Linc-smad7通过靶向miR-125b/SIRT1轴促进胰腺癌细胞迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA smad7(long non-coding RNA smad7,Linc-smad7)对胰腺癌(pancreatic cancer,PC)细胞侵袭、迁移的作用及其作用机制。方法qRT-PCR检测PC组织及细胞系中Linc-smad7的表达;Transwell小室观察过表达Linc-smad7对PaCa-2细胞迁移、侵袭能力的影响;荧光素酶报告基因检测Linc-smad7对miR-125b,以及miR-125b对沉默调节蛋白1(Sirtuin1,SIRT1)的结合作用;qRT-PCR检测Linc-smad7在PaCa-2细胞中对miR-125b表达的调控作用,qRT-PCR、Western blotting检测miR-125b对SIRT1表达的调控作用。结果Linc-smad7在PC组织及细胞系中明显升高;Linc-smad7表达上调的PaCa-2细胞迁移、侵袭能力增强,miR-125b表达下降;miR-125b表达上调后,SIRT1表达显著下降;荧光素酶报告基因结果提示Linc-smad7直接靶向结合miR-125b,miR-125b直接结合SIRT1;过表达Linc-smad7或是下调miR-125b表达可逆转SIRT1沉默对PaCa-2细胞侵袭、迁移能力的影响。结论Linc-smad7通过miR-125b/SIRT1轴促进PaCa-2细胞侵袭和迁移。

健脾化瘀方调控TGF-β1/Smad7通路逆转肝细胞癌上皮间质转化及血管生成

目的探讨健脾化瘀方(人参、茯苓、白术、丹参等)通过TGF-β1/Smad7通路对肝细胞癌上皮间质转化(EMT)及血管生成的调控作用。方法(1)采用BALB/C-nu裸鼠建立Hep3B荷瘤小鼠模型,随机分为对照组及健脾化瘀方低、中、高剂量组(3.844、7.689、15.378 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组5只。灌胃给药,每日1次,连续给药21 d。(2)将Hep3B细胞分为空白组、造模组(10 ng·mL^(-1)TGF-β1)、低浓度组(10 ng·mL^(-1)TGF-β1+4 mg·mL^(-1)健脾化瘀方)、高浓度组(10 ng·mL^(-1)TGF-β1+6 mg·mL^(-1)健脾化瘀方),TGF-β1诱导48 h后更换为相应浓度的健脾化瘀方完全培养液(0、4、6 mg·mL^(-1))继续培养24 h。(3)将HUVEC细胞分为正常组、模型组、中药组、模型加中药组。正常组细胞用不含TGF-β1的条件培养基培养;模型组细胞用含TGF-β1的条件培养基培养;中药组细胞用含有4 mg·mL^(-1)健脾化瘀方但不含TGF-β1的条件培养基培养;模型加中药组细胞用含4 mg·mL^(-1)健脾化瘀方且含TGF-β1的条件培养基培养。继续培养24 h后收集细胞进行后续实验。(4)计算Hep3B荷瘤裸鼠皮下移植瘤的瘤质量指数和抑瘤率;采用免疫荧光法检测荷瘤裸鼠皮下移植瘤中CD31的表达;免疫组化法检测荷瘤裸鼠皮下移植瘤的微血管密度;细胞划痕实验检测Hep3B细胞的迁移能力;Transwell实验检测Hep3B/HUVEC细胞的侵袭能力;检测HUVEC细胞小管形成能力;Western Blot法检测荷瘤裸鼠皮下移植瘤、Hep3B及HUVEC细胞中相关蛋白的表达水平。结果(1)与对照组比较,健脾化瘀方中、高剂量组荷瘤裸鼠皮下移植瘤质量及瘤质量指数显著降低(P<0.01);低、中、高剂量组荷瘤裸鼠皮下移植瘤中CD31的表达量及微血管密度显著降低(P<0.05,P<0.01),VE-cadherin、EphA2、N-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01),E-cadherin、Smad7蛋白表达显著上调(P<0.01)。(2)与空白组比较,造模组的Hep3B细胞的相对迁移率明显升高(P<0.05),侵袭细胞数显著增加(P<0.01);Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.01),E-cadherin、Smad7蛋白表达显著下调(P<0.01)。与造模组比较,健脾化瘀方低、高浓度组Hep3B细胞的相对迁移率显著降低(P<0.01),侵袭细胞数显著减少(P<0.01);Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.01),E-cadherin、Smad7蛋白表达显著上调(P<0.01)。(3)与正常组比较,模型组HUVEC细胞形成的小管分支点数显著增多(P<0.01),小管分支长度及侵袭细胞数显著增加(P<0.01);VE-cadherin、EphA2蛋白表达显著上调(P<0.01),Smad7蛋白表达显著下调(P<0.01)。与模型组比较,模型加中药组HUVEC细胞形成的小管分支点数显著减少(P<0.01),小管分支长度显著缩短(P<0.01),侵袭细胞数显著减少(P<0.01);VE-cadherin、EphA2蛋白表达显著下调(P<0.01),Smad7蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论健脾化瘀方可明显抑制肝细胞癌的生长、侵袭与迁移,可能与通过调控TGF-β1/Smad7通路介导的EMT及血管生成有关。

