非洲猪瘟p62蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

为了获得非洲猪瘟(african swine fever virus,ASFV)p62蛋白进行血清学诊断技术研究。根据GenBank ASFV参考序列合成CP530R基因(编码p62蛋白),插入pET-32a(+)载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,SDS-PAGE及Western blot鉴定。采用Ni柱纯化p62蛋白,然后免疫Balb/c雌鼠,制备鼠抗ASFV p62蛋白的多克隆抗体,ELISA检测多抗效价。结果表明,成功构建了pET32a-p62质粒,表达蛋白为56.1 kDa,以包涵体表达为主。Western blot显示该蛋白能与ASFV阳性血清结合。Ni柱纯化获得p62蛋白浓度为2.9 mg/mL。用该蛋白免疫小鼠,三免后抗体效价达1∶256000。表明表达蛋白具有良好抗原性,制备的p62多克隆抗体具有较高的反应性和特异性,为进一步研究p62蛋白的特性和诊断奠定基础。

p62体募集自噬相关蛋白WIPI2的机制研究

目的探讨自噬接头蛋白(Sequestosome 1,SQSTM1/p62)与磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositide 3-kinase,PI3K)复合物的结合蛋白WD重复结构域磷酸肌醇互作蛋白2(WD repeat domain phosphoinositide-interacting protein 2,WIPI2)在空间上定位的调控关系。方法使用CRISPR-Cas9技术敲除正常大鼠肾上皮细胞(Normal rat kidney,NRK)中的自噬相关基因2A(Autophagy-related gene,Atg2A)、自噬相关基因2B(Autophagy-related gene,Atg2B)和p62基因,建立Atg2A和Atg2B基因敲除的细胞系(Atg2AB double knockout,Atg2AB DKO)以及p62基因敲除细胞系(p62 knockout,p62 KO);透射电镜观察Atg2AB DKO细胞中p62体周围囊泡的定位;活细胞成像观察Atg2AB DKO细胞内p62体与自噬相关蛋白WIPI2的定位变化;光漂白实验观察相变蛋白p62与WIPI2的荧光漂白恢复;通过免疫荧光观察WT、p62 KO和Atg2AB DKO细胞中WIPI2与p62的定位关系;通过蛋白免疫印记检测WT和p62 KO细胞中WIPI2表达量的变化。结果建立了Atg2AB DKO和p62 KO细胞系;透射电镜显示Atg2AB DKO细胞中p62附近聚集了大量囊泡;在Atg2AB DKO中,通过活细胞成像观察到tdTomatop62与WIPI2-GFP高度共定位;荧光漂白实验观察到WIPI2具有流动性;通过免疫荧光观察到,与WT细胞相比,在Atg2AB DKO中WIPI2点的数量明显增多(P<0.0001);与WT细胞相比,p62 KO细胞中WIPI2点的数量和表达量无明显变化(P>0.05)。结论无膜细胞器p62能够与具有流动性的WIPI2阳性囊泡动态融合,促进自噬体的形成。

自噬受体蛋白p62的表达及功能研究

目的:构建人自噬受体蛋白p62的真核表达质粒,初步探索p62在氧化应激中的功能。方法:从HeLa细胞系中扩增SQSTM1基因,插入真核表达载体nFLAG/pRK5,构建p62的重组表达质粒nFLAG-SQSTM1/pRK5。采用HEK293T细胞表达带有FLAG标签的重组p62蛋白,免疫共沉淀法观察p62和核因子E2相关因子2(Nrf2)相互作用。结果:重组表达质粒nFLAG-SQSTM1/pRK5经琼脂糖凝胶电泳和测序对比均与预期结果一致,Western blot实验中p62蛋白可正常表达,且大小与预期结果一致。免疫共沉淀和蛋白质谱证明p62与氧化应激转录调控蛋白Nrf2可相互作用。结论:采用真核表达系统成功表达p62蛋白,并发现其与Nrf2可相互作用,为进一步研究p62与Keap1-Nrf2通路关系提供依据。

