期刊文献+
共找到150,379篇文章
< 1 2 250 >
每页显示 20 50 100
高密度发酵P.pastoris诱导表达egⅡ基因
1
作者 尹慧祥 易国辉 +3 位作者 屠发志 张添元 罗进贤 张爱联 《工业微生物》 CAS CSCD 2011年第2期43-46,共4页
用套叠PCR法扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)的葡聚糖内切酶Ⅱ(egⅡ)基因。扩增基因经EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后克隆进P.pastoris表达载体pPIC9k,获得重组表达质粒pPIC9K-egⅡ。通过电转法将egⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G41... 用套叠PCR法扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)的葡聚糖内切酶Ⅱ(egⅡ)基因。扩增基因经EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后克隆进P.pastoris表达载体pPIC9k,获得重组表达质粒pPIC9K-egⅡ。通过电转法将egⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的转化子作为工程菌。工程菌的发酵在生物反应器中进行,在50 L的发酵罐中加入20 L发酵液。连续24 h补加甘油-PTM4增殖细胞,然后以甲醇为碳源诱导egⅡ基因表达48 h。放罐时生物量为A_(600)=203,重组EGⅡ产量为90 mg/L。表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。 展开更多
关键词 里氏木霉 葡聚糖内切酶 基因表达 p.pastoris 高密度发酵
下载PDF
β-葡聚糖酶杂合基因bglHAM的克隆及在P.pastoris中的表达 被引量:2
2
作者 苏华波 韦宇拓 +2 位作者 黄鲲 赵颖怡 黄日波 《广西大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2002年第1期10-13,共4页
采用 PCR的方法 ,以 Bacillus macerans总 DNA为模板 ,构建出β 1 ,3 1 ,4葡聚糖酶杂合基因bgl HAM,与巴斯德毕赤酵母表达载体 p PIC9K重组 ,得到重组质粒 p PIC9K HAM,电脉冲转化法转化酵母菌 GS1 1 5 ,KM71 .在 MM,MD平板上筛选表型 ,... 采用 PCR的方法 ,以 Bacillus macerans总 DNA为模板 ,构建出β 1 ,3 1 ,4葡聚糖酶杂合基因bgl HAM,与巴斯德毕赤酵母表达载体 p PIC9K重组 ,得到重组质粒 p PIC9K HAM,电脉冲转化法转化酵母菌 GS1 1 5 ,KM71 .在 MM,MD平板上筛选表型 ,YPD G41 8平板上筛选多拷贝重组子 .重组菌株经甲醇诱导后 ,刚果红平板染色法检测到β葡聚糖酶活性 ,SDS PAGE证明表达产物的分子量约为 2 4k D,摇瓶诱导培养筛选到的重组菌株 ,胞外每 m L发酵液最高酶活达 2 40 U. 展开更多
关键词 bglHAM p.pastoris β-1 3-1 4葡聚糖酶 巴斯德毕赤酵母 杂合基因 基因克降 基因表达 PCR扩增
下载PDF
高密度发酵P.pastoris诱导表达葡聚糖外切酶 被引量:1
3
作者 杨穗珊 易国辉 +3 位作者 屠发志 张添元 罗进贤 张爱联 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期64-66,共3页
目的:应用P.pastoris的pAOX1表达系统表达CBHⅡ酶。方法:PCR法扩增木霉的cbhⅡ基因。将其克隆进P.pastoris表达载体pPIC9k,电转法将其cbhⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的克隆为工程菌。重组CBHⅡ酶的生产是在50 L生物反... 目的:应用P.pastoris的pAOX1表达系统表达CBHⅡ酶。方法:PCR法扩增木霉的cbhⅡ基因。将其克隆进P.pastoris表达载体pPIC9k,电转法将其cbhⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的克隆为工程菌。重组CBHⅡ酶的生产是在50 L生物反应器中进行。连续24h补加甘油-PTM4增殖细胞,然后用甲醇诱导表达64h。结果:放罐时生物量为A600=180,重组CBHⅡ产量为80mg/L。表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。结论:实现应用pAOX1表达系统在生物反应器中高密度发酵P.pastoris诱导表达CBHⅡ。该研究为重组CBHⅡ的规模化生产打下基础。 展开更多
关键词 葡聚糖外切酶 p.pastoris 高密度发酵
下载PDF
巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)高密度发酵研究进展 被引量:18
4
作者 闵兆升 郭会明 +1 位作者 颜旭 洪厚胜 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期42-49,共8页
高密度发酵已经成为提高毕赤酵母目的蛋白表达量的关键技术之一,而其中发酵工艺又是高密度发酵的一个重要因素。主要从巴斯德毕赤酵母遗传学特性、表达宿主菌、表达载体、外源蛋白的表达方面进行了阐述,并从毕赤酵母工程菌的选择、培养... 高密度发酵已经成为提高毕赤酵母目的蛋白表达量的关键技术之一,而其中发酵工艺又是高密度发酵的一个重要因素。主要从巴斯德毕赤酵母遗传学特性、表达宿主菌、表达载体、外源蛋白的表达方面进行了阐述,并从毕赤酵母工程菌的选择、培养基的优化设计、发酵过程关键参数调控以及甲醇诱导等方面阐述毕赤酵母的高密度发酵。最后,提出了巴斯德毕赤酵母高密度发酵过程中存在的问题并进行展望。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 表达系统 高密度发酵 过程参数 甲醇
