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Rapid detection of sepsis complicating acute necrotizing pancreatitis using polymerase chain reaction 被引量:7
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作者 Wei Zhong Zhang1 Tian Quan Han2 +2 位作者 Yao Qing Tang2 Sheng Dao Zhang2 1Department of Surgery. Huangyan First Hospital, Huangyan 318020, Zhejiang Province. China 2Department of Surgery. Ruijin Hospital. Shanghai Second Medical University. Shanghai 200025. ChinaDr. Wei Zhong Zhang, graduated from Shanghai Second MedicalUniversity receiving master degree of surgery in 1999 he is devoted to basic and clinical investigation on severe acute pancreatitis and has one paper published. 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2001年第2期289-292,共4页
INTRODUCTIONAcute narcotizing pancreatitis usually takes a severe clinical course and is associated with multiple organ dysfunction .With the further understanding of pathophysiological events of acute pancreatisis an... INTRODUCTIONAcute narcotizing pancreatitis usually takes a severe clinical course and is associated with multiple organ dysfunction .With the further understanding of pathophysiological events of acute pancreatisis and the therapeutic measuses taken by the clinicians ,the patients can pass through the critical carry stages ,and then the septic complication caused by rtanslocated bacteria, mostly gram-negative microbes from the intestines ensues[1]. 展开更多
关键词 Polymerase chain reaction Adult Aged Bacterial Proteins DNA Bacterial Female Humans Male Middle Aged Pancreatitis Acute Necrotizing RNA Ribosomal 16S SEPTICEMIA
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Clinical Value of Molecular Biological Methods in Respiratory Tuberculosis in Children
2
作者 Ulia Ovchinnikova Anna Starshinova Irina Dovgalyuk Natalia Kornev Viacheslav Zhuravlev 《Journal of Health Science》 2014年第5期248-251,共4页
The pattern of clinical forms of respiratory tuberculosis in children shows a preponderance of intrathoracic lymph node tuberculosis (89.4%) that is characterized by a complicated process in every third child under ... The pattern of clinical forms of respiratory tuberculosis in children shows a preponderance of intrathoracic lymph node tuberculosis (89.4%) that is characterized by a complicated process in every third child under present-day conditions. Positive result of PCR closely correlates with the severity