心房颤动患者TGF-β1/Smad2、smad7信号通路在心房肌重构表达的研究

目的探讨TGF-β1信号通路中的Smad2、smad7表达分布变化与房颤纤维化的发生、发展的关系。方法选取2018年1月至2020年12月于我院行心脏外科手术患者52例,按病变性质分为房颤组24例(RAF)和窦律组28例(RSR),通过检测心外科手术患者房颤及窦性心律组右心房组织中的Smad2、smad7、纤维化因子Fibronectin的表达,比较Smad2、smad7表达量、空间分布及Fibronectin表达量变化。结果房颤患者右心房Smad2表达量明显高于窦性心律组,而smad7表达量明显低于窦性心律患者,纤维化因子Fibronectin表达量明显高于窦性心律组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TGF-β1/Smad2、smad7信号通路参与房颤心房纤维化所致结构重构。

血清miR-33a-5p、SMAD7水平与视网膜静脉阻塞患者视力预后的关系

目的观察视网膜静脉阻塞患者血清微小核糖核酸-33a-5p(miR-33a-5p)、SMAD同源物7(SMAD7)水平变化,并探讨二者与视力预后的关系。方法选择视网膜静脉阻塞患者108例(观察组),同期体检健康的志愿者108例(对照组),采集所有研究对象清晨空腹外周静脉血,离心留取血清,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-33a-5p,采用ELISA法检测血清SMAD7。比较两组血清miR-33a-5p、SMAD7水平,分析视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p、SMAD7水平的关系。所有视网膜静脉阻塞患者予雷珠单抗玻璃体腔内注射治疗。治疗3个月,评估视力,其中预后不良57例、预后良好51例。采用多因素Logistic回归模型分析视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-33a-5p、SMAD7水平对视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的预测价值。结果观察组血清miR-33a-5p水平低于对照组,血清SMAD7水平高于对照组(t分别为13.362、38.657,P均<0.01)。Pearson相关分析显示,视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p水平与血清SMAD7水平呈负相关(r=-0.649,P<0.05)。单因素分析显示,视网膜静脉阻塞患者视力预后不良者合并高血压、高血脂比例和有并发症比例以及血清SMAD7水平均高于其预后良好者(χ^(2)/t分别为13.412、7.342、10.095、6.394,P均<0.05),血清miR-33a-5p水平低于其预后良好者(t=7.373,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高和合并高血压、高血脂以及有并发症是视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的独立危险因素(OR分别为0.683、3.843、2.146、1.463、2.773,P均<0.05)。血清miR-33a-5p、SMAD7水平预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.870、0.869,二者联合预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的AUC为0.938。血清miR-33a-5p、SMAD7水平联合预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的AUC高于二者单独(Z分别为2.419、2.422,P均<0.05)。结论视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高;血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高是视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的独立危险因素;血清miR-33a-5p、SMAD7水平对视网膜静脉阻塞患者视力预后不良均有一定预测价值,二者联合预测价值更高。

