新疆地区249例RhD变异型基因分型研究

目的研究分析新疆地区RhD变异型标本的RHD基因分型特征。方法收集2006年1月—2023年6月常规RhD阴性确认工作中RhD抗原盐水法阴性或弱阳性、间接抗人球蛋白试验(IAT)阳性的RhD变异型标本249例,并做RhCE抗原分型,提取血液基因组DNA,采用PCR-SSP或qPCR方法对RHD基因进行分型,必要时用基因测序验证。结果249例RhD变异型标本中,检出弱D15型(RHD*15)155例(62.25%)、DⅥtype 3型(RHD*06.03.01)30例(12.05%),弱D1型(RHD*01W.1)7例(2.81%)、弱D17型(RHD*01W.17)2例(0.80%)、DⅥtype 4型(RHD*06.04)3例(1.20%)、DⅤtype 2型(RHD*05.02)9例(3.61%)、DⅢa型(RHD*03.01)1例(0.40%),以及DEL1227A(RHD*01EL.01)6例(2.41%),未能确定RHD等位基因型别,有待进一步基因测序分析的标本有36例。RHD*15的常见Rh表型为ccEe。结论新疆地区RhD变异型的RHD基因以RHD*15为最常见,并存在丰富的遗传多态性。

重庆地区RhD变异型无偿献血者的基因多态性及其表型研究

目的对重庆地区22例RhD变异型无偿献血者标本进行Rh血型血清学检测和三代基因测序,了解重庆地区RhD变异型的表型分布及其基因分型。方法选择2023年1—8月本中心参与无偿献血的人群作为研究对象。使用传统血清学方法对其进行RhD表型鉴定,确定为RhD变异型后使用D-screen试剂盒对其进行RhD不同抗原表位的检测。此外,提取其基因组DNA,使用叠瓦式引物设计进行多段扩增、拼接获得RHD基因全长序列进行三代测序检测,并用SnapGene软件对序列结果进行分析。结果在22例RhD变异型中,8例为DVI 3型(36.36%),其存在RHD-CE(3-6)-D杂交等位基因;6例部分弱D15型(27.27%),主要发生的突变为c.845G>A;6例亚洲型Del(27.27%),主要发生的突变为c.1227G>A,还有1例弱D17型发生的突变为c.340C>T和1例推测为部分D(c.491A>T,p.Asp164Val,错义突变)。结论重庆地区无偿献血人群中最常见的RhD变异型为DVI 3型,使用SMRT三代测序技术可以获得RhD变异型单倍体全长。

广州地区RhD阴性献血者Del表型及基因型分析

目的研究广州地区RhD阴性献血者D放散型(Del)分布、表型及基因型以了解本地区DEL血型分子生物学背景。方法对2021年11月1日—2022年6月30日期间广州地区献血者采用盐水法初筛为RhD阴性血液进行间接抗人球蛋白试验(IAT)血清学确认、采用RhCE分型卡确定RhCE表型,对1146例确认RhD阴性所有C+(n=459)以及随机抽取部分C-标本(n=175)进行吸收放散(Del)筛查(共634例);提取Del阳性标本DNA进行高分辨熔解曲线分析法(HRM)实时荧光PCR检测RHD基因c.1227位点基因情况;对HRM检测RHD^(*)1227位点无突变标本采用限制性片段多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)扩增后产物作PstⅠ酶切,进行电泳分析RHD基因合子型;sanger法进行RHD基因进行外显子测序(exon 1-10),采用SeqMan软件分析基因突变情况;采用第3代单分子测序技术对可疑Del阳性标本进行RHD全基因分析。结果634例确认RhD阴性标本吸收放散试验结果显示Del表型占36.1%(229/634),占总RhD确认阴性的20%(229/1146);229例DEL的RhCE分型分别为Ccee 181例,CCee 40例,CcEe 7例,ccEe 1例,HRM结合RHD盒子型分析结果显示170例RHD基因为RHD^(*)1227A/01N.01、32例为RHD^(*)1227A/1227G,26例为RHD^(*)1227A/1227A、6例为RHD^(*)1227G/1227G(其RHD基因测序结果显示1例为弱D12型、4例为D-和1例RHD^(*)01EL.02)。结论广州地区献血者DEL个体基因型以RHD^(*)1227A/01N.01为主且其RhCE表型均为C+的特征;HRM可作为常规筛查“亚洲型”DEL血型基因的分子生物学方法。