下载PDF
黑曲霉GA Ⅰ基因的克隆及在P.pastoris中的分泌表达 被引量:2
5
作者 郭德军 柳增善 《黑龙江八一农垦大学学报》 2005年第4期69-72,共4页
采用RT-PCR技术,从黑曲霉的菌丝体RNA中扩增出葡萄糖淀粉酶GAI的结构基因,将其连接到pPICZαA载体中,转入巴斯德毕赤酵母GS115中,获得8株重组酵母;甲醇诱导目的蛋白分泌表达,葡萄糖淀粉酶酶活最高达174U/mL,占上清液蛋白的36%。
关键词 黑曲霉 葡萄糖淀粉酶 毕赤酵母 分泌表达
下载PDF
用pGAP启动子在P.pastoris中组成型表达cbhⅡ基因
6
作者 易国辉 屠发志 +3 位作者 张爱联 张添元 屈直 罗进贤 《工业微生物》 CAS CSCD 2010年第4期29-33,共5页
用套叠PCR法扩增木霉的cbh Ⅱ基因,以EcoR I和Not I双酶切将其克隆进P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP-cbh Ⅱ。通过电转法将其cbhⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的克隆作为工程菌。用葡萄糖作为碳源摇瓶发... 用套叠PCR法扩增木霉的cbh Ⅱ基因,以EcoR I和Not I双酶切将其克隆进P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP-cbh Ⅱ。通过电转法将其cbhⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的克隆作为工程菌。用葡萄糖作为碳源摇瓶发酵3 d,分泌的重组蛋白CBHⅡ达到50 mg/L。用CMC酶活法测定发酵液中的CMC酶活力为2.05 U/mL。 展开更多
关键词 纤维素二糖水解酶 毕赤酵母 基因表达 酶活力
下载PDF
工程菌P.pastoris GS115(pPIC9K-lac2)的构建及诱导表达漆酶的研究
7
作者 沈锦城 张泽华 +3 位作者 杨穗珊 张添元 罗进贤 张爱联 《工业微生物》 CAS CSCD 2013年第1期36-40,共5页
用PCR法扩增枯草芽孢杆菌的漆酶基因lac2。构建表达质粒pPIC9K-lac2。通过电转法将lac2基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性和高表达漆酶的转化子作为工程菌GS115(pPIC9K-lac2)。在发酵罐中发酵GS115(pPIC9K-lac2)表达重组蛋白。... 用PCR法扩增枯草芽孢杆菌的漆酶基因lac2。构建表达质粒pPIC9K-lac2。通过电转法将lac2基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性和高表达漆酶的转化子作为工程菌GS115(pPIC9K-lac2)。在发酵罐中发酵GS115(pPIC9K-lac2)表达重组蛋白。在50 L发酵罐中加入20 L无机盐发酵培养基。在发酵的第一阶段连续24 h补加50%甘油-0.8%PTM4增殖P.pastoris,然后用甲醇-0.8%PTM4诱导49 h。在发酵过程中,通过调节搅拌的频率和通气量,将溶氧维持于20%~30%,用氨水维持pH 5.0.放罐时生物量为A_(600)=266.5,表达漆酶1097.5U/L发酵液。 展开更多
关键词 漆酶 枯草芽孢杆菌 基因表达 P PASTORIS 发酵 高密度发酵
下载PDF
小分子药物TD-198946促进大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化
8
作者 杨超 罗宗平 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第13期2648-2654,共7页
背景:小分子药物TD-198946是一种能诱导干细胞形成软骨的高效软骨生成剂,但目前尚不清楚其对成骨分化的作用。目的:探讨小分子药物TD-198946促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的效果及其作用机制。方法:提取SD大鼠骨髓间充质干细胞,利用... 背景:小分子药物TD-198946是一种能诱导干细胞形成软骨的高效软骨生成剂,但目前尚不清楚其对成骨分化的作用。目的:探讨小分子药物TD-198946促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的效果及其作用机制。方法:提取SD大鼠骨髓间充质干细胞,利用CCK-8法评估不同浓度TD-198946对骨髓间充质干细胞增殖的影响,确定TD-198946的最佳使用浓度;然后加入最适浓度TD-198946和成骨分化培养基对骨髓间充质干细胞进行成骨诱导;成骨诱导第3天用qRT-PCR检测碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、骨钙蛋白、Ⅰ型胶原基因表达;成骨诱导第7天进行碱性磷酸酶染色,Western blot检测Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K蛋白表达;成骨诱导第21天进行茜素红染色。结果与结论:①CCK-8实验结果显示,100 nmol/L TD-198946能促进骨髓间充质干细胞增殖;②碱性磷酸酶染色及茜素红染色结果显示,TD-198946能促进大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化;③qRT-PCR结果显示,TD-198946可促进成骨相关基因碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、骨钙蛋白、Ⅰ型胶原的表达;④Western blot结果显示,TD-198946可促进Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原以及p-PI3K、p-AKT蛋白表达。结果表明,小分子药物TD-198946可能通过激活PI3K/AKT信号通路,诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 TD-198946 成骨分化 PI3K/AKT信号通路 AKT P-AKT