miR-590-5p靶向SMAD7促进结肠癌细胞进展的机制研究

目的研究miR-590-5p在结直肠癌组织和结肠癌细胞中的表达和功能及可能相关的分子机制。方法对2022年6月—2023年12月本院收治的进行手术的结直肠癌患者进行样本采集,共收集结直肠癌组织及癌旁组织临床样本40对,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-590-5p在两者的表达情况并与临床特征进行相关性分析。通过瞬时转染进行体外细胞实验,使用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测miR-590-5p对结肠癌细胞增殖的作用,运用Transwell实验检测miR-590-5p对结肠癌细胞迁移与侵袭的影响。通过生物信息分析筛选数据库筛选miR-590-5p的靶基因SMAD7,分别采用双荧光素酶实验、qPCR和蛋白质免疫印迹实验(western blot)验证二者的作用及相关性。结果结直肠癌组织中miR-590-5p的表达水平与结直肠癌的临床分期、神经脉管侵犯情况和淋巴结转移数目情况存在正相关关系;过表达miR-590-5p会提高结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),而抑制miR-590-5p表达后结果则相反(P<0.05);双荧光素酶实验结果表明SMAD7是miR-590-5p的一个靶基因,qPCR实验和western blot实验结果则表明二者存在负相关关系。结论miR-590-5p在进展期结直肠癌中可能扮演着积极的角色,其可能通过靶向SMAD7促进结肠癌细胞的增殖、迁移与侵袭。

血清Smad7及TSLP在新生儿坏死性小肠结肠炎诊断及病情判断中的价值

目的探讨血清Smad同源物7(Smad7)、胸腺基质淋巴生成素(TSLP)在新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)诊断及病情判断中的价值。方法选取2021年4月至2023年4月该院收治的98例确诊为NEC的患儿为观察组,根据病情严重程度分为重症组(38例)和轻症组(60例)。另选取同期在该院出生的98例健康新生儿为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清Smad7相对表达量,采用酶联免疫吸附试验检测血清TSLP水平;采用Spearman相关分析NEC患儿血清Smad7、TSLP水平与病情严重程度的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Smad7、TSLP水平对重症NEC的诊断价值。结果与对照组比较,观察组血清Smad7、TSLP水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与轻症组比较,重症组血清Smad7、TSLP水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清Smad7、TSLP水平与病情严重程度均呈正相关(r=0.486,P<0.001;r=0.421,P<0.001)。血清Smad7、TSLP诊断重症NEC的曲线下面积(AUC)分别为0.800、0.750,二者联合检测诊断重症NEC的AUC为0.850,二者联合检测的AUC明显大于血清Smad7、TSLP单独检测的AUC(Z=2.074,P=0.038;Z=1.974,P=0.048)。结论NEC患儿的血清Smad7、TSLP水平均上调,且与病情严重程度关系密切,二者联合检测对重症NEC具有较高的诊断价值。

丹荔输通汤对慢性输卵管炎性阻塞模型大鼠CTGF、Smad7的影响

目的探讨丹荔输通汤对慢性输卵管炎性阻塞的治疗与作用机制。方法以SD大鼠为观察对象,随机选取11只为空白组,其余以苯酚明胶化学法制作慢性输卵管炎性阻塞模型,造模成功后,将造模后大鼠随机分为模型组、丹荔输通汤高剂量灌胃+灌肠组、丹荔输通汤中剂量灌胃+灌肠组、丹荔输通汤低剂量灌胃+灌肠组、丹荔输通汤中剂量灌胃组及阿奇霉素混悬液灌胃对照组,每组11只。实验处理30 d后,处死各组大鼠,取输卵管组织,经病理检测观察输卵管组织的组织形态变化,以逆转录-实时定量聚合酶链反应、Western blot检测输卵管组织Smad7、结缔组织生长因子(CTGF)在大鼠输卵管组织的表达。结果病理检测发现造模成功,经药物治疗后,输卵管局部组织形态趋于正常,输卵管积水、积脓消失。丹荔输通汤各剂量组均能明显降低模型组大鼠输卵管组织CTGF表达,上调Smad7表达,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05),且丹荔输通汤高剂量灌胃+灌肠组、丹荔输通汤中剂量灌胃+灌肠组对大鼠输卵管组织Smad7、CTGF的影响优于丹荔输通汤低剂量灌胃+灌肠组。对于丹荔输通汤中剂量的不同用药方式上:与丹荔输通汤中剂量灌胃组相比,丹荔输通汤中剂量灌胃+灌肠组大鼠输卵管组织Smad7、CTGF相对表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论丹荔输通汤可能通过调节输卵管组织的CTGF及Smad7表达发挥治疗作用,从而减轻局部组织炎性反应,改善局部组织纤维化,从而恢复输卵管正常组织形态与生理功能;不同剂量丹荔输通汤对模型大鼠输卵管组织CTGF及Smad7表达影响有差异。

