真武汤对大部分肾切除所致尿毒症心肌病小鼠心脏的保护作用

目的探讨真武汤对小鼠尿毒症心肌病心脏保护作用及其机制。方法大部分肾切除术制作尿毒症心肌病模型。C57BL/6小鼠随机分3组:假手术组、模型组和真武汤组。真武汤组小鼠术后予真武汤灌胃,假手术组和模型组小鼠术后予等量蒸馏水灌胃。心脏彩超、心脏组织HE染色及血生化分别观察尿毒症心肌病小鼠心脏功能、结构及肾功能变化,Western blotting检测心脏组织p-AMPK及p-mTOR的表达情况。结果模型组小鼠较假手术组体质量明显下降(P<0.05),心脏质量及心脏指数明显增加(P<0.05),心脏舒张期及收缩期左室后壁厚度增大(P<0.05),HE染色示心肌细胞肥大,血尿素氮、肌酐显著升高(P<0.05)。真武汤组小鼠与模型组相比心脏质量及心脏指数减小(P<0.05),心脏舒张期及收缩期左室后壁厚度减小(P<0.05),病理变化减轻。模型组小鼠与假手术组相比p-AMPK表达明显降低,p-mTOR表达明显升高(P<0.05);真武汤组小鼠与模型组相比pAMPK表达明显升高,p-mTOR表达明显降低(P<0.05)。结论真武汤抑制尿毒症心肌病小鼠心肌肥厚,此效应可能是通过AMPK-mTOR信号通路实现。

真武汤联合紫杉醇腹腔热灌注化疗治疗中晚期上皮性卵巢癌合并腹腔积液的临床研究

目的:观察真武汤联合紫杉醇腹腔热灌注化疗治疗中晚期上皮性卵巢癌合并腹腔积液的临床疗效。方法:将60例上皮性卵巢癌合并腹腔积液患者随机分为治疗组和对照组各30例,均治疗3个疗程后,对比两组患者治疗后肿瘤的控制情况、腹腔积液的改善情况、生活质量及不良反应。结果:治疗后肿瘤控制有效率治疗组(76.7%)与对照组(70.0%)比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗组患者治疗后生活质量明显改善,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后治疗组腹腔积液控制率为86.7%,对照组的腹腔积液控制率为53.3%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:真武汤联合紫杉醇腹腔热灌注化疗治疗上皮性卵巢癌合并腹腔积液有较好疗效,可控制卵巢肿瘤、腹腔积液,改善患者生活质量,其安全性好。

真武汤颗粒成型工艺研究

目的 :探讨真武汤颗粒的成型工艺。方法 :以颗粒的吸湿性、成型性、流动性和溶化性为考察指标,优选合适的辅料种类及配比,并测定最佳成型工艺所制颗粒的临界相对湿度。结果:药粉-可溶性淀粉-糊精的比例为8∶3∶1时,颗粒的成型性高,流动性和溶化性好,吸湿性小,颗粒的临界相对湿度为66%。结论 :本研究为真武汤颗粒成型工艺提供了可靠依据。

经方治疗慢性心衰概况

经方治疗心衰研究颇多,真武汤可强心利尿,对脾肾阳虚、水泛凌心型疗效显著;可提高左室射血分数和6min步行距离、改善临床症状、延缓心室重塑降低心肌细胞凋亡、调节神经内分泌系统、减少洋地黄、利尿、扩血管药用量。苓桂术甘汤能改善心功能及症状、抑制神经内分泌及细胞因子、影响血流动力学,不同剂量(小-中-大)有差别。四逆汤可改善心功能、保护心肌细胞、调节神经细胞因子、双向调节作用。炙甘草汤可改善心功能及症状、调节细胞因子。五苓散有改善心功能,减轻体重,调节细胞因子,减少洋地黄等用药(剂量、时间、毒副作用),双相调节尿液。

芪加真武汤对免疫抑制小鼠血清溶血素的影响

目的:研究芪加真武汤颗粒对小鼠免疫的影响,旨在探讨其作用机制,为临床使用提供实验依据。方法:将实验动物(昆明种小鼠)随机分为四组,每组10只。第一组实验组:环磷酰胺+芪加真武汤;第二组阳性对照组:环磷酰胺+胸腺肽;第三组病理模型组:环磷酰胺+生理盐水;第四组正常对照组:生理盐水+生理盐水。实验组小鼠用芪加真武汤灌胃4周。第3周末1、2、3组用环磷酰胺150mg/kg一次性腹腔注射,造成免疫抑制模型。第4周处死动物。用分光光度法检测血清溶血素水平。结果:与正常对照组比较,病理模型组血清溶血素降低(P<0.05)。与病理模型组比较,实验组显著提高血清溶血素水平(P<0.05)。与阳性对照组比较实验组血清溶血素水平差异显著(P<0.01)。结论:芪加真武汤颗粒能增强免疫抑制小鼠血清溶血素分泌。从体液免疫方法证实,芪加真武汤颗粒能显著提高机体免疫,具有开发前景。

