内蒙古玉米大斑病菌孢子数量动态变化规律

揭示内蒙古地区玉米大斑病菌孢子的数量动态变化规律,并为玉米大斑病的预警和防控提供更科学的依据,利用孢子捕捉仪及Real-time PCR方法,连续3 a(2021-2023年)对内蒙古6个玉米主产区的空气中的分生孢子数量进行监测。结果表明,内蒙古地区玉米大斑病菌孢子数量的高峰期出现在6月中上旬和8月中下旬。相关性分析显示,6个地区监测的孢子数量与空气温度均呈正相关(P<0.05)。孢子数量与内蒙古西部3个地区(巴彦淖尔、鄂尔多斯和呼和浩特)的相对湿度呈正相关(P<0.05),与内蒙古东部3个地区(赤峰、通辽和兴安盟)的相对湿度相关性不显著。这说明在内蒙古西部地区空气温度和相对湿度是影响孢子浓度的关键因子,在内蒙古东部地区空气温度是影响孢子浓度的关键因子。

六妹羊肚菌分生孢子室内产生条件

羊肚菌(Morchella spp.)成功实现大田栽培后,其栽培过程中产生大量分生孢子而形成菌霜。纯培养条件下羊肚菌分生孢子的产生及萌发成为研究重点。为实现羊肚菌分生孢子的室内获取,通过模拟六妹羊肚菌(M.sextelata)室外栽培条件,从培养容器、培养基组分、覆盖物种类、覆盖厚度及覆盖时间这5个方面研究六妹羊肚菌分生孢子产生的室内条件。结果显示:用六棱形玻璃罐头瓶(底径7.6 cm,口径6.6 cm,高9.8 cm,容积280 mL)为容器,以体积比1︰1的土壤(含水量20%)和PDA为培养基,接种六妹羊肚菌菌丝块20 d后,在菌落表面覆盖厚度为1.5 cm的无菌湿润河沙,可在室内获得分生孢子,每平方厘米分生孢子产量为(2.37±0.63)×10^(6)个。

稻曲病菌的形态学观察研究

利用光学和电子显微镜对稻曲病菌的有性子座和不同来源的繁殖体进行了形态学观察。子囊壳单层环状埋生于子座外层,顶端突出子座表面而形成许多乳突结构。子囊发育成熟后,子囊壳壁的顶端可自行消解,露出里面的子囊。子囊孢子无色单胞,线状。厚垣孢子圆形或稍椭圆,黄褐色至黑褐色,胞壁厚密,外表有许多疣状突起。子囊孢子和厚垣孢子萌发都产生次生分生孢子。这些次生分生孢子与液体培养获得的分生孢子在大小和形态特征上是一样的,它们都是薄壁分生孢子。薄壁分生孢子卵圆形或长圆形,大小为2.6～8μm×2～5μm,无色透明,外表光滑。薄壁分生孢子萌发直接形成新一代薄壁分生孢子,此繁殖过程可不断重复进行。

冬虫夏草菌世代交替的初步研究

研究了冬虫夏草菌寄主蝠蛾幼虫的昆虫病理。观察了冬虫夏草菌对蝠蛾幼虫的侵染，虫菌体在幼虫体内血淋巴中的生长繁殖及分化。冬虫夏草子座的成熟及子囊孢子的弹射与萌发。

稻瘟病拮抗细菌的活性研究

将拮抗细菌接种于NB培养液中 ,经 2 4 0r/min、30℃下振荡培养 4 8h后 ,取上层清液 ,稀释 10 0倍后 ,与稻瘟病分生孢子悬浮液等量混合 ,滴于凹玻片上置 2 5℃下保温培养 12h。结果显示 ,10 0倍稀释液对孢子萌发的抑制率为 97% ,并对分生孢子的附着孢形成也具有明显的抑制效果。稀释液配以 5 g/L至 5 0g/L浓度的生物助剂SDP溶液时 ,助剂对拮抗细菌发酵液的拮抗活性无显著促进作用。另外 ,拮抗细菌发酵液对水稻种子的萌发没有影响。结果表明 ,低浓度的拮抗细菌发酵液对稻瘟病分生孢子的萌发具有明显的抑制效果 。

