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云南省不同地区恶性疟原虫MSA-1、MSA-2和Pf60.1基因多态性研究 被引量:1
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作者 张国森 杨亚明 +2 位作者 刘慧 张再兴 沈旭 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期371-372,共2页
关键词 云南 疟原虫 MSA-1 MSA-2蛋白 pf60.1基因 基因多态性
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PCR检测Pf60.1基因诊断恶性疟实验方法研究 被引量:1
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作者 刘慧 张国森 +1 位作者 杨亚明 张强 《实用寄生虫病杂志》 2001年第1期8-10,共3页
为探讨通过 PCR技术检测 Pf60 .1基因来诊断恶性疟的可行性 ,采用 PCR技术检测了 4年前采集贮存的 2 0例疑似疟疾病人的血样。阳性对照为恶性疟原虫 FCC1 /HN培养株 ;阴性对照为食蟹猴疟原虫、间日疟原虫及非疟区的正常供血员血样。结果... 为探讨通过 PCR技术检测 Pf60 .1基因来诊断恶性疟的可行性 ,采用 PCR技术检测了 4年前采集贮存的 2 0例疑似疟疾病人的血样。阳性对照为恶性疟原虫 FCC1 /HN培养株 ;阴性对照为食蟹猴疟原虫、间日疟原虫及非疟区的正常供血员血样。结果为 FCC1 /HN株、1 2例镜检定为恶性疟和 2例混合感染的血样扩增出长度为 3 1 3 bp~ 3 2 0 bp的特定 Pf60 .1基因片段 ;而阴性对照均未产生 DNA带型。此结果说明检测Pf60 k D中的 Pf60 .1基因片段的方法稳定性好 ,特异性强和敏感性高 ,是恶性疟诊断的理想方法之一。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 pf60.1基因 聚合酶链反应 诊断
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适冷菌Pseudomonas extremaustralis PF中海藻糖的合成途径及TreS基因的克隆 被引量:6
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作者 龙凤 李洁 +4 位作者 王光鹏 陈熙明 陈书燕 盛红梅 安黎哲 《兰州大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期87-93,共7页
通过对一株高寒冰缘植物内生适冷假单胞菌Pseudomonas extremaustralis PF的研究,发现该菌中同时存在TPS/TPP,TreY/TreZ和TreS三种海藻糖合成途径,其中TreS途径的合成酶活性最高.对该菌的海藻糖合成酶TreS的基因进行克隆,得到一个新的T... 通过对一株高寒冰缘植物内生适冷假单胞菌Pseudomonas extremaustralis PF的研究,发现该菌中同时存在TPS/TPP,TreY/TreZ和TreS三种海藻糖合成途径,其中TreS途径的合成酶活性最高.对该菌的海藻糖合成酶TreS的基因进行克隆,得到一个新的TreS基因PFTreS,该基因与已报道的细菌TreS基因在核酸序列上表现出较高的同源性(最高达80.2%).根据基因序列预测的PFTreS氨基酸序列具有TreS酶的催化功能保守区,与假单胞菌P.Fluorescens Pf-5的TreS有很高的同源性.这些结果表明了Pseudomonas extremaustralis中海藻糖的合成特性,为进一步揭示海藻糖的合成与Pseudomonas extremaustralis PF的低温响应机制的关系奠定了基础. 展开更多
关键词 PSEUDOMONAS extremaustralis PF 海藻糖 TreS基因 克隆
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基于伪F统计量的模糊聚类方法在基因表达数据分析中的应用 被引量:7
4
作者 易东 张彦琦 +4 位作者 王文昌 张蔚 杨梦苏 黄明辉 方志俊 《中国卫生统计》 CSCD 北大核心 2002年第3期146-150,共5页
目的 通过对基因芯片数据的分析 ,提出一种基因表达的分类方法。方法 首先 ,应用FCM模糊聚类法(FuzzyClusteringMethod)进行聚类 ,然后我们应用PFS(PseudoF statistics)统计量作为一个判别函数来确定最佳类数目。结果 将本方法应用... 目的 通过对基因芯片数据的分析 ,提出一种基因表达的分类方法。方法 首先 ,应用FCM模糊聚类法(FuzzyClusteringMethod)进行聚类 ,然后我们应用PFS(PseudoF statistics)统计量作为一个判别函数来确定最佳类数目。结果 将本方法应用于模拟数据、人类纤维原细胞血清基因表达数据上 ,其结果明显好于K 均值法。结论 本方法基于没有聚类数据的任何先验知识和组成成分信息的前提下 ,考虑如何确定数据的分类结构。根据实际结果发现 。 展开更多
关键词 基因 模糊聚类法 伪F-统计 数据分析