胆囊癌组织P62蛋白的表达及其与血管生成关系

目的 :检测胆囊癌组织中P6 2蛋白、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达和微血管密度 (MVD) ,探讨它们的相互关系 ,以及与胆囊癌临床病理特征的关系。方法 :4 1例胆囊癌和 2 2例慢性胆囊炎组织中 ,P6 2蛋白和bFGF的表达用SP免疫组化染色法进行检测。胆囊癌组织中MVD用抗CD34单抗 (mAb)做SP免疫组化染色进行检测。结果 :4 1例胆囊癌组织中 ,P6 2和bFGF表达阳性率分别为 6 3.4 %和 75 .6 % ,均高于 2 2例慢性胆囊炎组织 (P <0 .0 1)。P6 2的表达与胆囊癌淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 ) ,与癌组织的分级、临床分期无显著关系。bFGF的表达与胆囊癌临床病理分期及组织学分级有关 (P <0 .0 5 ) ,而与淋巴结转移无显著关系。P6 2表达率与bFGF表达率呈正相关关系 (r=0 .5 2 1;P <0 .0 1)。两者的表达均与患者的年龄、性别、肿瘤的种类、是否伴有胆囊结石无关。胆囊癌组织中MVD明显高于慢性胆囊炎组织 (P <0 .0 1)。P6 2及bFGF表达阳性组织MVD高于表达阴性组织 (分别P <0 .0 5和P <0 .0 1)。MVD与胆囊癌的Nevin分期及淋巴结转移有关 (P<0 .0 1) ,与患者的年龄、性别、肿瘤种类、分化程度以及是否伴有胆囊结石无关。结论 :P6 2蛋白及bFGF的表达与胆囊癌组织中血管的生成相关 ,在胆囊癌的发生和发展过程中可能具有重?

表皮生长因子受体、自噬相关蛋白5、p62蛋白在甲状腺乳头状癌合并颈部淋巴结转移中的表达及临床意义

目的分析表皮生长因子受体(EGFR)、自噬相关蛋白5(ATG5)、p62在甲状腺乳头状癌(PTC)合并颈部淋巴结转移患者中的表达及意义。方法取80例PTC患者的PTC组织及相应的癌旁正常组织,同时取其中合并颈部淋巴结转移的45例患者的转移淋巴结组织标本。免疫组化法检测PTC组织、转移淋巴结组织和癌旁正常组织中EGFR、ATG5、p62蛋白的表达情况,及其与PTC患者临床特征及生存情况的关系。结果PTC组织和转移淋巴结组织中EGFR、p62蛋白的阳性表达率均高于癌旁正常组织,ATG5蛋白的阳性表达率低于癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同TNM分期和淋巴结转移情况PTC患者PTC组织中ATG5蛋白阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);不同分化程度、TNM分期和淋巴结转移情况PTC患者PTC组织中p62蛋白阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Spearman相关分析结果显示,PTC组织和转移淋巴结组织中,ATG5的表达与p62呈负相关(P﹤0.01)。对80例PTC患者进行为期3年的随访,病死22例,3年生存率为72.50%(58/80)。p62阳性表达PTC患者的3年生存率为65.52%,低于阴性表达患者的90.91%,差异有统计学意义(P﹤0.05)。Cox风险比例回归模型结果显示,TNM分期、淋巴结转移、EGFR阳性表达、p62阳性表达为PTC患者预后的独立危险因素(P﹤0.05),ATG5阳性表达为PTC患者预后的独立保护因素(P﹤0.05)。结论PTC组织及淋巴结转移组织中EGFR、p62的阳性表达率较高,ATG5的阳性表达率较低,此外,ATG5及p62与PTC生物学行为有关,可能成为PTC诊断的潜在指标。

乳腺癌中p62^(m-myc)和p16蛋白表达与预后的关系探讨

本研究采用免疫组化ＬＳＡＢ法对１０７例有随访资料的乳腺癌石蜡标本进行了ｐ６２ｃｍｙｃ和ｐ１６蛋白的联合检测，结合ＥＲ、ＰＲ、病理类型、组织学分级等进行了ｃｏｘ模型分析，并绘制了两者表达相反时的ｋａｐｌａｎＭｅｉｅｒ生存曲线。结果显示：ｐ６２ｃｍｙｃ蛋白在乳腺癌的阳性表达率为６３５５％，ｐ１６蛋白的阳性表达率为４０１９％。ｐ６２ｃｍｙｃ表达阳性的乳腺癌患者存活时间较短，ｐ１６蛋白表达阳性者存活时间较长。