冬虫夏草子囊孢子及其无性型在培养过程中的形态学观察

在显微镜下挑取冬虫夏草弹射的单子囊孢子接种于平板上,18℃培养,在显微镜下观察其生长过程,发现单子囊孢子产生芽管后,直接进行微循环产孢,产生被粘液包裹的球状分生孢子团,经过缓慢生长形成菌落后,开始无性繁殖产生大量分生孢子。取其分生孢子接种到液体培养基中,在18℃下振荡培养,观察其生长过程。分生孢子液态培养主要经过:(Ⅰ)分生孢子萌发进行微循环产孢;(Ⅱ)孢子萌发产生菌丝;(Ⅲ)菌丝产生芽生孢子;(Ⅳ)芽生孢子生长形成新的芽孢。结果表明,分离得到的冬虫夏草的无性型是中国被毛孢,且分生孢子在液体培养中也存在微循环产孢的现象。

几种诱导黑麦草Loliump erenneL.内生真菌产孢的方法

从黑麦草Lolium perenne5个栽培品种中分离、纯化得到6株形态稳定的内生真菌,它们在常规培养条件下均不产生分生孢子。通过在PDA和MEA培养基上进行预培养、扫刷营养体、近紫外光照射以及在菌丝体上放置宿主植物等诱导方法,使其中5株真菌不同程度产生了分生孢子,通过分生孢子的形态成功鉴定了黑麦草内生真菌。实验证明通过诱导内生真菌产孢的方法并借助形态学依据来鉴定无性的内生真菌是可行的。

酱油曲霉孢子原生质体的制备与紫外诱变育种

由1株分离、纯化自曲精的酱油曲霉的分生孢子制备原生质体,并进行紫外诱变,得到7株中性蛋白酶活提高幅度较大的紫外突变株U系,中性蛋白酶活最高的1株达到6 197.4U,为出发株的1.94倍。对原生质体制备条件进行了优化:选取孢子生长旺盛的新鲜斜面培养物(培养5 d左右)制备孢子悬浮液;采用25 mmol/L-巯基乙醇+5 mmol/L Na2EDTA体系预处理20 min;酶解条件是:1%溶菌酶+1%蜗牛酶+1%纤维素酶,山梨醇作为渗透压稳定剂(0.6 mol/L,pH6.88),酶解温度33℃,酶解5 h;再生培养基为0.6 mol/L NaCl高渗透压豆汁培养基,涂布法再生。

温度和湿度对越冬后苹果褐斑病菌产孢的影响

【目的】褐斑病是引起苹果早期落叶的主要病害之一,本研究通过测定越冬后病菌的产孢条件和动态,明确褐斑病初侵染孢子的形成期和形成量,为病害前期防控提供参考和依据。【方法】2009—2010年在培养箱控温、控湿条件下测定越冬后褐斑病菌产孢所需温度、湿度条件和动态。【结果】越冬后的褐斑病菌在0—30℃都产生拟分生孢子,最适产孢温度为15.5℃。越冬后病菌产孢需要高湿条件。将越冬病叶湿润或直接置于相对湿度97%以上的环境中,病菌在6 h内产生大量拟分生孢子。3月初采集的越冬病叶,在15或20℃下经36 h以上保湿处理后产生少量子囊盘,子囊盘的检出频率为0.34%。5月下旬采集的越冬病叶中,子囊盘的检出频率升至5.3%,形成子囊盘的越冬病叶达27%。【结论】春季,当日均气温达到或超过5℃,遇5 mm以上的降雨,被湿润的越冬病叶6 h内可产生大量拟分生孢子。当日均温接近或超过15℃时,遇24 h以上的阴雨过程,越冬后病菌就产生子囊孢子。拟分生孢子和子囊孢子均具致病性,为褐斑病的初侵染提供大量菌源。

披针叶黄华中抑制植物病原真菌物质的分离鉴定

从披针叶黄华 (ThermopsislanceolataR .Brown)的种子中分离得到一种液体生物碱 ,经物理常数和光谱分析鉴定为鹰爪豆碱。生测结果表明 ,对 4种植物病原真菌孢子的萌发具有抑制作用 ,其中对灰葡萄孢菌 (Botryiscinerea)和松枯梢病菌 (Sphaeropsissapinea)的抑制作用非常明显 ,其EC50 分别为 2 6和 2 2 μg/mL。 75 %百菌清对这 4种植物病原真菌孢子的萌发也具有较好的抑制作用 ,其EC50 分别为 5 8(杉木猝倒病菌 )、1 9(龙竹霉变孢菌 )、0 .8(松枯梢病菌 )、4(灰葡萄孢菌 ) μg/mL。鹰爪豆碱对 7种植物病原真菌菌丝生长的生测结果表明 ,其抑制作用较上述孢子弱。

