银染-TRAP法检测胸腹水脱落细胞端粒酶活性的研究

目的:探讨检测胸腹水脱落细胞端粒酶活性对于鉴别良恶性肿瘤的临床意义.方法:用Kim法处理48例胸腹水细胞后,利用改进的银染—TRAP(端粒重复序列扩增)法测其端粒酶活性.结果:24例临床及细胞涂片检查证实恶性胸腹水细胞端粒酶活性全部阳性;12例临床证实恶性而细胞检查未找到癌细胞的胸腹水细胞端粒酶活性阳性7例,阴性5例;12例良性胸腹水细胞端粒酶活性全部阴性.结论:端粒酶的激活与恶性胸腹水的发生发展密切相关,并有可能成为一种鉴别良恶性胸腹水快速、灵敏的临床诊断指标.

TRAP-银染色法用于肝癌组织端粒酶活性测定的研究

目的探讨端粒酶活性检测在肝癌诊断中的意义。方法用裂解液提取组织细胞中的端粒酶模板,在特异的引物作用下进行PCR扩增,所得产物作聚丙稀酰胺凝胶垂直板电泳,经硝酸银染色分析端粒酶活性。结果肝癌组织中的端粒酶阳性率为85.7%,明显高于慢性肝炎组2.6%、肝硬化组16.7%和对照组4.2%,P<0.01。慢性肝炎组、肝硬化组、对照组之间无显著性差异(P<0.05)。结论端粒酶活性检测对临床恶性肝脏肿瘤疾病的诊断具有良好的应用前景。

端粒重复序列扩增-银染色法用于端粒酶活性测定的研究

目的 :建立端粒重复序列扩增 (TRAP) -银染色技术 ,探讨端粒酶活性检测在肿瘤诊断中的意义。 方法 :用裂解液提取组织细胞中的端粒酶模板 ,在特异引物作用下进行 PCR扩增 ,所得产物用氯仿∶异戊醇 (2 4∶ 1)处理浓缩 ,作聚丙稀酰胺凝胶垂直板电泳 ,经硝酸银染色分析端粒酶活性。 结果 :TRAP-银染色法能准确特异地检测小鼠骨髓瘤细胞 (SP2 / 0 )的端粒酶活性 ,灵敏度可达 1× 10 2个细胞。端粒酶阳性率在 2 3例各种恶性肿瘤组织中为 86 .9% (2 0 / 2 3) ,而在 19例炎性包块与良性增生组织为 5 .3% (1/ 19) ,5例正常组织中未发现有端粒酶活性。 结论 :TRAP-银染色法简便快速、具有较好的测定敏感度与重复性 ,对临床恶性肿瘤疾病的诊断具有良好的应用前景。

三氧化二砷对人类肝癌细胞株端粒酶活性的影响

目的观察中药砒霜的主要成分——三氧化二砷(As2O3)对人类肝癌细胞株的端粒酶活性的影响,深入探讨As2O3注射液的抗肝癌作用机制。方法采用端粒重复序列扩增法(TRAP)结合聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)银染法,检测不同浓度和作用时间的As2O3对人类肝癌细胞株SMMC-7721和QGY-7703以及对人类正常肝细胞株L-02端粒酶活性的影响。结果人类正常肝细胞株L-02端粒酶活性为阴性,人肝癌细胞株SMMC-7721和QGY-7703端粒酶活性为阳性。不同浓度的As2O3作用24小时时对肝癌细胞株端粒酶活性未见明显抑制,而浓度20μg/ml和40μg/ml的As2O3作用48小时时可完全抑制其端粒酶活性,浓度为8、10、20和40μg/ml的As2O3作用72小时时可完全抑制其端粒酶活性。结论As2O3能够显著地选择性抑制人类肝癌细胞株端粒酶活性,且这种抑制作用呈现出典型的剂量相关性和时间依赖性。这可能是As2O3抗肿瘤作用的重要机制之一;同时提示As2O3注射液可能是一种优良的和具有临床实用价值的端粒酶抑制剂。

端粒酶活性测定在膀胱癌诊断中的作用

目的 :评估端粒酶活性测定对膀胱癌诊断的临床意义。 方法 :采用端粒重复序列扩增 银染色法 ,对 5 4例膀胱癌组织及尿沉渣进行端粒酶活性测定 ,并与对照组及尿脱落细胞病理学检查进行比较。 结果 :组织端粒酶活性的阳性率达 89% ;尿沉渣的阳性率达 81% ,而尿脱落细胞学检查的阳性率为 46 %。尿端粒酶活性明显高于尿脱落细胞病理学检查 ,尤其在肿瘤早期差异更为显著。 结论 :组织端粒酶活性测定的临床意义尚有待进一步研究 ;而尿沉渣端粒酶活性测定阳性率高、特异性好 ,且各级膀胱癌之间无明显差异 ,可以替代尿脱落细胞病理学检查 。

