番茄环斑病毒HC-RT-PCR-ELISA检测

番茄环斑病毒 (ToRSV)是我国对外检疫一类有害生物 ,目前国内尚无存在的报道。PCR技术是一种快速灵敏的植物病毒检测方法 ,但核酸内的聚合酶抑制物会导致漏检现象 ,而只通过凝胶电泳进行结果判定会出现假阳性 ,这两方面限制了PCR技术在对外检疫中的应用。利用共价结合在PCR管壁上的引物特异性杂交诱捕核酸粗提液中的靶标核酸 ,洗掉杂质及抑制物质 ,在同一管内作RT PCR ,凝胶电泳检测液相产物的同时对固相产物进行杂交检测 ,提高了结果的可靠性及灵敏度。利用所建立的HC RT PCR ELISA成功地从法国进口葡萄苗中检出ToRSV。

猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立

将RT-PCR方法和高灵敏度的地高辛检测系统相结合,先建立猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的RT-PCR方法,用地高辛标记RT-PCR产物;再建立CSFV的PCR-ELISA方法,用生物素标记的探针在链亲和素包被的微量板孔中杂交捕获地高辛标记的PCR产物,最后进行免疫显色得出结果。试验主要对RT-PCR ELISA的各种反应条件进行了优化,确定了1mg/L的链亲和素、50μg/L生物素标记的探针、1∶3000抗地高辛的过氧化物酶、37℃杂交2h等为最适反应条件。该方法的敏感性比常规琼脂糖凝胶电泳检测高100倍以上,克服了组织样品中CSFV含量少而难以检测的困难,为猪瘟的早期诊断和分子流行病学调查提供了一条新途径。

用RT-PCR和ELISA对暴发性急性胃肠炎事件中诺沃克样病毒检测的比较

目的 诺沃克样病毒是世界范围内急性非细菌性流行性胃肠炎的重要病原。采用RT-PCR和ELISA两种方法对广州市多起暴发性急性胃肠炎事件中病人标本进行诺沃克样病毒检测 ,了解广州市诺沃克样病毒流行情况 ,并对RT-PCR和ELISA两种检测方法进行比较。方法 用RT-PCR和ELISA对 76份腹泻病人粪便 ,2 3份肛拭子 ,12份食物进行诺沃克样病毒检测。结果 粪便通过RT-PCR检出阳性 37份 ,ELISA检出阳性 17份 ,肛拭子仅通过RT-PCR检出 1份阳性 ,食物无阳性检出。结论 这是首次我国实验室证实的由诺沃克样病毒引起的急性胃肠炎暴发。RT-PCR的阳性率大于ELISA ,且检品以粪便为好。并且我们的分离株与诺沃克原型株相应序列比较的同源性大于 90 %

猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立及其初步应用

建立了检测CSFV的快速、敏感、特异的RT PCRELISA方法。在RT PCR过程中以地高辛标记的dUTP(DIG dUTP)标记PCR产物 ,用生物素标记的捕获探针在链亲和素包被微量板孔中杂交捕获PCR产物。该方法的敏感性较常规RT PCR方法高 10 0倍 ,可检测出 35 0 μL1∶10 0 (相当于 3.5mg)的兔脾组织悬液中的C株CSFV ,特异性强 ,避免了PCR过程中因污染导致的假阳性结果。通过对RT PCR和微量杂交系统的条件优化 ,该方法用于检测C株兔脾组织毒、细胞适应毒和野毒感染的猪组织毒样品 。

DAS-ELISA、RT-PCR和IC-RT-PCR检测葡萄卷叶病毒Ⅲ的比较研究

在生长季节分3次对部分葡萄品种枝条上部、中部和下部叶片及韧皮部,进行双抗体夹心法(DAS-ELISA)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫捕捉反转录聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)3种方法检测卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)的比较。结果表明:DAS-ELISA的检出率明显低于RT-PCR和IC-RT-PCR方法。RT-PCR可以检测出RNA提取液为1:10-4的GLRaV-3病毒,但它受到了提取RNA难以及其它物质(如蛋白质、DNA等)干扰的影响,检测难度增加。从检测的灵敏度来看,RT-PCR和IC-RT-PCR比DAS-ELISA灵敏;并且,IC-RT-PCR比其它两种方法较快,整个过程仅需8h。