HPLC法同时测定真武汤中11种活性成分的含量

目的:建立同时测定真武汤中5-羟甲基糠醛、(+)-儿茶素、芍药苷、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰芍药苷、6-姜酚、8-姜酚、白术内酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Phenomenex Kinetex C18,流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为285 nm(4.4~7 min,5-羟甲基糠醛)、203 nm[7~12 min,(+)-儿茶素]、233 nm(12~50 min,芍药苷、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰芍药苷)、200 nm(50~62.3 min,6-姜酚、8-姜酚;62.9~90 min,6-姜烯酚、茯苓酸)、222 nm(62.3~62.9 min,白术内酯Ⅱ),柱温为35℃,进样量为20μL。结果:5-羟甲基糠醛、(+)-儿茶素、芍药苷、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰芍药苷、6-姜酚、8-姜酚、白术内酯Ⅱ、6-姜烯酚、茯苓酸检测质量浓度线性范围分别为0.62~12.47μg/mL(r=0.999 6)、2.36~47.25μg/mL(r=0.999 7)、200.80~4 016μg/mL(r=0.999 7)、4.45~89.04μg/mL(r=0.999 6)、4.28~85.54μg/mL(r=0.999 5)、5.16~103.13μg/mL(r=0.999 9)、5.53~110.66μg/mL(r=0.999 9)、0.84~16.89μg/mL(r=0.999 8)、0.60~12.04μg/mL(r=0.999 9)、0.53~10.62μg/mL(r=0.999 5)、1.04~20.78μg/mL(r=0.999 7);定量限分别为0.155、0.590、1.210、1.112、1.070、0.258、0.553、0.421、0.153、0.354、0.431μg/mL,检测限分别为0.047、0.179、0.134、0.337、0.324、0.078、0.168、0.128、0.046、0.107、0.131μg/mL,精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3%;加样回收率分别为96.06%~103.01%(RSD=2.64%,n=6)、95.11%~101.57%(RSD=2.58%,n=6)、97.22%~102.11%(RSD=1.93%,n=6)、96.43%~102.78%(RSD=2.35%,n=6)、96.42%~101.43%(RSD=2.15%,n=6)、96.86%~102.05%(RSD=2.10%,n=6)、95.32%~100.55%(RSD=1.87%,n=6)、97.04%~103.25%(RSD=2.22%,n=6)、96.78%~103.22%(RSD=2.62%,n=6)、97.04%~103.14%(RSD=2.28%,n=6)、97.08%~103.51%(RSD=2.94%,n=6)。结论:该方法准确、专属性好,可用于同时测定真武汤中11种活性成分的含量。

真武汤颗粒剂制备工艺研究

目的:优选真武汤水提液最佳提取工艺及颗粒剂制备方法,为真武汤颗粒剂的开发利用提供参考。方法:采用加热回流提取方法,通过正交试验设计考察液料比、提取时间及提取次数,以芍药苷含量、苯甲酰新乌头原碱含量和出膏率为考察指标,确定真武汤最优水提取工艺。另外选用粒度合格率、水分、干燥失重、溶化性和休止角等为考察指标,通过单因素试验优选颗粒制备中的辅料配比。结果:芍药苷和苯甲酰新乌头原碱分别在5.45~32.70μg(r=0.999 6)和3.24~16.80μg(r=0.999 7)浓度范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.62%(RSD=1.34%,n=6)和101.72%(RSD=1.74%,n=6)。最优提取工艺为:液料比1∶12,回流提取2次,每次2 h。颗粒最佳成型工艺为:辅料采用糊精与可溶性淀粉的混合物,最佳配比1∶3,所制颗粒的粒度合格率、水分、干燥失重、溶化性和休止角分别为94.12%、4.87%、0.93%、89.23%、36.18°。结论:优化的真武汤回流提取工艺稳定、可行,制备的颗粒成型性和溶化性较好。

真武汤联合生脉注射液治疗慢性充血性心力衰竭50例

目的评价真武汤联合生脉注射液治疗慢性充血性心力衰竭(CHF)的临床疗效。方法 100例CHF患者随机分成观察组和对照组。对照组采用生脉注射液治疗;观察组采用真武汤联合生脉注射液治疗。结果观察组总有效率为88.00%优于对照组68.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论真武汤联合生脉注射液治疗CHF疗效可靠。