下载PDF
加味逍遥散通过外泌体miRNA途径发挥抗肝癌作用
9
作者 刘晓明 程金来 +4 位作者 黎如霜 李妞妞 秦秋云 夏猛 姚春 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第19期4052-4062,共11页
背景:在课题组先前研究中发现加味逍遥散具有明显的抗肝癌作用,但具体作用机制不明。目的:基于高通量测序结合生物信息学,探讨加味逍遥散对二乙基亚硝胺慢性诱导的原发性肝癌模型大鼠血浆外泌体miRNA水平的调节作用。方法:将SD大鼠随机... 背景:在课题组先前研究中发现加味逍遥散具有明显的抗肝癌作用,但具体作用机制不明。目的:基于高通量测序结合生物信息学,探讨加味逍遥散对二乙基亚硝胺慢性诱导的原发性肝癌模型大鼠血浆外泌体miRNA水平的调节作用。方法:将SD大鼠随机分为空白对照组、肝癌模型组、加味逍遥散组。以二乙基亚硝胺持续给药12周诱导肝癌模型,从第17周开始,加味逍遥散组大鼠给予加味逍遥散灌服,每日1次,直至第20周末停药,空白对照组和肝癌模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃,通过检测大鼠肝组织的形态结构、肝癌标志物Glypican-3蛋白和血清甲胎蛋白表达验证抗肝癌效应。使用超速离心法分离提取各组大鼠血浆外泌体,利用高通量测序技术筛选出大鼠血浆外泌体中差异表达的miRNA,生物信息学预测加味逍遥散通过肝癌血浆来源外泌体miRNA发挥抗肝癌作用的潜在生物标志物,并进行功能分析。结果与结论:①加味逍遥散对肝癌模型大鼠肝组织的形态结构有显著改善作用,与肝癌模型组相比,加味逍遥散组肝癌标志物Glypican-3蛋白和血清甲胎蛋白的表达均显著降低;②生物信息学分析显示,加味逍遥散组对肝癌模型组上调的miR-223-3p与基因E2F1、NCOA1存在靶向结合位点,并且与肝癌生存率及预后密切相关。由此可见,加味逍遥散对肝癌有治疗作用,可能是通过肝癌血浆来源外泌体miR-223-3p靶向负调控NCOA1/E2F1进而发挥抗肝癌效应。 展开更多
关键词 肝癌 加味逍遥散 外泌体 MIRNA 生物信息学 miR-223-3p
下载PDF
刺芒柄花素对白细胞介素1β诱导软骨细胞损伤影响的机制
10
作者 单继新 叶锐彬 +1 位作者 巨少华 王强 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第12期2484-2491,共8页
背景:刺芒柄花素是一种异黄酮类化合物,广泛存在于红车轴草、黄芪、鸡血藤中,具有抑制氧化应激、炎症因子释放及细胞凋亡的作用。目的:探讨刺芒柄花素对白细胞介素1β诱导软骨细胞损伤的影响及机制。方法:①收集骨关节炎患者及单纯半月... 背景:刺芒柄花素是一种异黄酮类化合物,广泛存在于红车轴草、黄芪、鸡血藤中,具有抑制氧化应激、炎症因子释放及细胞凋亡的作用。目的:探讨刺芒柄花素对白细胞介素1β诱导软骨细胞损伤的影响及机制。方法:①收集骨关节炎患者及单纯半月板损伤患者的软骨组织,采用实时定量PCR检测miR-135b-5p表达。②体外培养人软骨细胞,分9组培养:正常对照组不进行任何处理,培养48 h;白细胞介素1β组加入白细胞介素1β处理48 h;白细胞介素1β+刺芒柄花素低浓度组加入25μmol/L刺芒柄花素处理24 h后加入白细胞介素1β处理48 h;白细胞介素1β+刺芒柄花素中浓度组加入50μmol/L刺芒柄花素处理24 h后加入白细胞介素1β处理48 h;白细胞介素1β+刺芒柄花素高浓度组加入100μmol/L刺芒柄花素处理24 h后加入白细胞介素1β处理48 h;白细胞介素1β+miR NC组转染miR NC 6 h后加入白细胞介素1β处理48 h;白细胞介素1β+miR-135b-5p组转染miR-135b-5p模拟物6 h后加入白细胞介素1β处理48 h;白细胞介素1β+刺芒柄花素高浓度+anti-miR-NC组转染anti-miR-NC 6 h后加入100μmol/L刺芒柄花素处理24 h,再加入白细胞介素1β处理48 h;白细胞介素1β+刺芒柄花素高浓度+anti-miR-135b-5p组转染anti-miR-135b-5p 6 h后加入100μmol/L刺芒柄花素处理24 h,再加入白细胞介素1β处理48 h。处理结束后进行相关检测。结果与结论:①骨关节炎患者软骨组织中miR-135b-5p表达低于单纯半月板损伤患者(P<0.05)。②与正常对照组比较,白细胞介素1β组软骨细胞miR-135b-5p表达、增殖活力、超氧化物歧化酶活性、Ⅱ型胶原蛋白、Bcl-2蛋白表达均降低(P<0.05),细胞凋亡率、乳酸脱氢酶活性、丙二醛水平、促炎因子水平、基质金属蛋白酶13蛋白、Bax蛋白表达均升高(P<0.05);刺芒柄花素可抑制白细胞介素1β对软骨细胞造成的损伤,并且呈现浓度依赖性。转染miR-135b-5p模拟物可提升白细胞介素1β组miR-135b-5p表达,抑制白细胞介素1β对软骨细胞造成的损伤;转染anti-miR-135b-5p可降低白细胞介素1β+刺芒柄花素高浓度组miR-135b-5p表达,抑制刺芒柄花素发挥软骨细胞作用。③结果表明,刺芒柄花素对白细胞介素1β诱导软骨细胞损伤的保护作用可能与调控miR-135b-5p表达有关。 展开更多
关键词 刺芒柄花素 miR-135b-5p 软骨细胞 氧化应激 炎症 细胞增殖 细胞凋亡
下载PDF
骨桥蛋白和p38MAPK信号通路在多房棘球蚴原头节发育中的作用
11
作者 徐刚 毛艺 +6 位作者 胡帅 葛宇飞 徐志 张玉梦 谢士伟 张宏伟 张示杰 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期9-15,共7页
