南昌霉素高产菌株的链霉素抗性基因突变诱变筛选研究

通过链霉素对南昌霉素 (Nanchangmycin)产生菌NS 41 80菌株孢子的致死浓度测定基础上 ,采用诱变剂甲基磺酸乙酯 (EMS)的不同诱变剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含链霉素 ( 1 0 μg/mL)致死浓度的高氏平板上 ,获得了大量的链霉素抗性基因 (str)突变株。然后从 3,0 0 0株链霉素抗性基因 (str)突变株中通过初筛获得比诱变出发菌株产素能力提高 2 0 %以上的菌株 2 0 2株。再进一步通过摇瓶复筛 ,获得比出发菌株产素能力分别提高 1 0 0 %、 2 0 0 %和 30 0 %高产菌株为 48株 ,7株和 1株 ,分别为复筛菌和初筛菌株的 2 3 76%和 1 60 % ;3 46%和 0 2 3% ;0 5 %和 0 0 3%。将产素能力提高 2 4 0 %以上 5个菌株连同出发菌株连续 3批次进行摇瓶发酵结果 ,5个突变株的产素能力均比出发菌株的产素能力提高 5 7%～ 96 4% ,其中突变株 80 5 3 1 65菌株摇瓶发酵单位达 6,0 0 0 μg/mL以上 ,3批次摇瓶平均发酵单位达 5 ,85 5 μg/mL。建立了南昌霉素高产菌株的链霉素抗性基因突变诱变快速高效的筛选方法。

通过获得链霉素抗性基因(str)突变株筛选梅岭霉素高产菌株

本文通过链霉素对梅岭霉素 (meilingmycin)产生菌南昌链霉菌NS 41 80菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS四种不同诱变剂量对菌株的孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含链霉素致死浓度的高氏平板上 ,获得了大量的链霉素抗性基因 (str)突变株。然后从链霉素抗性基因突变株进一步筛选到梅岭霉素高产菌株 80 5 .11 2 2 1,在摇瓶条件下 ,只产梅岭霉素不产南昌霉素 ,梅岭霉素活性效价达 15 0 0 μg/ml,比出发菌株NS 41 80的摇瓶发酵效价 85 5 μg/ml提高了 77.9%,该菌株连续传代六代进行摇瓶发酵 ,其F2 代和F3 代梅岭霉素发酵效价稳定 ,F4代至F6代随着传代数增加 ,其梅岭霉素发酵效价急速下降。通过EMS诱变剂量分别与抗药性突变率和链霉素抗性基因突变株产梅岭霉素产量的产势统计分析表明 ,菌株抗药性突变与产抗生素突变密切相关 ,产抗生素突变的EMS诱变剂量高于链霉素抗性基因突变诱变剂量。在 0 .0 3mol/L的EMS剂量作用下 ,菌株致死率为 99.43 %,而抗药性突变率为 0 .0 44 0 %,建立了梅岭霉素产生菌链霉素抗性基因突变筛选方法 ,为南昌链霉菌高产菌种选育研究作了有益的尝试 。

链霉素抗性突变理性筛选avermectin高产菌株

为提高菌株avermectin的产量 ,本文以链霉素抗性为选择压力 ,对除虫链霉菌Streptomycesavermi tilis进行紫外诱变 (2 53 7nm ,30w ,照射时间 45s) ,得到在摇瓶发酵水平比出发菌株产量提高 2 5 %以上的 4株突变株 ,其中 2株提高水平达 30 %以上。实验表明了链霉素抗性突变与产抗生素突变之间的密切联系。同时 。

梅岭霉素高产菌株链霉素抗性基因突变株筛选

通过链霉素对梅岭霉素 (Meilingmycin)产生菌南昌链霉菌NS 41 80菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS 4种不同剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,然后涂布在含链霉素致死浓度的高氏平板上 ,获得了大量的链霉素抗性基因 (str)突变株。并进一步筛选到梅岭霉素高产菌株 80 5 1 1 2 2 1 ,在摇瓶条件下 ,只产梅岭霉素不产南昌霉素 ,梅岭霉素活性单位达 1 ,52 1 μg/mL,比NS 41 80的摇瓶发酵单位 855μg/mL提高了 77 9% ,该菌株连续传 6代进行摇瓶发酵 ,其F2 代和F3 代发酵单位稳定 ,F4代至F6 代随着代数增加 ,梅岭霉素发酵单位急速下降。通过EMS诱变剂量分别与抗药性突变率和str突变株产梅岭霉素产量的产势统计分析表明 ,菌株抗药性突变与产量突变密切相关。产量突变的EMS剂量高于str突变剂量 ,从而建立了梅岭霉素产生菌链霉素抗性基因突变筛选方法。

链霉素抗性突变——纳他霉素高产菌株的选育研究

应用链霉素抗性筛选法 ,将经过紫外线诱变处理的纳他霉素生产菌———褐黄孢链霉菌 (Streptomycesgilvosporeus)ATCC1 332 6的孢子涂布在含有链霉素最小抑制浓度 (0 6μg mL)的培养基平板上 ,获得了 1 2 2株链霉素抗性突变株。其中纳他霉素产量高于出发菌株的有1 3株 ,产量阳性效率达到 1 0 6 % ,同时获得了产抗生素能力为出发菌株 1 46倍的突变株SG 56。