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报春PF sHSP 17-1基因转化拟南芥及耐热鉴定 被引量:3
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作者 张路 胡伟娟 +3 位作者 张启翔 高亦珂 石少川 王叶 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期177-181,186,共6页
根据灰岩皱叶报春PF sHSP 17-1热激蛋白基因序列,采用PCR法从差减文库中克隆得到该基因,并构建pCAMBIA1301-PF sHSP 17-1植物表达载体,通过根癌农杆菌介导的花器浸染法转化拟南芥,经潮霉素筛选、PCR和RT-PCR法鉴定后,对转基因植株和野... 根据灰岩皱叶报春PF sHSP 17-1热激蛋白基因序列,采用PCR法从差减文库中克隆得到该基因,并构建pCAMBIA1301-PF sHSP 17-1植物表达载体,通过根癌农杆菌介导的花器浸染法转化拟南芥,经潮霉素筛选、PCR和RT-PCR法鉴定后,对转基因植株和野生型对照进行高温胁迫,分析其耐热性差异。结果显示,在40℃、42℃、44℃处理下,转基因拟南芥的相对电导率和丙二醛含量升高的幅度均显著低于野生型对照,而脯氨酸含量的积累明显高于对照,可溶性蛋白的含量在热胁迫下也比对照稳定,仅有轻微下降。试验证明,PF sHSP 17-1基因对植物的耐热性有重要作用。 展开更多
关键词 PF sHSP17-1基因 拟南芥 转基因 耐热 热激蛋白
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报春PF sHSP21.4基因转化拟南芥的获得及耐热鉴定 被引量:1
6
作者 张路 胡伟娟 +1 位作者 张启翔 高亦珂 《分子植物育种》 CAS CSCD 2011年第5期635-641,共7页
根据灰岩皱叶报春PF sHSP21.4热激蛋白基因序列,采用PCR法从差减文库中克隆得到该基因并构建pCAMBIA1301-PF sHSP21.4植物表达载体,通过根癌农杆菌介导的花器浸染法转化拟南芥,经潮霉素筛选、PCR和RT-PCR法鉴定后,对转基因植株和野生型... 根据灰岩皱叶报春PF sHSP21.4热激蛋白基因序列,采用PCR法从差减文库中克隆得到该基因并构建pCAMBIA1301-PF sHSP21.4植物表达载体,通过根癌农杆菌介导的花器浸染法转化拟南芥,经潮霉素筛选、PCR和RT-PCR法鉴定后,对转基因植株和野生型对照进行高温胁迫,分析其耐热性差异。结果显示:在43℃或44℃处理下,转基因拟南芥幼苗的存活率明显高于野生型拟南芥,且高温处理后转基因植株叶片的相对电导率升高的幅度显著低于野生型对照,Fv/Fm值比野生型拟南芥下降幅度较小,可溶性蛋白的含量在热胁迫下有轻微上升,而野生型拟南芥的可溶性蛋白含量则随胁迫的加剧而显著降低。实验证明,PF sHSP21.4基因对植物的耐热性有重要作用。 展开更多
关键词 PF sHSP21.4基因 拟南芥 热激蛋白
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pfs基因原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化
7
作者 孟祥晨 杨杰 +1 位作者 赵日红 胡子毅 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第14期239-243,253,共6页
以植物乳杆菌KLDS1.0391的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增得到pfs基因,与Gen Bank中的序列对比发现同源性为99%。将目的基因与表达载体p QE-30连接,并将重组质粒p QE-30-pfs转化到E.coli M15中。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)... 以植物乳杆菌KLDS1.0391的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增得到pfs基因,与Gen Bank中的序列对比发现同源性为99%。将目的基因与表达载体p QE-30连接,并将重组质粒p QE-30-pfs转化到E.coli M15中。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,经SDS-PAGE分析,在全菌体蛋白中含有一条明显的特异性蛋白条带,大小约为27.4ku。经Ni-NTA纯化系统纯化后,在SDS-PAGE凝胶电泳图上获得纯化产物的条带。结果表明,原核表达载体p QE-30-pfs构建成功,且Pfs蛋白在大肠杆菌中成功表达,采用Ni-NTA纯化系统成功纯化了重组蛋白Pfs,为体外合成AI-2(Autoinducer-2)奠定了基础。 展开更多
关键词 pfs基因 重组质粒 诱导表达 重组蛋白Pfs
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致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05 Pfs基因的克隆、功能序列分析及原核表达
8