为明确骨桥蛋白(OPN)和多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在Em发育过程的作用,剖检感染Em 4~6月的长爪沙鼠,提取Em原头节后,分别用不同浓度的p38MAPK抑制剂(SB202190)处理Em原头节,选... 为明确骨桥蛋白(OPN)和多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在Em发育过程的作用,剖检感染Em 4~6月的长爪沙鼠,提取Em原头节后,分别用不同浓度的p38MAPK抑制剂(SB202190)处理Em原头节,选取合适的SB202190浓度后在体外将原头节分为DMSO组、anti-p38MAPK组、PBS组、OPN组、OPN+anti-p38MAPK组,采用伊红染色、caspase-3试剂盒检测caspase-3、EDU和Hoechst染色、活性氧(ROS)检测探针检测原头节的活性、凋亡和增殖情况。结果显示,抑制Em的SB202190适宜浓度为20μmol/L,SB202190增加Em的伊红染色率、caspase-3水平,减少EDU阳性、ROS水平,OPN可减少Em伊红染色率、caspase-3水平,增加EDU阳性率、ROS水平,且SB202190可逆转OPN对Em的结果,这些结果表明SB202190可抑制Em的活性和增殖、促进凋亡并与浓度正相关,而OPN可促进Em的活性和增殖、抑制凋亡,且SB202190可逆转OPN对Em的作用。研究结果为OPN和p38MAPK信号通路可能成为治疗多房棘球蚴病的新分子靶点提供证据。 展开更多
关键词 多房棘球蚴 多房棘球蚴病 骨桥蛋白 P38丝裂原活化蛋白激酶
下载PDF
禽白血病病毒p27蛋白单克隆抗体制备及抗原表位的鉴定
12
作者 陈桂娥 容芳 +3 位作者 苟鑫 孙荣航 李作生 陈瑞爱 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期23-28,共6页
为制备禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体,利用原核表达系统表达并纯化ALV p27蛋白,将其作为免疫原免疫注射Balb/c小鼠,用杂交瘤细胞融合和ELISA等筛选出阳性单克隆抗体细胞,对制备的单克隆抗体的抗体亚型、效价及特异性进行鉴... 为制备禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体,利用原核表达系统表达并纯化ALV p27蛋白,将其作为免疫原免疫注射Balb/c小鼠,用杂交瘤细胞融合和ELISA等筛选出阳性单克隆抗体细胞,对制备的单克隆抗体的抗体亚型、效价及特异性进行鉴定,将目的蛋白截短成4段,初步鉴定单克隆抗体识别的抗原表位区域。结果表明,共筛选出4株单克隆细胞,其抗体亚类皆为IgG1型,其中3A1抗体效价为1∶64000,3B2为1∶256000,5F1为1∶128000,5G2为1∶8000;4株单克隆抗体识别的抗原表位在1-60 aa之间。研究结果为进一步建立ALV相关免疫学检测方法提供了重要的材料。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 P27蛋白 单克隆抗体 抗原表位
下载PDF
电刺激诱导miR-741-3p调控Radil促进施万细胞的迁移
13
作者 刘庆 高博 +2 位作者 杨霄 姜宇 王培 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第19期4038-4043,共6页
背景:越来越多的动物实验和临床研究证实电刺激可以促进周围神经损伤修复,具体的机制尚未完全明确。目的:探讨电刺激诱导miR-741-3p调控Radil对施万细胞迁移的影响。方法:①12只雄性SD大鼠,随机分为电刺激组和对照组,电刺激组在坐骨神... 背景:越来越多的动物实验和临床研究证实电刺激可以促进周围神经损伤修复,具体的机制尚未完全明确。目的:探讨电刺激诱导miR-741-3p调控Radil对施万细胞迁移的影响。方法:①12只雄性SD大鼠,随机分为电刺激组和对照组,电刺激组在坐骨神经挤压伤后连续电刺激7 d,对照组在坐骨神经挤压后不做任何处理。术后第7天取损伤处神经,利用荧光原位杂交技术检测两组miR-741-3p的表达差异。②通过miRDB、TargetScan和miRWalk数据库预测miR-741-3p靶基因。③将miR-741-3p模拟物及其对照、miR-741-3p抑制物及其对照、Radil siRNA及其对照、miR-741-3p抑制物+Radil siRNA及miR-741-3p抑制物+siRNA对照对施万细胞进行转染,采用RT-PCR检测转染效率,Transwell小室检测施万细胞的迁移能力。结果与结论:①电刺激组神经残端miR-741-3p荧光强度低于对照组;②数据库预测结果显示有69个基因可能是miR-741-3p靶基因,Radil是预测靶基因之一,主要参与细胞黏附和迁移;③与miR-741-3p抑制物对照组相比,miR-741-3p抑制物组施万细胞迁移数增多(P<0.05);与miR-741-3p模拟物对照组相比,miR-741-3p模拟物组施万细胞迁移数减少(P<0.05);与siRNA对照组相比,Radil siRNA组施万细胞迁移数减少(P<0.05);④与miR-741-3p抑制物对照组相比,miR-741-3p抑制物组Radil的表达水平升高;与miR-741-3p模拟物对照组相比,miR-741-3p模拟物组Radil的表达水平降低;⑤与miR-741-3p抑制物+siRNA对照组相比,miR-741-3p抑制物+Radil siRNA组施万细胞迁移数减少(P<0.05)。结果表明,电刺激通过下调miR-741-3p调控Radi的表达来促进施万细胞迁移。 展开更多
关键词 施万细胞 电刺激 miR-741-3p Radil 细胞迁移 神经再生
下载PDF
miR-192-5p在增生性瘢痕组织及成纤维细胞中的表达及调控
14
作者 赵皎均 田文融 +4 位作者 卜盼盼 齐郁松 马志伟 李培培 马少林 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第12期2500-2506,共7页