and extent of the specific process in children. Real-time PCR (RT-PCR) was ascertain to exhibit the highest sensitivity in detecting Mycobacterium tuberculosis DNA in children with primary generalized tuberculosis (62.5%) and in those with a disseminated specific process (55.6%), which was much higher than conventional bacteriological study of diagnostic materials. By taking into account the findings, the RT-PCR detection of M. tuberculosis was considered as a substantial criterion for evaluating the magnitude of specific changes and the degree of tuberculosis infection activity in children. 展开更多
关键词 Molecular BIOLOGICAL methods real-time POLYMERASE chain reaction RESPIRATORY tuberculosis children.
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核酸适配体筛选中单链DNA制备方法的研究进展
3
作者 顾华杰 蔡涵 +7 位作者 李雨欣 沈家明 陈锦辉 陈耔含 朱召娣 王璐君 杨倩倩 杨皓宇 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第19期215-227,共13页
核酸适配体是人工合成的短链核酸,作为分子识别元件,能够与各类靶标物质高特异性、高亲和力的结合,分为单链DNA和RNA两种类型。其中单链DNA适配体由于其稳定性比RNA适配体更好而更受欢迎,因此得到广泛应用。核酸适配体筛选通常是通过配... 核酸适配体是人工合成的短链核酸,作为分子识别元件,能够与各类靶标物质高特异性、高亲和力的结合,分为单链DNA和RNA两种类型。其中单链DNA适配体由于其稳定性比RNA适配体更好而更受欢迎,因此得到广泛应用。核酸适配体筛选通常是通过配体指数富集系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)实现的,筛选能否成功在很大程度上取决于其最关键的单链制备步骤,即将双链DNA转化为相应的单链DNA。目前,存在许多方法可以制备单链DNA,包括热变性法、生物素-链霉亲和素亲和分离法、变性胶电泳分离法、核酸外切酶消化法、不对称聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法等。本文在总结文献报道的基础上,具体阐述了各种单链DNA制备方法的原理、优缺点及近5年的应用情况,并对这些单链DNA制备方法进行了比较和展望,以期能为成功筛选各类靶标的核酸适配体提供参考。 展开更多
关键词 核酸适配体 单链DNA制备 热变性法 生物素-链霉亲和素亲和分离法 变性胶电泳分离法 核酸外切酶消化法 不对称聚合酶链式反应
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聚合酶链式反应检查法、细菌培养法在阴道细菌检查中的应用价值
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作者 王立立 高姝敏 《中国社区医师》 2024年第24期59-61,共3页
目的:探究聚合酶链式反应(PCR)检查法、细菌检查法在阴道细菌检查中的应用价值。方法:选择2022年1—12月进行阴道细菌检查的阴道炎患者作为研究对象,共45例。收集所有患者的阴道分泌物,行PCR检查和细菌培养法检查,分析检验结果。结果:PC... 目的:探究聚合酶链式反应(PCR)检查法、细菌检查法在阴道细菌检查中的应用价值。方法:选择2022年1—12月进行阴道细菌检查的阴道炎患者作为研究对象,共45例。收集所有患者的阴道分泌物,行PCR检查和细菌培养法检查,分析检验结果。结果:PCR检查法阳性检出率高于细菌培养法、肠球菌、棒状杆菌、加特纳菌、检出率高于细菌培养法(P<0.05)。结论:在阴道细菌检查中,PCR检查法相对于细菌培养法具有更高的应用价值,其病原菌检出率更高,为细菌性阴道炎的准确诊断和个体化治疗提供了更可靠的手段。 展开更多
关键词 阴道细菌检查 聚合酶链式反应检查法 细菌培养法
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帕利亚姆病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
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作者 杨恒 李占鸿 +5 位作者 宋子昂 高林 李卓然 廖德芳 肖雷 李华春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期395-400,共6页