沉默SMAD 家族成员3( SMAD3) 促进类风湿性关节炎巨噬细胞M2 极化和SMAD7 表达

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默SMAD家族成员3(SMAD3)对类风湿性关节炎(RA)巨噬细胞极化及转化生长因子β1(TGF-β1)/SMAD家族信号通路的影响。方法以巨噬细胞与类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)共培养为细胞模型,TGF-β1刺激巨噬细胞后,将SMAD3特异性siRNA(si-SMAD3)和阴性对照siRNA(si-NC)转染TranswellTM小室共培养的人RA巨噬细胞,实时荧光定量PCR检测SMAD3 mRNA表达,Western blot法分别检测TGF-β1、SMAD3和SMAD7蛋白的表达;ELISA测定细胞培养上清液中TGF-β1、白细胞介素23(IL-23)的含量;CCK-8法检测细胞增殖情况;TranswellTM小室测定细胞的迁移。结果与模型组和si-NC组相比,沉默SMAD3后,RA巨噬细胞中TGF-β1、SMAD3 mRNA和蛋白表达显著下降,IL-23的分泌明显减少,细胞增殖活性及细胞迁移受到抑制,SMAD7高表达。结论敲低SMAD3促进RA巨噬细胞M2极化及SMAD7表达。

SMAD7、SMAD9与肺腺癌患者预后及免疫浸润的相关性分析

目的 本研究旨在探讨SMAD7、SMAD9在肺腺癌中的预后价值及其与免疫浸润的相关性。方法 借助GEPIA数据库预测SMAD家族成员在肺腺癌组织与癌旁组织中的表达水平,筛选差异表达的成员作为关键基因纳入研究。分析关键基因对肺腺癌患者预后的影响,GEPIA与TIMER数据库分析关键基因与免疫浸润的相关性。收集108例手术切除的肺腺癌患者组织,使用qRT-PCR验证关键基因在组织内的表达水平。分析关键基因对患者5年生存率的影响及影响生存率的独立预测因素。结果 GEPIA数据库预测结果显示,相对于正常组织样本,SMAD7、SMAD9在癌组织样本中的表达降低(P均<0.05)。GEPIA数据库预测结果显示SMAD7、SMAD9低表达水平患者总生存率低于SMAD7、SMAD9高表达水平患者(P均<0.05)。TIMER网站预测结果显示SMAD7与B细胞、CD4^(+)T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞水平均呈正相关(P均<0.05),SMAD9与B细胞、CD4^(+)T细胞、巨噬细胞水平呈正相关(P均<0.05)。GEPIA网站显示SMAD7与CD115、CD86、CD68、CCL2、IRF5呈正相关(P均<0.05),SMAD9与CCL2、IRF5呈正相关(P均<0.05)。相对于癌旁组织中SMAD7(1.00±0.27)、SMAD9(1.00±0.31)的表达,癌组织中SMAD7(0.76±0.24)、SMAD9(0.81±0.22)的表达降低(P均<0.05)。SMAD7、SMAD9低表达患者的5年总生存率低于高表达患者(P均<0.05)。Cox分析结果显示,淋巴结转移、T3+T4分期、组织学Ⅲ级与SMAD7、SMAD9水平是影响患者总生存时间的独立风险因素(P均<0.05)。结论 SMAD7、SMAD9是预测肺腺癌不良预后的潜在生物分子,与免疫浸润水平相关,可能参与免疫细胞调节。