背景:研究表明,miRNAs的表达与肝纤维化、肾纤维化及皮肤纤维化发生有关;并证实在痛风性关节炎中miR-192-5p与表皮调节素存在靶向调控关系。目的:探讨miR-192-5p在增生性瘢痕中的表达及调控作用,并验证miR-192-5p与表皮调节素之间存在... 背景:研究表明,miRNAs的表达与肝纤维化、肾纤维化及皮肤纤维化发生有关;并证实在痛风性关节炎中miR-192-5p与表皮调节素存在靶向调控关系。目的:探讨miR-192-5p在增生性瘢痕中的表达及调控作用,并验证miR-192-5p与表皮调节素之间存在靶向调控关系。方法:①在新疆医科大学第一附属医院收集6例增生性瘢痕组织及6例正常皮肤组织,采用qRT-PCR法检测miR-192-5p与表皮调节素mRNA表达。②组织块法获取原代增生性瘢痕成纤维细胞,传代培养至3-6代用于后续实验,实验分为3个组:阴性对照组、miR-192-5p模拟物组和miR-192-5p抑制物组,分别转染对应的序列。采用CCK-8法和EdU试剂盒检测细胞增殖活力,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR和Western blot法检测表皮调节素、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-SMA的基因和蛋白表达,生物信息学网站预测miR-192-5p靶点,双荧光素酶实验验证靶向结合。结果与结论:①与正常皮肤组织及其成纤维细胞相比,miR-192-5p和表皮调节素在增生性瘢痕和增生性瘢痕成纤维细胞中均呈高表达(P<0.05或P<0.01);②过表达miR-192-5p后,与阴性对照组比较,细胞增殖能力增强(P<0.05),EdU阳性细胞率增加(P<0.01);抑制miR-192-5p后细胞活力降低(P<0.05),EdU阳性细胞率减少(P<0.05);③过表达miR-192-5p 24 h后,与阴性对照组比较,模拟物组细胞划痕间面积、细胞凋亡率减小(P<0.05),miR-192-5p抑制物组细胞划痕间面积、细胞凋亡率增加(P<0.01);④转染48 h后,miR-192-5p模拟物组表皮调节素mRNA及蛋白水平显著降低、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白mRNA及蛋白水平显著增高(P<0.05或P<0.01);miR-192-5p抑制物组上述4项指标呈现相反的变化(P<0.05或P<0.01);⑤Targetscan网站预测表皮调节素与miR-192-5p有潜在结合位点;⑥双荧光素酶实验显示,miR-192-5p能够与表皮调节素靶向结合。结果说明:miR-192-5p过表达可降低表皮调节素的表达,二者可能存在负向调控;提示通过调控表皮调节素可能起到抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用。 展开更多
关键词 增生性瘢痕 miR-192-5p 表皮调节素 成纤维细胞
下载PDF
miR-27a-3p激活MAPK信号通路促进人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖
15
作者 李俊 巩晶晶 +5 位作者 孙国斌 郭睿 丁杨 强立娟 张晓莉 方占海 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第8期1609-1617,共9页
背景:目前多项研究证实了丝裂原活化蛋白激酶信号通路参与了细胞的增殖过程,且miRNA参与增生性瘢痕的发生发展,因此深入探讨了miR-27a-3p和丝裂原活化蛋白激酶信号通路在病理性瘢痕形成中的作用。目的:探究miR-27a-3p通过丝裂原活化蛋... 背景:目前多项研究证实了丝裂原活化蛋白激酶信号通路参与了细胞的增殖过程,且miRNA参与增生性瘢痕的发生发展,因此深入探讨了miR-27a-3p和丝裂原活化蛋白激酶信号通路在病理性瘢痕形成中的作用。目的:探究miR-27a-3p通过丝裂原活化蛋白激酶信号通路对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法:收集皮肤标本并分别分离出原代成纤维细胞,倒置显微镜观察原代细胞,免疫荧光予以验证;采用qRT-PCR检测miR-27a-3p在组织中的相对表达水平;利用数据库预测miR-27a-3p的靶基因,再将预测的靶基因进行基因本体功能富集分析及京都基因与基因组百科全书生物通路富集分析;设置分组为:空白对照组、阴性对照组、miR-27a-3p过表达组、miR-27a-3p抑制组、miR-27a-3p过表达+p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂组、miR-27a-3p过表达+细胞外信号调节蛋白激酶抑制剂组、miR-27a-3p过表达+c-Jun氨基末端激酶抑制剂组,Western blot检测细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38激酶总量及其磷酸化水平,采用CCK-8法和EdU检测细胞增殖情况。结果与结论:①与正常皮肤成纤维细胞相比,增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性更强(P<0.05),增殖速度也更快(P<0.001);②与正常皮肤相比,miR-27a-3p在增生性瘢痕中呈高表达(P<0.001);③与阴性对照组相比,过表达miR-27a-3p能促进细胞的增殖活性(P<0.001)和增殖水平(P<0.001);④与阴性对照组相比,敲低miR-27a-3p能抑制细胞的增殖活性(P<0.05)和增殖水平(P<0.001);⑤与阴性对照组相比,过表达miR-27a-3p促进细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的磷酸化水平(P<0.05);与阴性对照组相比,敲减miR-27a-3p能抑制细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的磷酸化水平(P<0.05);⑥与miR-27a-3p过表达组相比,细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的特异性抑制剂可逆转miR-27a-3p对成纤维细胞的增殖活性(P<0.01)和增殖水平(P<0.001);⑦提示miR-27a-3p通过激活丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。 展开更多
