外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平对妊娠期糖尿病不良妊娠结局的预测价值

目的 探究外周血单个核细胞YY1转录因子(YY1)、微小RNA(miR)-181a-5p表达水平对妊娠期糖尿病(GDM)不良妊娠结局的预测价值。方法 纳入2020年6月至2022年6月该院收治的GDM患者200例作为GDM组,选取同期产检健康孕妇100例作为对照组。采用荧光定量PCR检测外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析YY1、miR-181a-5p表达水平对GDM患者不良妊娠结局的预测价值。结果 与对照组比较,GDM组外周血单个核细胞中YY1、miR-181a-5p表达水平均下降(P<0.05),GDM组产后出血、巨大儿、新生儿低血糖的发生率均上升(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄、血糖控制不良是GDM患者妊娠不良结局的独立危险因素(P<0.05),外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平均是GDM患者妊娠不良结局的独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平单独及二者联合预测GDM患者不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)分别为0.717、0.751、0.832,其中联合预测的AUC明显高于二者单独预测(P<0.05)。结论 GDM患者外周血单个核细胞YY1、miR-181a-5p表达水平降低可增加不良妊娠结局的风险,YY1、miR-181a-5p与GDM患者不良妊娠结局的关系密切,二者均可作为GDM患者不良妊娠结局的预测因子。

YY1/GOLGA8B调控轴在肝细胞癌进展中的表达意义及潜在分子机制

目的:探讨Golgin A8家族成员B(GOLGA8B)在肝细胞癌中的临床病理学意义及潜在分子功能。方法:利用免疫组织化学染色评估GOLGA8B蛋白在肝细胞癌、非癌对照组织的相对表达水平及其区分能力。基于全球基因芯片及高通量测序数据,探究GOLGA8B的mRNA综合表达水平,鉴定肝细胞癌过表达基因和GOLGA8B共表达基因,对其交集基因进行功能注释。本研究利用染色质免疫共沉淀测序分析,预测了阴阳1转录因子(YY1)对GOLGA8B的特异性调控机制,并从组织、单细胞层面验证YY1转录因子的表达水平及与GOLGA8B的Spearman相关性。根据TIMER反卷积算法探究GOLGA8B及YY1转录因子与免疫微环境的关联。结果:GOLGA8B蛋白在肝细胞癌组织呈强阳性表达(285例肝细胞癌VS 89例非癌对照,P<0.001),对肝细胞癌具有较强区分能力(曲线下面积=0.997)。基于2151例非癌对照肝组织、3091例肝细胞癌组织、26个不同平台,GOLGA8B的过表达在mRNA层面得到验证(标准平均差=0.26,95%可信区间:0.12~0.41)。537个GOLGA8B共表达基因在表观遗传调控信号中显著富集;其中,染色质免疫共沉淀测序分析结果提示GOLGA8B受YY1转录因子正性调控。全球基因芯片、高通量测序分析结果支持YY1在肝细胞癌组织显著高表达(SMD=0.29,95%可信区间:0.14~0.45)且与GOLGA8B表达水平呈显著正相关(P<0.05)。单细胞测序结果亦证实YY1/GOLGA8B在肝细胞癌恶性上皮细胞亚群内过表达。YY1与肝细胞癌免疫微环境显著正相关。结论:YY1/GOLGA8B轴可能在肝细胞癌中发挥促癌作用。