p62蛋白在大肠癌中的表达及对大肠癌细胞生物学特性的影响

目的探讨p62蛋白在大肠癌中的表达水平及对大肠癌细胞生物学特性的作用。方法收集60例大肠癌患者的大肠癌组织及其相应的癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法检测不同组织中p62蛋白的表达情况,分析p62蛋白的表达情况与患者临床特征及预后的关系。体外培养处于对数生长期的大肠癌HT29和SW480细胞,并选择p62蛋白表达水平高的HT29细胞进行转染,将转染p62特异性干扰小RNA(siRNA)的HT29细胞作为siRNA/p62组,未进行处理的HT29细胞作为阴性对照组,转染阴性对照序列的HT29细胞作为siRNA/SCR组。采用蛋白质印迹法(Westernblot)检测转染后大肠癌HT29和SW480细胞中p62蛋白的表达情况,噻唑蓝(MTT)法和划痕实验分别检测转染后HT29细胞的增殖情况和迁移能力。结果大肠癌组织中p62蛋白的阳性表达率为66.7%,明显高于癌旁组织的36.7%(P﹤0.01)。不同远处转移情况的大肠癌患者大肠癌组织中p62蛋白的阳性表达率比较,差异有统计学意义(P﹤0.01);不同年龄、性别、肿瘤直径、分化程度和临床分期的大肠癌患者大肠癌组织中p62蛋白的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。p62蛋白阳性表达患者的1年累积生存率明显低于p62蛋白阴性表达的患者(P﹤0.01)。HT29细胞中p62蛋白的表达水平高于SW480细胞。转染后,siRNA/p62组HT29细胞中p62蛋白的表达水平明显低于siRNA/SCR组和阴性对照组,siRNA/p62组HT29细胞的迁移距离、光密度(OD)值均明显低于阴性对照组和siRNA/SCR组(P﹤0.01)。结论p62蛋白可能在大肠癌的发生、发展过程中发挥着重要的作用,其可能是大肠癌进展和预后不良的潜在标志物。

血清p62及LC3-Ⅱ联合检测对HBV-ACLF患者近期预后的价值

目的探讨血清自噬相关蛋白[p62和微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)]联合检测在预测乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者近期预后中的应用价值。方法收集2016年9月至2018年9月在辽宁中医药大学附属医院就诊的HBV-ACLF患者78例(ACLF组),另选取同期健康体检者42名作为对照组。两组均采集清晨空腹静脉血,测定总胆红素(TBil)、肌酐(Cr)和国际标准化比值(INR),计算终末期肝病模型(MELD)分值;使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定患者血清中p62和LC3-Ⅱ水平;记录患者入院后3个月内临床结局;应用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清p62、LC3-Ⅱ预测HBV-ACLF患者近期预后的效力。结果ACLF组血清LC3-Ⅱ水平明显高于对照组[(68.35±16.07)ng/mL比(37.96±11.50)ng/mL],p62水平低于对照组[(2.30±1.45)ng/mL比(4.63±2.38)ng/mL],差异均有统计学意义(均P<0.05);Pearson相关分析显示,血清p62与MELD评分呈负相关(r=0.383,P<0.05),血清LC3-Ⅱ与MELD评分呈正相关(r=0.458,P<0.05);通过ROC曲线确定p62、LC3-Ⅱ预测HBV-ACLF患者近期预后的最佳临界值分别为1.51 ng/mL、80.74 ng/mL,二者联合预测的AUC[0.813(95%CI:0.710~0.892)]分别大于p62[0.727(95%CI:0.616~0.821)],LC3-Ⅱ[0.736(95%CI:0.626~0.828)]单项预测的AUC,差异均有统计学意义(均P<0.05),而p62与LC3-Ⅱ预测HBV-ACLF预后的AUC差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清p62与LC3-Ⅱ在HBV-ACLF患者短期预后预测中具有一定价值,二者联合检测能提高预后预测效力。