关键词 miR-27a-3p 丝裂原活化蛋白激酶 增生性瘢痕 成纤维细胞 增殖
下载PDF
Expression rates of p16,p53 in head and neck cutaneous squamous cell carcinoma based on human-papillomavirus positivity
16
作者 Ha-Jong Nam Heongrae Ryu +5 位作者 Da-Woon Lee Je Yeon Byeon Jun Hyuk Kim Ji Hye Lee Soomin Lim Hwan Jun Choi 《World Journal of Clinical Cases》 SCIE 2025年第9期13-23,共11页
BACKGROUND The high prevalence of human papillomavirus(HPV)infection in oropharyngeal squamous cell carcinoma(SCC)is well established,and p16 expression is a strong predictor.HPV-related tumors exhibit unique mechanis... BACKGROUND The high prevalence of human papillomavirus(HPV)infection in oropharyngeal squamous cell carcinoma(SCC)is well established,and p16 expression is a strong predictor.HPV-related tumors exhibit unique mechanisms that target p16 and p53 proteins.However,research on HPV prevalence and the combined predictive value of p16 and p53 expression in head and neck cutaneous SCC(HNCSCC),particularly in Asian populations,remains limited.This retrospective study surveyed 62 patients with HNSCC(2011-2020),excluding those with facial warts or other skin cancer.AIM To explore the prevalence of HPV and the predictive value of p16 and p53 expression in HNCSCC in Asian populations.METHODS All patients underwent wide excision and biopsy.Immunohistochemical staining for HPV,p16,and p53 yielded positive and negative results.The relevance of each marker was investigated by categorizing the tumor locations into high-risk and middle-risk zones based on recurrence frequency.RESULTS Of the 62 patients,20(32.26%)were male,with an average age of 82.27 years(range 26-103 years).High-risk included 19 cases(30.65%),with the eyelid and lip being the most common sites(five cases,8.06%).Middle-risk included 43 cases(69.35%),with the cheek being the most common(29 cases,46.77%).The p16 expression was detected in 24 patients(38.71%),p53 expression in 42 patients(72.58%),and HPV in five patients(8.06%).No significant association was found between p16 expression and the presence of HPV(P>0.99),with a positive predictive value of 8.33%.CONCLUSION This study revealed that p16,a surrogate HPV marker in oropharyngeal SCC,is not reliable in HNCSCC,providing valuable insights for further research in Asian populations. 展开更多
关键词 Squamous cell carcinoma OROPHARYNGEAL Non-oropharyngeal Human papillomavirus The p16 The p53
下载PDF
新疆南天山榆树沟含石榴夕线石泥质麻粒岩的超高温变质作用及其构造意义
17
作者 荆彦清 仝来喜 +1 位作者 刘兆 李超 《岩石学报》 SCIE EI CAS 北大核心 2025年第1期215-236,共22页
