辣椒N基因介导抗根结线虫作用早期表达基因的抑制性消减杂交SSH分析

以含N基因的辣椒(Capsicum annuumL.)为试验材料,接种南方根结线虫(Meloidogyne in-cognita)12、24、36h的根尖材料作为测验方(tester),相应的未接种根尖材料作为驱动方(driver),构建一个南方根结线虫诱导N基因表达早期的正向抑制消减杂交cDNA文库,并结合文库高密度点阵膜杂交差异筛选,获得了237条表达序列标签(EST)。在GenBank上进行BLASTn与BLASTx分析,得到148条功能已知的EST序列,获得已知的上调抗性相关EST68个。分离出了具有NBS-LRR结构的抗线虫蛋白和类LRR抗性蛋白的基因,防御作用相关的类萌芽素(GLP)、HSR203J蛋白、蜜腺蛋白、蛇毒素肽等基因,抗性相关的WRKY、ERFBP等转录因子基因,以及G蛋白、14-3-3蛋白等多种信号蛋白基因。通过Gene Ontology分析,N基因介导的早期表达抗病基因涉及病原物的识别、抗性信号传导、过敏性坏死、系统获得性抗性以及植物细胞保护机制等多个方面,并有许多功能未知的基因有待于进一步的研究。

N^＋离子注入陆地棉花粉对胚珠DNA及M1代cDNA表达的影响

通过对胚珠DNA的SSR标记分析,在DNA水平上检测氮离子束诱变后胚珠的多态性变化,结果表明,离子注入陆地棉花粉后再授粉雌蕊,会对胚珠的DNA多态性产生影响,表明在一定程度上改变了花粉中精细胞的DNA序列;利用抑制性消减杂交(SSH)分离N+离子诱变花粉和正常花粉(对照)分别给雌蕊授粉后产生的M1代植株叶片间表达有差异的cDNA片段,建立差异表达cDNA文库。已测序的有50个缩减cDNA克隆,根据BLAST网络服务检索查询EMBL、Gen Bank、DDBJ和PDB的核苷酸序列数据库以及蛋白质氨基酸序列数据库,进行序列联配,结果发现52%序列在数据库中都有同源的棉属来源的EST。38个EST与其他物种已知基因部分区域的同源性为56%~100%,占总EST的76%;5条EST序列能在数据库中检索到同源性序列,但其功能(占10%)尚不清楚;9个EST能在数据库中发现为推测蛋白,占18%;4个EST在GenBank中没有查到对应的同源序列,占8%。

Lin^-CD_(34)^-与Lin^-CD_(34)^+细胞差异表达基因的鉴定

目的 克隆并鉴定Lin-CD3 4-细胞区别于Lin-CD3 4+细胞的可能与其性状相关的基因。方法 以Lin-CD3 4-细胞作为检测对象 ,Lin-CD3 4+细胞作为驱动细胞 ,应用抑制消减杂交技术构建Lin-CD3 4-细胞的cDNA消减文库。选取部分克隆测序 ,测序结果与GenBank进行同源性比较和功能分析。结果 共获得 593个含有插入片段的克隆 ,片段的长度为 30 0～ 50 0bp。随机选取 53条EST进行测序 ,其中 37条EST代表了 1 0个已知基因 ,其余 1 6条EST代表了 4个未知序列。结论 利用抑制消减杂交技术鉴定出部分Lin-CD3 4-细胞特异表达的基因 ,可能与Lin-CD3