猪转录因子YY1基因克隆、序列特征及真核表达载体构建

YY1(Yin-Yang1,YY1)作为重要的转录因子对基因表达调控起到重要的作用。本研究旨在克隆猪YY1基因CDS区序列,利用生物信息学软件分析猪YY1基因编码蛋白的特性和功能。利用免疫荧光检测YY1在猪卵泡颗粒细胞中的定位;利用同源重组构建YY1真核表达载体,通过qRT-PCR及Western Blot(WB)检测YY1过表达载体在猪原代卵泡颗粒细胞中的表达效率。本研究成功克隆了猪YY1基因全长CDS区,生物信息学分析结果表明猪YY1蛋白由411个氨基酸组成,相对分子质量为44.3 kDa,为亲水性与酸性蛋白,无跨膜结构域与信号肽,二级结构主要含有α-螺旋(16.06%)、延伸链(19.71%)、β-转角(7.54%)和无规则卷曲(56.69%),YY1主要定位于细胞核,共含39个潜在的磷酸化位点,互作蛋白有EP300、E2H2、HDAC1、HDAC2等。免疫荧光检测发现YY1主要在猪原代卵泡颗粒细胞的细胞核中表达,qPCR和Western Blot检测结果显示该真核表达载体在猪原代卵泡颗粒细胞中成功表达。本研究为进一步探究猪转录因子YY1的生物学功能及提高母猪的繁殖率提供了理论依据。

YY1对胶质瘤细胞迁移能力的影响及其分子机制

目的探讨转录因子阴阳1(YY1)对胶质瘤细胞迁移的影响及其分子机制。方法体外培养人胶质瘤细胞U251和U87,对细胞过表达或敲低YY1后,通过Transwell实验、细胞划痕实验、克隆形成实验检测过表达或敲低YY1对胶质瘤细胞U251和U87迁移的影响;通过基因转录调控数据库(GTRD)预测YY1下游靶基因,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白印迹实验检测YY1下游靶基因基质金属蛋白酶15(MMP15)mRNA及其蛋白的表达情况;利用双荧光素酶报告实验检测YY1与MMP15启动子的结合区域。通过Transwell实验、细胞划痕实验、克隆形成实验检测过表达HA-YY1的同时敲低MMP15对胶质瘤细胞U251和U87迁移的影响。结果Transwell实验结果表明,与未过表达HA-YY1的对照组相比,过表达HA-YY1组U251和U87细胞的迁移能力显著提高(t=13.300、5.847,P<0.05);划痕实验结果显示,过表达HA-YY1组U251和U87细胞的划痕间距较对照组明显变小(t=9.698、7.215,P<0.05);克隆形成实验结果显示,过表达HA-YY1组U251和U87细胞的克隆形成能力较对照组显著提高(t=5.871、5.095,P<0.05);双荧光素酶报告实验显示,YY1能够直接结合到MMP15的启动子区域,并促进MMP15的表达;而敲低MMP15可以抑制由于YY1过表达而促进的细胞迁移。结论YY1通过转录激活MMP15促进胶质瘤细胞迁移。

水牛YY1基因克隆及其shRNA片段的筛选

本试验旨在克隆水牛阴阳因子1(YY1)基因,并筛选获得可有效抑制水牛YY1基因表达的shRNA干扰片段。以水牛成纤维细胞cDNA为模板,采用RT-PCR方法,扩增水牛YY1基因CDS序列,将其连接插入到pMD18-T载体中,进行序列测序并分析。采用Xho I和EcoR I双酶切,将水牛YY1基因编码区定向克隆至pEGFP-N1载体中,构建其真核表达载体pYY1-EGFP-N1。设计2条靶向水牛YY1基因的shRNA序列并构建其慢病毒表达载体,命名为pSicoR-GFP-YY1 shRNA1/2。以pSicoR-GFP和pSieoR-GFP-1864分别为空白对照和阴性对照质粒,采用脂质体转染方法,将YY1真核表达载体分别与2条shRNA慢病毒表达载体共转染293T细胞,48h后观察绿色荧光蛋白EGFP表达情况;72h收集共转染细胞样品,采用qRT-PCR和western-blot方法分析YY1基因的表达水平。结果表明,克隆得到1248 bp的水牛YY1基因CDS序列,其与牛YY1基因的同源性达99%。构建的水牛YY1基因真核表达载体pYY1-EGFP-N1能在水牛胎儿成纤维细胞(BFF)中瞬时表达。酶切分析及序列测定结果表明,所构建的shRNA慢病毒表达载体pSieoR-GFP-YY1 shRNA1/2为阳性克隆。质粒共转染293T细胞48h后,可观察到绿色荧光蛋白EGFP的表达。qRT-PCR结果显示,设计合成的2条shRNA对水牛YY1基因的表达均有抑制效果,其中YY1 shRNA2的抑制效果(93.64%)显著高于YY1 shRNA1(50.77%)(P<0.05),Western-blot分析结果显示,2条shRNA对YY1蛋白表达均有抑制效果。以上结果说明克隆得到水牛YY1基因编码区序列,并获得2条有效抑制其表达的shRNA片段,为进一步阐明YY1基因在水牛早期胚胎发育过程中的作用奠定了基础。