乳腺癌P62^(C-myc)蛋白表达与雌激素和孕激素受体的关系及其临床意义

为探讨乳腺癌Ｐ６２Ｃｍｙｃ蛋白表达与雌激素和孕激素受体的关系及其临床意义，采用ＬＳＡＢ免疫组化法对１０７例乳腺癌标本进行Ｐ６２Ｃｍｙｃ蛋白检测。结果：Ｐ６２Ｃｍｙｃ蛋白表达阳性率为６３．５５％（６８／１０７），在生存时间≤５年、＞５年＜１０年及≥１０年者，其Ｐ６２Ｃｍｙｃ蛋白表达阳性率分别为９４．００％（４７／５０），６５．００％（１３／２０）和２１．６２％（８／３７），表明Ｐ６２Ｃｍｙｃ蛋白过度表达与乳腺癌的临床分期晚、组织学分级高及腋淋巴结转移有关，而与雌、孕激素受体状况关系不大。由此提示：Ｐ６２Ｃｍｙｃ蛋白表达可作为判断乳腺癌预后的一个重要指标。

AKT和p62在外阴鳞状细胞癌变中的表达及意义

目的:研究自噬相关基因AKT和p62在外阴鳞癌中的表达,明确二者与外阴鳞癌临床病理特征的关系。方法:选取2008年1月至2014年12月盛京医院外阴鳞癌(VSCC)40例石蜡包埋组织作为实验组;外阴上皮内瘤变(VIN)30例、正常外阴皮肤10例石蜡包埋组织作为对照组。采用免疫组化SP法检测AKT和p62蛋白在外阴鳞癌、VIN和外阴正常皮肤中的表达水平。分析AKT、p62与VSCC临床病理特征相关性。结果:与正常外阴皮肤相比,AKT和p62蛋白在VIN中的表达显著增加,在VSCC组织中的表达量增加更为显著,与VSCC的病理分级呈正相关(P<0.05)。AKT和p62蛋白呈正相关(P<0.05)。结论:自噬相关蛋白AKT和p62在VSCC中表达增加,与VSCC的病理分级呈正相关,二者的表达改变与VSCC的发生和进展相关。

清热活血方对CIA大鼠自噬相关蛋白p62表达的影响

目的 研究清热活血方对胶原诱导关节炎(collagen type Ⅱ-induced arthritis, CIA)大鼠滑膜组织、外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)自噬相关蛋白p62的影响,进一步探讨清热活血方防治类风湿关节炎的相关机制。方法 40只SD大鼠随机分成正常组、模型组、清热活血方组、依那西普组,用免疫源性牛Ⅱ型胶原造模,造模成功后各组大鼠分别给予相应药物灌胃,连续治疗28 d后观察大鼠关节肿胀程度,检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)及白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)水平、滑膜及PBMC中p62蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠出现关节红肿,血清TNF-α、IL-1β水平上升(P<0.01),关节滑膜组织及PBMC中p62 mRNA水平上升(P<0.01),p62蛋白相对含量降低(P<0.01)。与模型组比较,清热活血方组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量降低(P<0.01),滑膜组织及PBMC中p62 mRNA水平均降低(P<0.01),p62蛋白相对含量升高(P<0.01)。结论 清热活血方可通过下调CIA大鼠血清TNF-α、IL-1β水平抑制大鼠滑膜组织及PBMC中p62蛋白的转录,减少p62蛋白的消耗,抑制自噬水平而起到抗炎作用。