糖通饮靶向microRNA-21调控Smad7、PTEN抑制糖尿病肾病肾纤维化

目的:探讨糖通饮抑制糖尿病肾病肾纤维化的作用机制。方法:60只SD大鼠中随机选取10只作为正常对照组,其余采用高糖高脂饲料喂养联合STZ多次小剂量腹腔注射制备糖尿病肾病(DKD)大鼠模型,将造模成功的DKD大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦(13.5 mg/kg)阳性对照组及糖通饮低(6.21 g/kg)、中(12.42 g/kg)、高(24.84 g/kg)剂量组,每组10只,灌胃给药,1次/d,共8 w。检测各组大鼠FBG、24 h尿mAlb;HE及Masson染色观察大鼠肾组织病理学变化;Western Blot检测大鼠肾组织Smad7、PTEN、E-cadherin、FN、Vimentin、α-SMA蛋白表达;RT-PCR检测大鼠肾组织Smad7、PTEN、FN、Vimentin α-SMA、E-cadherin mRNA及miRNA-21表达。体外实验对高糖状态下HBZY-1细胞进行miRNA-21过表达慢病毒转染并予糖通饮含药血清进行干预,Western Blot法检测细胞Smad7、PTEN、α-SMA蛋白表达,RT-PCR法检测细胞miR-21、Smad7、PTEN、α-SMA mRNA表达。结果:体内实验结果显示,与模型组比较,糖通饮能显著降低DKD大鼠肾组织FN、Vimentin、α-SMA mRNA及蛋白表达,显著升高Smad7、PTEN、E-cadherin mRNA及蛋白表达,显著降低miRNA-21表达及FBG、24h尿mAlb水平(P<0.05),改善DKD大鼠肾组织病理学变化。体外实验结果显示,经miRNA-21过表达慢病毒转染后,高糖状态下HBZY-1细胞中Smad7、PTEN mRNA及蛋白表达显著降低,α-SMA mRNA及蛋白表达显著升高,糖通饮可使HBZY-1细胞中miRNA-21表达显著降低,Smad7、PTEN mRNA及蛋白表达显著升高,α-SMA mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:miRNA-21是糖通饮防治DKD的靶点之一,糖通饮可通过作用于miRNA-21进而良性调节其靶标Smad7、PTEN的表达,抑制糖尿病肾病肾纤维化。

Smad7介导TGF-β信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞增殖的影响

【目的】卵泡发育是一个复杂的调控过程,其中绵羊卵泡颗粒细胞(granulosa cells,GCs)的增殖,分化会直接影响卵泡的发育状况。TGF-β信号通路在绵羊卵巢发育和卵泡生长过程中起着重要作用,Smad7作为TGF-β信号通路关键性的抑制基因也发挥重要作用,通过探究Smad7介导TGF-β信号通路对绵羊卵泡GCs增殖凋亡的影响,为进一步研究Smad7在卵泡GCs增殖凋亡过程中的调控作用提供依据。【方法】选取4—6月龄未怀孕的晋中健康杜湖杂交母羊20只,屠宰后采集双侧卵巢组织,分离培养卵泡颗粒细胞,FSHR细胞免疫荧光鉴定,Smad7细胞免疫荧光的表达定位,CCK8法测定细胞增殖情况,绘制生长曲线;细胞传代后外源添加不同浓度Smad7激动剂积雪草苷(asiaticoside,AS)(0、100、200、400、600 ng·mL^(-1))培养绵羊卵泡GCs,选择AS最佳作用浓度处理二代颗粒细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测TGF-β信号通路中关键基因及细胞凋亡和周期相关基因表达水平;合成3个siSmad7,转染至卵泡GCs中,选择干扰效果最佳的,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测TGF-β信号通路中关键基因及细胞凋亡和周期相关基因表达水平。【结果】Smad7在绵羊卵泡GCs中有表达;200 ng·mL^(-1) AS能极显著上调Smad7在GCs的表达(P<0.01),siSmad7-1对绵羊卵泡GCs的转染效果最佳(P<0.01);Smad7上调能显著增加TGF-β信号通路Smad4,TFDP-1和EP300的表达量(P<0.05),极显著增加TGF-β信号通路SP1的表达(P<0.01),显著增加凋亡相关基因Caspase8的表达量(P<0.05),极显著增加凋亡相关基因Caspase3和Bim的表达量(P<0.01),显著升高细胞周期相关基因P21和P27的表达量(P<0.05),极显著升高细胞周期相关基因CCND2的表达量(P<0.01),而CCND1的表达量显著降低(P<0.05);Smad7 siRNA显著降低TGF-β信号通路Smad4,TFDP-1和EP300的表达量(P<0.05),极显著降低TGF-β信号通路SP1的表达量(P<0.01),显著降低凋亡相关基因Caspase8的表达量(P<0.05),极显著降低凋亡相关基因Caspase3和Bim的表达量(P<0.01),极显著降低细胞周期相关基因P21,P27和CCND2的表达量(P<0.01),极显著升高CCND1的表达量(P<0.01);CCK8分析显示,Smad7上调,GCs的增殖率在24和48 h显著下调(P<0.01),Smad7 siRNA在24和72 h显著升高GCs的增殖率(P<0.05),在48 h极显著升高GCs的增殖率(P<0.01)。【结论】Smad7介导TGF-β信号通路抑制绵羊卵泡GCs增殖和促进细胞凋亡。