YY1抑制效应的破坏可促进人乳头瘤病毒16型癌基因的转录

人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）癌基因的表达受病毒早期启动子Ｐ９７的控制。位于ＬＣＲ上ＹＹ１蛋白结合位点的破坏可明显提高Ｐ９７的活性。为了观测ＹＹ１位点破坏在全基因组范围内对病毒ｅ６／ｅ７基因转录的影响，将构建的带有ＬＣＲ特异性突变的重组ＨＰＶ１６全基因组ＤＮＡ和ＨＰＶ１６野毒株ＤＮＡ转染至培养细胞，同时组建ＨＰＶ１６Ｅ６反向序列ＲＮＡ体外转录质粒。ＲＮａｓｅ保护试验证实，突变ＨＰＶ１６ＤＮＡ在短暂转染细胞中可诱导更多量的Ｅ６特异性ｍＲＮＡ转录。这一结果提示，ＬＣＲ上ＹＹ１位点的破坏可促进ＨＰＶ１６癌基因的转录，从而使感染细胞具有更高的癌变可能性。

miR-142-5p靶向转录因子YY1调控非小细胞肺癌上皮间质转化

目的:探究miR-142-5p靶向转录因子YY1调控上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞体外转移的机制。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞系中YY1和miR-142-5p表达水平;利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-5p与YY1的结合位点;Transwell实验和划痕愈合实验分析YY1和miR-142-5p过表达对肺癌细胞迁移、侵袭的影响;Western blot与qRT-PCR检测各组细胞内EMT相关蛋白的表达变化。结果:YY1在不同肺癌细胞系中均表达上调,miR-142-5p表现为表达下调;双荧光素酶报告基因实验结果进一步验证了YY1与miR-142-5p的靶向结合相关性;抑制miR-142-5p表达水平能显著提高细胞中YY1表达,而miR-142-5p过表达能显著抑制肺癌细胞中YY1的表达水平,两者表达水平呈负相关;Transwell和划痕实验表明,YY1过表达能够促进肺癌细胞转移,而miR-142-5p过表达会抑制肺癌细胞转移;YY1过表达促进EMT相关蛋白的表达,而miR-142-5p作用相反。结论:miR-142-5p负向调控YY1作用于EMT相关分子表达,进而在体外抑制NSCLC细胞的转移。

乳腺癌组织中YY1表达与E-cadherin甲基化状态的关系

目的:探讨乳腺癌组织中YY1(Yin Yang-1,YY1)的表达与E-cadherin甲基化状态之间的关系。方法:采用免疫组织化学法检测42例乳腺癌原发病灶以及18例正常乳腺组织中YY1的表达情况,采用甲基化特异性聚合酶链反应法(MSP)进行E-cadherin基因甲基化检测。结果:乳腺癌中E-cadherin甲基化率为57.1%(24/42),显著高于正常乳腺组织的11.1%(2/18),差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌组织中阳性YY1的表达(22/42,52.3%)显著高于正常乳腺组织(2/18,16.7%),差异有统计学意义(P<0.05),YY1阳性乳腺癌组中E-cadherin甲基化者为20/22(90.9%),而YY1阴性组的乳腺癌E-cadherin甲基化者为4/16(25%),YY1与E-cadherin甲基化状态之间呈正相关(P<0.05)。结论:乳腺癌患者E-cadherin基因启动子甲基化发生率显著高于正常乳腺组织,乳腺癌组织中YY1的高表达有可能是E-cadherin甲基化失活的主要原因。