天山造山带是中亚造山带的重要组成部分,新疆南天山造山带出露有橄榄岩-麻粒岩地体,其北部榆树沟地区麻粒岩超高温变质作用的确定及P-T-t轨迹的建立为南天山造山带增生造山过程的研究提供了重要依据。本文主要以榆树沟地区3个含石榴夕... 天山造山带是中亚造山带的重要组成部分,新疆南天山造山带出露有橄榄岩-麻粒岩地体,其北部榆树沟地区麻粒岩超高温变质作用的确定及P-T-t轨迹的建立为南天山造山带增生造山过程的研究提供了重要依据。本文主要以榆树沟地区3个含石榴夕线石泥质麻粒岩为研究对象,在详细岩相学研究的基础上进行了温压计算、相平衡模拟及锆石U-Pb年龄分析。结果显示其普遍保留了4个阶段的矿物组合:(1)峰前阶段(M1)主要是石榴子石核部与核部包裹体矿物Grt1+Bt1+Pl1+Ilm1+Rt1+Qz1±Ksp1;(2)峰期阶段(M2)由石榴子石幔部和基质矿物核部组成,Grt2+Sil2+Ksp2+Pl2+Ilm2+Rt2+Qz2+Liq2,其温压条件为910~973℃和0.90~1.09GPa;(3)高压麻粒岩相阶段(M3)主要是石榴子石内边部和边部包裹体及基质中矿物的边部,Grt3+Bt3+Sil3+Ksp3+Pl3+Ilm3+Rt3+Qz3+Liq3,其温压结果为845~869℃和1.01~1.14GPa;(4)角闪岩相退变质阶段(M4)以石榴子石的外边部及围绕石榴子石的矿物为代表,Grt4+Bt4+Sil4+Ksp4+Pl4+Ilm4+Qz4±Rt4,其温压条件为701~737℃和0.7~0.8GPa。温压结果指示泥质麻粒岩记录了一条逆时针P-T轨迹。锆石U-Pb年龄分析结果指示原岩沉积是在427Ma之后,超高温变质作用发生在397~409Ma,压力峰期变质作用年龄范围为381~395Ma,退变质年龄结果为355~387Ma。超高温变质作用的热源可能是泥盆纪弧岩浆侵入,随后麻粒岩及与之接触的橄榄岩被俯冲板片捕获并经历了高压变质作用,后期受挤压折返发生了退变质降压冷却。 展开更多
关键词 泥质麻粒岩 超高温变质作用 P-T轨迹 榆树沟 南天山
下载PDF
长链非编码RNA核富集转录本1对瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和迁移的影响
18
作者 张彦峰 张慧敏 +1 位作者 何翔 郑屿萍 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第2期347-354,共8页
背景:已有研究阐明核富集转录本1(nuclear enriched abundant transcript 1,NEAT1)下调抑制了瘢痕成纤维细胞的进展,但具体机制尚不完全清楚。目的:探讨长链非编码RNA NEAT1调节miR-136-5p/泛素特异性蛋白酶4(ubiquitin specific protea... 背景:已有研究阐明核富集转录本1(nuclear enriched abundant transcript 1,NEAT1)下调抑制了瘢痕成纤维细胞的进展,但具体机制尚不完全清楚。目的:探讨长链非编码RNA NEAT1调节miR-136-5p/泛素特异性蛋白酶4(ubiquitin specific protease 4,USP4)轴对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响。方法:将瘢痕成纤维细胞分为5组:si-NC组、空白对照组、si-NEAT1组、si-NEAT1+miR-136-5p inhibitor组、si-NEAT1+inhibitor-NC组,qRT-PCR检测NEAT1、miR-136-5p表达;CCK-8法及EDU染色检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;划痕愈合实验检测细胞迁移情况;Western blot检测USP4、p27、Bax、基质金属蛋白酶9、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白α1链蛋白表达;双荧光素酶实验检测NEAT1与miR-136-5p、miR-136-5p与USP4的关系。结果与结论:①与si-NC组比较,si-NEAT1组NEAT1表达、A450值、EDU阳性细胞百分比、划痕愈合率以及USP4、基质金属蛋白酶9、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白α1链蛋白表达降低(P<0.05),miR-136-5p表达、细胞凋亡率及p27、Bax蛋白表达升高(P<0.05);②miR-136-5p inhibitor逆转了沉默NEAT1对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响;③miR-136-5p与NEAT1、miR-136-5p与USP4存在靶向调控关系。结果表明,沉默NEAT1可能通过调控miR-136-5p/USP4轴抑制瘢痕成纤维细胞的增殖和迁移,诱导其凋亡。 展开更多
关键词 长链非编码RNA核富集转录本1 miR-136-5p 泛素特异性蛋白酶4 瘢痕成纤维细胞 增殖
下载PDF
SphK1/S1P/S1PR2信号通路促进肌生成:运动改善骨骼肌健康的新视角
19
作者 张文华 李荀 +3 位作者 张伟超 李欣颖 马帼澳 王孝强 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第6期1265-1275,共11页
背景:近年来,运动改善骨骼肌的健康已成为学者们关注的一个重要研究内容,适宜的运动对骨骼肌具有积极的作用,其中在运动激活鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SphK1)/鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)/鞘氨醇-1-磷酸受体2(sp... 背景:近年来,运动改善骨骼肌的健康已成为学者们关注的一个重要研究内容,适宜的运动对骨骼肌具有积极的作用,其中在运动激活鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SphK1)/鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)/鞘氨醇-1-磷酸受体2(sphingosine-1-phosphate receptor2,S1PR2)信号通路如何改善骨骼肌的健康,正受到科研人员的重视。