MiR-103a通过靶向SMAD7调控炎症因子对小鼠类风湿关节炎的影响

目的 分析miR-103a在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)中发挥的作用及相关机制,并探讨其成为RA治疗靶点的可能性。方法 首先,利用RT-qPCR观察miR-103a在30例RA患者和30例健康人群中的表达水平。然后,将40只小鼠随机分为对照组、骨胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis, CIA)模型组、CIA+miR-103a敲低组及空载体组,每组各10只。建模成功后,RT-qPCR检测各组小鼠血清中miR-103a的表达水平,并在miR-103a敲低组小鼠双后肢骨关节处注射含10μl miRNA-103a抑制载体的慢病毒悬液。评价各组小鼠关节组织评分,并检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、IL-6和IL-1β表达水平。最后,使用生物信息学软件预测miR-103a的下游靶mRNA,并通过双荧光素酶报告系统进行验证。结果 MiR-103a在RA患者血清中呈异常高表达状态。MiR-103a在小鼠CIA模型中的表达水平显著高于对照组,且沉默miR-103a能够显著降低CIA模型小鼠的足趾肿胀程度、关节组织评分以及血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平;双荧光素酶报告结果证实SMAD7是miR-103a下游靶基因。此外,与CIA模型组相比,miR-103a沉默组CIA小鼠中SMAD7的表达水平显著上调。结论 MiR-103a通过靶向抑制SMAD7的表达促进小鼠类风湿关节炎的发生发展,有望成为RA的临床治疗靶点。

SMAD7调控内皮间质转化可预防跟腱损伤后的异位骨化

背景:现有的研究结果证明,内皮细胞向间质细胞转化(End MT)在异位骨化病程中起主要作用。目的:基于SMAD7基因在阻止肌成纤维细胞转化等内皮-间质转化进展中的潜能,验证其是否是异位骨化潜在的治疗靶点。方法:构建了过表达SMAD7的慢病毒颗粒,并在大鼠主动脉内皮细胞中测定了其最佳滴度和转染效率。随后,将该病毒颗粒注入构建的大鼠跟腱损伤模型中,对照组注射生理盐水。使用qPCR和蛋白印迹实验分析了损伤处内皮和间质标志物的表达,采用X射线和组织染色观察异位骨化病程转化。结果与结论:(1)局部注射转染SMAD7基因的病毒载体可引起内皮细胞标志物(CD31,VE-cadherin)发生上调,同时间质细胞标志物(N-cadherin,vimentin)发生下调,提示SMAD7的局部高表达阻断了内皮-间质转化改变。这种表达差异在造模后10周时比在造模后6周时更明显;(2)X射线片和组织染色显示,相比对照组,注入表达SMAD7的慢病毒后,肌腱组织中骨化结构缺失;(3)因此认为,促进局部SMAD7的高表达可用来预防术后异位骨化形成,而不影响正常的伤口愈合过程。

抑制Smad7的表达对肾小管上皮细胞的影响

目的:本研究旨在观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小管上皮细胞Smad7表达变化,以及对其凋亡及增殖的影响。方法:大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52E分别与终浓度为0(对照组)、10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/LAngⅡ共培养24h。通过AnnexinV-FITC/PIKit用流式细胞仪检测细胞凋亡指数,用免疫组化的方法检测增殖性细胞核抗原(PCNA)和Smad7蛋白的表达,RT-PCR检测Smad7mRNA的表达水平。结果:随着AngⅡ浓度的增加,10-6mol/LAngⅡ组与对照组相比凋亡指数显著增加,分别为(27.06±1.14)%vs(3.09±0.73)%(P<0.001)。与对照组相比,Smad7的表达在含有AngⅡ组中均呈现出低表达水平,并在一定范围内随AngⅡ浓度的增加而逐渐受到抑制,并与细胞凋亡指数成负相关(r=-0.82,P<0.05)。结论:AngⅡ可以抑制肾小管上皮细胞Smad7的表达,同时促进细胞凋亡,二者具有密切关系。