转录因子YY1促进下咽癌细胞的迁移能力

目的分析转录因子YY1对人下咽癌细胞系FaDu迁移能力的影响。方法提取下咽癌及癌旁正常组织全RNA,通过real-time PCR分析YY1表达水平差异;将转录因子YY1 siRNA转染至下咽癌FaDu细胞中,通过real-time PCR和Western blot检测转染效率;通过Transwell实验检测敲减YY1对下咽癌FaDu细胞迁移能力的影响。结果与癌旁正常组织相比,YY1在下咽癌组织中显著上调(P<0.05);YY1 siRNA能够显著降低YY1的mRNA和蛋白相对表达量(P<0.05);与对照组相比,敲减YY1后下咽癌FaDu细胞迁移能力显著降低(P<0.05)。结论YY1在下咽癌中是潜在的癌基因,并能够促进下咽癌FaDu细胞迁移的能力,参与下咽癌的转移过程。

YY1基因对J82膀胱尿路上皮癌细胞增殖侵袭能力的影响

目的观察YY1基因在不同表达水平下对J82膀胱尿路上皮癌细胞增殖侵袭能力的影响。方法以转染YY1的J82细胞设为YY1增强表达组,选用靶向YY1序列的shRNA导入J82细胞设为YY1沉默组,并设定对照组。应用Western blot法检测YY1转染效率。以MTT、Transwell实验检测各组细胞增殖和侵袭能力。结果 Western blotting结果显示增强组的YY1表达高于空白组(P=0.001),空白组YY1蛋白表达水平高于沉默组(P <0.05)。MTT实验结果显示YY1增强表达组在培养24 h、48 h和72 h后的吸光度均高于空白组和YY1沉默组(P <0.05)。24 h后空白组和YY1沉默组的吸光度无明显区别(P>0.05)。48 h和72 h后空白组吸光度明显高于YY1沉默组(P <0.05)。Transwell实验结果显示YY1沉默组的细胞计数明显小于空白组和YY1增强组(P <0.05),空白组和YY1增强组之间无明显差异(P> 0.05)。结论沉默YY1基因后可明显减弱J82膀胱尿路上皮癌细胞的增殖和侵袭能力。以YY1为靶点的RNA干扰技术有望成为针对该肿瘤的基因治疗新方法。

转录因子YY1在非小细胞肺癌中的表达研究

目的探讨转录因子YY1表达与非小细胞肺癌(non-smal-cel lung carcinoma,NSCLC )发生和发展的关系。方法应用免疫组织化学法检测45例非小细胞肺癌组织和相应癌旁组织中转录因子YY1的表达。结果转录因子YY1在非小细胞癌组织和相应癌旁组织中阳性表达率分别为73.3豫和31.1豫,差异有统计学意义(=0.001);转录因子YY1表达与非小细胞肺癌分化相关(P=0.000),与患者年龄、性别,肿瘤分型、分期和淋巴结转移无关。结论转录因子YY1与非小细胞肺癌发生和发展相关。

