HMGB1在TNF-α诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖中的作用及机制

目的:探讨HMGB1在TNF-α诱导的大鼠滑膜RSC-364细胞增殖中的作用及机制。方法:将常规培养的RSC-364细胞分为正常对照组和10μg.L-1TNF-α刺激组,分别于6 h、12 h、24 h收集细胞。RT-PCR检测HMGB1、STAT1和STAT3 mRNA的表达;免疫细胞化学和流式细胞术检测HMGB1、PCNA、STAT1和STAT3蛋白表达。结果:①TNF-α能显著上调HMGB1 mRNA和蛋白的表达,同时PCNA蛋白表达也增强(P<0.05或P<0.01)。②TNF-α作用12 h后,STAT1 mRNA和蛋白的表达明显增强,24 h表达最高(P<0.01)。③TNFα作用6 h-24 h对STAT3 mRNA和蛋白的表达无明显影响(P>0.05)。④HMGB1蛋白表达与PCNA、STAT1蛋白表达呈正相关;STAT1与PCNA蛋白表达亦呈正相关。结论:TNF-α可能通过诱导RSC-364细胞高度表达HMGB1,促进滑膜细胞增殖;STAT1可能参与了其信号转导及调控过程。

穿山龙总皂苷含药血清对IL-17和TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364NF-κB p65活性、STAT3及VEGF mRNA表达的影响

目的观察穿山龙总皂苷含药血清对IL-17和TNF-α联合诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364 NF-κB p65活性、STAT3表达及VEGF mRNA表达水平的影响,探讨穿山龙总皂苷抑制类风湿性关节炎血管新生的作用机制。方法制备穿山龙总皂苷和雷公藤(阳性对照)含药血清;取大鼠滑膜细胞株RSC-364经IL-17(10μg/L)和TNF-α(10μg/L)、穿山龙总皂苷含药血清、雷公藤多甙片含药血清单独或联合应用孵育,孵育24 h,提取各组细胞核蛋白用于TransAMTMNF-κB p65活性检测试剂盒检测NF-κB p65的DNA结合活性;提取各组细胞总蛋白后应用Western blot方法观察STAT3蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞VEGF mRNA的表达情况。结果 IL-17+TNF-α诱导的细胞模型组中NF-κB p65的DNA结合活性、STAT3蛋白表达及VEGFmRNA表达水平均显著高于空白对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.05);与细胞模型组相比,雷公藤含药血清组、穿山龙总皂苷含药血清组的NF-κB p65 DNA结合活性、STAT3蛋白表达及VEGF mRNA表达水平均显著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.05),且2组之间比较无显著性差异(P>0.05)。结论本研究证实穿山龙总皂苷含药血清可以抑制NF-κB p65的DNA结合活性及STAT3蛋白的表达,考虑穿山龙总皂苷通过上述信号转导途径来调控血管新生关键因子VEGF的产生,进而抑制RA血管新生。

雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖和IL-6分泌的影响

目的:观察雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖和IL-6分泌的影响,探讨其治疗类风湿性关节炎的作用机理。方法:培养大鼠滑膜细胞株RSC-364,运用CCK-8法检测不同剂量的雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖的影响,酶联免疫吸附实验检测细胞株培养上清中的IL-6的含量。结果:经过IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364,在不同浓度的雷公藤多甙的作用48h后,其增殖明显受到抑制,并呈剂量依赖性。同时各剂量组均可抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌炎性因子IL-6的分泌。结论:雷公藤多甙抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364的过度增殖和IL-6的分泌,这可能是其治疗类风湿性关节炎的作用机理之一。

蛋白质巯基亚硝基化对RSC-364细胞cAMP反应元件结合蛋白活性的影响

目的:观察RSC-364细胞外源性亚硝基化对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)活性的影响。方法:提取RSC-364细胞总蛋白,与100μmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、100μmol/L NO供体亚硝基化谷胱甘肽(GSNO)、10mmol/L亚硝基化抑制剂二硫苏糖醇(DTT)及溶剂单独或联合应用孵育15min完成外源性亚硝基化,采用生物素转化法与Western blotting技术检测亚硝基化蛋白表达水平;分别用溶剂或重组大鼠白细胞介素-1β(rIL-1β)10μg/L孵育RSC-364细胞1h,提取细胞核蛋白,经外源性亚硝基化后用电泳迁移率改变分析(elec-trophoresis mobility shift assay,EMSA)观察亚硝基化作用对CREB活性的影响。结果:RSC-364细胞总蛋白经GS-NO孵育后亚硝基化蛋白表达水平明显增高,而应用DTT可抑制亚硝基化水平;GSNO与RSC-364细胞核蛋白孵育后,明显抑制了rIL-1β诱导的CREB活性(P<0.01),GSNO的作用可被DTT所逆转(P<0.01)。结论:NO可通过亚硝基化作用抑制RSC-364细胞CREB活性。