作者 郑婷婷 齐亚银 +2 位作者 王熙楚 孔科委 周霞 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期30-34,共5页
采用PCR技术从致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05基因组中扩增得到甲硫腺苷/S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Pfs)基因的全序列,对其功能序列进行分析,同时与其他细菌相应序列及编码的氨基酸进行同源性分析,构建该基因的原核表达载体,对表达蛋白进行反应... 采用PCR技术从致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05基因组中扩增得到甲硫腺苷/S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Pfs)基因的全序列,对其功能序列进行分析,同时与其他细菌相应序列及编码的氨基酸进行同源性分析,构建该基因的原核表达载体,对表达蛋白进行反应原性分析。结果显示:XJ05的Pfs基因全长696bp,与XJ01、XJ08、XJ11,与屎肠球菌TX 2466之间的同源性在99.1%以上,其中,XJ05与V583为100%,且关键的功能序列相同,与肺炎链球菌同源性在55.8%以上、霍乱弧菌同源性在55.0%以上;pfs基因编码231个氨基酸,XJ05、XJ01、XJ08、XJ11与肺炎链球菌、霍乱弧菌、粪肠球菌V583、屎肠球菌TX 2466的同源性在86.43%以上;构建的重组质粒经诱导后表达蛋白分子量为28ku,Western blot检测显示特异性条带。结果表明,表达的融合蛋白具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 粪肠球菌 Pfs基因 序列分析 原核表达
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生防假单胞菌Pf-5对秀丽隐杆线虫的毒性及其作用机制 被引量:5
9
作者 娄志英 王云鹏 +5 位作者 袁启明 张露露 顾沁 王暄 伍辉军 高学文 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期827-834,共8页
[目的]本文旨在研究生防假单胞菌(Pseudomonas protegens)Pf-5菌株的杀线虫活性,以及鉴定其产生的主要杀线虫活性物质。[方法]采用基于sacB基因的蔗糖致死无标记突变体系,构建Pf-5菌株的相关突变体;以模式线虫秀丽隐杆线虫(Caenorhabdit... [目的]本文旨在研究生防假单胞菌(Pseudomonas protegens)Pf-5菌株的杀线虫活性,以及鉴定其产生的主要杀线虫活性物质。[方法]采用基于sacB基因的蔗糖致死无标记突变体系,构建Pf-5菌株的相关突变体;以模式线虫秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)为作用对象,利用绿色荧光蛋白基因对菌株进行标记,研究菌株对秀丽隐杆线虫的致死效果;利用扫描和透射电镜研究Pf-5菌株杀线虫物质的作用机制。[结果]Pf-5菌株对秀丽隐杆线虫具有很强的致死活性,用不同浓度的Pf-5菌液处理线虫,48h对秀丽隐杆线虫的致死中浓度(LC50)为4.92×10^7CFU·mL^-1,96hLC50为3.58×10^6CFU·mL^-1;处理48h时,野生型Pf-5菌株对秀丽隐杆线虫的致死率达到73.57%,而突变体Pf-5ΔfitD的致死活性显著下降,只有25.04%;Pf-5菌株fitD基因的Delivery结构域和CROPS结构域缺失突变体对线虫的致死活性也显著下降,表明FitD蛋白是Pf-5菌株的主要杀线虫物质。扫描电镜结果表明,Pf-5菌株及其突变体都不会破坏线虫的体壁;透射电镜的结果则表明,Pf-5菌株导致线虫肠道绒毛变薄和脱落,而突变体Pf-5ΔfitD则没有此效果。[结论]生防假单胞菌Pf-5菌株中杀线虫物质为FitD蛋白,初步表明其作用位点在肠道部位。 展开更多
关键词 生防假单胞菌Pf-5 fitD基因 杀虫毒素 秀丽隐杆线虫
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奶牛隐性乳房炎致病性大肠杆菌AI-2信号分子检测 被引量:2
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作者 曹素芳 吴迪 +2 位作者 孔兰芳 皇甫和平 陈文定 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第8期9-12,16,共5页