miR-34a通过调控YY1抑制肾癌细胞的增殖及侵袭

目的探讨miR-34a在肾癌组织中表达、miR-34a对人肾癌ACHN细胞增殖和侵袭的影响及调控机制。方法实时聚合酶链反应(PCR)检测miR-34a在20例肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将miR-34a mimics转染入肾癌ACHN细胞中,试验分空白对照组、阴性对照组、miR-34a mimics转染组。实时PCR检测转染24 h后miR-34a表达量;噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力;实时PCR和蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1表达水平。结果与癌旁组织相比,20例癌组织中miR-34a平均表达量为1.06±0.67,显著低于癌旁组织(1.62±0.83,P<0.01);转染后24 h,miR-34a mimics转染组的miR-34a表达量为157.04±13.01,较阴性对照组显著上调(P<0.01);miR-34a mimics转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期;细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01);转染miR-34a mimics后YY1基因在mRNA表达无明显变化(P>0.05),蛋白水平下调。结论 miR-34a在肾癌中低表达,可能与肾癌的发生有关;miR-34a调控YY1的表达可能是抑制肾癌细胞生物活性的重要机制之一。

芍药苷抑制NF-κB/YY1信号通路改善TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞炎症反应的实验研究

目的探讨芍药苷抑制核因子-κB(NF-κB)/YY1信号通路改善肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症反应的机制。方法体外培养HUVECs,采用TNF-α(20 ng/mL)诱导的HUVECs炎症损伤模型,给予不同剂量的芍药苷(80μmol/L和160μmol/L)干预,采用细胞毒性活性检测试剂盒(CCK-8)检测各组细胞的活力;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测各组细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的含量;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞NF-κB和YY1基因表达;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测各组细胞NF-κB、YY1和环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达。结果TNF-α可诱导HUVECs活力下降,提高炎性因子IL-6、IL-8的表达,促进炎症介质COX-2的活化,激活NF-κB/YY1信号通路;不同剂量的芍药苷能改善HUVECs的活力,降低炎性因子IL-6、IL-8和炎症介质COX-2的表达,抑制炎症信号通路NF-κB/YY1的活化。结论芍药苷通过抑制NF-κB/YY1信号通路改善内皮细胞的炎症反应,发挥抗动脉粥样硬化的作用。

转录因子Yin Yang1(YY1)在食管癌中的表达及其对食管癌细胞功能的影响

目的:探讨转录因子Yin Yang 1(YY1)在正常食管组织和食管鳞癌组织中的表达及其在食管癌发生发展中的作用。方法:免疫组化染色检测15例正常食管组织,39例食管癌旁组织和88例食管癌组织样品中YY1蛋白表达水平;噻唑蓝(MTT)和克隆实验检测食管鳞癌细胞(TE-1细胞)增殖和生长变化;蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1和p21表达水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测TE-1细胞迁移、侵袭能力的变化。结果:与正常食管组织和食管癌旁组织相比,YY1蛋白在食管鳞癌组织样品中的表达显著提高。此外,转染了YY1过表达载体后明显抑制TE-1细胞生长,而干扰YY1表达则可促进细胞的生长;同时伴随着YY1靶基因p21(也称p21WAF1/Cip1)的变化。TE-1细胞转染YY1过表达载体后,细胞的侵袭、迁移能力增强。结论:食管鳞癌组织中YY1表达显著上调,YY1可调节细胞的生长和转移侵袭能力。因此,YY1有望成为食管癌诊断和发展的分子标志物,也有可能是食管癌基因治疗的一个潜在靶点。

YY1在胰岛素瘤中的表达及意义

目的探讨YY1在良、恶性胰岛素瘤组织中的表达情况及意义。方法收集2000~2014年南方医院19例胰腺神经内分泌肿瘤组织蜡块,利用免疫组化法检测19例标本中YY1的蛋白表达水平。结果 YY1在良恶性胰岛素瘤中组织中都有表达,恶性胰岛素瘤组织中YY1表达强度高于良性胰岛素瘤组织（P=0.042）,YY1表达强度与胰岛素瘤的良恶性质存在正相关关系（P=0.037）,YY1表达强度高的胰岛素瘤更具恶性潜能。结论 YY1的高表达强度与胰岛素瘤发生发展有一定关系,YY1有望成为检测胰岛素瘤恶性转化的新肿瘤标志物。

