油茶总RNA及mRNA的分离与纯化

利用改良的CTAB法,从富含酚类糖类等次生物质油茶叶片中分离出总RNA,并从总RNA中,通过两次过Oligo(dT)柱分离纯化得到mRNA.实验结果证明:所提取的RNA和mRNA完整,质量较高,并应用到油茶cDNA文库的构建.

植物组织RNA的几种提取方法

以白菜叶为试材,用常用的异硫氰酸胍法、尿素法及Tris-硼酸法,比较其提取RNA的质量和纯度。结果表明异硫氰酸胍法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高;尿素法提取RNA成本低、RNA质量也较高;而Tris-硼酸法则较适合于酚类物质含量的材料RNA的提取,其RNA的产率较高。

茶树中提纯总RNA的研究

在克氏一步法分离总RNA的基础上 ,根据茶树叶片生化成分特点 ,做了部分修改 ,并研究了不同浓度的L -半胱氨酸和可溶性聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)、不溶性PVP对提取的RNA纯度、回收率和完整性的影响。分光光度计检测和变性琼脂糖凝胶电泳结果证明 :使用本方法并加入 5- 10mmol LL -半胱氨酸或 4 % - 6 %可溶性PVP能提高RNA纯度和 (或 )回收率 ,研磨时加入5% - 10

半定量RT-PCR检测少量兔血管内皮细胞中特异mRNA的表达

目的 :半定量检测体外培养的少量兔血管内皮细胞中特异mRNA的表达。方法 :用PharmaciaBiotech公司的快速微量mRNA提纯试剂盒从兔内皮细胞中直接提取出mRNA ,并以此为模板 ,用半定量RT -PCR技术检测培养的兔血管内皮细胞中内皮素 (ET - 1)mRNA的相对含量。结果 ;从 10 5个兔血管内皮细胞中提取出未降解的mRNA ,A2 6 0 /A2 80 >1.8;用半定量RT -PCR技术 ,测定出ET - 1mRNA的表达。结论 :本实验建立了一种从少量细胞中快速、简便、安全而可靠地检测特异mRNA表达的方法。

茶树RNA的提纯与鉴定

研究了一种可有效排除茶树叶片细胞所富含的茶多酚、茶多糖等杂质污染的茶树总RNA提取方法.即在Trizol法的基础上,于提取的初始阶段,重点防止褐化效应,用水不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和β-巯基乙醇(β-Me)排除茶多酚干扰,同时用低含量乙醇去除茶多糖;在最后阶段,55-60℃热水浴10min,低温离心进一步去除茶多糖的干扰.利用这一方法提取的茶树总RNA,经琼脂糖电泳鉴定,可见清晰的18s和28sRNA的2条带型,证明RNA完整,无弥散或降解.

慢性丙型肝炎患者血清和肝组织中庚型肝炎病毒RNA检测

目的了解慢性丙型肝炎（ＣＨＣ）患者血清和肝组织中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染的状况．方法用ＲＴＰＣＲ方法对４９例ＣＨＣ患者血清和其中１４例肝组织进行ＨＧＶＲＮＡ检测．结果在４９例ＣＨＣ患者的血清和其中１４例肝组织中ＨＧＶＲＮＡ阳性检出率分别为１２２％和２１４％，证实ＨＧＶ和ＨＣＶ感染在ＣＨＣ患者血清和肝组织中同时存在，而肝组织中ＨＧＶＲＮＡ阳性检出率更高，其原因同受血或其直接经血液暴露密切相关．结论ＣＨＣ患者血清和肝组织中存在ＨＧＶ感染，而且感染率较高，故应加强对献血员进行ＨＧＶＲＮＡ和ＡＬＴ筛查。

植物叶中总poly(A)^+mRNA的分离纯化及性质测定

本文以芹菜叶为材料介绍了从植物叶中分离纯化总 poly(A)^+mRNA 的一般方法,并测定了总 poly(A)^+mRNA 体外蛋白合成和逆转录的模板活性。发现不同生长期的芹菜叶中总 poly(A)^+mRNA 及总 RNA 的含量有明显的差别。同时还测定了 mRNA3′端多聚腺嘌呤核苷酸的长度及分布,经测定最长 poly(A)片段为165±5个核苷酸。

麻疯树核糖体失活蛋白的分离纯化和作用机制研究

从麻疯树种子中分离纯化出一种核糖体失活蛋白 ,用SDS PAGE测定其相对分子量为 2 8 2kD ,IEF PAGE计算其等点电为 8 5 4左右。体外抑制实验表明 ,麻疯树核糖体失活蛋白对兔网织红细胞裂解液的蛋白质生物合成有较强的抑制活性。当麻疯树核糖体失活蛋白作用于大鼠肝核糖体经苯胺处理后 ,在聚丙烯酰胺的尿素变性胶电泳图上能观察到 4 5 0bp左右的特征性核酸条带 ,证明麻疯树核糖体失活蛋白是一种RNAN 糖苷酶 ,从而首次阐明了麻疯树核糖体失活蛋白失活核糖体的分子机制。

苦瓜子蛋白的分离纯化及其性质研究

从苦瓜种子的粗提物苦瓜子蛋白丙酮分级沉淀干粉中,用CM-Sephadex C-50和SephadexG-75分离得到了两个核糖体失活蛋白,α-苦瓜子蛋白(α-momorcharin,α-MMC)和β-苦瓜子蛋白(β-momorcharin,β-MMC),其等电点分别为9.10(α-MMC),9.32(β-MMC).用ESI-MS和MALDI-TOF-MS测定它们的分子量,分别为28625(α-MMC),29076(β-MMC)(+Na,29099);,28795(α-MMC),29074.7(β-MMC).它们都是糖蛋白.其生物活性的分析测定表明,都属于RNA N-糖苷酶.本文重点对β-苦瓜子蛋白的分离纯化及其性质进行详细报道,并对其N-端部分的氨基酸顺序进行了测定.

反义核酸药物的合成和纯化

反义核酸药物是能与特定mRNA序列互补的不同长度的短小DNA片段,能够通过与靶mRNA形成杂交双链而干扰基因表达。反义核酸药物的合成、纯化是新药临床前评价的基础。本文就国内外反义核酸药物合成中常用的载体、硫代试剂、脱保护试剂的发展,纯化常用的聚丙烯酰胺凝胶电泳、薄层色谱、高效膜吸附色谱、寡核苷酸纯化柱芯和高效液相色谱等方法进行了综述,对其各自的特点、应用前景及优缺点等进行了介绍。