郑州地区RhD变异型献血者分子生物学分析

目的研究郑州地区RhD变异型献血者血清学特征及基因突变机制。方法选择2023年1月—2023年12月送至本实验室的1619名RhD阴性献血者为研究对象,应用试管法和微柱凝胶间接抗球蛋白试验方法进行RhD阴性确认试验及RhCE表型检测。采用RHD基因扩增和Sanger测序检测RhD变异型标本基因型。结果RhD阴性确认试验共检出RhD变异型69例,比例为4.26%(69/1619)。RhCE表型分别为ccEe、Ccee、CcEe、CCee。包含17种基因型,15种D变异型表型。RHD^(*)weak partial 15等位基因最多(33例),频率为47.83%(33/69),主要表型为ccEe;其次是RHD^(*)DVI.3等位基因20例,频率为28.99%(20/69),主要表型为Ccee。RHD^(*)weak partial 15/RHD^(*)01EL.01杂合子3例,频率为4.35%(3/69),皆为CcEe表型。其他罕见基因型共13例,频率为18.84%(13/69)。抗筛阳性3例,比例为4.35%(3/69)。女性献血者2名,皆有孕产史,经抗体鉴定为抗-D;男性献血者1名,为抗-M。结论郑州地区RhD变异型献血者中RHD^(*)weak partial 15基因型最常见,其次为RHD^(*)DVI.3基因型。对保障安全供血,指导临床精准输血具有重要作用。

1例RHD-CE(3-7)-D基因重组与RHCE变异型患者的血清学与分子生物学分析

目的 研究分析1例Rh血型弱D、弱cE患者的血清学与分子生物学特征,为该类患者的临床安全输血提供实验依据。方法 采用微柱凝胶卡法对患者红细胞进行ABO、RhDCcEe抗原的鉴定,同时采用试管法进行血型复核,抗人球蛋白卡法筛查不规则抗体;采用PCR-SSP法对RhDCcEe(RhD、RhC、Rhc、RhE、Rhe)基因型进行检测;三代全长测序技术对RHD/RHCE基因序列进行测序分析。结果 微柱凝胶卡法鉴定ABO、RhD、RhCcEe血型抗原的结果为:A抗原(-)、B抗原(-)、RhD(1+)、RhC(4+)、Rhc(1+)、RhE(1+)、Rhe(4+)、对照孔(-);试管法ABO、RhD、RhCcEe抗原鉴定该患者表型为:A抗原(-)、B抗原(-)、RhD(w+)、RhC(4+)、Rhc(w+)、RhE(w+)、Rhe(4+),对照管(-);抗人球蛋白卡法筛查患者不规则抗体阴性;PCR-SSP法血型基因分型RhDCcEe结果:RhD(+)、RhC(+)、Rhc(+)、RhE(+)、Rhe(+);RHD/RHCE基因结果:RHD单倍体1为外显子1-10全缺失,而单倍体2为外显子RHD-CE基因重组融合,且确认其重组类型为RHD-CE(3-7)-D,起点在外显子2(g.20238-20312之间),终点在外显子8(g49184-50480之间),同时RHCE基因第6外显子存在新碱基点突变RHCE*cE(827C>A)。结论RHD-CE(3-7)-D基因重组融合与RHCE*cE(827C>A)新等位基因突变可能引起D、cE血型抗原弱表达,为临床安全输血提供了重要的实验数据支持。

RhD阴性孕产妇与HDFN发生的相关性及影响因素分析

目的 通过对RhD阴性孕产妇腹中胎儿和分娩的新生儿发生胎儿新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)的相关指标对比分析,为预防和治疗HDFN提供参考和指导。方法 收集我院2018年1月—2022年12月分娩的RhD阴性孕产妇737名,比较新生儿是否发生RhD血型不合、ABO血型不合导致的HDFN及其影响因素,发生RhD-HDFN和发生ABO-HDFN的相关影响因素。分析发生RhD-HDFN和发生ABO-HDFN患儿的实验室指标差异;分析IgG抗-D效价≤16和≥32的孕产妇分娩的新生儿发生RhD-HDFN的实验室指标差异。结果 737名RhD阴性孕产妇中,发生RhD-HDFN的母婴ABO血型相同或相容者比率88.89%(40/45)显著高于母婴ABO血型不相容者11.11%(5/45)。母体二次妊娠及以上发生RhD-HDFN比率93.33%(42/45)显著高于ABO-HDFN 60.66%(37/61)者。母体IgG抗-D效价≥32者分娩的新生儿血红蛋白(hemoglobin,Hb)最低值低于母体IgG抗-D效价≤16者(χ^(2)=5.61,P<0.05),母体IgG抗-D效价≥32者分娩的新生儿血清总胆红素(total bilirubin,TBil)峰值高于IgG抗-D效价≤16者(χ^(2)=4.471,P<0.05)。结论 RhD阴性孕产妇中,母婴ABO血型相同或相容及孕产次≥2者,相应新生儿更易发生RhD-HDFN,母体IgG抗-D效价≥32者发生新生儿溶血的严重程度显著高于抗-D效价≤16者。