人隐孢子虫RT-PCR-ELISA检测方法的建立

目的建立一种高度敏感和特异的人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法。方法根据人隐孢子虫与其他隐孢子虫粘附蛋白p23基因的多重比对,设计一对引物(其中p1引物带有生物素标记)用来扩增含高变区目的片段;采用RT-PCR方法扩增目的片段,扩增产物与探针引物进行液相杂交,将杂交产物与微孔板上包被的链霉亲和素结合,再与辣根过氧化酶标记的抗地高辛抗体反应。用所建立的方法对22份临床样本进行检测,并与常规检测方法进行比较。结果所建立的RT-PCR-ELISA检测方法具有高特异性和敏感性,比常规的PCR方法灵敏度提高了100(0.08:8ng)左右。临床检测结果显示,该方法的检出率高达86%(19/22),而RT-PCR、蔗糖漂浮法和抗酸染色法的检出率仅为27%(6/22)、27%(6/22)和50%(11/22)。结论本试验成功建立了人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法,检出率比常规检测方法高。

猪瘟病毒RT-PCR核酸检测与ELISA抗原检测试验应用研究

本试验根据NCBI公布的猪瘟病毒石门毒株E2基因序列,设计、合成了1对检测猪瘟病毒E2基因的PCR引物。以120份疑似猪瘟病料为试验材料,使用RT-PCR核酸检测与ELISA抗原检测2种方法,分别用这2种方法检测疑似病料,并且比较这2种方法在猪瘟病料检测中的实际差别。通过猪瘟病毒RT-PCR核酸检测结果及ELISA抗原检测结果相互印证,为云南猪瘟的诊断及防制提供了技术支持。

甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)ELISA鉴定及RT-PCR检测方法的建立

利用双抗体酶联免疫吸附测定法（DAS-ELISA ）对采自福建省51份甘薯叶片进行检测，结果显示51份样品中有24份SPFM V呈阳性，阳性率为47.06％，其中泉州样品SPFM V阳性率最高，为71.40％，其次为南安和龙岩的样品，阳性率均为50％。根据GenBank中公布的SPFM V外壳蛋白（CP）基因序列保守区域设计了1对特异性引物，通过RT-PCR反应程序的优化建立了能检测SPFM V的检测方法。该检测方法能够扩增出SPFM V特异性片段，片段大小为441 bp ，测序结果表明， SPFM V序列与参考序列的同源性92％～97％。

应用RT-PCR和dot-ELISA方法检测单头灰飞虱体内水稻条纹病毒

本文比较了RT-PCR和dot-ELISA两种方法对单头灰飞虱携带水稻条纹病毒（Rice stripe virus,RSV）的检出率、检测灵敏度和检测成本。结果表明,两种方法均能检测到单头灰飞虱体内的RSV,RT-PCR检测单头灰飞虱体内RSV的阳性检出率比dot-ELISA方法低11.79%-15.77%,但RT-PCR的检测灵敏度比dot-ELISA高10倍,RT-PCR技术的检测成本比dot-ELISA的高。结果暗示,对于单头介体昆虫中的病毒检测,RT-PCR技术的检出率不一定比dot-ELISA的高。综合考虑后,如对室外大批量灰飞虱进行带毒率检测时可采用dot-ELISA方法,如需准确分析单头灰飞虱体内RSV时可采用RT-PCR方法。

ELISA抗原检测与荧光RT-PCR快速诊断猪瘟的比较研究

为找出临床上猪瘟快速、有效的诊断方法,对荣昌县2个猪场出现的40头临床症状疑似猪瘟的病猪进行病理剖检,结果证实有8头病猪出现猪瘟典型症状.采集40头病猪的血样,进行ELISA猪瘟抗原检测和荧光RTPCR猪瘟核酸检测,结果显示ELISA抗原检测检出7份血样为猪瘟抗原阳性,阳性检出率为87.5%;荧光RTPCR核酸检测出4份血样为阳性,阳性检出率为50%.该结果证实,ELISA猪瘟抗原检测的阳性检出率比荧光RT-PCR核酸检测更高,建议临床上采用ELISA抗原检测的方法进行猪瘟的快速诊断.