真武汤治疗原发性肾病综合征的临床疗效

目的：探讨真武汤治疗原发性肾病综合征的临床疗效。方法选取于2013年8月～2015年2月在我院接受治疗的原发性肾病综合征患者共110例，分为观察组和对照组。两组患者均进行一般对症治疗。给予对照组激素治疗。在对照组基础上，给予观察组真武汤治疗，观察临床效果。结果观察组总有效率为92.7%，高于对照组，组间比较差异具有统计学意义（P ＜0.05）。结论采用真武汤治疗原发性肾病综合征提升了临床治疗效果。

真武汤联合参附针治疗慢性心功能不全60例

目的观察真武汤联合参附针治疗慢性心功能不全的临床疗效。方法 120例患者分为两组,治疗组60例,用真武汤联合参附针治疗;对照组60例,用地高辛片治疗,采用卡方检验方法比较,观察治疗前后临床症状的改善情况。结果治疗组临床症状改善的总有效率为83.33%,对照组的总有效率为86.67%,差异无显著性意义(P>0.05)。结论真武汤联合参附针是治疗慢性心功能不全的有效治疗方法。

基于Nrf2/HO-1/GPX4信号通路探讨真武汤改善脾肾阳虚型糖尿病肾病小鼠的作用机制

目的:基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路探讨真武汤对脾肾阳虚型糖尿病肾病(DKD)小鼠肾脏氧化损伤的干预作用及机制。方法:将25只7周龄SPF级雄性db/m小鼠及95只7周龄SPF级雄性db/db小鼠适应性喂养1周。db/m小鼠作为空白组,其余小鼠进行运用灌服生大黄溶液和氢化可的松制备脾肾阳虚型DKD模型,成模后随机分为模型组、厄贝沙坦组(25 mg·kg^(-1))、真武汤高、中、低剂量(33.8、16.9、8.45 g·kg^(-1))组,每组15只,连续灌胃8周。观察小鼠生存状态和计算中医证候评分并测定脾肾阳虚相关、空腹血糖(FBG)及肾功能相关指标;苏木素-伊红(HE)染色观察各组肾脏组织病理学改变;生化试剂盒法测定肾组织中氧化应激相关指标;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠肾组织中Nrf2、HO-1、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)、GPX4 m RNA和蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠中医证候积分明显升高(P<0.05),雌二醇(E2)含量明显升高(P<0.05),睾酮(T)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)含量明显降低(P<0.05);FBG明显升高(P<0.05),肾功能明显下降(P<0.05);肾脏病理显示肾小球肥大,肾小球系膜和基底增厚明显,肾组织中过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平均明显降低(P<0.05),丙二醛(MDA)的含量明显升高(P<0.05),肾组织中Nrf2、HO-1、GCLC、GPX4 m RNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.05);与模型组比较,真武汤高、中剂量组中医证候积分明显降低、E2含量明显降低(P<0.05),T、T3、T4含量明显升高(P<0.05);肾功能明显改善(P<0.05),肾脏病理明显改善,真武汤高、中剂量组小鼠肾组织中CAT、T-AOC、GSH水平均明显升高(P<0.05),MDA的含量明显下降(P<0.05),各给药组小鼠肾组织中Nrf2、HO-1、GCLC、GPX4 m RNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:真武汤改善脾肾阳虚型db/db小鼠一般状态、肾功能,降低氧化损伤和减轻肾脏病理改变,其作用机制可能与调节Nrf2/HO-1/GPX4通路有关。

古代经典名方真武汤的历史溯源与考证

张仲景之真武汤为温阳利水的经典名方,由附子、茯苓、白术、白芍、生姜5味药物组成。后世医家对其进行了较为详细的记载与运用,使真武汤不断被传承并发扬。该文采用文献计量学方法,将记载真武汤方书进行系统梳理,对其历史沿革、主治病证、用药剂量、药物炮制、用法、药味加减变化等进行考证。研究发现,真武汤在明清时期应用最为广泛,诸医家对于真武汤的主治病证多继承仲景之说,个别医家将其用于治疗白喉及一切水证;部分医家对真武汤药味进行加减变化,用以治疗发斑、休息痢、黄疸等。现代临床多用于治疗循环系统、呼吸系统、泌尿系统等疾病。其药物炮制较为明确,建议附子需炮制、去皮,茯苓、白术、芍药、生姜生用;虽用药剂量不尽相同,但大都与《伤寒论》中剂量一致。根据文献考证建议临床该方参考剂量为:茯苓、芍药、生姜各41.25 g,白术27.5 g,附子15 g。用法为以水1 600 mL,煎煮成600 mL,去渣,每次温服140 mL,每日3次。通过对记载真武汤的文献挖掘整理,以期对真武汤的临床应用及成方制剂提供理论参考。

