Usher综合征Ⅱ型患儿临床表型及USH2A基因突变分析

目的探讨Usher综合征Ⅱ型患儿USH2A基因的变异类型和临床表型,明确其致病原因,为临床诊断提供参考依据。方法回顾性分析2022年6月至2023年6月在宁波大学附属妇女儿童医院确诊的3例Usher综合征Ⅱ型患儿的临床资料,采集患儿及其父母的外周血样,应用全外显子组测序技术对患儿进行检测,并用Sanger测序技术对疑似致病变异及患儿父母进行位点验证。结果3例患儿均存在双耳轻度到中度听力损失,视力正常,未出现前庭反应。例1检出USH2A基因:c.8559-2A>G/c.1964G>C(p.C655S)复合杂合变异。例2检出USH2A基因:c.1644+4A>G/c.187C>T(p.R63*)复合杂合变异。例3检出USH2A基因:c.13877_13880del(p.Q4626Pfs*7)/c.7232A>C(p.Q2411P)复合杂合变异。例1和例2遗传自亲代,例3未接受亲代验证。根据美国医学遗传学与基因组学学会相关指南,USH2A基因c.8559-2A>G、c.187C>T(p.R63*)和c.13877_13880del(p.Q4626Pfs*7)变异评为致病性变异;USH2A基因c.1644+4A>G评为可能致病性变异;USH2A基因c.1964G>C(p.C655S)和c.7232A>C(p.Q2411P)评为临床意义未明变异。c.1964G>C(p.C655S)变异查询文献和数据库均未见报道和收录。结论USH2A基因复合杂合变异可能是3例患儿的致病原因;本研究结果不仅丰富了USH2A基因的变异谱,也为临床诊断提供参考依据。

中国人与欧美人USH2A基因突变谱不同

Usher综合征是一种常见的综合征性视网膜色素变性（RP），为常染色体隐性遗传性疾病，具有临床和遗传高度异质性。迄今已将Usher综合征的致病基因定位了12个染色体位点，确定了其中的9个致病基因。很多研究证实USH2A基因是Usher综合征的主要致病基因，USH2A基因突变还可引起单纯性RP，但国内的一些研究结果发现，中国人USH2A基因突变谱与欧美人不同。中国人RP致病的热点基因谱尚有待进一步研究。

USH2A基因变异耳聋患者临床特征分析

目的本研究对临床常见的USH2A基因变异耳聋患者的基因型及表型进行分析,为实施精准的遗传咨询和干预指导提供参考。方法对2015-2018年于解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科就诊的547例感音神经性耳聋患者进行基因检测,筛选出USH2A基因变异耳聋患者,对USH2A基因变异位点致病性及常见的USH2A基因变异图谱及特点进行分析。并对患者进行耳科学及听力学检查,分析听力损失程度和听力图类型,以及年龄与听力损失程度的相关性。结果共收集到10例USH2A基因变异耳聋患者,USH2A基因变异耳聋患者发现听力下降的中位年龄为6岁(7个月~13岁)。听力损失程度结果统计,轻度听力损失1例,中度听力损失1例,中重度听力损失6例,重度听力损失1例,极重度听力损失1例。部分患者听力损失程度随年龄进一步增加。听力损失表型结果:渐降型2例,平坦型3例,低频(125~500 Hz或125~1000 Hz)陡降,中高频(500~8000 Hz)平坦型5例。10例USH2A基因变异耳聋患者中共有22处变异,20个不同的USH2A基因变异位点,其中有10个位点为未曾被报道过的变异。其变异种类包括:3个剪切位点变异,c.5572+1G>A、c.14969-2A>G、c.15297+1G>A;3个移码突变,c.5548delT、c.62926296ATAAG>TA、c.7863delA;4个错义突变,c.T3364G、c.11279G>C、c.13876C>G、c.14225C>T。另外10个为报道过的变异,已知明确致病位点6个,分别为c.99100insT、c.187C>T、c.2797C>T、c.8559-2A>G、c.11156G>A、c.1510415105del。10例患者中2例携带USH2A c.99100insT位点,余变异位点均为1例。22处USH2A变异位点中,有3个位点位于2号外显子。结论本研究发现了中国耳聋患者较为常见的USH2A基因变异位点c.99100insT,较常见的USH2A基因变异耳聋患者听力损失程度为中重度,较常见的听力损失类型为低频陡降、中高频平坦型,为USH2A基因变异耳聋患者早期诊断及早期干预、精准的遗传咨询提供了临床证据。

