立

为了建立对鸭病毒性肝炎的检测方法,快速诊断DHV,本研究建立了DHV的NASBA检测方法并加以验证,实验结果表明该方法具有特异性、敏感性可重复性,该方法为鸭病毒性肝炎的诊断提供技术支持。

NASBA-ELISA检测曲霉菌方法的建立及在侵袭性曲霉病诊断中的应用评价

目的:建立基于核酸序列依赖扩增的酶联免疫(enzyme-linked immunosorbent assay of nucleic acid sequence-based amplification,NASBA-ELISA)法用于侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis,IA)的诊断,并评价其诊断价值。方法:将核酸序列依赖扩增技术(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)方法和高灵敏度的地高辛检测系统相结合,采用地高辛标记NASBA恒温扩增曲霉菌特异性18s RNA基因片段,用生物素标记的DNA探针在链酶亲和素包被的微孔板孔中杂交捕获地高辛标记的NASBA扩增产物,最后加入碱性磷酸酶标记的地高辛抗体和底物进行酶标显色,应用此法分别对梯度数量的曲霉菌孢子和其他临床常见菌株进行检测以评价其灵敏度和特异度,并通过对82例临床标本(32例阳性,50例阴性)的检测分析其临床诊断效能。结果:将含有梯度数量的曲霉菌孢子的样本提取总RNA后进行NASBA-ELISA检测,结果表明光密度值与霉菌孢子量对数存在线性相关关系(y=0.278x+0.119,R2=0.887),该方法的灵敏度可达1个孢子;对照菌株(大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和新型隐球菌)和曲霉菌提取RNA后进行检测,结果仅曲霉菌的吸光度(absorbance,A)值大于设定的阈值(6个随机阴性标本的平均A值+3倍标准差)呈阳性;对82例临床标本进行NASBA-ELISA检测,其敏感度和特异度分别为80.6%、80.0%,受试者工作特征曲线曲线下面积为0.759(95%CI=0.644~0.874)。结论:NASBA-ELISA方法检测曲霉菌具有敏感性高、特异性强、操作简便的特点,适合常规实验室开展,为侵袭性曲霉病的早期诊断提供了一条新方法。

NASBA技术研究进展

NASBA （Nucleic acid sequence-based amplifi-cation） 技术是由加拿大Cangen公司于1991年提出的一种核酸序列依赖扩增技术，该技术是由一对特异的引物介导的、三种酶催化的以单链RNA为模板的恒温扩增技术，具有操作简单、特异性强、灵敏度高、不易被污染等优点，

NASBA——一种新型禽流感病毒检测方法

NASBA(nucleic acid sequence-based amplification)是一项持续等温的核酸扩增技术,特别适合于以RNA为模版的扩增,与其它常用禽流感病毒检测方法(病毒培养法、免疫学方法和PCR)相比,具有灵敏度高、特异性强、操作简便等特点。就NASBA的操作原理及其在禽流感病毒检测中的成功应用进行综述。NASBA不仅成为禽流感病毒检测的有力工具,而且对于其它恶性传染病的监测、检测同样具有重要价值和意义。

bDNA和NASBA法定量检测HIV-1病毒载量的比较研究

目的比较分支DNA杂交实验(branched DNA,bDNA)和核酸序列扩增实验(Nucleic acid sequence-based am-plification,NASBA)两种方法检测人类免疫缺陷病毒1型病毒(HIV-1)病毒载量间的一致性。方法对25例HIV感染者/艾滋病(Acquired immune deficiency syndrome,AIDS)患者血浆标本同时用bDNA法和NASBA法检测HIV-1病毒载量,并用流式细胞术检测患者外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞。结果bDNA法及NASBA法测得HIV-1病毒载量平均值分别为(4.398±0.580)log拷贝数/ml和(4.488±0.602)log拷贝数/ml,差异无统计学意义(t=1.210,P>0.05);两种方法检测出的病毒载量呈显著直线相关(r=0.8004,P<0.001),且与患者的CD4+T细胞数及CD4+/CD8+比值均呈显著直线负相关。结论bDNA法和NASBA法检测HIV-1病毒载量具有高度一致性,在实际工作中均可选用。