基于OS/NF-κB/炎症因子探讨加味真武汤延缓慢性肾功能衰竭并发心脏病变进展的作用机制

目的:通过观察加味真武汤对腺嘌呤诱导慢性肾功能衰竭大鼠血清及肾组织中超氧化物歧化酶1(SOD1)、丙二醛(MDA)、晚期氧化蛋白产物(AOPP)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、磷酸化核转录因子-κB p65(p-p65)、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达及心肾组织病理的影响,探讨加味真武汤延缓慢性肾功能衰竭并发心脏病变进展的可能作用机制。方法:将50只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组10只、造模组40只,将大鼠适应性饲养1周后采用腺嘌呤150 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃的方法建立实验性慢性肾功能衰竭并发心血管病变大鼠模型。造模完成后随机选取正常组和造模组大鼠各3只取材,检测造模是否成功。造模成功后,将造模组大鼠按照随机数字表法分成模型组、加味真武汤低剂量组、加味真武汤中剂量组、加味真武汤高剂量组、盐酸贝那普利组各6只,进行药物灌胃,每日1次,治疗4周。于实验第17周末检测24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)、尿肌酐(UCr),第17周末各组大鼠麻醉后取材,腹主动脉取血后离心取上清检测甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血钙、血钾、血磷、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清AOPP、IL-1β、TNF-α表达水平变化;苏木素-伊红(HE)染色法/马松染色(Masson)法观察心肾组织病理改变;透射电镜观察近端肾小管超微结构变化;免疫组织化学(IHC)法观察肾组织SOD1、MDA、AOPP、NF-κB p65、p-p65、IL-1β、TNF-α表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)观察肾组织SOD1、NF-κB p65、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肾组织SOD1、MDA、NF-κB p65、p-p65表达水平。结果:(1)与正常组比较,模型组实验大鼠24 h-UTP显著增高(P<0.01),UCr显著降低(P<0.01);模型组实验大鼠Cr、BUN、TG、TC、血磷、血钾显著增高(P<0.01);模型组实验大鼠血清中AOPP、IL-1β、TNF-α含量显著升高(P<0.01);模型组实验大鼠肾小球球囊间隙明显增宽,肾间质明显增宽伴有大量炎细胞浸润,大量肾小管官腔有褐色沉淀物阻塞,肾间质有大量胶原纤维沉积,肾脏血管周围、肾小囊壁层囊壁外、肾小球基底膜和肾小管基底膜胶原纤维明显增多,心脏心肌纤维明显增粗,血管周围有少量炎细胞浸润,心脏血管周围和心肌细胞间有大量胶原纤维。模型组实验大鼠近端肾小管上皮细胞内可见高密度菱形针状结晶,溶酶体增多,线粒体增生、线粒体嵴和线粒体外膜致密变;模型组实验大鼠左心室舒张期心室壁厚度和收缩期心室壁厚度均升高;模型组实验大鼠MDA、AOPP、NF-κB p65、IL-1β、TNF-α在近端肾小管上皮细胞表达明显增强(P<0.01),p-p65在近端肾小管上皮细胞的细胞核表达明显增加(P<0.01),SOD1在近端肾小管上皮细胞表达显著减弱(P<0.01);模型组实验大鼠肾组织NF-κB p65、IL-1β、TNF-αmRNA表达显著增强(P<0.01),SOD1 mRNA表达显著减弱(P<0.01);模型组实验大鼠肾组织SOD1蛋白表达显著下降(P<0.01);MDA、NF-κB p65、p-p65蛋白表达显著升高(P<0.01)。(2)与模型组比较,加味真武汤干预后,24 h-UTP显著降低(P<0.01),UCr显著升高(P<0.01);Cr、BUN、TG、TC、血磷、血钾显著降低(P<0.01);血清AOPP、IL-1β、TNF-α含量显著下降(P<0.01);心肾病理损害减轻;近端肾小管上皮细胞线粒体损伤减轻;MDA、AOPP、NF-κB p65、IL-1β、TNF-α在近端肾小管上皮细胞表达显著减弱(P<0.01),p-p65在近端肾小管上皮细胞的细胞核表达显著减弱(P<0.01),SOD1在近端肾小管上皮细胞表达显著增强(P<0.01);肾组织NF-κB p65、IL-1β、TNF-αmRNA表达显著减少(P<0.01),SOD1 mRNA表达显著升高(P<0.01);肾组织SOD1蛋白表达显著升高(P<0.01),MDA、NF-κB p65、p-p65蛋白表达显著降低(P<0.01);中药组表现出明显的量效趋势。结论:加味真武汤可能通过减轻近端肾小管上皮细胞氧化应激和线粒体损伤,从而减少氧化应激产物产生和抑制NF-κB信号通路激活引起的炎症因子释放,减轻对心肾组织及功能的损伤,实现延缓慢性肾功能衰竭并发心脏病变进展的目的,且中药组具有量效趋势。