本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,... 本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,对方法的特异性、灵敏性与重复性进行评估;以我国分离的28株PALV和90份核酸阳性血液样本评估检测方法的可靠性;利用建立的方法对采集库蠓样本中携带的PALV进行血清型鉴定。结果显示,建立的PALV血清型qRT-PCR检测方法具有良好的特异性与灵敏性,可检出核酸拷贝数下限在22至28 copies·μL^(-1)。对28株PALV的qRT-PCR检测结果与病毒测序鉴定结果一致;对PALV不同感染阶段哨兵动物血液(90份)中的qRT-PCR鉴定结果与分离病毒的血清型鉴定结果一致;建立的方法可准确鉴定库蠓中携带PALV的血清型。本研究建立的PALV血清型qRT-PCR定型方法具有良好的特异强、敏感性与重复性,可用于PALV感染动物与媒介中PALV血清型的鉴定,具有良好的应用价值。 展开更多
关键词 帕利亚姆病毒 血清型鉴定 实时荧光定量RT-PCR 检测方法
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柯萨奇病毒B组5型TaqMan一步法RT-qPCR检测方法的建立
6
作者 刘煜菡 张名 +4 位作者 郭伟 许丹菡 冯昌增 徐丽兰 马绍辉 《医学研究杂志》 2024年第7期84-88,共5页
目的建立柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirusB5,CV-B5)特异的TaqMan一步法实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测方法。方法根据CV-B5的VP1序列,设计特异性引物和TaqMan探针。将目的... 目的建立柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirusB5,CV-B5)特异的TaqMan一步法实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测方法。方法根据CV-B5的VP1序列,设计特异性引物和TaqMan探针。将目的基因插入pMD18^(TM)载体,在DH5α感受态细胞中扩增,大肠杆菌体外转录后获得RNA标准品并建立标准曲线,最后对检测方法的重复性、敏感度和特异性进行评价。结果该方法在10^(3)~10^(11)拷贝/微升的模板范围内具有良好的线性关系(r^(2)>0.99),扩增效率E=100.9%,敏感度达1×10^(3)拷贝/微升,只对CV-B5有特异性扩增曲线,且重复性较好。结论本实验建立的TaqMan一步法RT-qPCR检测方法有较高的敏感度、特异性和重复性,有良好的抗干扰性,可用于CV-B5的临床样本检测和绝对定量分析。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒B组5型 实时荧光定量聚合酶链反应 TaqMan探针法
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基于粪便样本检测幽门螺杆菌感染及耐药情况的研究进展
7
作者 瞿燚 张振玉 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2024年第11期1552-1556,共5页
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是一种革兰氏阴性细菌,特异性定植于人类的胃上皮,特别是胃窦上皮中。它是慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤及一些胃外疾病的主要病因。由于H.pylori抗生素耐药菌株的迅... 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是一种革兰氏阴性细菌,特异性定植于人类的胃上皮,特别是胃窦上皮中。它是慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤及一些胃外疾病的主要病因。由于H.pylori抗生素耐药菌株的迅速出现,其根治率正逐年下降。对抗生素耐药性进行检测,指导临床医师选择治疗方案是目前提高H.pylori根治率的重要手段。目前,H.pylori抗生素耐药性的检测主要是患者基于接受内镜检查的侵入性检测。而针对非侵入性手段获得粪便样本的检测相比于侵入性检测具有无创便捷、高效、依从性好等优点。近年来针对粪便样本进行抗原检测、分子检测等多种方式的研究均有报道。本文就基于粪便样本诊断H.pylori感染及检测其耐药情况的研究进展进行综述和分析,为探索更为便捷、高效的诊断方式和指导治疗手段提供思考。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 粪便样本 粪便抗原检测 聚合酶链反应 抗生素耐药性 诊断方法
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实时荧光定量PCR检测不同结核标本及其联合玻璃珠磨菌法检测的价值 被引量:1
8
作者 张鑫 周辰刚 《临床和实验医学杂志》 2024年第6期637-641,共5页