在BEP2D细胞恶性转化过程中TGF-β1对Smad7表达的调节

背景与目的:细胞逃避转化生长因子-β(TGF-β)诱导的对细胞生长、增殖的抑制是许多肿瘤发生的一个重要机制。Smad7是TGF-β信号转导通路的抑制型Smads,它可阻断TGF-β信号在胞浆内的传导,其紊乱是TGF-β信号转导通路紊乱的机制之一。本研究旨在分析在细胞恶性转化过程中,Smad7基因表达是否发生紊乱,TGF-β1对Smad7基因的调控功能有无发生变化,以探索细胞发生恶性转化的原因。方法:培养BEP2D细胞及BERP35T-2细胞,于收获前60min和90min加入不同剂量的TGF-β1,提取细胞总RNA,分别以未加TGF-β1的细胞组作为对照,用Northernblot杂交比较两组细胞Smad7mRNA表达的差异以及细胞对TGF-β1细胞因子刺激的反应性。同时提取BEP2D及BERP35T-2细胞蛋白,用Westernblot方法比较两组细胞内源性TGF-β1表达的差异。结果:Smad7mRNA表达水平恶性转化细胞高于永生化细胞;加了TGF-β1细胞因子后,BEP2D细胞Smad7mRNA表达增高,BERP35T-2细胞表达水平改变不明显。而内源性TGF-β1的表达水平,BERP35T-2细胞稍高于BEP2D细胞。结论:Smad7在辐射致肺癌细胞系中的过表达及对TGF-β1应答的降低可能是辐射诱发肺癌发生的机制之一。

胃癌组织TGF-βRII、Smad4、Smad7的表达及其与临床病理特征和生存的关系

背景与目的:目前研究认为,TGF-β/Smads信号通路在恶性肿瘤的发生发展过程中起到重要的作用,并可能与胃癌等恶性肿瘤的生物学行为密切相关。本研究通过探讨TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7在胃癌组织的表达及其意义,分析它们与临床病理特征及患者生存之间的关系。方法:应用组织芯片技术和免疫组化SABC法检测200例胃癌组织及56例癌旁组织TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7蛋白的表达。结果:胃癌组织中TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7的阳性率分别为25.5%、67.0%和47.0%。TGF-βRⅡ表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移、分化程度和Lauren分型密切相关(分别χ2=6.214,χ2=11.308,χ2=14.633和χ2=8.216,均P<0.05);Smad4表达与胃癌分化程度及Lauren分型密切相关(分别χ2=16.162和χ2=13.100,均P<0.05);Smad7表达与胃癌分化程度及Lauren分型密切相关(分别χ2=4.710和χ2=5.297,均P<0.05);Smad4与TGF-βRⅡ表达呈正相关(r=0.191,P=0.007);Smad4表达与患者生存密切相关(χ2=4.090,P=0.043)。结论:胃癌组织中广泛存在TGFβ-Smad信号通路相关分子TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7表达异常。胃癌中Smad4蛋白阳性患者其预后优于阴性者。

槲皮素脂质体对糖尿病肾病氧化应激和TGF-β1/Smad7通路的影响

目的观察槲皮素脂质体(LQ)对糖尿病肾病氧化应激和转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad7通路的影响。方法高糖高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备大鼠2型糖尿病肾病模型,随机分为糖尿病模型组(DM组)、槲皮素脂质体组(LQ组)和厄贝沙坦组(IRB组),另设正常组。8周后生化法测定各组大鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,免疫组化检测大鼠肾脏TGF-β1和Smad7蛋白的表达,RT-PCR法检测大鼠肾皮质TGF-β1和Smad7 mRNA的表达情况。结果与正常组比较,DM组大鼠血清中HDL、SOD、GSH-Px活性水平显著下降,TC、TG、LDL、MDA含量明显升高,肾组织TGF-β1蛋白及TGF-β1 mRNA表达均显著增高,Smad7蛋白及Smad7 mRNA表达减少。与DM组比较,LQ组和IRB组HDL、SOD、GSH-Px活性水平升高,TC、TG、LDL、MDA含量降低,肾组织TGF-β1蛋白及TGF-β1mRNA减少,Smad7蛋白及Smad7 mRNA表达增加。结论 LQ通过减轻体内氧化应激反应,干预TGF-β1和Smad7通路从而对糖尿病肾病起保护作用。