基于网络药理学、分子对接和实验验证探讨加味真武汤延缓慢性肾功能衰竭进展的作用机制

目的:基于网络药理学初步预测加味真武汤治疗慢性肾功能衰竭(CRF)的活性成分、作用靶点及信号通路,通过分子对接和动物实验验证探讨其延缓疾病进展的可能作用机制。方法:通过本草组鉴(HERB)数据库获取加味真武汤的有效成分及靶点;通过基因数据库(GeneCards)获取CRF疾病靶点;通过Venny 2.1软件获得交集靶点基因,结合STRING数据库绘制蛋白质-蛋白质相互作用网络,并通过Cytoscape 3.9.1软件筛选加味真武汤治疗CRF的核心作用靶点;使用Metascape数据库对交集基因进行基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。选取关键作用靶点与药物活性成分通过AutoDockTools 1.5.6软件进行分子对接验证;采用腺嘌呤灌胃12周的方法建立实验性CRF大鼠模型,给予加味真武汤和盐酸贝那普利干预4周。给药结束后处死大鼠,通过免疫组织化学(IHC)、免疫荧光(IF)、实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测大鼠肾组织中脯氨酸羟化酶1(PHD1)、脯氨酸羟化酶2(PHD2)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平进行动物实验验证。结果:通过HERB数据库获得加味真武汤药物靶点基因426个;通过GeneCards获取CRF相关靶点基因2698个;药物疾病交集基因154个;核心靶点8个,其中白蛋白(ALB)、蛋白激酶B1(Akt1)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-6(IL-6)、胰岛素(INS)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、肿瘤蛋白p53(TP53)、白细胞介素-1β(IL-1β)等靶点可能与加味真武汤治疗CRF密切相关;KEGG富集分析预测加味真武汤治疗CRF的机制主要涉及脂质与动脉粥样硬化、HIF-1信号通路、细胞凋亡、核转录因子-κB(NF-κB)信号通路等通路。分子对接结果,加味真武汤的成分与核心作用靶点中的ALB、Akt1、TNF、IL-6、INS、VEGFA、TP53、IL-1β具有较为稳定的结合活性,其可能通过影响ALB、Akt1、TNF、IL-6、INS、VEGFA、TP53、IL-1β靶点蛋白进而调控炎症反应和细胞凋亡。动物模型验证结果,加味真武汤可降低CRF大鼠肾组织中HIF-1α、α-SMA表达水平,提高PHD1、PHD2表达水平,减轻肾组织细胞缺氧损伤,减少肌成纤维细胞生成,减缓CRF大鼠疾病进展。结论:加味真武汤可能通过影响ALB、Akt1、TNF、IL-6、INS、VEGFA、TP53、IL-1β等靶点蛋白的表达及调控HIF-1等信号通路进而改善肾组织缺氧,抑制细胞转分化、细胞凋亡/焦亡、炎症反应,从而延缓CRF进展。