3例SARS患者的RT-PCR与ELISA确认

目的 为了对SARS疑似患者进行快速早期诊断和进行血清学确认。方法 从SARS疑似患者含漱液与细胞病毒分离上清液中提取病毒RNA ,进行逆转录套式PCR反应 ,扩增SARS病毒特异性核酸片段 ,进行序列测定与序列比对。并对患者不同发病日期采集的血清标本进行SARS病毒ELISA抗体测定。结果 SARS患者含漱液标本和细胞病毒分离上清液中均能扩增出特异性核酸片段 ,经测序证实来自SARS冠状病毒。患者血清标本中SARS病毒抗体在发病后 18d开始呈阳性 ,以后随发病日期增加而升高。结论 逆转录套式PCR是一种早期、敏感、特异、快速检测传染性非典型肺炎疑似患者临床样本中SARS冠状病毒的理想方法。浙江省 3例SARS临床诊断病例的含漱液和血清标本经SARS病毒核酸和抗体检测 。

烟草芜菁花叶病毒的ELISA和RT-PCR快速检测技术研究

采用间接ELISA和RT-PCR,建立了烟草芜菁花叶病毒(Turnipmosaic virus,TuMV)快速检测的技术体系。间接ELISA测定结果表明,TuMV多抗按1∶3000浓度稀释后,具有较高的检测灵敏度,其检测极限浓度为1∶3215;通过改进RNA提取技术,从少量的烟草病叶中提取出高质量总RNA,进行cDNA合成及PCR扩增,得到一条长度约986 bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的大小一致,可有效地对田间烟株进行快速检测。

ELISA法和RT-PCR法在麻疹病毒检测中的应用对比

目的:对比分析酶联免疫吸附试验(ELISA)法和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法在麻疹病毒检测中的应用。方法:由本市各医院采集并送至本中心接受麻疹病毒检测的50例疑似麻疹患者为研究对象,所有患者标本均采用ELISA法和RT-PCR法进行麻疹病毒检测。对比两种检测方式在不同出疹时间段所取标本的阳性率、检测水平。结果:在50例疑似麻疹患者中,ELISA法检测麻疹病毒Ig M抗体阳性22例,Ig M抗体阴性28例,阳性率为44.00%;RT-PCR法检测,麻疹病毒Ig M抗体阳性26例,Ig M抗体阴性24例,阳性率为52.00%,两种检测方式阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。患者出疹第1天收集的标本,采用ELISA法检测阳性率为60.00%,采用RT-PCR法检测阳性率为80.00%。随着患者采样时间不断改变,两种检测方式的阳性率均逐渐降低,两种方法检测的阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。50例麻疹疑似患者同一时间段采集血清和咽拭子标本,24例患有免疫史,不伴随有免疫史亦或者是不详的共26例。结论:RT-PCR法适用于出疹时间在2 d之内疑似麻疹患者的临床诊断中,而ELISA法则适合使用在出疹时间在2 d或以上疑似麻疹患者的临床检测中。

Dot-ELISA和RT-PCR检测南方水稻黑条矮缩病毒灵敏度的比较

南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)是近年来在我国南方稻区和越南危害严重的一种新病毒,主要由白背飞虱传播,造成水稻大面积减产。检测田间白背飞虱、杂草和水稻植株的带毒率是南方水稻黑条矮缩病预测预报的基础。为寻找一种适合大量样本的检测方法,以感染南方水稻黑条矮缩病毒的水稻植株和带毒的白背飞虱为材料,比较了斑点免疫测定法(Dot-ELISA)和反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)两种检测方法的灵敏度。试验结果表明:RT-PCR技术的检测灵敏度比Dot-ELISA技术检测灵敏度高。

利用ELISA和RT-PCR法检测甜菜丛根病毒(BNYVV)

利用酶联免疫吸附法(ELISA)和RT-PCR两种方法对甜菜丛根病病毒(BNYVV)进行检测,结果表明:(1)两种方法对甜菜丛根病同一样品进行检测,所得结果相同,都能用于丛根病定性检测;(2)从实验中可以看出,ELISA检测方法操作简单、快捷,价格较低廉,适合于幼苗抗病快速筛选鉴定。RT-PCR法操作程序较复杂,适合于病毒研究,价格较昂贵。