NASBA技术及其在畜禽病毒检测中的应用

NASBA即核酸序列依赖扩增技术,主要用于扩增RNA,是由一对特异性的引物介导的、连续均一的、体外核酸序列等温扩增反应过程。该技术具有操作简便,特异性强,敏感性高,快速,高通量等优点,目前已经广泛应用于人类与动物的多种病毒性疾病的检测,具有良好的应用前景。在禽流感病毒、新城疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、口蹄疫病毒等的检测中均表现出了很高的敏感性和特异性。论文简要介绍了NASBA技术的原理,特点以及在畜禽病毒检测中的应用,旨为病毒检测技术提供新的途径。

NASBA——一种新的核酸扩增方法

1991年Cangene公司首次介绍了一种新的核酸扩增技术NASBA(Nucleic acid seguence-base amplification)。与PCR不同,NASBA是由一对引物指导的、连续均一的、体外特异核苷酸序列等温扩增的酶促反应过程。反应在42℃进行。

应用NASBA技术对献血者血浆/血清进行HCVRNA检测

目的 探讨对献血者混合血浆标本检测HCVRNA的必要性和可行性。方法 每 5 0份血浆混合为一组 ,用NucliSensExtractor提取核酸 ,以NASBA技术扩增HCVRNA和用ECL检测扩增产物。标本贮存 ,核酸提取、扩增、检测过程设立系统对照和阳性对照。结果 在抗 HCVELISA阴性的献血者 10 0 0 0人中发现 2例HCVRNA阳性。结论 用NASBA技术对混合血浆进行HCVRNA检测可有效控制输血后丙型肝炎的发生。

NASBA(核酸序列依赖的扩增)及其在医学上的应用

NASBA（Nucleicacidsequence－basedamplification）即核酸序列依赖的扩增，是一种扩增RAN的新技术，是由一对引物引导的、连续均一的、体外特异核苷酸序列等温扩增的酶促反应过程。反应在42℃进行，可以在2h左右将模板RNA扩增约109倍，不需特殊的仪器。本文就NASBA的原理、特点及实际应用作了介绍。

国境口岸志贺氏菌的NASBA快速检测

目的采用NASBA技术,建立国境口岸志贺氏菌的快速检测方法。方法根据志贺氏菌侵袭性质粒抗原ipa H基因设计引物,进行NASBA检测,并采用人工添加菌株污染样品进行验证。结果 NASBA技术检测志贺氏菌特异性强,能够从污染样品中扩增出391bp的特异性片段,试验中未出现假阳性和假阴性结果,灵敏度高,检出限达到8.2pg/μL总RNA;且检测周期短,NASBA反应在42℃90min即可进行有效扩增,24h即可完成样品中目标菌的筛选。结论因NASBA技术具有特异性强,灵敏度高,检测周期短等优点,不仅适用于国境口岸现场快速检测志贺氏菌,而且随着该技术的不断发展,必将有更为广阔的应用空间。

NASBA荧光分子信标技术定量检测丙型肝炎病毒

建立NASBA荧光分子信标探针检测技术 ,并对国家HCV标准品、人工构建HCVRNA野生株及HCV抗体阳性不同人群进行检测。实验结果 :该方法检测HCV的灵敏度为 1 0 3 拷贝 ml血清 ,阴性参比品的符合率为 1 0 0 %;检测的线性范围为 1 0 3 拷贝～ 1 0 9拷贝 ml血清 ;精密性 (CV值 )小于 6%,在HCV抗体阳性人群中HCVRNA的检出率在 45 %～ 65 %之间。结论 :该方法在HCVRNA临床定量检测中具有良好的灵敏度、特异性、重复性与实用性。

等温条件下序列特异性核酸扩增技术:NASBA

介绍了一种能在等温条件下进行序列特异性核酸体外扩增的技术──ＮＡＳＢＡ（ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＳｐｅｃｉｆｉｃ－ＢａｓｅｄＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）。该技术同时使用ＡＭＶ反转录酶、Ｔ７ＲＮＡ聚合酶及ＲＮａｓｅＨ，在同一个恒定温度下协同作用，使特异的核酸序列得以扩增至１０６～１０８倍。起始的模板可以是ＲＮＡ，也可以是ＤＮＡ，尤其适用于微量ｍＲＮＡ的特异性扩增。本文研究了各种因素对ＮＡＳＢＡ扩增效率的影响，找到了最适反应条件。并成功地从人脐带血总ＲＮＡ中扩增了人Ｔ细胞受体γ链ｍＲＮＡ。