妇科恶性肿瘤腹腔液癌细胞端粒酶活性测定及其临床意义

目的:探讨妇科恶性肿瘤腹水或腹腔冲洗液中游离癌细胞端粒酶活性及其临床意义,并与细胞学进行比较。方法:收集50例妇科住院的恶性肿瘤患者腹水或腹腔冲洗液,包括27例卵巢癌,20例子宫内膜癌,2例输卵管癌和1例原发性腹膜间皮瘤。对照组采用10例良性卵巢肿瘤腹水或腹腔冲洗液。采用TRAP-银染方法进行端粒酶活性测定,同时行细胞学检查。结果:50例妇科恶性肿瘤腹腔液癌细胞端粒酶活性检测总的阳性率为74%(37/50),细胞学检查总的阳性率为46%(23/50),二者差异有统计学意义,P=0·00427。10例对照标本细胞学检查均为阴性,端粒酶活性测定2例阳性。端粒酶活性检测与细胞学诊断符合率为70%(42/60),二者联合检测恶性肿瘤腹腔液阳性率为76%(38/50)。结论:对妇科恶性肿瘤腹腔液中癌细胞的检出,端粒酶活性检测比细胞学检查更为敏感,可以作为细胞学检查的辅助方法,尤其是细胞学阴性病例。

不同食管病变组织中端粒酶活性的测定

目的 探讨不同食管组织病变中端粒酶活性检测的意义及其与临床病理因素的关系。方法 采用TRAP 银染法 ,对38例食管癌组织、15例不典型增生组织及 12例正常食管粘膜组织进行端粒酶活性检测。结果 38例食管癌组织中 ,32例端粒酶活性呈阳性 ,阳性检出率为 84.2 1% ;15例不典型增生组织中 ,9例端粒酶活性呈阳性 (其中 8例轻、中度不典型增生中 4例呈阳性 ;7例重度不典型增生中 5例呈阳性 ) ,阳性检出率为 60 % ;12例正常食管粘膜组织中 ,仅 1例端粒酶活性呈阳性 ,其阳性检出率为 8.33%。三组比较端粒酶活性检出率均存在显著性统计学差异。结论 端粒酶的激活在食管癌的发生发展中起着重要作用 ,其活性的检测有望成为预测食管癌发生及其诊断的良好指标。

支气管肺泡灌洗液中端粒酶检测临床价值研究

目的 研究支气管肺泡灌洗液 (BALF)中端粒酶检测对肺癌的诊断价值。方法 收集 63例原发性肺癌和 3 1例非肺癌肺疾病患者BALF ,采用TRAP银染法检测其端粒酶。同步行经纤维支气管镜刷片病理学、灌洗液脱落细胞学检查。结果 肺癌组端粒酶阳性检出率为 76.2 % (4 8/ 63 ) ,高于对照组的 6.5 %(2 / 3 1) (χ2 =40 .6,P <0 .0 1) ,且高于刷检的阳性率 (5 8.7% ,3 7/ 63 ) (χ2 =3 .6,P >0 .0 5 ) ,也高于BALF细胞学的阳性率 (14 .3 % ,9/ 63 ) (χ2 =46.3 ,P <0 .0 1)。中心型肺癌组端粒酶阳性率为 71.4% (3 5 / 49) ,高于BALF细胞学的阳性率 (12 .2 % ,6/ 49) (χ2 =3 5 .3 ,P <0 .0 1) ,但与刷检 61.2 % (3 0 / 49)的阳性率间无明显差异 (χ2 =1.1,P >0 .0 5 )。周围型肺癌组BALF中端粒酶阳性率为 92 .9% (13 / 14 ) ,高于刷检的阳性率 (5 0 .0 % ,7/ 14 ) ,也高于BALF细胞学的阳性率 (2 1.4% ,3 / 14 )。结论 检测肺部疾病患者BALF中的端粒酶对确诊肺癌有一定的价值。

银染端粒重复序列扩增法检测端粒酶活性及其临床应用

目的 建立银染端粒重复序列扩增法(TRAP)测定肿瘤细胞的端粒酶活性.方法:将银染与TRAP相结合,测定了人肿瘤细胞株及穿刺细胞标本的端粒酶活性.结果:人肿瘤细胞株端粒酶活性为阳性,35例病理诊断为恶性肿瘤的穿刺标本中,33例端粒酶活性阳性,12例良性病变均为阴性.结论:银染TRAP法是特异,敏感及快速的端粒酶活性的检测方法,提示该方法可成为恶性肿瘤的诊断指标之一.