RhD变异体Type33型受血者同种免疫产生抗-D合并抗-E混合抗体的研究

目的:探讨1例RhD阳性患者免疫产生抗-D合并抗-E混合抗体的原因。方法:用常规血清学方法鉴定ABO/Rh血型和不规则抗体特异性,采用序列特异性引物聚合酶链式反应(PCR-SSP)检测患者的RHD基因外显子1-10区域并进行杂合性分析,利用一代测序方法分析全外显子序列。结果:患者Rh血型为弱D Type33型,其RHD等位基因为RHD01W.33,患者表现为RHD+/RHD-杂合型,Rh分型为Ccee,产生了抗-D合并抗-E混合抗体。结论:该患者RHD基因外显子4发生了c.520G>A的突变,这一变异导致了红细胞上RhD抗原的表达减弱。

北京地区初筛RhD阴性人群血清学和RHD基因分型特征研究

目的研究北京地区初筛RhD阴性人群RHD基因分型,分析不同基因型的血清学特征及Rh表型分布规律。方法收集本院2022年8月—2024年1月通过微板法或微柱凝集法初筛RhD阴性标本204例,使用盐水试管法进行Rh抗原表型鉴定,微柱凝集-间接抗人球蛋白技术进行RhD阴性确认试验,PCR-SSP法和测序技术进行RHD基因分型检测,计算各表型频率和基因频率。结果204例初筛RhD阴性标本Rh血清学表型分布为ccee 112例(54.90%)>Ccee 73例(35.78%)>CCee 9例(4.41%)>ccEe 6例(2.94%)>CcEe 4例(1.96%)。本研究共检出7种RHD基因型,检出数量由高至低依次为129例(63.24%)RHD^(*)01N.01、44例(21.57%)RHD^(*)01EL.01、26例(12.75%)RHD^(*)01N.03、2例(0.98%)RHD^(*)01N.16、1例(0.49%)RHD^(*)06.03.01、1例(0.49%)weak RHD^(*)15,1例(0.49%)RHD^(*)13.01/RHD^(*)01N.01。Rh血型抗原基因频率及表型分布,符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。结论北京市初筛RhD阴性人群RHD基因具有多态性,最常见的RhD阴性基因型为RHD^(*)01N.01,RHD变异型为RHD^(*)01EL.01。该研究可为临床实施基因型匹配输血提供数据支持。

23例RhD阴性患儿行神经外科手术围术期血液管理分析

目的分析RhD阴性患儿行神经外科手术围术期血液管理的特点以提高临床预后和安全性。方法回顾性收集2015至2022年接受颅内占位切除的RhD阴性患儿的病历记录,分析人口学资料、实验室检测结果、备血及输血相关围术期血液管理。结果23例RhD阴性患儿被纳入分析,患儿平均年龄(7±3.5)岁,术前22例(95.7%)申请备异体血,17例(73.9%)备血成功,5例(21.7%)术前备血未成功,从申请备血到手术的平均时间为(5.8±3)d,备异体红细胞260(260,455)mL,1例(4.3%)患儿术前储存自体全血400 mL;术中出血4.8(2.2,13.3)mL/kg,总计10例进行了输血,其中7例(30.4%)仅输入异体红细胞,1例(4.3%)输入异体红细胞及自体回收红细胞,1(4.3%)例输入自体回收红细胞,1例(4.3%)输入储存全血150 mL,输血率为43.5%,配血输注比(cross-match/transfused,C/T值)=2.7,输血指数(transfusion index,Ti)=1。术中12例(52.2%)患儿行动脉血气分析,2例(8.7%)患儿监测血栓弹力图,术后血红蛋白(117±19.4)g/L,6例(26.1%)患儿术后出现轻度贫血,2例(8.7%)中度贫血。结论RhD阴性患儿行神经外科手术备血困难,需根据病变类型及部位针对性制定围术期血液管理方案,并采用多模式治疗策略以减少出血及对异体RhD阴性血的依赖,保障患儿手术安全。