目的:研究运动经SphK1/S1P/S1PR2信号通路如何改善骨骼肌的健康,探索治疗相关肌肉疾病的新方法,以改善人的骨骼肌健康。方法:检索Web of Science、PubMed、中国知网、万方和维普数据库从建库至今与文章主题相关的文献,以“signaling pathway,SphK1,S1P,S1PR2,skeletal muscle,satellite cell,myogenesis,exercise”为英文检索词,以“信号通路,SphK1,S1P,S1PR2,骨骼肌,卫星细胞,肌生成,运动”为中文检索词,最终纳入69篇文献进行分析。结果与结论:①SphK1/S1P/S1PR2信号通路是一个复杂的调控网络,通过SphK1催化产生的S1P,与S1PR2等受体的相互作用,触发下游信号转导过程,进而调控细胞、组织、器官和系统的多种生物学功能。②SphK1/S1P/S1PR2信号通路能调控卫星细胞增殖和成肌细胞分化,改善肌生成。③文章通过文献资料调研法分析了SphK1/S1P/S1PR2信号通路的生理基础以及运动对其影响的可能性。急性有氧运动可提高骨骼肌中SphK1的表达,人体和动物研究中已证实急性和长期运动均可提高骨骼肌中S1P水平,另外研究表明长期抗阻运动可提高S1PR2在骨骼肌中的表达,部分实验结果表明急性和长期运动对肌肉或者血液中S1P水平无显著影响,出现不同结果的原因可能是选择的研究对象、方式、强度及频率不同,而具体机制尚不明确。④研究认为,运动能够促进SphK1/S1P/S1PR2信号通路在骨骼肌中的表达,调控下游相关信号通路,并且针对这一信号通路的研究可能为骨骼肌疾病的治疗提供新的策略和方法,从而改善骨骼肌健康。⑤未来应深化对SphK1/S1P/S1PR2信号通路与骨骼肌健康关联的研究,进一步揭示其与卫星细胞、成肌细胞的调控关系及与上下游通路的相互作用,挖掘其临床应用价值,制定康复方案时考虑该通路变化,探索不同运动对该通路的影响机制,并将其作为潜在治疗靶点,结合人体肌肉模型提升研究深度和准确性。 展开更多
关键词 SphK1/S1P/S1PR2信号通路 骨骼肌 运动 肌生成 卫星细胞 成肌细胞 机制
下载PDF
P2Y1 receptor in Alzheimer’s disease
20
作者 Shan Luo Yifei Wang Tatsuhiro Hisatsune 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS 2025年第2期440-453,共14页
Alzheimer’s disease is the most frequent form of dementia characterized by the deposition of amyloid-beta plaques and neurofibrillary tangles consisting of hyperphosphorylated tau.Targeting amyloid-beta plaques has b... Alzheimer’s disease is the most frequent form of dementia characterized by the deposition of amyloid-beta plaques and neurofibrillary tangles consisting of hyperphosphorylated tau.Targeting amyloid-beta plaques has been a primary direction for developing Alzheimer’s disease treatments in the last decades.However,existing drugs targeting amyloid-beta plaques have not fully yielded the expected results in the clinic,necessitating the exploration of alternative therapeutic strategies.Increasing evidence unravels that astrocyte morphology and function alter in the brain of Alzheimer’s disease patients,with dysregulated astrocytic purinergic receptors,particularly the P2Y1 receptor,all of which constitute the pathophysiology of Alzheimer’s disease.These receptors are not only crucial for maintaining normal astrocyte function but are also highly implicated in neuroinflammation in Alzheimer’s disease.This review delves into recent insights into the association between P2Y1 receptor and Alzheimer’s disease to underscore the potential neuroprotective role of P2Y1 receptor in Alzheimer’s disease by mitigating neuroinflammation,thus offering promising avenues for developing drugs for Alzheimer’s disease and potentially contributing to the development of more effective treatments. 展开更多
关键词 ASTROCYTES NEUROINFLAMMATION P2Y1 receptor purinergic receptor
下载PDF
上一页 1 2 250 下一页 到第
使用帮助 返回顶部