基于Ang Ⅱ/AT1R/NOX4信号通路探讨加味真武汤延缓慢性肾功能衰竭肾间质纤维化机制

目的:通过观察加味真武汤对腺嘌呤诱导慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠血清及肾组织中血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶4(NOX4)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)、Ⅲ型胶原蛋白(COL3A1)表达的影响,探讨加味真武汤延缓CRF肾间质纤维化的可能作用机制。方法:将50只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组10只、造模组40只,将大鼠适应性饲养1周后采用腺嘌呤150 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃的方法建立实验性CRF大鼠模型。造模完成后随机选取正常组和造模组大鼠各3只取材,检测造模是否成功。造模成功后,将造模组大鼠按照随机数字表法分成模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、盐酸贝那普利组各6只,进行药物灌胃,每日1次,治疗4周。于实验第1周末、第13周末、第17周末检测24 h尿蛋白定量(24 h-UTP),第17周各组大鼠麻醉后取材,腹主动脉取血后离心取上清检测血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清AngⅡ表达水平;苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色法观察肾组织病理改变;免疫组织化学(IHC)法观察AT1R、NOX4、TGF-β_(1)、COL1A1、COL3A1表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)观察AT1R、NOX4、TGF-β mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测AT1R、NOX4、TGF-β_(1)表达水平。结果:(1)与正常组比较,模型组实验大鼠24 h-UTP显著增高(P<0.01);模型组实验大鼠Cr、BUN含量水平显著升高(P<0.01),TP、ALB含量水平显著降低(P<0.01);模型组实验大鼠血清AngⅡ含量显著升高(P<0.01);模型组实验大鼠肾小球球囊间隙明显增宽,可见坏死肾小球,肾间质明显增宽伴有大量炎细胞浸润,大量肾小管管腔有褐色沉淀物阻塞,无规整肾小管,肾间质有大量胶原纤维沉积,肾脏血管周围、肾小囊壁层囊壁外、肾小球基底膜和肾小管基底膜胶原纤维明显增多;模型组实验大鼠AT1R、NOX4在肾小球、肾小管表达明显增强,TGF-β_(1)在肾小管表达明显增强,COL1A1、COL3A1在肾间质表达明显增强;模型组实验大鼠AT1R、TGF-β_(1)mRNA表达显著增强(P<0.01),NOX4 mRNA表达显著减弱(P<0.01);AT1R、NOX4、TGF-β_(1)蛋白表达显著增强(P<0.01)。(2)与模型组比较,加味真武汤干预后,24 h-UTP显著降低(P<0.01);Cr、BUN含量水平显著降低(P<0.01),TP、ALB含量水平显著升高(P<0.01);AngⅡ含量显著下降(P<0.01);肾脏病理损害减轻;AT1R、NOX4、TGF-β_(1)、COL1A1、COL3A1在肾小球、肾小管、肾间质达减弱;AT1R、TGF-β_(1) mRNA表达显著下降(P<0.01),NOX4 mRNA表达显著升高(P<0.01);AT1R、NOX4、TGF-β_(1)蛋白表达显著减弱(P<0.01);中药组表现出明显的量效趋势。结论:加味真武汤可能通过降低CRF大鼠血清及肾组织中AngⅡ、AT1R、NOX4、TGF-β_(1)表达,延缓肾间质纤维化进展,从而减轻肾脏病理损害,减少蛋白尿,保护肾功能,达到延缓CRF进展的目的,且中药组具有量效趋势。

基于IL-6/MMP-9/COL-Ⅳ信号通路探讨加味真武汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾间质纤维化的影响

目的:观察加味真武汤对慢性肾衰竭(CRF)大鼠白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Ⅳ型胶原蛋白(COL-Ⅳ)的调控作用,探究其治疗CRF的潜在机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为造模组40只和正常组10只,造模组大鼠连续腺嘌呤灌胃12周制备CRF模型。造模成功后将造模组按随机数字表法分为模型组、加味真武汤低剂量(7.2g·kg^(-1)·d^(-1))组、加味真武汤中剂量(14.4g·kg^(-1)·d^(-1))组、加味真武汤高剂量(28.8g·kg^(-1)·d^(-1))组、盐酸贝那普利(10 mg·kg^(-1)·d^(-1))组进行灌胃,正常组、模型组予等体积蒸馏水灌胃,持续干预4周。给药期间,定期检测各组大鼠体质量;给药结束后,检测大鼠血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白定量(24 h-UTP)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清IL-6水平;分别采用苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色观察肾组织病理形态学变化;免疫组化法(IHC)检测大鼠肾脏细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、IL-6、MMP-9、COL-Ⅳ蛋白表达结果;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠肾组织ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、MMP-9 mRNA、COL-ⅣmRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织ICAM-1、IL-6、MMP-9、COL-Ⅳ蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠SCr、BUN、24 h-UTP水平显著升高(P<0.01);血清IL-6含量显著上升(P<0.01);大鼠肾小管管腔扩张伴萎缩,小管上皮细胞坏死、肿胀、空泡变性,间质内大量炎症细胞浸润,胶原纤维沉积;肾小管间质内IL-6、ICAM-1、COL-Ⅳ呈强阳性表达,MMP-9表达减弱;模型组大鼠ICAM-1 mRNA、IL-6mRNA、COL-ⅣmRNA水平显著升高(P<0.01),MMP-9 mRNA水平显著降低(P<0.05);肾组织ICAM-1、IL-6、COL-Ⅳ蛋白表达显著升高(P<0.01),MMP-9蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,经加味真武汤治疗后,大鼠24 h-UTP、SCr、BUN水平均有大幅降低(P<0.01);血清IL-6含量显著下降(P<0.01);大鼠肾脏病损明显改善,胶原纤维沉积减少;IL-6、ICAM-1、COL-Ⅳ在肾小管、间质内表达减弱,MMP-9在肾小管间质内表达增强;大鼠ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、COL-ⅣmRNA水平显著降低(P<0.01),MMP-9 mRNA水平明显升高(P<0.05);肾脏内ICAM-1、IL-6、COL-Ⅳ蛋白表达显著下降(P<0.01),MMP-9蛋白表达显著上升(P<0.01)。结论:加味真武汤可能通过调控IL-6/MMP-9/COL-Ⅳ信号通路,进而减轻蛋白尿,改善肾功能,减轻肾脏病理损害,延缓CRF肾间质纤维化进展。