毛细管离心技术在RhD抗原混合外观患者D抗原鉴定中的应用

目的探讨毛细管离心技术在RhD抗原呈混合外观患者D抗原鉴定中的应用可行性。方法对11例RhD抗原呈混合视野的患者红细胞进行清洗,制备压积红细胞。之后用毛细管离心法分离血细胞,分别向近端患者自身红细胞和远端红细胞加入抗D试剂鉴定RhD抗原。根据献血者代码追踪输入红细胞的RhD抗原。结果经毛细管离心,1例患者RhD抗原阴性,8例患者RhD抗原阳性,其余两例患者RhD抗原仍为混合视野。结论毛细管离心技术可有效分离患者新生红细胞,准确鉴定患者RhD抗原,为临床输血提供安全保障。

芜湖地区初筛RhD阴性献血人群RHD基因分型特征

目的:了解芜湖地区献血者初筛RhD^(-)汉族人群的RHD基因分型的分子机制及分布特征。方法:收集2021年8月-2022年8月芜湖市中心血站无偿献血人群初筛RhD^(-)样本共210例,对样本的RHD基因第1、10号外显子进行PCR扩增,确定样本是否存在RHD基因。对含有D基因的82例样本RHD基因1-10号外显子进行PCR扩增及合子型分析,对55例含全部RHD外显子样本进行Sanger测序以确定基因型。结果:在210例RhD^(-)标本中,128例(60.38%)为RHD基因缺失;27例存在部分RHD外显子,包括2例RHD*DVI.3/RHD*01N.01,24例RHD*01N.04/RHD*01N.01和1例RHD-CE(2-10)/RHD*01N.01;55例含有全部RHD外显子,包括4例RHD*01/RHD*01N.01,6例RHD*15/RHD*01N.01,1例RHD*01 W.72/RHD*01N.01,1例RHD*15/RHD*01EL.01,39例RHD*01EL.01/RHD*01N.01,余下4例样本根据合子型分析确定不存在RHD基因缺失、测序显示存在1227G>A突变。结论:芜湖地区献血人群RhD^(-)D基因的分子机制存在多态性,其中RHD*01EL.01和RHD*15为本地区主要D变异型,本研究结果为本地区RhD血型鉴定和临床输血提供理论基础。

RHD抗原阴性孕产妇的围孕期管理及研究进展

R H是目前44个人类红细胞血型系统中除ABO血型外,最复杂、最富多态性的血型系统,D抗原是其中免疫原性最强的,红细胞上无D抗原为RHD阴性(简称RH-)血型。RH-人群的比例差异较大,欧美人群约占15-17%,非洲人群约占3-10%,我国及其他东南亚人群比例少约占0.3-0.4%。RH-在我国虽属稀有血型,但根据其人群的分布特点和遗传规律,我国的RH-孕妇分娩RH+胎儿的概率反而极高;且随着我国近年来多胎生育政策的逐步开放,RH-妇女再次妊娠率逐年增加,RH-血的用血需求也相应增加。上述情况增加了母婴RH血型不合的风险,进而增加了胎儿/新生儿免疫溶血性疾病 (简称HDFN)的风险,HDFN发病早、进展快、病情严重、并发症风险高,严重威胁围产儿的生命健康、影响患儿远期生活质量,因此规范RH-孕产妇的围孕期管理尤为重要。但目前我国尚无统一、权威的管理指南,故本文综合了国内外相关文献,总结了围产保健方向的RH-孕产妇的围孕期管理规范要点,供临床产科医生参考,以降低HDFN发生率、围产儿死亡率、提高母婴保健质量。

抗G与抗D/抗C的特异性识别策略及其在RhD阴性孕妇同种免疫妊娠中的应用

目的 建立完善的抗D、抗C和抗G的血清学检测方法及鉴别策略,对已产生抗G并且存在产生抗D风险的孕妇注射Rh免疫球蛋白的可行性和必要性给与证据支持,以预防新生儿溶血病。方法 对不规则抗体鉴定初检为抗D和C阳性的RhD阴性孕妇,根据抗G可与D、 C抗原反应及与C抗原的结合性强于D抗原的特性,从献血员中随机选择ABO同型dCcee悬浮红细胞作为第一次吸收细胞,与待检血清进行吸收放散试验,分别检测其吸收后血清及放散液,以确定待检血清中是否存在抗D、抗G;再随机选择ABO同型DccEE悬浮红细胞作为第二次吸收细胞,与待检血清进行反应,吸收完全后上清液与C+D-红细胞反应以确定待检血清中是否存在抗C。结果 使用两次吸收放散方法,鉴定8例待检标本,结果显示1例标本存在抗D、抗C及抗G;2例标本存在抗D及抗G;2例标本存在抗C及抗G;3例标本经吸收放散试验鉴定为存在抗D及抗C。结论 通过两次吸收放散试验,即可有效区分抗D、抗C及抗G,这有利于更好的管理RhD阴性孕妇妊娠期间的同种免疫反应,并有助于产前有针对性地注射Rh免疫球蛋白,有效预防Rh阴性胎儿新生儿溶血病。