目的研究实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)与玻璃珠磨菌法联合用于不同结核标本检测中的价值。方法以回顾性分析为法,收集并分析2021年1月至2022年6月在上海交通大学医学院附属仁济医院住院与门诊诊治的疑似结核病患者1200份不同临... 目的研究实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)与玻璃珠磨菌法联合用于不同结核标本检测中的价值。方法以回顾性分析为法,收集并分析2021年1月至2022年6月在上海交通大学医学院附属仁济医院住院与门诊诊治的疑似结核病患者1200份不同临床标本的qRT-PCR测定结果,其中血液样本469份,胸腔积液标本322份,心包积液标本16份,尿液标本25份,气管(支气管)肺泡灌洗液标本8份,腹腔积液标本34份,脑脊液标本143份,脓液标本31份,痰液标本152份;同时,对41份痰液标本予以玻璃珠振荡磨菌前后qRT-PCR定量检测效果分析。结果1200份不同结核标本的总检测阳性率为15.83%(190/1200),其中检出率最高的为气管(支气管)肺泡灌洗液标本,占比为37.50%(3/8),且门诊患者阳性率最高,占比为40.00%(2/5);脓液标本检出率第二,占比为35.48%(11/31),且住院患者阳性率最高,占比为38.46%(10/26);痰液标本检出率第三,占比为30.26%(46/152)。41份痰液标本经玻璃珠磨菌处理5 min之后,qRT-PCR检测核酸浓度明显高于处理前,差异有统计学意义(P<0.05);其中,14份痰液标本提升了菌株数量级,且11份含菌量为10^(2)拷贝/mL痰液标本于振荡研磨处理之后,7份痰液标本提升至了10^(3)拷贝/mL菌量数量级,磨菌处理后阳性检出率明显高于磨菌处理前,差异有统计学意义(P<0.05)。结论气管(支气管)肺泡灌洗液标本、脓液标本、痰液标本检测中qRT-PCR的检出率较高,而qRT-PCR在其他结核标本检测中的检出率较低,qRT-PCR联合玻璃珠磨菌法检测可有效提升临床结核标本阳性检出率。 展开更多
关键词 实时荧光定量聚合酶链式反应 玻璃珠磨菌法 结核分枝杆菌 检测
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基于CRISPR-Cas12a系统的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法的建立
9
作者 林冬媛 谢龙飞 +2 位作者 李芙蓉 梁玮珩 熊文广 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第8期68-76,共9页
为了建立一种特异性强、灵敏度高的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法,试验将聚合酶链式反应(PCR)与成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated, CRISPR-... 为了建立一种特异性强、灵敏度高的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法,试验将聚合酶链式反应(PCR)与成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated, CRISPR-Cas)系统相结合,首先根据鼠伤寒沙门氏菌的spy基因序列3′末端的保守区设计crRNA及靶标序列扩增引物,根据可视化检测原理设计单链DNA(single-stranded DNA, ssDNA)荧光报告探针;然后对靶标序列进行PCR扩增,将扩增产物加入CRISPR-Cas12a系统,在蓝光下通过肉眼观察是否产生绿色荧光实现对靶标的检测;最后进行特异性试验和灵敏度试验。结果表明:建立的方法仅能检测到鼠伤寒沙门氏菌,检测不到除鼠伤寒沙门氏菌外其他血清型的沙门氏菌及大肠杆菌、巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌,能检测到循环数为14个的PCR产物和0.53 copies/μL的重组质粒,灵敏度优于常规PCR方法和实时荧光定量PCR方法。说明本试验建立的方法可以实现鼠伤寒沙门氏菌的可视化检测,具有特异性强、灵敏度高的特点。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门氏菌 成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白12a(CRISPR-Cas12a)系统 可视化 检测方法 聚合酶链式反应(PCR)
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五重实时荧光聚合酶链式法快速筛查食用淀粉及其制品中植物源性成分
10
作者 张明娟 余秋地 +3 位作者 王娟 李根容 肖昭竟 周朝旭 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第13期207-214,共8页
目的 建立五重实时荧光聚合酶链式方法 快速筛查食用淀粉及其制品中植物源性成分。方法 首先设计豌豆、绿豆、木薯、玉米的特异性引物、探针,建立多重实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法 ,再验证方法 的特异... 目的 建立五重实时荧光聚合酶链式方法 快速筛查食用淀粉及其制品中植物源性成分。方法 首先设计豌豆、绿豆、木薯、玉米的特异性引物、探针,建立多重实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法 ,再验证方法 的特异性和绝对灵敏度,最后通过样品掺假模拟实验验证方法 的检出限。结果 该方法 的特异性强,仅能检出豌豆源性、绿豆源性、木薯源性、玉米源性成分;灵敏度较高,对绿豆源性和木薯源性的检测灵敏度可达到1×10^(–1) ng/μL水平,豌豆源性和玉米源性的检测灵敏度可达到1×10^(–2) ng/μL水平。结论 本研究建立的五重实时荧光PCR方法 可用来区分市场上淀粉及其制品中的豌豆源性、绿豆源性、玉米源性和木薯源性成分,具有较好的应用价值。 展开更多