甲氨蝶呤对脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌IL-17和IL-18的影响

目的:观察甲氨蝶呤对脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌IL-17和IL-18表达的影响,进一步探讨甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎(RA)的作用机理。方法:运用ELISA检测不同浓度的甲氨蝶呤对脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞上清液中的IL-17和-IL-18的含量。结果:甲氨蝶呤明显抑制脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞分泌炎性因子IL-17和IL-18的含量。结论:甲氨蝶呤抑制脂多糖诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌IL-17和IL-18,这可能是其治疗RA的重要的作用机制之一。

毛樱桃总黄酮对LPS诱导大鼠滑膜细胞RSC-364炎症及自噬的影响

目的探索毛樱桃总黄酮(Prunus tomentosaThumb total flavones,PTTTF)对大鼠滑膜细胞RSC-364炎症反应的影响及其自噬相关机制。方法选用RSC-364细胞株,通过脂多糖(LPS)诱导大鼠滑膜细胞RSC-364建立类风湿关节炎滑膜炎性细胞模型,将细胞分为空白组(CON)、模型组(MOD)、地塞米松(DXM)和不同剂量(0.4、4.0和40.0 mg/L)的PTTTF组。用RT-PCR法检测大鼠滑膜细胞RSC-364细胞中环氧酶1(COX-1)、环氧酶2(COX-2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)及肿瘤坏死因子(TNF-α)表达水平;采用Western blotting法检测大鼠滑膜细胞RSC-364细胞中自噬相关蛋白ATG5、ATG7、ATG12、Beclin1、Lc3II及Bcl-2的表达水平。结果与空白组相比,模型组中COX-2、IL-1β、IL-6、IL-17和TNF-αmRNA表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),自噬相关蛋白ATG5、ATG7、ATG12、Beclin1、Lc3II和Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),与模型组相比,PTTTF(0.4、4.0和40.0 mg/L)可明显降低大鼠滑膜细胞RSC-364细胞中炎症因子COX-2、IL-1β、IL-6、IL-17和TNF-αm RNA表达水平(P<0.05或P<0.01);PTTTF(0.4、4.0和40.0 mg/L)可明显抑制大鼠滑膜细胞RSC-364细胞中自噬相关蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论 PTTTF抑制大鼠滑膜细胞RSC-364炎症因子的表达及其作用机制可能与抑制自噬相关蛋白表达有关。

黄芩苷对脂多糖诱导的大鼠滑膜RSC-364细胞自噬的抑制作用

目的:探讨黄芩苷通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素(PI3k/Akt/mTOR)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的大鼠滑膜RSC-364细胞自噬的影响,并阐明其作用机制。方法:将对数生长期大鼠滑膜RSC-364细胞分为对照组、模型组、地塞米松(DXMS)组、10μmol·L-1黄芩苷组、20μmol·L-1黄芩苷组和40μmol·L-1黄芩苷组。对照组RSC-364细胞只加入培养基,其他各组RSC-364细胞均采用1 mg·L-1LPS体外刺激12 h制作炎症细胞模型。采用MTT法检测各组RSC-364细胞存活率,RT-PCR法检测各组RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR、Beclin1和微管相关蛋白-轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组RSC-364细胞中Beclin1、Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ和P62蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组RSC-364细胞存活率明显升高(P<0.01),模型组RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR mRNA和P62蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,不同浓度黄芩苷组RSC-364细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01),RSC-364细胞中PI3k、Akt、mTOR mRNA和P62蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),Atg5、Atg7、Atg12、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:黄芩苷可能通过激活PI3k/Akt/mTOR信号通路抑制LPS诱导的RSC-364细胞自噬。