EGFR和自噬相关蛋白Atg5、p62在宫颈癌中的表达及意义研究

目的分析表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)和自噬相关蛋白Atg5、p62在宫颈癌患者中的表达,探讨其与临床病理及预后因素的关系。方法收集2014年6月至2018年2月收治的80例经病理学证实为宫颈癌患者的组织标本及其癌旁正常组织标本,同时收集上述患者伴有盆腔淋巴结转移组织标本45例。比较宫颈癌组织、转移淋巴结组织和正常组织中EGFR、Atg5、p62表达情况和以上指标与宫颈癌患者临床病理特征及生存情况的关系。结果EGFR、p62在宫颈癌组织转移淋巴结组织中表达率均明显高于癌旁正常组织(P<0.05),Atg5在宫颈癌组织中和转移淋巴结组织中表达率分别为21.25%、33.33%,明显低于正常组织(P<0.05)。EGFR表达阳性率与宫颈癌临床病理参数均无相关性(P>0.05)。Atg5、p62在不同年龄及肿瘤直径中的表达差异无统计学意义(P>0.05),p62表达随肿瘤分化程度升高而降低,不同分化程度间差异有统计学意义(P<0.05),Atg5在不同肿瘤分化程度间差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅲ+Ⅳ期和有淋巴结转移患者中的Atg5表达分别低于Ⅰ+Ⅱ期组和无淋巴转移组(P<0.05),而p62的表达与之相反。Spearman相关分析显示,宫颈癌组织中Atg5和p62的表达呈明显负相关(r=-0.656,P<0.01),EGFR与Atg5和p62无相关性(P>0.05);在转移淋巴结组织中,Atg5和p62的表达呈负相关(r=-0.562,P<0.01),EGFR与Atg5和p62无明显相关性(P>0.05)。80例患者随访3年死亡22例,3年生存率为72.50%(58/80),宫颈癌组织中EGFR及p62高表达者3年生存率分别低于EGFR及p62低表达者,而Atg5高表达者3年生存率高于低表达者(P<0.05)。Cox比例风险模型分析显示:TNM分期、淋巴结转移、EGFR、p62为宫颈癌预后的独立危险因素,Atg5为保护因素。结论EGFR、p62在宫颈癌组织及淋巴结转移组织中呈高表达,而Atg5呈低表达,三者可作为宫颈癌患者预后独立预测因素,此外,Atg5及p62与宫颈癌生物学行为有关,可能成为宫颈癌诊断的潜在指标。

DAPK-1与p62/SQSTM1在早发型重度子痫前期患者胎盘组织中表达及临床意义

目的:探讨死亡相关蛋白激酶1(DAPK-1)和自噬受体蛋白p62(p62/SQSTM1)在早发型重度子癫前期(PE)患者胎盘组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学SABC法检测66例胎盘组织石蜡标本中DAPK-1和p62/SQSTM1的表达,其中早发型重度PE标本26例、晚发型重度PE 40例,正常孕妇30例(对照组)。结果:DAPK-1在对照组、晚发型重度PE组、早发型重度PE组中的阳性表达率分别为23.3%(7/30)、52.5%(21/40)、92.3%(24/26)有差异(P<0.05);早发型重度PE阳性表达较对照组、晚型重度PE组高(P<0.05);晚发型重度PE阳性表达较对照组高(P<0.05)。p62/SQSTM1在对照组、晚发型重度PE组、早发型重度PE中的阳性表达率分别为76.7%(23/30)、47.5%(19/40)、19.2%(5/26)有差异(P<0.05);早发型重度PE阳性表达较对照组、晚发型重度PE组低(P<0.05);晚发型重度PE阳性表达较对照组低(P<0.05)。DAPK-1和p62/SQSTM1的表达呈负相关(r=-0.505)。结论:DAPK-1与p62/SQSTM1可能与PE的发生发展和严重程度相关。

非洲猪瘟病毒p62蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)p62蛋白的特异性单克隆抗体,并初步应用于感染组织样品中ASFV抗原的免疫组化(IHC)检测,本研究以杆状病毒表达的非洲猪瘟病毒重组p62蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞。结果显示:基于纯化的p62蛋白建立的间接ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选和亚克隆,获得了18株可稳定分泌抗非洲猪瘟病毒p62蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经IFA检测,制备的单克隆抗体均与非洲猪瘟病毒反应,且不与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型等猪源常见病毒反应,特异性良好。抗体识别蛋白的鉴定结果显示,3株MAbs识别p35蛋白,15株MAbs识别p15蛋白。14株MAbs重链亚类为IgG1型,4株MAbs重链亚类为IgG2a,轻链均为κ链。利用18株MAbs对ASFV感染猪的肺、扁桃体、淋巴结等组织进行IHC检测,结果显示5株MAbs均能够与感染ASFV的组织发生特异性的免疫反应。本研究获得的非洲猪瘟病毒p62蛋白单克隆抗体可为非洲猪瘟病毒免疫学检测方法的建立及p62蛋白的结构功能等基础研究提供重要的生物材料。