为了探索奶牛隐性乳房炎大肠杆菌不同生长时期及不同培养条件下,AI-2信号分子的产生与lux S和pfs转录水平间的相互关系。应用哈维弧菌BB170,检测奶牛隐性乳房炎致病性大肠杆菌不同分离株、不同生长期及不同培养条件下AI-2的活性,应用实... 为了探索奶牛隐性乳房炎大肠杆菌不同生长时期及不同培养条件下,AI-2信号分子的产生与lux S和pfs转录水平间的相互关系。应用哈维弧菌BB170,检测奶牛隐性乳房炎致病性大肠杆菌不同分离株、不同生长期及不同培养条件下AI-2的活性,应用实时荧光定量PCR检测其AI-2产生水平与lux S基因与pfs基因转录的相关性。结果表明,E285、E80814、W41、E30707和EA701205株均能产生AI-2分子,但产生的AI-2均低于阳性菌BB152; E285在迟缓期、对数前期基本没有AI-2的表达,从对数中期开始AI-2开始大量表达,到对数后期达到顶峰,是阴性对照的12倍,随后下降,到稳定期已下降为阴性对照的3. 6倍。当培养基中添加蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、甘露醇、Na Cl及乳糖时,AI-2的活性均明显提高。实时荧光定量PCR结果显示,E285在不同生长期和不同培养条件时,其AI-2活性的高低与lux S基因转录水平一致,但与pfs基因的转录没有明显关系。提示奶牛隐性乳房炎致病性大肠杆菌分离株均能产生AI-2分子,其AI-2活性与lux S基因转录水平具有高度的相关性,与pfs基因的转录水平无明显相关性,蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、甘露醇、Na Cl及乳糖可促进AI-2合成。 展开更多
关键词 奶牛隐性乳房炎 致病性大肠杆菌 AI-2 LUXS基因 pfs基因
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Pf-Dmrt4,a potential factor in sexual development in the pearl oyster Pinctada fucata 被引量:3
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作者 WANG Qi SHI Yu HE Maoxian 《Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2018年第6期2337-2350,共14页
The mechanisms of sex determination and sex differentiation in the pearl oyster P inctada fucata are currently poorly understood. We therefore investigated the roles of orthologs of the D mrt gene family, key players ... The mechanisms of sex determination and sex differentiation in the pearl oyster P inctada fucata are currently poorly understood. We therefore investigated the roles of orthologs of the D mrt gene family, key players in male gonad differentiation in mammals, in P. fucata sex diff erentiation and sexual development. Pf-Dmrt4 exhibits features typical of the D mrt family, and displays significant homologies to the DMRT4 cluster. Pf-Dmrt4 mRNA expression in the gonads during a gametogenic cycle, measured by quantitative polymerase chain reaction, was maximal in mature individuals. P f-Dmrt4 expression, demonstrated by in situ hybridization, was localized in the spermatozoa, spermatids, oocytes and vitellogenic oocytes. Knockdown of Pf-Dmrt4 with double-stranded RNA resulted in decreased mRNA expression levels. And Pf-Dmrt4-dsRNA-injected groups showed spawning-stage male gonads, with ruptured follicles and released spermatozoa. Our results enhance the understanding of sex determination and differentiation in P. fucata and suggest that Pf-Dmrt4 could be involved in male gonadal development, and maintenance of male gonadal function. 展开更多
关键词 PINCTADA fucata Pf-Dmrt4 gene EXPRESSION sexual development
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奶牛隐性乳房炎中致病性大肠杆菌luxS及pfs基因表达及AI-2体外合成 被引量:1