YY1在胃癌组织中的表达及其对SGC-7901细胞株增殖和凋亡的影响

目的:检测YY1在胃癌组织中的表达情况,探讨YY1对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡的影响以及可能的机制。方法:利用定量PCR和免疫组织化学分别检测标本中YY1的mRNA和蛋白表达水平。利用慢病毒表达载体系统在胃癌细胞株SGC-7901中上调YY1,运用CCK-8、流式细胞术、平板克隆实验检测YY1对细胞的增殖、凋亡以及克隆形成能力的影响。结果:胃癌组织中YY1的mRNA和蛋白表达水平明显低于癌旁组织。与空载对照组(SGC-7901-Empty Vector,SGC-7901-EV)和与正常对照组(SGC-7901)相比,过表达YY1组细胞(SGC-7901-YY1)的增殖和平板克隆形成能力明显减弱,细胞凋亡增加。结论:YY1与胃癌的发生发展有一定的关系,可能起到抑癌基因的作用,YY1基因可能成为胃癌靶向治疗的新的潜在靶点。

DLL4基因对白血病细胞株K562细胞中YY1和c-Myc蛋白表达及细胞增殖的影响

本研究旨在探讨Notch的配体DLL4基因在白血病细胞株K562中对转录因子YY1和原癌基因c-Myc蛋白表达及细胞生长的影响。实验分正常对照组、阴性对照组(转染质粒pBudCE4.1)和实验组(转染质粒pBudCE4.1-DLL4)。转染后48小时,用免疫印迹法和免疫细胞化学法检测外源性DLL4瞬时转染表达水平及YY1和c-Myc蛋白的表达水平;用细胞计数试剂盒-8法检测各组细胞的增殖;转染后48小时用流式细胞仪检测各组细胞的周期分布和凋亡。结果表明,在各组K562细胞中均检测到DLL4、YY1和c-Myc蛋白的表达,实验组的DLL4、YY1和c-Myc蛋白表达量比两个对照组显著增多(p<0.05);实验组K562细胞的生长速度明显低于对照组;实验组较对照组G0/G1期细胞增多(p<0.001),凋亡率增加(p<0.001)。结论:DLL4基因能增加细胞转录因子YY1和原癌基因c-Myc蛋白的表达,诱导细胞生长速度减慢、细胞周期停滞于G0/G1期,并能增高凋亡率增加。

胰岛素瘤的全外显子组测序显示转录因子YY1中频繁出现T372R基因突变

功能性胰腺内分泌肿瘤（pancreatic neuroendocrine tumors,PNETs）主要以胰岛素瘤为表现,其不依靠血糖变化分泌胰岛导致低血糖。但散发性胰岛素瘤中主要的基因改变仍然未知。本组对10组散发的胰岛素瘤进行全外显子组测序发现转录因子YY1中经常有体细胞T372R基因突变。进一步筛选另外103例胰岛素瘤显示这个热点突变基因约占所有筛选肿瘤的30%（34/113）。

转录因子YY1对垂体瘤侵袭性的影响

目的观察转录因子YY1(Yin-Yang 1)在垂体腺瘤中的表达情况,并进一步分析沉默YY1对大鼠垂体瘤GH3细胞侵袭性的影响。方法运用免疫组化技术观察YY1在不同类型垂体腺瘤组织中的表达情况。Western blot实验检测siRNA沉默大鼠垂体瘤GH3细胞中的基因YY1后,YY1蛋白及基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的表达水平。采用Transwell chamber细胞侵袭实验观察沉默YY1对GH3细胞侵袭的影响。结果 YY1在侵袭性垂体腺瘤中表达升高;沉默YY1后,GH3细胞侵袭能力下降35.7%(P<0.05),MMP-2、MMP-9蛋白表达量下降(P<0.05)。结论转录因子YY1在侵袭性垂体腺瘤中的表达升高,并通过上调MMP-2、MMP-9的表达来促进GH3细胞侵袭性。