RhD抗原表达强度对输血相容性检测低值阳性质控品制备的影响

目的通过血清学结果比较RhD抗原表达强度差异,确定低值阳性质控品弱凝集强度的基准红细胞。方法以1500倍稀释抗-D分型试剂,使用微柱凝胶法对RhD(+)红细胞进行检测,挑选RhD抗原表达强度弱和强的标本分别为低值阳性质控品弱凝集强度的基准红细胞并进行验证。结果使用稀释后抗-D分型试剂对10份RhD(+)红细胞进行检测,其中8份凝集强度为1+、2份为±。以凝集强度呈1+的红细胞为基准,确定其凝集强度呈1+时抗-D分型试剂倍比稀释的最大稀释倍数,作为低值阳性质控品制备标准,则其与RhD抗原表达强度低的红细胞反应凝集强度极弱呈±,难以保障其控制界限性质稳定。以凝集强度呈±的红细胞为基准,重新确定其凝集强度呈1+时抗-D分型试剂倍比稀释的最大稀释倍数,作为低值阳性质控品制备标准,结果符合质控品设置要求。结论以RhD抗原表达强度低的红细胞为基准,设置低值阳性质控品弱凝集强度,可避免质控品因靶值较低而造成失控。

微柱凝胶检验法在RhD、ABO血型抗原鉴定中的应用价值分析

目的探讨微柱凝胶检验法在RhD、ABO血型抗原鉴定中的应用价值。方法120例需行RhD及ABO血型鉴定患者,将所有取得的血样分为两份,分别使用试管法及手工微柱凝胶免疫检验法(微柱凝胶检验法)对血型进行分析。比较两种检测方式的鉴定结果。结果120例患者血样经试管法及微柱凝胶检验法检测后,结果均发现ABO阳性112例(其中A型34例,B型33例,AB型11例,O型34例),ABO阳性率为93.33%;RhD阴性1例,RhD阴性率为0.83%。两种方法的抗原检测结果符合率为100.00%,两种方法检测血型结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论微柱凝胶检验法应用在RhD、ABO血型抗原鉴定中,操作简便,准确率高,值得在临床中推广应用。

一种缺失去泛素化功能的RHD1突变体保留特异性结合线性泛素链活性

线性泛素链连接方式特殊且被发现时间较短,目前商用的线性泛素链特异性抗体种类少且特异性仍有待提高。RHD1是一种木瓜蛋白酶样去泛素化酶,仅特异性识别线性泛素链。其主要酶活位点残基的第13位半胱氨酸(C13)突变,使得RHD1突变体失去去泛素化功能,但是与线性泛素链的结合活性水平仍不高。本研究在此突变体的基础上继续优化互作界面点突变,期望实现提升特异性结合活性。为此,本研究利用RHD1和线性双泛素蛋白复合物结构模型分析蛋白质间互作界面上氨基酸的理化性质,设计了RHD1突变体文库。本研究通过重叠延伸PCR法定点突变RHD1多肽链氨基酸,使用大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达突变体重组蛋白,采用酶联免疫吸附法(ELISA)成功筛选到与线性四泛素蛋白结合活性显著提升的RHD1突变体,该突变体包含C13A与A92T点突变。该RHD1突变体有望被开发成为一种有助于研究线性泛素链的蛋白质配体工具,并且有巨大的潜力应用于临床诊断和开发相关治疗药物。