积雪草甙对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与Smad7蛋白的影响

目的 研究积雪草甙对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及对Smad7蛋白的影响。方法 用组织块法培养人瘢痕成纤维细胞。应用流式细胞术、免疫细胞化学、RT PCR及Westernblot技术结合光密度扫描分析 ,观察积雪草甙对增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期、凋亡和Smad7在细胞中的定位及其mRNA和蛋白含量的改变。结果 积雪草甙可抑制瘢痕的成纤维细胞从S期进入M期 ,增加瘢痕成纤维细胞中Smad7mRNA和蛋白的含量。结论 积雪草甙抑制瘢痕的作用可能部分通过增加抑制性Smad7蛋白。

益气养阴方对大鼠肺纤维化的干预作用及对Smad2、Smad7蛋白的影响

目的:观察益气养阴方对博来霉素所致大鼠肺纤维化的干预作用及对Smad2、Smad7表达水平的影响。方法:选用雄性SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组、中药组、激素组、中药+激素组5组。正常组大鼠经气管注入生理盐水,其余组大鼠气管内缓慢注入博来霉素5 mg/kg。自造模后第2天开始给药,中药组给予益气养阴方1 ml/100 g灌胃;激素组给予35%醋酸泼尼松溶液按1 ml/100 g体重灌胃;中药+激素组给予中药加激素混合溶液按1 ml/100 g灌胃;正常组和模型组予等量生理盐水灌胃。实验第28天处死所有大鼠,取左肺下叶行HE染色观察肺组织病理学改变及免疫组化检测大鼠肺组织Smad2、Smad7蛋白的表达。结果:与正常组相比,模型组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度评分明显增高;激素组、中药组、中药+激素组大鼠肺泡炎及肺纤维化程度与模型组相比均减轻,以中药组肺损伤减轻更为明显。模型组肺泡上皮细胞及成纤维细胞胞浆中Smad2蛋白高表达,且表达量明显高于正常组;与模型组相比,激素组、中药组、中药+激素组Smad2阳性表达均减少,以中药组表达量最低。模型组Smad7蛋白较正常组明显减少;与模型组相比,激素组、中药组、中药+激素组Smad7蛋白表达增强,以中药组表达量最高。结论:益气养阴方对博来霉素所致大鼠肺纤维化具有干预治疗作用,其机制可能与抑制炎症反应、减少胶原蛋白的形成和沉积及干预Smad信号通路有关。

BEP2D细胞恶性转化过程中Smad7基因对MAPK信号通路的调控

背景与目的:Smad7基因是转化生长因子(transforminggrouthfactor-茁,TGF-β)信号通路的抑制分子,有研究表明TGF-β通过活化SMAD通路和ras/MEK/ERK通路来诱导某些基因的表达。本研究旨在探讨在人永生化支气管上皮细胞BEP2D经辐射诱发恶性转化过程中,作为SMAD蛋白家族的抑制分子Smad7是否参与TGF-β对MAPK信号通路的调控。方法:将人工合成的Smad7siRNA及Smad7真核表达载体与pTet-Elk,pTet-Jun反式激活载体、报告基因荧光素酶共转染BEP2D细胞,TGF-β刺激,通过报告基因荧光素酶的表达丰度来检测Smad7对MAPK信号通路的调控。结果:永生化BEP2D细胞中,TGF-β刺激之后,Elk和Jun磷酸化活性升高(PElk=0.033,PJun=0.016);Elk或Jun同Smad7真核表达载体共转染之后,Elk磷酸化活性升高,Jun磷酸化活性降低(PElk=0.017,PJun=0.028);Elk或Jun同Smad7-siRNA共转染之后,Elk磷酸化活性降低,Jun磷酸化活性升高(PElk=0.018,PJun=0.005)。恶性化BERP35T2细胞中,TGF-β刺激之后,Elk磷酸化活性增强(P=0.006),Elk同Smad7siRNA共转染之后,Elk磷酸化活性降低(P=0.000);恶性化细胞中几乎检测不到Jun的活性。结论:在BEP2D细胞发生恶性转化过程中,Smad7基因干预MAPK信号通路,使ERK和JNK磷酸化活性的平衡失调,导致促增殖作用强于生长抑制作用,从而有助于细胞向恶性方向发展。