用抗性筛选法选育γ-亚麻酸(GLA)高产菌株

以深黄被孢霉 (Mortierellaisabellina)为出发菌株 ,经紫外线诱变处理 ,采用抗性筛选法 ,直接在梯度平板上挑取抗脂肪酸脱氢酶抑制物抑芽丹 (maleichydrazide)的菌株进行初筛 ,然后经摇瓶发酵法测定相关性能指标进行复筛 ,获得一株生产性能比出发菌株显著提高的突变株M80 ,其菌体收率达 2 5 1 0 g/L、油脂产率达 1 2 35g/L、γ 亚麻酸 (GLA)产率达771 88mg/L。

纤维素酶高产菌株的选育

该文通过利用紫外线、亚硝基胍等对里氏木霉进行诱变处理 ,采用低剂量、反复多次复合诱变处理方法 ,用“以 2 -脱氧葡萄糖作为降解产物阻遏物”的高效筛选方法 ,选育得到一株抗分解代谢阻遏的突变株 。

链霉素抗性突变—万古霉素高产菌株的选育研究

以东方拟无枝酸菌(Amycolatopsisorientalis)AO-4为出发菌株,经紫外线(15w,253.7nm,距离30cm)诱变处理,筛选链霉素抗性突变株(链霉素浓度1000μg/ml),从中获得万古霉素高产变株AmycolatopsisorientalisAO-29,其发酵效价较出发菌株提高170%。传代实验表明该变株的高产性能遗传特性较稳定。

氮离子注入选育阿维拉霉素高产菌株的研究

以提高产绿链霉菌(Streptomyces viridochromogenes)SV-1产阿维拉霉素(Avilamycin)产量为目的,采用低能氮离子注入技术,辅之以链霉素抗性筛选法进行诱变选育研究。结果表明,“马鞍”区域即注入剂量范围在3×10^(15)～5×10^(15)ions/cm^2诱变效果最佳,菌株的抗药性突变与产量突变密切相关,链霉素抗性筛选法具有可行性。在摇瓶条件下,最终获得稳定性良好,阿维拉霉素产量达到83．5mg/L,较出发菌株提高195%的突变株SVT-45。实验表明,离子注入技术是一种有潜力的微生物诱变育种新方法。

链霉素抗性突变理性筛选新霉素高产菌株

采用化学诱变剂NTG结合链霉素抗性筛选法获得新霉素高产菌株。出发菌株费氏链霉菌(Streptomyces fradiae)FS1109的孢子悬液经不同剂量的化学诱变剂NTG处理后,涂布在含链霉素最小抑制浓度(3μg/m L)的培养基平板上培养,获得大量的链霉素抗性突变株。经影印法初筛和摇瓶发酵复筛,正突变率高于负突变率,获得一株遗传性状稳定的Streptomyces fradiae Str 63菌株,其新霉素生物活性单位比出发菌株提高了50%以上,且C组分较出发菌株的低。

陆地棉黄萎病体细胞抗性突变体的筛选研究

黄萎病菌培养滤液对陆地棉珂字２０１的愈伤组织及悬浮细胞系的生长和生活力有显著的影响。低浓度的病菌培养滤液，可抑制愈伤组织和悬浮细胞的生长，生活力下降；高浓度则可使细胞死亡。珂字２０１愈伤组织经诱变，在含１０％～２０％的黄萎病菌培养滤液的培养基上悬浮培养，经多次筛选获５个抗性细胞系。经鉴定，Ｍ２１０１０１５、Ｍ１１０１０１０１０和Ｍ１２０１０三个细胞系在１０％病菌培养滤液培养基上的存活率，由珂字２０１的３４．８５％提高到８１．２５％、８５．００％和８０．００％，且高于耐病品种爱ＳＪ—１（６３．５２％）和ＳＪ—５（５６．６７％）；它们的原生质体对病菌培养滤液的敏感性降低。抗性细胞系植株再生研究表明，其胚胎发生能力均比对照下降，畸胚、畸苗增多。Ｎ１１０１０的再生植株，经鉴定，对黄萎病菌培养滤液的反应是发病时间推迟，萎蔫程度明显减轻，表现一定的抗性。

氮离子注入玫瑰孢链霉菌选育达托霉素高产菌株的研究

通过离子注入技术对达托霉素产生菌玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus)进行诱变选育,使用N^+作为离子源,初步探讨N^+注入对达托霉素生产菌所产生的生物学效应。通过链霉素抗性筛选法获得多株遗传稳定性较好的高产突变株,其中突变株N3-36发酵单位比出发菌株提高了26%。