一个中国Usher综合征2型家系中USH2A基因的2个新的致病突变

目的为了扩大USH2A突变的范围并进一步揭示USH2A基因在2型Usher综合征(Usher syndrome type 2, USH2)中的作用,对中国的USH2患者进行了USH2A基因突变筛选。方法从收集到的中国USH2患者及其家属的外周血中提取基因组DNA,设计特异性引物扩增USH2A基因编码区(外显子2-72)并使用Sanger测序研究等位基因并与NCBI数据库中的标准序列进行比对。使用PolyPhen-2等预测软件对筛选出来的突变的致病性进行预测。结果在1例患者中检测到2个之前未报道过的致病的杂合突变c.230dupA(Phe78Valfs*30)和c.4085C>T(p.Pro1362Leu)。结论通过全外显子测序鉴定了可能导致USH2的2个新的杂合USH2A基因致病突变。这一结果扩大了已知的USH2A基因致病突变的范围。

USH2A基因突变致非综合征性视网膜色素变性的临床表型分析

目的分析一视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,PR)家系成员的临床表型特征,确定其遗传类型,并筛选可疑致病基因。方法选取2016年3月就诊于解放军总医院眼科门诊的一山东视网膜色素变性家系,该家系3代共21名成员,其中4名患者(3女1男),17名非患者,详细询问病史、家族史,采集其中8名成员的外周血(包括4名患者,4名非患者),并对这8名成员进行眼科检查,包括裸眼视力、最佳矫正视力、眼压、裂隙灯检查、色觉、眼底检查、光学相干断层成像术、视网膜电图、视野,绘制家系图谱,对收集的临床资料进行分析,确定该家系的临床分型,并筛选可疑致病基因的突变位点。结果该家系中4名患者均有视野缺损,出现色盲,视力不同程度下降,彩色眼底像可见视盘色蜡黄,血管变细,视网膜有骨细胞样色素沉着。4名患者明确诊断为非综合征性视网膜色素变性,其中2代2名患者较3代2名患者症状出现时间更早,症状更重。结论该家系为常染色体隐性遗传的非综合征性视网膜色素变性家系,可能为USH2A基因上两个位点复合杂合突变所致。

一视网膜色素变性家系的基因检测分析

目的通过对一个三代视网膜色素变性(RP)家系进行基因检测分析,找到其致病基因。方法采用外显子捕获直接测序,检测家系成员40个RP相关基因,经与美国国立生物技术信息中心(NCBI)的SNP数据库(dbSNP)和国际人类基因组单体型图(Haplotype Map,简称HapMap)数据库进行比较,查找致病基因。结果该家系的致病基因位于USH2A基因。该基因编码区存在2个错义突变(p.Tyr1279Asn、p.Cys934Trp)。结论本研究在一个三代RP家系中发现了USH2A基因p.Tyr1279Asn、p.Cys934Trp两个新突变位点。

USH2A基因外显子13相关遗传性视网膜变性基因治疗进展

USH2A基因双等位基因致病变异可导致Usher综合征Ⅱ型和非综合征性视网膜色素变性,患者因光感受器细胞进行性丧失最终失明。USH2A基因很大,其cDNA有15,606 bp,无法使用腺相关病毒载体递送进行基因替代治疗。研究发现位于外显子13的致病变异在USH2A基因所有外显子的致病变异中占比最高,成为治疗的靶点。反义寡核苷酸、基因组编辑和RNA编辑方法对USH2A基因外显子13的干预研究,显示了潜在的治疗效果和应用前景。本文总结了USH2A基因外显子13相关的分子遗传机制、研究结果以及面临的挑战。

Usher综合征一家系的致病基因分析

目的:对一Usher综合征家系的临床特征进行分析,探索该家系的致病基因。方法:收集于我院就诊的一视网膜色素变性家系,详细询问患者病史并进行临床检查,诊断为Usher综合征,抽取家系成员静脉血4mL,提取全基因组DNA,对先证者进行靶向捕获高通量测序获得突变位点,对于筛选出的可疑突变扩展至家系全体成员进行Sanger测序验证,同时在100名正常对照者中验证。结果:患者除视网膜色素变性表现外,还存在轻至中度感音神经性耳聋,测序结果发现家系患者USH2A基因复合杂合突变c. 2310_2311insA(p. E771Rfs*8)和c. 8559-2A>G(IVS42),而在与患者有直系血缘关系的亲属中发现仅存在其中1个突变,其他家属成员和正常人中未发现该两种突变。结论:USH2A基因为该家系的致病基因,c. 8559-2A>G(IVS42)突变为已报道的热点突变,而c.2310_2311insA(p.E771Rfs*8)突变则为首次报道,本研究扩展了USH2A基因导致Usher综合征的突变谱。