真武汤加味联合整脊手法治疗膝骨关节炎发作期寒湿痹阻证的临床观察

目的:探讨真武汤加味联合整脊手法治疗膝骨关节炎(KOA)发作期寒湿痹阻证的疗效及对关节液炎症因子的影响。方法:将148例患者根据随机按数字表法分为对照组和观察组各74例。对照组口服塞来昔布胶囊,0. 2 g/次,1次/d;整脊疗法,采用腰椎定位斜扳法和指压法进行治疗,手法隔日1次,每周3次,共12次。观察组采用真武汤加味内服,1剂/d,整脊疗法同对照组。两组疗程均为连续治疗4周。进行治疗前后西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数可视化量表(WOMAC),疼痛和肿胀程度,膝OA严重程度指数(ISOA),膝关节局部体征和寒湿痹阻证评分,生活质量采用关节炎影响评估表2(AIMS2-SF),均于治疗前后各评价1次。检测治疗前后关节液白细胞介素-1β(IL-1β),IL-17,P物质(SP),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和钙素基因相关肽(CGRP)水平。结果:观察组患者临床疗效优于对照组(Z=2. 131,P <0. 05);观察组患者WOMAC量表疼痛、僵硬和关节功能3个维度评分和WOMAC总分均低于对照组(P <0. 01);疼痛(行走痛、静息痛、压痛)和肿胀程度评分均低于对照组(P <0. 01);观察组ISOA,寒湿痹阻证和膝关节局部体征评分均低于对照组(P <0. 01);观察组AIMS2-SF量表躯体、症状、影响、社会和工作因子评分和总分均高于对照组(P <0. 01);观察组关节液IL-1β,IL-17,TNF-α,SP和CGRP水平均低于对照组(P <0. 01)。结论:真武汤加味内服结合整脊疗法治疗KOA急性期寒湿痹阻证患者,能明显减轻临床症状,改善关节功能,提高患者生活质量,并能降低关节液中促炎因子和神经肽类物质表达,从而抑制了炎症反应,控制了临床症状。

防己黄芪汤合真武汤加减治疗气虚血瘀型慢性心力衰竭患者临床观察

目的:观察防己黄芪汤合真武汤加减治疗慢性心力衰竭气虚血瘀型患者的临床疗效。方法:将符合纳入标准的80例慢性心力衰竭(气虚血瘀型)患者,随机分为对照组与治疗组,各40例。对照组给予常规抗心衰西药治疗,包括血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitors,ACEI)或血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(angiotensinⅡreceptor blockers,ARB),扩血管药物,β受体阻滞剂,利尿剂,地高辛等;治疗组在常规治疗基础上加用防己黄芪汤合真武汤加减,共4周。观察两组患者治疗前与治疗后中医证候疗效、心功能分级比较、左室舒张末内径(left ventricular end diastole,LVED),左室收缩末内径(left ventricular end of systolic diameter,LVSD),左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)。结果:经过治疗,在中医证候疗效方面,治疗组总有效率82.5%,优于对照组的65%(P<0.05);在心功能分级比较方面,治疗组总有效率85%,优于对照组的60%(P<0.05);在心功能指标方面,对照组和治疗组LVED和LVSD均降低,LVEF上升(P<0.05);治疗组LVED和LVSD均低于对照组,LVEF高于对照组(P<0.01)。结论:防己黄芪汤合真武汤加减在改善慢性心力衰竭患者的中医证候、心功能分级、以及改善心功能和心室重构方面具有一定作用。