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作者 曹素芳 王金合 +6 位作者 皇甫和平 康宇 陈奎荣 陈淑慧 张凡 赵雯娟 杨永磊 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第9期3-6,11,共5页
为了了解luxS基因和pfs基因变异情况,探索信号分子AI-2(Autoinducer-2,AI-2)体外合成的影响因素。本试验应用PCR法扩增了奶牛隐性乳房炎致病性大肠杆菌E285的luxS和pfs基因,经酶切后插入原核表达载体pET-30a(+)中,经PCR和酶切鉴定后进... 为了了解luxS基因和pfs基因变异情况,探索信号分子AI-2(Autoinducer-2,AI-2)体外合成的影响因素。本试验应用PCR法扩增了奶牛隐性乳房炎致病性大肠杆菌E285的luxS和pfs基因,经酶切后插入原核表达载体pET-30a(+)中,经PCR和酶切鉴定后进行序列测定及分析,构建luxS和pfs基因的重组表达质粒pET-luxS和pET-pfs,经诱导、纯化获得可溶性重组LuxS蛋白和Pfs蛋白,利用纯化的重组蛋白LuxS和Pfs体外合成AI-2分子。结果表明,扩增获得的luxS基因和pfs基因高度保守,与GenBank中已发表的核苷酸序列同源性均达到98%以上;两基因在原核表达系统中均获得了高效表达,利用获得重组蛋白LuxS和Pfs体外催化SAH,获得了AI-2分子,其浓度为200μmol/L,对其活性检测显示为阴性对照DH5α的61倍。提示奶牛隐性乳房炎致病性大肠杆菌E285的LuxS和Pfs蛋白在体外能催化SAH产生高活性的AI-2。为深入研究AI-2对E285的毒力基因表达、生物被膜形成的调控奠定基础。 展开更多
关键词 奶牛隐性乳房炎 致病性大肠杆菌 LUXS基因 pfs基因 AI-2
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鸭源鸡杆菌pfs基因的扩增及原核表达
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作者 姬向波 皇甫和平 +2 位作者 张晓曼 唐桂芬 向瑞平 《现代牧业》 2021年第3期1-4,共4页
以鸭源鸡杆菌临床分离株G7的基因组为模板,采用PCR技术,扩增得到5′-甲硫腺苷/S-腺苷高半胱氨酸核苷酶基因(pfs)的全序列,对其核苷酸序列及其编码的氨基酸序列进行了同源性分析,构建了该基因的原核表达载体并诱导表达。G7的pfs基因全长6... 以鸭源鸡杆菌临床分离株G7的基因组为模板,采用PCR技术,扩增得到5′-甲硫腺苷/S-腺苷高半胱氨酸核苷酶基因(pfs)的全序列,对其核苷酸序列及其编码的氨基酸序列进行了同源性分析,构建了该基因的原核表达载体并诱导表达。G7的pfs基因全长693 bp,与其他3个参考鸭源鸡杆菌核苷酸序列的同源性均在93%以上。诱导表达获得的蛋白大小为28 kD,与根据pfs编码基因所推导的蛋白大小一致。 展开更多
关键词 鸭源鸡杆菌 pfs基因 序列分析 原核表达
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晚期初治肺腺癌患者接受含铂联合化疗后生存获益影响因素及HER 2基因状态的影响
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作者 尚娜娜 刘志 +1 位作者 董雪茹 王鹏远 《中国医学工程》 2022年第4期11-14,共4页
目的探讨晚期初治肺腺癌患者接受含铂联合化疗后生存获益影响因素及HER2基因状态的影响。方法回顾性分析河南科技大学附属许昌市中心医院2015年1月至2019年12月收治接受含铂联合化疗期初治肺腺癌患者共424例临床资料,分析HER2基因状态... 目的探讨晚期初治肺腺癌患者接受含铂联合化疗后生存获益影响因素及HER2基因状态的影响。方法回顾性分析河南科技大学附属许昌市中心医院2015年1月至2019年12月收治接受含铂联合化疗期初治肺腺癌患者共424例临床资料,分析HER2基因状态与临床特征关系及对临床疗效的影响,评价患者接受含铂联合化疗后生存获益影响因素。结果424例患者中男252例,女172例;中位年龄57.0(32.0~75.0)岁;根据HER2基因状态划分,突变型12例,野生型412例;接受含铂联合化疗中位周期数为6.0(2.0~14.0)个;治疗后客观缓解率(ORR)和疾病控制率(DCR)分别为22.64%(96/424),71.70%(324/424)。HER2基因状态与晚期初治肺腺癌患者年龄、性别及既往吸烟情况有关(P<0.05);HER2突变组接受含铂联合化疗后ORR和DCR均显著高于HER2野生组(P<0.05)。单因素分析结果显示,合并脑转移、给予维持化疗及HER2基因型与晚期初治肺腺癌患者接受含铂联合化疗后生存获益有关(P<0.05);Cox比例风险回归模型多因素分析结果证实,存在HER2基因突变是晚期初治肺腺癌患者接受含铂联合化疗后无进展生存期(PFS)独立危险因素(P<0.05)。结论晚期初治肺腺癌患者接受含铂联合化疗后生存获益与HER2基因突变独立相关,HER2突变型人群接受含铂联合化疗PFS更长。 展开更多
关键词 肺癌 晚期 HER2基因 化疗 无进展生存期
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