单味药鹿茸调控大鼠骨关节炎软骨组织Smad2、3表达的研究

目的观察单味中药鹿茸对大鼠骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨靶器官Smad2、3表达的影响。方法选择3个月龄健康雌性SD大鼠100只,体质量(200±20)g。常规喂养1周后,随机数字表法分成5组:鹿茸低剂量组、鹿茸高剂量组、盐水组、模型组及正常组,每组20只。除正常组外采用经典Hulth方法造模,造模后6周,行病理学观察,确认造模成功,鹿茸低剂量组按0.021 g/100 g给药,鹿茸高剂量组按0.084g/100 g给药,盐水组每天灌服相应的生理盐水,正常组及模型组不予任何处理。于灌胃后2、4、6周,分别取大鼠双侧膝关节软骨,采用免疫组织化学、荧光定量-PCR和蛋白免疫印迹杂交方法分别检测Smad2、3 mRNA和蛋白表达。结果病理观察可见成功制备OA模型,免疫组织化学可见Smad2、3蛋白在软骨层广泛表达,且定位于软骨细胞膜内。与模型组比较,鹿茸低、高剂量组在灌胃后2、4、6周Smad2、3 mRNA表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与同组灌胃后4周比较,灌胃后6周,鹿茸高、低剂量组的Smad2、3mRNA表达量有所下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,鹿茸低、高剂量组Smad2、3蛋白在灌胃后2、4周时,其在软骨细胞中的表达量有明显的升高,差异有统计学意义(P<0.01);与同组灌胃后2周比较,鹿茸低、高剂量组灌胃后4周升高更显著,差异有统计学意义(P<0.01);与同组灌胃后4周比较,灌胃后6周时鹿茸低、高剂量组Smad2、3蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 (1)鹿茸通过调控软骨细胞内Smad2、3基因和蛋白的表达而起到修复软骨的作用。(2)软骨细胞内的Smad2、3基因表达及蛋白水平的上调可能是OA发病的重要机制之一。

膀胱癌18q缺失做图与Smads蛋白表达分析

目的 研究 18号染色体短臂的杂合性缺失在膀胱癌发生发展中的作用 ,为早诊及定位克隆相关基因提供资料。方法 利用位于 18q上的 12个多态性微卫星位点进行缺失做图 ,并对此区域的抑癌基因Smad 2和Smad 4进行免疫组织化学分析。结果 84 2 % (32 / 38)的病例至少在 12个位点中的一个发生杂合性缺失 ,最小缺失区域跨越Smad 4基因。免疫组化结果显示 :Smad 2蛋白有2 1 1% (8/ 38)表达上调 ,34 2 % (13/ 38)表达下调 ;Smad 4蛋白有 6 8 4% (2 6 / 38)表达下调而仅 1例表达上调。结论 18号染色体短臂的缺失与膀胱癌变相关。位于 18号染色体短臂的两个候选抑癌基因Smad 2和Smad 4的异常表达 ,对于膀胱癌的发生、发展可能有着重要作用。

USF2与其截短体真核表达载体的构建及对Smurf1/2转录水平的影响

目的构建上游刺激因子2(USF2)及其截短体的真核表达载体,鉴定USF2蛋白中抑制泛素连接酶Smurf1/2转录的功能区域。方法采用PCR技术扩增USF2及其两个截短体USF2(1~235aa)、USF2(236~346aa)编码基因,分别将其构建在pCMV-Myc重组载体上,转染真核细胞后验证其表达,Western blot及实时定量PCR确定USF2下调Smurf1/2转录水平的区域。结果成功地将USF2及其两个截短体编码基因构建至pCMV-Myc载体,并验证其在真核细胞中的正确表达,Western Blot和实时定量PCR实验结果显示,USF2 C端236~346aa区域对Smurf1/2的转录水平有抑制效应。结论 USF2通过其C端236~346aa区域对Smurf1/2的转录产生抑制效应。