穿山龙总皂苷对大鼠滑膜细胞株VEGF与AP-1的影响

目的观察含穿山龙总皂苷血清对大鼠滑膜细胞株RSC-364血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA和激活蛋白-1(AP-1)活性的影响,探讨其抑制血管新生的作用机制。方法制备含穿山龙总皂苷和雷公藤(阳性对照)血清。将培养好的大鼠滑膜细胞株RSC-364分为空白对照组、模型对照组、含雷公藤多苷血清组和含穿山龙总皂苷血清组,培养1 h,除空白对照组外,其余各组加入IL-17和TNF-α(均为10μg·L-1)共同孵育24 h。采用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞VEGF mRNA表达,凝胶电泳迁移率实验法(EMSA)检测各组细胞核蛋白提取物AP-1的DNA结合活性。结果与空白对照组比较,模型对照组VEGF mRNA表达水平及AP-1 DNA结合活性显著增高(P<0.05,P<0.01);与模型对照组比较,含雷公藤多苷血清组、含穿山龙总皂苷血清组VEGF mRNA表达水平及AP-1 DNA结合活性均降低(P<0.05),且两组间比较,差异无统计学意义。结论含穿山龙总皂苷血清可以抑制VEGF mRNA表达水平及AP-1 DNA结合活性,其机制可能是通过抑制转录因子AP-1来调控血管新生关键因子VEGF产生,进而抑制血管新生。

大黄醇提液的抗疱疹病毒作用

大黄乙醇提取物的细胞毒性极低，２００００μｇ／ｍｌ未见细胞毒性，反而能促进细胞生长；在细胞培养上有明显的抗病毒作用，对单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）的有效抑制浓度为１００μｇ／ｍｌ，并对ＨＳＶ的感染有预防作用和对病毒颗粒有直接杀伤作用。

EGCG对人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤COX-2、VEGF和bFGF表达的调控

【目的】探讨表没食子儿茶素没食子酸脂EGCG对人肝癌细胞株HepG2裸鼠移植瘤生长和肿瘤血管生成的抑制作用及EGCG对移植瘤环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)表达的调控。【方法】将肝癌细胞HepG2种植至裸鼠背部皮下,10 d后开始用不同浓度EGCG治疗,38 d后处死。观测裸鼠移植瘤的体积和质量。并采用间接免疫流式细胞术和Western Blot法检测移植瘤COX-2、VEGF和bFGF的表达,用免疫组化法检测微血管密度(MVD)。【结果】①生理盐水组切除的移植瘤平均体积和质量分别是(1174.6±793.5)mm3和(0.572±0.138)g,EGCG 50 mg/kg组分别为(649.3±100.8)mm3和(0.340±0.066)g,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。EGCG 50 mg/kg组抑瘤率为40.56%。②生理盐水对照组和EGCG 50mg/kg组的MVD值分别为23.24±1.76和14.27±1.25,两组差异有统计学意义(P<0.01);间接免疫荧光流式细胞术和Western Blot检测结果提示EGCG呈浓度依赖性地抑制人肝癌细胞HepG2移植瘤中COX-2、VEGF和bFGF的表达。【结论】EGCG具有抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长的作用;同时能抑制肝癌移植瘤内新生血管内皮细胞的生长,其机制可能与抑制COX-2的表达以及由此引起的VEGF和bFGF蛋白表达降低有关。

语音识别技术新热点——语音识别专用芯片

引言 语音识别技术的应用可以分为两个发展方向:一个方向是大词汇量连续语音识别系统,主要应用于计算机的听写机,以及与电话网或者互联网相结合的语音信息查询服务系统,这些系统都是在计算机平台上实现的;另外一个重要的发展方向是小型化、便携式语音产品的应用,如无线手机上的拨号。

八肽胆囊收缩素对肿瘤坏死因子-α诱导大鼠RSC-364细胞增殖及金属蛋白酶分泌的影响及作用机制

目的探讨八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导大鼠RSC-364细胞增殖及金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)分泌的影响及作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测TNF-α诱导RSC-364细胞的增殖情况,ELISA法测定细胞中MMPs(MMP-1、MMP-3、MMP-9)的分泌水平、环腺苷酸(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)含量和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)活性。结果 TNF-α可促进RSC-364细胞增殖及MMP-1、MMP-3、MMP-9的分泌,CCK-8可抑制TNF-α的上述作用,Forskolin(一种c AMP诱导剂)与CCK-8的上述作用类似,而H89(PKA特异性抑制剂)可部分逆转CCK-8的上述作用。TNF-α可提高细胞中c AMP含量和PKA活性,CCK-8(10^(-10)、10^(-8)、10^(-6) mol/L)可进一步促进TNF-α的上述作用,且呈剂量依赖性,CR1409(CCK-A受体结抗剂)和CR2945(CCK-B受体结抗剂)可部分逆转CCK-8的上述作用,以CR2945为著。结论 CCK-8可通过活化c AMP-PKA信号通路,进而抑制TNF-α促细胞增殖和MMP-1、MMP-3、MMP-9的分泌,该过程由CCK受体介导。