关键词 五重实时荧光聚台酶链式反应 淀粉 淀粉制品 检测方法
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HPV诊断中应用PCR检验的效果
11
作者 喻晓英 《国际检验医学杂志》 CAS 2024年第S01期164-167,共4页
目的分析高危型人乳头瘤病毒(HPV)诊断中应用实时聚合酶链式反应(PCR)检验的效果。方法以该院2023年1-12月内收治的101例高危型HPV患者为本次研究对象,所有研究对象先使用第二代杂交式捕获法(HC-Ⅱ)检验,再行实时PCR检验,以病理实验检... 目的分析高危型人乳头瘤病毒(HPV)诊断中应用实时聚合酶链式反应(PCR)检验的效果。方法以该院2023年1-12月内收治的101例高危型HPV患者为本次研究对象,所有研究对象先使用第二代杂交式捕获法(HC-Ⅱ)检验,再行实时PCR检验,以病理实验检测结果为金标准,统计对比两种检验方式的诊断效能。结果组间对比,HC-Ⅱ与实时PCR对高危型HPV的诊断特异度差异无统计学意义(P>0.05),但实时PCR对高危型HPV的诊断准确率、灵敏度均显著高于HC-Ⅱ,差异有统计学意义(P<0.05)。结论实时PCR对于高危型HPV感染患者具有较高检出率,可为此类患者的早期治疗提供科学依据,倡导临床应用。 展开更多
关键词 高危型人乳头瘤病毒 实时聚合酶链式反应 第二代杂交式捕获法
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探讨荧光定量PCR法与免疫胶体金法用于骨质疏松症手术住院患者感染监控的诊断价值
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作者 吴敏芳 董明治 +2 位作者 杨越 张艳 陈启 《系统医学》 2024年第1期57-59,63,共4页
目的本研究旨在探讨荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)法与免疫胶体金法检测用于骨质疏松症进行手术治疗住院患者感染监控的临床效果。方法选取2020年3月—2023年4月曲靖市第一人民医院收治的180例骨质疏松症进行... 目的本研究旨在探讨荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)法与免疫胶体金法检测用于骨质疏松症进行手术治疗住院患者感染监控的临床效果。方法选取2020年3月—2023年4月曲靖市第一人民医院收治的180例骨质疏松症进行手术治疗疑似住院感染患者作为研究对象,所有患者均先后接受荧光定量PCR法与免疫胶体金法检测,以细菌培养结果作为金标准,比较两种方法的检出率,评估两种检查方法的诊断效能。结果荧光定量PCR法的检验准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为96.67%、89.19%、98.60%、94.29%、97.24%,免疫胶体金法分别为82.78%、43.24%、93.01%、61.54%、86.36%,荧光定量PCR法的检验准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均明显高于免疫胶体金法检验,差异有统计学意义(χ^(2)=18.827、17.458、5.567、10.124、11.533,P均<0.05)。结论荧光定量PCR法检验在骨质疏松症进行手术治疗住院患者感染监控中具有良好的诊断效能。在骨科住院患者感染监控中予以微生物检验干预,有助于基于检验结果进行及早诊断和治疗,进而降低感染发生率和传播风险。 展开更多
关键词 荧光定量聚合酶链式反应法 住院患者 骨质疏松症 免疫胶体金法 病原菌
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实时荧光定量PCR定量方法研究进展 被引量:17
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作者 廉红霞 高腾云 +2 位作者 傅彤 孙宇 李改英 《江西农业学报》 CAS 2010年第10期128-129,132,共3页
实时荧光定量PCR以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点而成为了分子生物学研究中的重要工具,综述了实时荧光定量PCR技术及其定量方法的研究进展,并展望了其应用前景。
关键词 实时荧光定量 PCR技术 定量方法 研究进展 POLYMERASE chain reaction QUANTITATIVE Real-time method of 分子生物学研究 应用前景 特异性强 灵敏度高 封闭反应 重复性 速度 工具
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癌胚纤维连接蛋白mRNA在大肠癌细胞中的表达 被引量:3