真武汤的方证解析与现代研究概况

真武汤是《伤寒论》中温阳利水之经典方,由炮附子、生姜、白术、茯苓、芍药5味药组成,现已收录于国家中医药管理局2018年发布的《古代经典名方目录(第一批)》。《伤寒论》中有两条论述真武汤证,太阳病篇第82条云:"太阳病,发汗,汗出不解,其人仍发热,心下悸,头眩,身瞤动,振振欲擗地者,真武汤主之。"少阴病篇第316条亦有:"少阴病二三日不已,至四五日,腹痛,小便不利,四肢沉重疼痛,自下利者,此为有水气。其人或咳,或小便利,或下利,或呕者,真武汤主之。"原文论述其基本病机皆属少阴阳虚水泛,以小便不利,肢体沉重或浮肿,舌质淡胖,苔白,脉沉为辨证要点。本文从方药配伍、用法用量及方证解读方面,考证《伤寒论》真武汤证;总结真武汤物质基础研究,为其复方药效物质基础及质量控制提供依据;并对近几年来真武汤的药理研究进展进行归纳,发现真武汤具有强心、利尿、降脂、抗氧化、改善肾功能和平衡水液代谢等诸多功效;列举运用真武汤辨治心悸、水肿、咳嗽、腹痛、痰饮、眩晕、消渴、带下等中医病证,及充血性心力衰竭、肺源性心脏病、支气管哮喘、慢性结肠炎、肝硬化腹水、慢性肾小球肾炎、慢性肾功能衰竭、前列腺增生、美尼尔氏综合症等西医疾病,阐述真武汤"异病同治"的原理,以期为真武汤及更多的古代经方的研究开发及临床应用提供有益借鉴。

经典名方真武汤对大鼠血液指标和组织病理的影响

目的:观察经典名方真武汤长期应用对大鼠血液指标和组织病理的安全性影响。方法:采用SD大鼠进行灌胃给药30 d毒性实验。按体质量和性别随机分为4组,每组32只,雌雄各半,分别为真武汤低、中、高剂量(生药16,24,36 g·kg^(-1))3个剂量组(等效于真武汤临床剂量的20,30,45倍)及1个空白组(纯净水);每天上午灌胃给药1次,连续给药30 d,停药后观察14 d;每周测量体质量和摄食量1次,并根据所称体质量更换给药量;实验期间每天进行1次一般观察;分别于给药前1 d(D_(-1)),给药后4 h(D_(0)),给药第15天(D_(14)),给药结束(D_(29))和恢复期结束(D_(43))测量大鼠心电图1次;于给药结束(D_(30))和恢复期结束(D_(44))对部分大鼠(每次64只)进行血液和各组织病理学检查。结果:与空白组比较,真武汤高剂量组(D_(8)~D_(35)),中剂量组(D_(13)~D_(35)),低剂量组(D_(15)~D_(33))部分大鼠出现脱毛现象,主要脱毛部位出现在项颈部。与空白组比较,真武汤中、高剂量组雌性大鼠给药D_(7)体质量明显降低(P<0.05);真武汤低剂量组在给药D_(21)和D_(29)大鼠体质量明显降低(P<0.05);真武汤中、高剂量组在给药D_(7)~D_(29)大鼠体质量有不同程度的降低(P<0.05)。与空白组比较,给药第1周,真武汤低、中、高剂量组大鼠摄食量明显减少(P<0.05);雄性大给药第1,2周,真武汤中、高剂量组大鼠摄食量和给药第4周高剂量组大鼠摄食量明显减少(P<0.05)。与空白组比较,雌性大鼠在给药D_(14),真武汤中、高剂量组大鼠心率明显加快(P<0.05);雄性大鼠在给药D_(14)和D_(29),真武汤低、中、高剂量组大鼠心率明显加快(P<0.05);雄性大鼠在给药D_(14)和D_(29),真武汤中剂量组大鼠P波时间延长(P<0.05);雌性大鼠在给药D_(14)天,真武汤中、高剂量组大鼠QRS间期延长(P<0.05);雌性大鼠在给药D_(14)天,真武汤高剂量组大鼠S波波幅明显降低(P<0.05);雄性大鼠在给药D_(14)和D_(29),真武汤中、高剂量组大鼠S波波幅明显降低(P<0.05)。实验显示低、中、高剂量真武汤对SD大鼠灌胃给药30 d毒性实验,可导致大鼠脱毛,体质量下降,饮食不佳,心率加快,心率不齐,对血液学检测(血常规、凝血四项和血生化)指标影响不明显,病理检查亦无明显变化。结论:真武汤有正性肌力作用,临床45倍量无明显毒性作用,但要注意预防室性早搏的发生。