马铃薯早疫病菌分生孢子萌发条件的研究

为了明确马铃薯早疫病菌分生孢子萌发的条件，研究了温度、湿度、pH、光照、营养条件等对马铃薯早疫病菌分生孢子萌发的影响。结果表明，分生孢子在水滴中于30℃1h即可萌发，8h后达到萌发高峰，萌发率为98．4％；萌发的最适温度为30℃；相对湿度85％以上均可萌发，水滴中萌发率最高；pH6-10的条件利于分生孢子萌发；紫外线对分生孢子萌发有抑制作用；无机氮源中的铵态氮和尿素对孢子萌发有抑制作用，有机氮源中半胱氨酸和谷氨酸对孢子萌发有抑制作用；山梨糖不利于分生孢子萌发；光照对分生孢子萌发也有抑制作用；分生孢子致死温度是57℃。

枯草芽孢杆菌菌株A抗菌蛋白的分离纯化及抗真菌机理

【目的】揭示生防菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株A产生的抗真菌蛋白的性质及作用机理。【方法】采用硫酸铵沉淀菌株A发酵液获粗蛋白;采用DE52离子交换层析技术对粗蛋白进行分离纯化;对具抗真菌活性的纯化组分采用MALDI-TOF-MS进行结构分析;以玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)为材料,对纯化活性蛋白的抗真菌机理进行研究。【结果】从粗蛋白中分离到一种抗真菌活性蛋白(FV),与RNA结合蛋白Hfq Bacillus subtilis subsp.subtilis gi|16078797的匹配率为86.484%,相对分子质量为8 508.5 Da,等电点为8.04。FV对玉米小斑病菌孢子萌发的半数抑制浓度(IC50)为138.32μg.mL-1,附着胞形成的IC50为22.23μg.mL-1。经FV处理后,玉米小斑病菌菌丝顶端、中部出现膨大泡囊,呈"念珠状";扫描电镜观察发现泡囊状菌丝表面凹凸不平,并残留有碎片;透射电镜观察发现在部分菌丝细胞原生质出现"空泡"的菌丝里有"子菌丝"。【结论】枯草芽孢杆菌菌株A产生的抗真菌蛋白与RNA结合蛋白Hfq高度同源,可抑制致病真菌孢子萌发、附着胞形成,并影响菌丝细胞的形态和结构。

甜瓜蔓枯病菌子实体法分离及A型菌株产孢条件研究

为解决甜瓜蔓枯病菌(Didymellabryoniae)组织分离法中枯萎病菌污染和单孢分离法操作复杂的问题,采用挑取单个子实体分离纯化获得甜瓜蔓枯病菌A型菌株。该菌株在12h荧光/12h黑暗的常规光照条件下,不能形成分生孢子器,但经过一定时间的暗处理和间歇紫外灯(12h紫外灯/12h黑暗)照射后则能够产生大量分生孢子。研究了光照、温度、pH值、培养基、碳源、氮源对产孢量的影响。综合各种因素,A型菌株产生分生孢子的最佳条件为:7d暗培养和4d间歇紫外灯处理的光照条件下,只含有磷酸二氢氨的马铃薯平板培养基,25℃时产生的分生孢子量最多。

不同产地冬虫夏草无性型的形态观察

冬虫夏草为我国传统的名贵中草药，是冬虫夏草真菌侵染蝙蝠蛾科昆虫幼虫而形成的僵虫与真菌子座的复合体。本文从西藏、青海、云南和四川采集的新鲜冬虫夏草样品中分离和培养无性型菌株，进行分子鉴定，观察菌落和菌丝与分子孢子的显微形态。结果表明分离到的菌株为冬虫夏草无性型-中国被毛孢；扫描电镜下观察到H型菌丝融合现象；冬虫夏草无性型可产生包括肾形、椭圆形或长椭圆形及近球形的多态分生孢子，其大小为1．36～13．76μm×1．03～9．18μm；在同一培养基上分生孢子大小与菌株的产地有关，从大到小依次是云南、西藏、青海、四川采集的菌株；同一种菌株在不同培养基上产生的分生孢子形态及大小差异不明显。

不同培养基对芒果炭疽病菌分生孢子形成的影响

从广西壮族自治区及海南省芒果树上分离了６个芒果炭疽病菌株，用１０个不同培养基在暗中２６℃下进行培养试验，结果表明，酵母膏培养基对芒果炭疽菌的分生孢子形成具有显著的促进效果。在测试浓度范围内，供试菌株的产孢量基本与酵母膏的含量呈正相关。促进该菌产孢的最适酵母膏浓度为８～１０ｇ／１０００ｍｌ。芒果树嫩叶培养基比成叶对芒果炭疽病菌的分生孢子形成有利。