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作者 刘宝瑞 乔庆大 +1 位作者 刘文超 宁国礼 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2001年第2期107-109,共3页
目的 检查癌胚纤维连接蛋白在大肠癌中的表达及转化生长因子 β1对其表达的影响。方法 采用逆转录聚合酶链法扩增癌胚纤维连接蛋白 EDA、EDB和 CS1剪切区 ,并对目的片段进行酶切鉴定。结果 EDA、EDB和 CS剪切区在大肠癌细胞中表达... 目的 检查癌胚纤维连接蛋白在大肠癌中的表达及转化生长因子 β1对其表达的影响。方法 采用逆转录聚合酶链法扩增癌胚纤维连接蛋白 EDA、EDB和 CS1剪切区 ,并对目的片段进行酶切鉴定。结果 EDA、EDB和 CS剪切区在大肠癌细胞中表达阳性 ,EDB、 CS1表达仅局限于癌组织中 ;转化生长因子 β1可部分逆转 EDA、EDB的表达。结论 EDA、EDB和 CS在大肠癌基因诊断和治疗方面具有潜在的应用价值 ,值得进一步研究。转化生长因子β1逆转 EDA、EDB表达可能是该因子抑制大肠癌浸润与转移的机理之一。 展开更多
关键词 大肠癌 纤维连接蛋白 转化生长因子Β1 聚合酶链反应 MRNA
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半定量RT-PCR检测少量兔血管内皮细胞中特异mRNA的表达 被引量:4
15
作者 陈云波 侯孟君 +3 位作者 王奇 高国全 程淑意 赖世隆 《广州中医药大学学报》 CAS 2000年第1期81-84,共4页
目的 :半定量检测体外培养的少量兔血管内皮细胞中特异mRNA的表达。方法 :用PharmaciaBiotech公司的快速微量mRNA提纯试剂盒从兔内皮细胞中直接提取出mRNA ,并以此为模板 ,用半定量RT -PCR技术检测培养的兔血管内皮细胞中内皮素 (ET - 1... 目的 :半定量检测体外培养的少量兔血管内皮细胞中特异mRNA的表达。方法 :用PharmaciaBiotech公司的快速微量mRNA提纯试剂盒从兔内皮细胞中直接提取出mRNA ,并以此为模板 ,用半定量RT -PCR技术检测培养的兔血管内皮细胞中内皮素 (ET - 1)mRNA的相对含量。结果 ;从 10 5个兔血管内皮细胞中提取出未降解的mRNA ,A2 6 0 /A2 80 >1.8;用半定量RT -PCR技术 ,测定出ET - 1mRNA的表达。结论 :本实验建立了一种从少量细胞中快速、简便、安全而可靠地检测特异mRNA表达的方法。 展开更多
关键词 基因表达 聚合酶链反应 MRNA 血管内皮细胞
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不同保存方法对光皮桦总DNA提取效果的影响 被引量:19
16
作者 李志真 谢一青 +2 位作者 黄儒珠 黄勇 陈杰 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第1期131-134,共4页
光皮桦是一种顽拗类植物,其鲜叶组织中富含酚类、糖类及其他次生代谢物。这些物质很容易使鲜叶发生褐变,从而严重影响植物基因组DNA的提取质量。本文以新鲜嫩叶为对照,比较了-20℃冷藏、硅胶干燥、改进的饱和NaCl-CTAB溶液保存和核分离... 光皮桦是一种顽拗类植物,其鲜叶组织中富含酚类、糖类及其他次生代谢物。这些物质很容易使鲜叶发生褐变,从而严重影响植物基因组DNA的提取质量。本文以新鲜嫩叶为对照,比较了-20℃冷藏、硅胶干燥、改进的饱和NaCl-CTAB溶液保存和核分离缓冲液固定4种鲜叶保存方法对提取光皮桦基因组总DNA效果的影响,寻找最佳的光皮桦嫩叶保存方法。并以提取的核酸得率、纯度、片段分布情况、是否含有PCR反应抑制剂等指标来评价其保存效果。结果表明:-20℃冷藏的样品未能提到DNA;新鲜样品、改进的饱和NaCl-CTAB溶液保存和核分离缓冲液保存的样品均提到纯度较好的DNA,大小在48Kb左右,得率为400!g/g鲜叶左右,并获得条带清晰、多态性好的PCR扩增图谱;用硅胶干燥保存的样品也能提到DNA,但得率低,为51.2!g/g鲜叶,且未获得条带完整、清晰的PCR扩增图谱。 展开更多
关键词 光皮桦 保存方法 DNA提取 PCR
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化疗对结肠癌Th1和Th2类细胞因子基因表达的影响及意义 被引量:5
17
作者 梁婧 李岩 +2 位作者 刘晓琳 许晓群 赵跃然 《国际消化病杂志》 CAS 2006年第2期133-136,共4页
目的探讨结肠癌患者体内Th1和Th2类细胞因子的基因表达水平及化疗对其表达的影响。方法收集67例结肠癌患者、35例正常人和30例结肠息肉患者血清。采用RT-PCR技术,检测3组及结肠癌组化疗后外周血单个核细胞(PBMC)Th1和Th2类细胞因子mRNA... 目的探讨结肠癌患者体内Th1和Th2类细胞因子的基因表达水平及化疗对其表达的影响。方法收集67例结肠癌患者、35例正常人和30例结肠息肉患者血清。采用RT-PCR技术,检测3组及结肠癌组化疗后外周血单个核细胞(PBMC)Th1和Th2类细胞因子mRNA表达水平。结果正常对照及结肠息肉组Th1和Th2类细胞因子基因表达呈阴性或基本不表达。结肠癌组IL-4、IL-6、IL-10mRNA表达水平显著高于正常对照及结肠息肉组(P<0.05),且与结肠癌的分化程度及临床分期相关(P<0.05);IFN-γ无阳性表达(0/67),IL-2则仅有3例阳性表达,其表达与结肠癌的分化程度及临床分期无相关性(P>0.05)。化疗后Th1类细胞因子表达增强,Th2类细胞因子的表达则减弱(P<0.05)。结论结肠癌患者Th1和Th2类细胞因子表达失衡,细胞免疫受抑,化疗可使结肠癌患者Th2类细胞因子的强势表达向Th1类逆转。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 逆转录聚合酶链反应 细胞因子 化学治疗