雷公藤内酯醇联合热疗对肝癌细胞增殖、凋亡及p62蛋白表达的影响

目的观察雷公藤内酯醇(TPL)联合热疗对肝癌细胞增殖、凋亡及p62蛋白表达的影响。方法将对数生长期的肝癌HepG2细胞随机分为4组,对照组不处理,TPL组加入终浓度20 nmol/L的TPL作用24 h,热疗组于43℃加热150 min,联合组加入TPL后热疗处理。取各组细胞,采用MTT法测算细胞增殖抑制率,流式细胞仪测算细胞凋亡率,Western blotting法检测自噬相关蛋白p62。结果联合组细胞增殖抑制率高于TPL组、热疗组(P均<0. 05),TPL组、热疗组细胞增殖抑制率差异无统计学意义。细胞凋亡率对照组<TPL组、热疗组<联合组(P均<0. 05),TPL组、热疗组细胞凋亡率差异无统计学意义。细胞中p62蛋白相对表达量对照组<TPL组、热疗组<联合组(P均<0. 05),TPL组、热疗组细胞中p62蛋白相对表达量差异无统计学意义。结论 TPL联合热疗较单一治疗可更有效地抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡,该作用有可能与其上调p62蛋白表达抑制细胞自噬有关。

Klotho蛋白对缺血再灌注急性肾损伤中Bax、Bcl-2、p62及LC3蛋白表达的影响

目的观察Klotho蛋白对缺血再灌注急性肾损伤(AKI)小鼠Bax、Bcl-2、p62以及LC3蛋白表达的影响。方法2017年6月—2018年9月在内蒙古自治区人民医院动物实验室进行实验,选择小鼠60只,按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、肾脏缺血再灌注组(I/R组)和Klotho蛋白组各20只,光镜下观察各组肾组织病理学改变情况,观察肾功能变化情况,检测肾组织Bax、Bcl-2、p62以及LC3蛋白的表达情况。结果Sham组小鼠肾组织未发生病理改变,I/R组小鼠肾损伤明显,Klotho蛋白组小鼠肾损伤得到改善。SCr和BUN浓度比较,Sham组<Klotho蛋白组<I/R组(F/P=48.028/0.000、29.716/0.000);Bcl-2和p62蛋白比较,Sham组>Klotho蛋白组>I/R组,Bax蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值比较,Sham组<Klotho蛋白组<I/R组(F/P=17.143/0.000、27.305/0.000、26.127/0.000、28.528/0.000)。结论补充Klotho蛋白可缓解小鼠缺血再灌注急性肾损伤后肾功能的丢失,减轻肾组织损伤,起到肾保护作用。

p62蛋白在原发性骨肿瘤中作用机制的研究进展

p62是一种多功能接头蛋白,通过调控多种信号转导途径发挥不同作用。p62蛋白在几种人类恶性肿瘤中过表达,参与肿瘤的增殖、侵袭及迁移,p62蛋白与肿瘤的发生发展密切相关且在骨转移癌中发挥重要作用。原发性骨肿瘤具有侵袭性强、易复发等特点,治疗较为困难。p62蛋白在几种原发性骨肿瘤(多发性骨髓瘤、骨肉瘤、骨巨细胞瘤)中过表达,可以通过调节多种信号通路在原发性骨肿瘤中起重要作用。目前,p62蛋白在原发性肿瘤方面的研究较为局限,有待进一步研究为原发性骨肿瘤治疗提供理论依据。

不明原因羊水过少孕妇胎盘组织中自噬体及自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ和P62的表达情况

目的分析不明原因羊水过少孕妇的胎盘组织中自噬体、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和P62的表达情况,探讨不明原因羊水过少与自噬反应的关系。方法收集足月妊娠的30例不明原因羊水过少产妇(观察组)和30例羊水量正常产妇(对照组)的胎盘组织。使用透射电子显微镜观察胎盘组织内自噬体表达情况,免疫印迹试验和免疫组化法分别检测胎盘组织LC3-Ⅱ、P62蛋白的表达水平,苏木精-伊红染色观察胎盘组织的病理变化。结果透射电镜下发现观察组的胎盘组织内部出现双层膜结构的自噬体。免疫印迹试验和免疫组化实验结果均显示,与对照组比较,观察组的LC3-Ⅱ蛋白表达量升高,P62蛋白表达量降低(均P<0.05)。苏木精-伊红染色结果显示,对照组胎盘组织内部细胞排列整齐,观察组的胎盘组织内出现大量血管损伤。结论不明原因羊水过少孕妇的胎盘组织中自噬体和自噬反应表达增加。推测胎盘组织中自噬反应过度致使细胞发生自噬性死亡,血管组织发生破损,可能为不明原因羊水过少的发生机制。