荧光RT-PCR检测与ELISA检测在戊肝临床诊断效果的比较分析

目的探讨和比较荧光RT-PCR检测与ELISA检测在戊肝临床诊断的效果。方法从我院健康体检中心2013年1月至2016年1月的50500血清标本中随机选择100份作为研究标本。通过采用酶联免疫法对戊肝抗体的检测,然后再通过荧光RT-PCR检测法进行确诊,观察和比较两组检测方法的检查结果。结果阳性一致率为55%,阴性一致率为100%,总一致率为75%,Kappa值为0.59(0.4<Kappa≤0.75),表示两者一致性一般。ELISA阳性检出率为30%,PCR阳性检出率为50%,PCR阳性检出率明显高于ELISA,数据比较差异具有统计学意义,P=0.000<0.005。结论荧光RTPCR检测和ELISA检测在戊肝的诊断中都具有一定的检查准确度,同时荧光RT-PCR检测的阳性检出率明显高于ELISA检测。由于ELISA检测容易受到各方面因素的影响而发生漏诊的情况,因此建议对于ELISA检测出现可疑的标本,使用RT-PCR进行确诊,使更具可靠性。

ELISA法和荧光定量RT-PCR在登革热病毒感染早期检测中的差异对比

目的:比较ELISA法和荧光定量RT-PCR在登革病毒感染早期检测中的差异,提高早期筛查效率。方法:收集2016年1月-2018年12月广东省佛山市地区疑似登革热且发病7 d内的病例的血清标本3780份,均采用ELISA法(登革热病毒NS1抗原检测)及荧光定量RT-PCR(病毒核酸检测)进行检测,比较两种检测方法的差异。结果:在病程第2~5天,ELISA法检测的阳性率低于荧光定量RT-PCR检测,差异有统计学意义(P<0.05)。在病程第6~7天荧光定量RT-PCR检测的阳性率低于ELISA法检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:对于疑似登革热病例早期筛查,发病2~5 d可先行荧光定量RT-PCR检测,对于发病6~7 d可先行ELISA法检测,以提高筛查效率。

ELISA法和RT-PCR法在麻疹病毒检测中的应用比较分析

目的探讨酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和实时荧光定量PCR(quantitative realtime PCR,RT-PCR)对疑似麻疹病例的麻疹病毒的检测,为疾病的尽早确诊及治疗提供实验依据。方法以上海市宝山区2014年4月至2015年12月的250例疑似麻疹病例为研究对象,采集其血清标本和咽拭子标本,分别应用ELISA法检测患者血清中的麻疹特异性的免疫球蛋白M(immunoglobulin M,Ig M)抗体和RT-PCR法检测咽拭子中麻疹病毒的核酸。结果 250例疑似麻疹病例,排除风疹病毒阳性的34例病例,其中麻疹病毒(measles virus,MV)Ig M抗体呈阳性的有80例,阳性率为37.04%;MV RT-PCR呈阳性的有128例,阳性率为59.26%。RT-PCR的检测阳性率显著高于Ig M检测(χ2=41.14,P<0.001)。结论 RT-PCR法可快速诊断麻疹病毒的病原学,且对出疹初期麻疹Ig M呈阴性的病例可进一步确诊,是一种有效可靠的方法。

百合无症病毒的RT-PCR和IC-RT-PCR检测

应用DAS-ELISA,RT-PCR和IC-RT-PCR技术检测百合无症病毒(LSV)。结果表明:RT-PCR和IC-RT-PCR分别可从2ng和200ng百合叶片组织中检测出LSV,分别是DAS-ELISA敏感度的1000倍和10倍。百合鳞茎的不同取样部位对PCR检测结果的影响较大,RT-PCR难以从鳞片和根部检测出病毒,但IC-RT-PCR可以检测出病毒。

RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒

根据猪传染性胃肠炎病毒 ( TGEV)纤突蛋白 S基因的 5′端核酸序列设计了 1对引物。该对引物扩增的目的片段长度为 886bp。在优化 RT-PCR反应条件的基础上 ,建立了检测 TGEV的 RT-PCR方法。用此RT-PCR方法检测 56份猪腹泻粪样 ,同时用夹心 ELISA法作对照。结果显示 ,RT-PCR法检测的 2 0份阳性粪样 ,用夹心 ELISA法检测有 1 4份呈阳性 ,两者的符合率为 89%。 RT-PCR法比夹心 ELISA法敏感性更高 ,可用于