端粒酶活性两种检测方法的相关性研究

〔目的〕用TRSP -银染法及TRAP -ELISA法两种方法测定端粒酶活性并对其特异性、敏感性及相关性进行研究。方法 :以人肺腺癌A5 49细胞为实验材料 ,用RNA酶、加热、倍比稀释的等因素处理A5 49细胞 ,TRAP -银染法对其特异性、敏感性进行检测 ;用 2mmol/LCINN加入A5 49细胞培养体系 ,用两种方法检测诱导分化剂CINN对肿瘤细胞前后端粒酶活性的改变 ,及对其相关性进行分析。结果 :端粒酶活性在A5 49细胞中有很强的特异性 ,且可以检出约 10 2 个肿瘤细胞的端粒酶活性 ;CINN可抑制端粒酶活性并对时间有依赖性 ;TRAP -银染法及TRAP -ELISA法两种方法作等级相关分析 ,呈正相关 (rs=1.0 0 0 ,P <0 .0 1)。结论 :两种方法测定端粒酶活性有很高的特异性及敏感性且呈正相关。

siRNA体外合成体系中GMP浓度优化及其对HeLa细胞端粒酶抑制的研究

目的在小片段干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)体外合成的反应体系中加入不同浓度的GMP,比较RNA转录效率的高低,探讨siRNA体外合成体系中GMP的最佳浓度。并以该法合成的siRNA对肿瘤细胞端粒酶基因表达进行RNA干扰来验证其干扰效应。为简便、高效、低成本体外合成制备siRNA提供优化的实验条件,为广泛开展RNA干扰实验打下基础。方法以本实验室根据端粒酶hTERT基因(genebankgi:2347128)2653-2673位的核酸序列,构建的末端带T7启动子的部分双链DNA为模板,用T7RNA聚合酶体外合成方法合成siRNA。在siRNA体外合成的反应体系中加入不同浓度的GMP,以分光光度法测定合成的RNA量来比较RNA转录效率的高低;从而确定siRNA体外合成中GMP的最佳浓度。并以磷酸钙共沉淀法将合成的siRNA转染Hela细胞。用TRAP-银染法和PCR-EIA分别检测siRNA转染后的Hela细胞端粒酶活性,以验证其干扰效应。结果在T7RNA聚合酶体外转录合成siRNA的反应体系中加入不同浓度的GMP,结果显示以GMP终浓度为5mM时的RNA转录效率为最佳。用该法合成的siRNA转染Hela细胞后端粒酶表达被抑制。结论GMP可提高T7RNA聚合酶体外转录体系的转录效率,本实验研究的反应体系中以5mMGMP终浓度为其最佳。以该优化法合成的针对端粒酶hTERT的siRNA对端粒酶的表达产生了干扰效应。

银染端粒重复序列扩增法定量检测端粒酶活性的研究

目的 :探讨运用简便、快速及无放射性污染的银染端粒重复序列扩增法 (silverstainingtelomericrepeatamplificationprotocol,SS -TRAP)定量检测端粒酶活性。方法 :运用SS -TRAP法检测了 2 93细胞、经加热处理的 2 93细胞、空白对照及典型乳腺癌组织、良性乳腺病变标本中端粒酶活性 ,其结果予以定量。结果 :该法至少能检测出10个以上 2 93细胞中端粒酶活性 ,热处理及空白对照均为阴性 ;乳癌组织标本中银染条带清晰可见 ,而良性病变中未见端粒酶阳性条带。结论 :非核素银染TRAP法可用于端粒酶活性定量检测 ,与TRAP法相比 ,同样具有较高敏感性和特异性 ,但更快速、简便。

端粒酶活性测定方法的改进与探讨

目的 判断改良TRAP银染法在端粒酶活性测定中的应用价值。方法 建立支气管灌注煤焦沥青法诱导大鼠肺癌的模型 ,用改良TRAP银染法测定大鼠肺癌、癌前及正常组织中的端粒酶活性 ,同时用A54 9细胞系进行方法学鉴定。结果 端粒酶较特异地表达于肺癌组织中 ,改良TRAP银染法有较好的特异性 ,敏感性 (10 2 个细胞 )比原方法 (10 3 个细胞 )有了进一步提高 ,较原方法简单且染色更为充分 ,便于观察结果。结论 银染法无放射性、成本较低 ,有推广使用的价值。有望通过改进取材和测定方法 ,达到早期诊断肺癌的目的。