胰腺癌患者自噬标记蛋白Beclin-1和P62的表达及其相关性

目的分析不同来源胰腺组织中自噬标记蛋白Beclin-1和P62含量的差异及其相关性。方法选取60例胰腺癌临床确诊患者、60例胰腺炎确诊患者和60例健康居民作为研究对象,应用免疫组织化学法检测胰腺组织中自噬相关蛋白Beclin-1和P62的含量差异,并分析不同病情的胰腺癌患者病理组织中Beclin-1和P62表达含量的差异,同时对2种标记物进行相关性分析。结果 4组不同来源胰腺组织中Beclin-1蛋白(F=1013. 51,P=0. 00),P62(F=355. 72,P=0. 00)含量的差异具有统计学意义;且两两比较发现,Beclin-1蛋白和P62含量的差异均显著(均有P <0. 05)。不同病情(肿瘤大小、分化程度、病变部位、TNM分期、周围组织侵犯情况)胰腺癌患者病理组织中Beclin-1和P62表达含量的差异也显著(P均<0. 05);胰腺癌患者病理组织进行免疫组化分析,阳性物质中Beclin-1的平均积分光密度(252130. 47±20147. 33),P62表达强度评分(5. 13±1. 46),两者呈显著相关(Pearson=0. 87,P=0. 00)。结论 Beclin-1和P62与胰腺癌的发生发展密切相关,且Beclin-1和P62呈显著相关性,不同病情胰腺癌患者亦存在差异性表达。

Beclin-1、P62、LC3B在肺炎链球菌感染小鼠肺部中的表达变化

目的:探讨自噬相关蛋白Beclin-1、P62及微管相关蛋白轻链3B(microtubule-associated protein light chain 3B,LC3B)在肺炎链球菌感染小鼠肺部中的表达及意义。方法:生长至对数生长期的肺炎链球菌标准株D39用无菌PBS调节浓度为1.5×109CFU/mL,采用鼻滴的方法对50只SPF级雌性Balb/c鼠(6~8周,16~20 g)进行处理,分别在感染后0、6、12、24、48 h收集Balb/c小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)及肺组织,瑞氏-吉姆萨染色进行BALF细胞计数,HE染色观察肺组织病理学改变,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、P62、LC3B在肺组织中的表达水平,免疫荧光观察LC3B在肺组织中的表达情况。结果:HE染色显示,小鼠鼻饲肺炎链球菌后12 h及24 h后肺组织内出现大量炎症细胞浸润。BALF中总细胞数量及中性粒细胞数量于感染后6 h开始增高[(1.280±0.506)vs.(6.272±1.312),P=0.000;(0.000±0.000)vs.(3.456±1.308),P=0.000],在12 h时达到高峰[(1.280±0.506)vs.(19.456±0.997),P=0.000;(0.000±0.000)vs.(15.040±1.012),P=0.000],48 h后基本恢复正常水平[(1.280±0.506)vs.(3.520±0.933),P=0.005;(0.000±0.000)vs.(0.128±0.175),P=0.835]。Western blot结果显示:自噬相关蛋白Beclin-1于感染后6 h开始增加[(0.626±0.078)vs.(0.921±0.093),P=0.002],48 h时达到最高水平[(0.626±0.078)vs.(1.884±0.158),P=0.000];自噬相关蛋白P62于感染后6 h开始减少[(2.915±0.094)vs.(2.275±0.269),P=0.000],48 h时降低至最低水平[(2.915±0.094)vs.(1.178±0.142),P=0.000];自噬相关蛋白LC3B于感染后12 h开始升高[(0.747±0.197)vs.(1.429±0.318),P=0.006],24 h时达到高峰[(0.747±0.197)vs.(2.002±0.451),P=0.000],48 h后降低[(0.747±0.197)vs.(1.563±0.501),P=0.002]。免疫荧光显示:小鼠感染后12 h与24 h,肺组织中LC3B蛋白表达水平增加。结论:肺炎链球菌感染小鼠肺部后激活自噬的发生,且自噬在免疫调节过程中发挥着重要作用。