利用病原真菌毒素离体筛选茄子抗黄萎病突变体的研究

以茄子黄萎病菌毒素为选择剂,结合组织培养技术,离体筛选茄子抗黄萎病突变体,开拓一条体细胞抗病育种的新途径。结果表明,以茎段为外植体,在MS+IAA 1 mg/kg+NAA 1 mg/kg+KT 0.2 mg/kg培养基上愈伤组织诱导率最高,下胚轴次之,子叶最差;15%的毒素浓度(v/v)可以作为突变体的筛选压力;逐步提高毒素浓度能够在一定程度上提高愈伤组织对毒素的抗性。

拟南芥抗旱突变体的筛选和鉴定

文章采用不同浓度的甘露醇模拟干旱胁迫,以发芽率为筛选指标在拟南芥突变体库中筛选抗旱突变体,筛选出2株候选突变体,最终得到1株稳定突变体vem1,通过表型和生理生化鉴定,确定为抗旱突变体。该研究为抗旱基因克隆及功能分析奠定基础,对于揭示植物抗旱的分子机理具有重要的理论意义。

小麦抗赤霉病突变体的选育及RAPD分子验证

利用辐射诱变、组织培养和细胞筛选相结合的方法选育出了抗赤霉病突变体９２ｋ８０９。该突变体不仅抗赤霉病能力强，且抗性稳定，同时具有优良的农艺性状，比原亲本增产４９％。经ＲＡＰＤ技术检测，所用的１２８个引物中有１个引物（ＯＰＹ１５）在抗病突变体９２ｋ８０９和赤霉病抗原苏麦３号中得到了相同的扩增产物。初步认为该片段与赤霉病的抗性有关。

抗生素抗性筛选在微生物菌株选育中的作用

选育优良微生物菌株对微生物药物研发尤其是对微生物制药实现产业化具有至关重要的意义。抗生素抗性筛选基于微生物对抗生素产生抗性,因其实验操作简便、效果显著而在有用微生物菌株选育中得到广泛应用。在微生物药物领域抗生素抗性筛选技术主要用来筛选获取高产菌株,但近来发现微生物的抗生素抗性突变可赋予突变株新生次级产物的代谢生产能力,因此在拓展药源微生物资源领域具有潜在应用价值。本文主要综述抗生素抗性筛选在微生物菌株选育中的作用以及相关新近研究进展。

通过获得链霉素抗性基因突变株筛选小诺霉素高产菌株

通过链霉素对小诺霉素产生菌 (Micromonospora purpura) 49 1 2 #菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS 3种不同诱变剂量对菌株的孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含链霉素致死浓度的改良高氏平板上 ,获得大量的链霉素抗性基因突变株 ,然后从链霉素抗性基因突变株进一步筛选小诺霉素高产菌株 ,获得小诺霉素菌株 49 1 2 3菌株。在摇瓶条件下 ,其产小诺霉素生物活性单位比出发菌株 49 1 2 #的摇瓶发酵单位提高了 40 %以上。小诺霉素的组分比由出发菌株的C2b∶C1a的 5∶5提高到 8∶2。C2b有效组分提高了 30 %;链霉素抗性基因突变与小诺霉素发酵单位突变之间 ,小诺霉素正突变率达到 40 %,负突变率达 2 6%。

链霉素抗性筛选法在选育博来霉素A2组分高产菌株中的应用

应用链霉素抗性筛选法提高博来霉素产生菌Streptomycin verticillus SIPI 7011产博来霉素A2组分的产量,将经紫外线诱变处理过的博来霉素产生菌孢子涂布在含有链霉素最小抑制浓度(180μg/ml)的培养基平板上,获得了151株链霉素抗性突变株。其中博来霉素A2产量高于出发菌株的有19株,产量阳性效率达到12.6%,并获得一株产抗生素能力为出发菌株约1.25倍的突变株。

利用叶斑病菌粗毒素离体筛选太子参抗叶斑病突变体

为培育太子参抗叶斑病新品种,运用组织培养技术以太子参叶斑病粗毒素为选择压力进行胁迫培养,采用逐步正筛选法离体筛选太子参抗叶斑病突变体。结果表明,太子参叶斑病粗毒素对愈伤组织的诱导、增殖、不定芽分化有明显的抑制作用,逐步提高毒素浓度能够在一定程度上提高愈伤组织对毒素的抗性。25%的毒素可以作为愈伤组织突变体的筛选压力,愈伤组织存活率达15.5%;将粗毒素浓度适当降低至10%～20%有利于不定芽的分化,分化率达54%～40%;60%～70%的毒素可以作为苗期抗毒素突变体的筛选压力,小苗存活率为8.3%。获得了44株高抗性植株,其对毒素的抗性显著高于对照。

运用致病毒素筛选抗稻曲病突变体的研究

通过4个品种水稻愈伤组织的诱导、继代与分化,研究了稻曲病病原菌粗毒素为选择压力进行抗稻曲病突变体的筛选的可行性。结果表明,供试的水稻各品种在细胞水平的抗性与田间的抗性相一致,因而可以以制备的稻曲病菌粗毒素为选择压力进行抗病突变体的筛选。对得到的抗性愈伤组织的抗性稳定性进行了鉴定。结果表明,继代后愈伤组织的抗性仍得到了保持并得到了分化植株。这说明毒素筛选体系是目前最成熟的一种方法。