人脑肿瘤端粒酶活性表达及其临床意义

目的研究人类脑肿瘤中端粒酶的表达情况,探讨端粒酶活性与恶性脑肿瘤发生和发展的关系。方法采用TRAP—银染法检测37例脑肿瘤组织和4例正常脑组织中的端粒酶活性。结果37例脑肿瘤组织标本中,16例有端粒酶活性的表达,阳性率为43.2%;4例正常脑组织中均未检测到端粒酶活性。结论端粒酶活性的表达与脑肿瘤的恶性程度密切相关,有可能成为恶性脑肿瘤的一个重要标志物。

端粒酶活性检测在消化道恶性肿瘤诊断中的应用价值研究

目的：探讨端粒酶活性在消化道恶性肿瘤诊断中的应用价值。方法：使用改良的TRAP-银染法。结果：检测83例消化道肿瘤标本端粒酶活性，其中食道癌31例，阳性29例；胃癌30例，阳性24例；大肠癌22例，阳性20例。结论：改良TRAP-银染法检测消化道恶性肿瘤端粒酶活性对消化遣恶性肿瘤的诊断、预后及指导治疗有重要的价值。

脑肿瘤p53蛋白和端粒酶活性表达及临床意义的研究

目的 :探讨p53基因蛋白产物和端粒酶活性在脑肿瘤中的表达情况及其相关性 ,和两者与脑肿瘤的病理类型、恶性程度之间的关系。方法 :采用免疫组化SABC法和改进的TRAP银染法对 4 8例脑肿瘤及 10例正常脑组织中p53蛋白和端粒酶活性进行检测。结果 :脑肿瘤中p53蛋白表达检测结果为70 8% (34/ 4 8) ,端粒酶活性检测结果为 77 1% (37/ 4 8) ,正常脑组织中两者均呈阴性表达。其中 2 9例脑肿瘤端粒酶活性与p53蛋白均有表达。结论 :p53和端粒酶参与脑肿瘤的发生发展 ,p53蛋白和端粒酶活性表达与脑肿瘤的病理类型、恶性程度密切相关 ,有可能成为恶性肿瘤的重要相关标志物 ,脑肿瘤中p53蛋白与端粒酶活性表达无相关性。

银染检测端粒酶活性方法的建立

目的 应用银染 TRAPEZE技术对消化系肿瘤的端粒酶活性进行初步研究 ,以探讨端粒酶活性与肿瘤的关系 ,建立一个低污染的端粒 DNA显色技术。方法 采用 TRAPEZE-银染方法检测 73例消化道恶性肿瘤组织及 1 7例良性病变组织端粒酶活性。结果采用 χ2检验进行统计学处理。结果 61 /73例消化道恶性肿瘤 ,对照组 2 /1 7例检出端粒酶活性 ;其中食道癌 1 5 /1 7例 ,肠癌 6/9例 ,胃癌 2 0 /2 5例 ,肝癌 2 0 /2 2例检出端粒酶活性 ;高分化癌 1 3/1 7例 ,中分化癌 2 8/31例 ,低分化癌 2 0 /2 5例检出端粒酶活性。 χ2 检验消化道恶性肿瘤及对照组端粒酶活性检出率有显著性差异 ( P<0 .0 0 1 ) ;不同病理组织间及不同分化程度的肿瘤组织间端粒酶活性检出率无显著性差异 ( P>0 .0 5 )。结论 端粒酶活性是消化道恶性肿瘤的一个重要标志 ;端粒酶活性在恶性肿瘤的表达无显著的组织特异性 ,可作为一广谱的肿瘤标志物 ;端粒酶活性与细胞分化程度无明显关系 ;银染技术可以得到理想的端粒 DNA图谱 ,可用于端粒酶活性的检测。

端粒酶检测对恶性胸腹水的诊断价值探讨

目的探讨端粒酶活性对良恶性腩腹水的诊断价值。方法用TRAP银染法检测120份脚腹水脱落细胞的端粒酶活性,以瑞氏染色对脱落细胞进行细胞学检杳。结果在37例细胞学阳性的恶性胸腹水中端粒酶全部表达,在48例良性胸腹水中有2例端粒酶表达,在35例细胞学阴性的可疑恶性胸腹水中有29例端粒酶表达,测定的敏感性91.6%,特异性95.8%,阳性预示值97.0%,阴性预示值为88.5%,实验有效率93.3%。结论端粒酶活性表达与恶性胸腹水呈高度相关,检测端粒酶活性是临床鉴别良恶性胸腹水的一种有效方法。