产气荚膜梭菌α-β融合基因的高效表达

用PCR从含产气荚膜梭菌α毒素基因的质粒pXETA1中扩增出α毒素基因 ,用NcoI和BamHI双酶切该α毒素基因 ,回收 0 .95kb的α毒素基因片段 ,再用NcoI和BamHI双酶切含产气荚膜梭菌 β毒素基因质粒pXCPAB2 ,与上述回收的α毒素基因片段连接 ,转化至受体菌BL2 1(DE3)中。经NcoI、BamHI、NcoI酶切反应鉴定和核苷酸序列分析证实 ,获得了理想重组质粒pXCPAB2 ,该重组质粒含有α β融合基因。重组菌株BL2 1(DE3) (pXCPAB2 )经IPTG诱导后 ,其表达产物经ELISA检测和SDS_PAGE分析 ,结果表明重组菌株可以高效表达α β融合蛋白 ,该融合蛋白占菌体总蛋白的 2 2 .14%。

抗A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体1A8的基因克隆及序列测定

应用RT_PCR技术,从分泌具有中和活性的抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体(McAb) 的杂交瘤细胞1A8 中,扩增出抗体VH 和VL基因,用linker(Gly4Ser3)3 基因,将VH 和VL 基因连接成ScFv 基因,并将其克隆至pGEM_T载体中。经核甘酸序列分析证实,VH 和VL 基因及linker 基因拼接正确,基因全长729bp,经计算机分析,VH 和VL基因均为新发现的基因序列,符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征。VH 和VL 基因分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ(A)