213例黏膜下子宫肌瘤患者术后RHDS评分及相关影响因素研究

目的研究黏膜下子宫肌瘤患者术后出院准备度(RHDS)评分及相关影响因素。方法以我院2019年06月至2021年12月收治的213例接受手术治疗的黏膜下子宫肌瘤患者为研究对象,采用单因素分析影响黏膜下子宫肌瘤患者术后RHDS评分的因素(文化程度、手术年龄、家庭人均月收入、出院带药数量、居住情况、付费方式、婚姻状况、职业、是否有照顾者、与医院距离、手术方式、手术时间、切口长度、肌瘤直径、肌瘤数、舒适护理、住院天数、疼痛评分、有无并发症、术前使用抗生素),对有差异的因素赋值进行多元线性分析。结果黏膜下子宫肌瘤患者术后患者RHDS评分在是否有照顾者、出院带药数量、与医院距离、切口长度、住院天数、舒适护理、疼痛评分、有无并发症情况方面对比,差异显著(P<0.05);多元线性回归分析表明,是否有照顾者、出院带药数量、与医院距离、切口长度、住院天数、舒适护理、有无并发症、疼痛评分为黏膜下子宫肌瘤患者术后RHDS评分的影响因素(P<0.05)。结论接受手术治疗的黏膜下子宫肌瘤患者RHDS评分受舒适护理、住院天数、有无并发症等因素影响,临床可根据以上因素给予针对性护理,以提高患者出院准备度。

南宁地区RhD阴性献血者招募管理研究

目的调查南宁地区RhD阴性献血者招募管理现状,提出完善建议。方法对2020年1月—2022年12月在本血站无偿献血的224名RhD阴性献血者进行信息统计,研究RhD阴性献血者对血站现行招募策略的接受程度、3年内重复献血的情况以及首次献血后未继续献血的原因。结果①RhD阴性献血者的年龄集中在26~46岁,以企事业单位员工、现役或退役军人、学生为主。②在血站现行招募措施中,RhD阴性献血者对“血站开放日参观活动”“《南宁市献血条例》对稀有血型献血者的关爱政策”的认可率较高。③224名RhD阴性献血者中,3年内再次献血的有176名,再次献血率为78.57%。从客观数据来看,年龄、职业、学历均为影响RhD阴性献血者再次献血的因素。48名未再次献血的RhD阴性献血者认为工作家庭因素、周围人劝阻、年龄因素是影响自己再次献血的主要因素。结论针对南宁市RhD阴性献血者,政府与血液中心应拓展工作策略,采取切实有效的宣传招募措施及优惠政策,提升其无偿献血的主动性,以确保RhD阴性血液的充足供应。

RhD抗原鉴定技术在临床输血中的应用效能及安全性研究

目的:研究不同RhD抗原鉴定技术在临床输血中应用效能及安全性。方法:选取2021年7月—2023年2月济南市章丘区人民医院需要输血的患者1126例作为研究对象,进行血清学试验及RhD抗原鉴定。对微柱凝胶抗球蛋白法(MGCT)、凝聚胺法(MPT)、盐水法的效能进行比较,使用受试者工作特征曲线分析三种检测方法的效能。结果:谱细胞检测RhD抗原(Rh+)1115例,无RhD抗原(Rh−)11例。MGCT的Kappa值为0.816,与谱细胞检测一致性最高。MGCT曲线下面积>MPT、盐水法,MPT曲线下面积>盐水法。结论:三种RhD抗原鉴定技术中,MGCT在RhD抗原鉴定中表现最佳,有利于保证临床输血安全。

RhD双群患者的血清学及分子生物学分析--附1例报道

目的对1名配血困难的RhD双群(double population,DP)患者进行血清学及分子生物学分析,解决其RhD血型鉴定及临床用血问题。方法用毛细管离心法分离患者红细胞,对近心端、远心端红细胞分别进行ABO和Rh血型鉴定,以及直接抗人球蛋白试验;对患者血浆进行不规则抗体筛选及鉴定以及交叉配血试验;采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测RHD基因合子型,采用序列特异性聚合酶链反应(PCR-SSP)进行RHD和RHCE基因型检测。结果血型鉴定的结果显示该患者血型为B型,RhD及RhCE的c和E血型抗原均为DP,直抗阳性,抗体筛查及鉴定结果显示血浆中含有抗-D;PCR-RFLP结果显示该患者RHD基因盒子型为D-/D-纯合子,即为RHD编码基因缺失型所致的RhD阴性;PCR-SSP的结果也显示该患者RHD编码基因外显子均缺失,RHD基因型为RHD*01N.01/01N.01,RHCE基因型为Ccee。结论本例患者在急救情况下输注了RhD阳性血液,之后被误判为RhD阳性血型,实则为RhD阴性血型。本中心在血型鉴定为DP时,利用分子生物学方法对患者进行了Rh血型准确鉴定,为该患者的精准临床用血提供了依据。