常染色体隐性遗传视网膜色素变性患者致病突变基因分析

目的研究一常染色体隐性遗传视网膜色素变性家系(autosomal recessive retinitis pigmentosa,ARRP)的致病突变基因。方法选取2016年就诊于本院眼科门诊的来自山东的一视网膜色素变性家系,采用目标区域捕获高通量测序方法对先证者Ⅱ7(女,48岁)基因组DNA进行检测,锁定患者的致病基因,进一步在该家系其他研究对象中进行相关突变位点的验证,最终确定该家系患者的致病基因突变位点。结果该家系为USH2A基因上多个突变位点复合杂合突变所致,患者Ⅱ7和Ⅱ9均由USH2A上的c.4649C>A和c.970G>A两个位点组成的复合杂合突变致病,患者Ⅲ5是由USH2A上的c.4649C>A和c.8559-2A>G两个位点组成的复合杂合突变致病。结论采用目标区域捕获高通量测序技术,可以在ARRP患者中筛查致病基因,结合家系内其他成员的Sanger验证,可明确该家系患者的致病基因及突变位点。

一个Usher综合征家系USH2A基因的突变分析

目的探讨一个Usher综合征家系的致病基因突变。方法对一个疑似为Usher综合征Ⅱ型家系的所有11名成员进行全面的眼科检查和听力测试，并提取外周血基因组DNA，采用PCR和直接测序对先证者进行USH2A基因的突变筛查。以正常人和患者的基因组DNA为模版，分别构建包含USH2A基因第42外显子、第42内含子及第43外显子的野生型和突变型minigene真核表达质粒。采用脂质体法将携带minigene的质粒转染Hela细胞，通过实时定量PCR检测minigene的剪切情况。结果家系分析和临床诊断提示该家族患有常染色体隐性遗传的Usher综合征Ⅱ型。测序发现先证者的USH2A基因中存在纯合的C．8559-2A〉G突变。对其他家系成员进行测序验证发现该突变与疾病共分离。C．8559—2A〉G突变为剪切突变，可能引起第42内含子的剪切异常。Minigene结果证实该突变可导致第42内含子不能剪切，从而保留至成熟的mRNA中。结论USH2A基因C．8559—2A〉G突变是该Usher综合征Ⅱ型家系的致病原因。该突变可以导致USH2Apre-mRNA的剪切异常。

一个Usher综合征2型家系USH2A基因的突变分析

目的 鉴定1个Usher综合征2型家系USH2A基因的致病性突变,为其提供分子遗传学依据.方法 对1个Usher综合征家系2例患者与4名表型正常家系成员的USH2A基因的全部编码区及侧翼剪切位点进行PCR扩增,产物直接测序进行突变分析,同时选择100名无亲缘关系的正常对照进行检测.结果 家系中2例患者（先证者及其妹妹）均携带了USH2A基因第42外显子c.8272G＞T（p.E2758X）和第63外显子c.12376-12378 ACT＞TAA（p.T4126X）复合杂合性突变.而患者的父亲为c.12376-12378 ACT＞TAA杂合突变携带者,其母亲为c.8272G＞T杂合突变携带者,两名表型正常的家系成员未检测到突变.经检索HGMD数据库两个突变均为新突变,且与家系疾病表型共分离.100名无血缘关系的正常人中未发现该突变.结论 USH2A基因的c.8272G＞T（p.E2758X）和c.1237612378ACT＞TAA（p.T4126X）复合杂合性突变可能为该家系的致病原因,为该Usher综合征家系的病因诊断提供了分子遗传学依据.

一例Usher综合征Ⅱ型患儿USH2A基因的致病变异分析

目的分析1例Usher综合征Ⅱ型患儿听力障碍相关基因的致病性变异,为其临床诊断提供分子遗传学依据。方法采集患儿和父母外周血进行听力障碍者相关基因检测,100名无听力障碍作为正常对照。结果患儿USH2A基因存在第41内含子c.8224-1G>C和第28外显子c.5678C>G(p.Ser1893X)复合杂合变异,患儿的母亲为c.8224-1G>C杂合变异携带者,父亲为c.5678C>G杂合变异携带者。根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异分类标准与指南,USH2A基因c.8224-1G>C和c.5678C>G变异均判定为致病性变异(PVS1+PM2+PM3)。结论USH2A基因c.8224-1G>C和c.5678C>G复合杂合变异可能为该患儿的致病原因,新变异的检出扩展了USH2A基因变异谱。

耳聋患儿的TECTA基因突变分析

目的 探讨1例耳聋患儿的分子遗传病因,为家系的遗传咨询和产前诊断提供依据。 方法 提取先证者外周血基因组,用芯片法富集纯化127种耳聋相关基因,以>100×测序深度进行二代测序,通过数据库分析比对,寻找致病突变。用Sanger测序法进一步验证疑似突变,排除二代测序错配误差。 结果 先证者TECTA基因发生c.1893C>A纯合突变,该突变使TECTA蛋白翻译提前终止,丧失功能;USH2A基因存在c.13010C>T和c.12790G>A复合杂合突变,前者疑似致病突变,后者临床意义不明。家系分析证实先证者的突变均遗传自父母。 结论 TECTA基因c.1893C>A纯合突变可能是先证者耳聋的主要原因,该位点遵循常染色体隐性遗传。