苹果树腐烂病拮抗细菌鉴定及其抑菌作用效果测定

为了开发一种高效低毒的苹果树腐烂病生防制剂,通过对峙培养法、形态学及分子生物学的方法进行了苹果树腐烂病菌拮抗菌的分离筛选及鉴定,采用离体枝条法测定了拮抗菌对苹果树腐烂病的防效,并采用显微观察和液体培养法分别研究了拮抗菌对苹果树腐烂病菌的抑菌机理和无菌滤液对苹果树腐烂病菌生长的影响。分离筛选结果表明,从甘肃省各苹果产区果园土壤和苹果树枝条上分离得到23株细菌,2株对苹果树腐烂病菌具有较好拮抗作用,分别为LZ-1201和TS-1203,其对苹果树腐烂病菌菌丝生长抑制率分别为79.00%和85.00%。鉴定结果表明,菌株LZ-1201和TS-1203分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。离体枝条防效测定表明,拮抗菌无菌滤液对苹果树腐烂病的防效随着稀释倍数增大而降低,原液防效最高,分别为74.43%和77.07%。抑菌作用机理结果表明,两株拮抗菌均可导致苹果树腐烂病菌丝膨大畸形、原生质浓缩、释放及溶解。拮抗菌无菌滤液对腐烂病菌生长的影响测定结果表明,无菌滤液对腐烂病菌分生孢子萌发和菌丝生长量均有显著抑制作用(P<0.05),其无菌滤液稀释40倍时对腐烂病菌分生孢子萌发和菌丝生长量的抑制率均高于60%,表明该拮抗菌具有很好的生防潜力。

茶云纹叶枯病病原菌侵入与叶位关系研究

采用茶园调查和室内接种相结合的方法,研究了茶云纹叶枯病病菌(Colletotrichum camelliae)侵入与不同叶位的关系。结果表明:自然状态下,病害症状主要出现在成、老叶上。2006年嫩叶组、成叶组和老叶组3处理的病叶率分别为0.89%、18.89%、10.67%,2007年分别为2.00%、19.56%、13.78%,其中嫩叶、成叶上的病害都是当年病菌侵染所致。茶枝离体接种时,症状出现在嫩叶和成叶上,而且以前者为多,2006年3处理的病叶率分别为15.28%、9.73%和0%,2007年分别为12.50%、8.73%和2.78%。结果显示:分生孢子的侵染叶位以嫩叶为主,在各类叶片上均有较高的萌发率,但只有部分能够形成附着胞,在嫩叶和成叶上形成率较高,老叶上几乎不能形成。不同叶位的解剖结构如角质层厚薄、栅栏组织层次多少、海绵组织细胞排列松紧等都与病菌侵染有一定的相关性。

香蕉棒孢霉叶斑病菌的分离与鉴定

从广西南宁市采集香蕉棒孢霉叶斑病样本,用常规组织分离法获得3个菌株,经柯赫氏法则验证确定其为香蕉叶斑病的病原菌。该菌的形态特征在分离培养前后变化较大,自然病斑上的分生孢子和分生孢子梗均较短,经PDA培养基分离培养后显著变长,培养后的病原菌形态特征与前人对Corynespora cassiicola的描述一致。根据形态特征及rDNA-ITS区序列比对结果,确定该病原菌株为多主棒孢菌[Corynespora cassiicola(Berk&Curt)Wei]。

多菌灵对绿色木霉的毒力测定

用滤纸片法测定多菌灵对绿色木霉菌丝生长的毒力,回归方程为y=-1.2997+2.9544×±0.1482,方差分析表明完全符合实际。用改良的涂布平板法测定,多菌灵对绿色木霉分生孢子萌发无抑制作用,当初生菌丝生长至12.50～28.33μm时,菌丝先端畸形,从而抑制菌丝生长、分生孢子梗分化和分生孢子的形成。

苹果腐烂病菌诱导产孢方法

为了研究一种能诱导苹果腐烂病菌快速大量产孢的方法,测试了6种培养基对苹果腐烂病菌的诱导产孢效果。结果发现,苹果腐烂病菌在加蜂蜜水和蛋白胨的带壳大麦上能大量产孢。接种苹果腐烂病菌菌丝的带壳大麦,在黑暗中培养15天后可产生大量黑色子实体。已形成子实体的大麦粒在黑光灯下诱导25天后开始产生分生孢子。每颗大麦粒平均产生11个子实体,其中15%的子实体能溢出分生孢子角。70 g大麦粒上所产生的分生孢子可配制浓度为106个孢子/mL的孢子悬浮液1500~2000 mL。试验还发现,不同的腐烂病菌菌株在同一条件下产孢量存在很大差异。