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PCR方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌 被引量:5
18
作者 李波 乔凤 +4 位作者 方丽 刘桂华 王韶 刘键 刘娅 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期154-156,共3页
目的:建立一种快速准确检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法。方法:采用聚合酶链反应 (PCR)特异性扩增单核细胞增生李斯特氏菌溶血素基因(hlyA),用PCR方法检测80份长春地区的食品样品。结果:在706 bp处出现hlyA基因的目的片段,食品... 目的:建立一种快速准确检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法。方法:采用聚合酶链反应 (PCR)特异性扩增单核细胞增生李斯特氏菌溶血素基因(hlyA),用PCR方法检测80份长春地区的食品样品。结果:在706 bp处出现hlyA基因的目的片段,食品样品中单核细胞增生李斯特氏菌阳性检出12份,阳性率为 15%,与吉林省疾病预防控制中心同步进行的国标法检测结果一致,二者符合率100%。结论:PCR方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌更简便、快速、敏感、特异性高,适用于基层单位开展食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染的调查及监测。 展开更多
关键词 食品 利斯特菌 单核细胞增生 聚合酶链反应/方法
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食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测 被引量:8
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作者 王韶 刘桂华 +3 位作者 乔凤 史杰萍 方丽 李波 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期933-936,共4页
目的:建立检测食品中金黄色葡萄球菌的PCR方法并将PCR方法与传统方法进行比较,评价PCR方法的检测效果。方法:采用PCR方法特异性扩增金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶编码基因(nuc基因),分别采用PCR方法和国家标准规定的方法检测180份吉林省... 目的:建立检测食品中金黄色葡萄球菌的PCR方法并将PCR方法与传统方法进行比较,评价PCR方法的检测效果。方法:采用PCR方法特异性扩增金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶编码基因(nuc基因),分别采用PCR方法和国家标准规定的方法检测180份吉林省各地区的抽检食品样品。结果:所检金黄色葡萄球菌在422bp处出现nuc基因目的片段;食品样品传统方法检出阳性42份,PCR方法检出45份,PCR检测方法与国标法检出阳性率比较,差异无显著性(P>0·05)。结论:PCR方法检测食品中金黄色葡萄球菌较传统方法更快速和简便,且具有较高的特异性和敏感性,可作为食品中金黄色葡萄球菌快速检测的手段。 展开更多
关键词 食品 葡萄球菌 金黄色 聚合酶链反应/方法 核糖核酸酶类 葡萄球菌感染/诊断
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常见肉类鉴别技术研究进展 被引量:22
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作者 高敬 魏迪 +1 位作者 张癸荣 聂凌云 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第11期356-360,共5页
近年来,食品安全问题,尤其是市场上各种肉类掺杂、掺假事件,成为人们日益关注的焦点。严格监测市场上肉制品,必须要有可靠、简便、快速的技术作支撑。本文综述了现阶段常见肉类鉴别技术的研究进展,并着重描述了聚合酶链式反应(polymeras... 近年来,食品安全问题,尤其是市场上各种肉类掺杂、掺假事件,成为人们日益关注的焦点。严格监测市场上肉制品,必须要有可靠、简便、快速的技术作支撑。本文综述了现阶段常见肉类鉴别技术的研究进展,并着重描述了聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,因其灵敏度高和特异性高、简便且耗时少,逐渐成为肉类检测的实用技术。 展开更多
关键词 肉类检测 传统方法 免疫学技术 聚合酶链式反应技术
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