苏云金芽胞杆菌cryI基因探针的制备及质粒基因定位

将ｐＥＳＩ经ＥｃｏＲＩ酶解后回收纯化的含有苏云金芽胞杆菌ｃｒｙＩ基因高保守区的ＥｃｏＲＩ－Ｆ片段重组到ｐＳＥＬＥＣＴ－１的ＥｃｏＲＩ位点，通过ＤＩＧ体外标记转录制备高灵敏度、背景清楚的ＲＮＡ探针，并利用该探针进行苏云金芽胞杆菌８０１０杀虫基因定位．结果表明。

苏云金杆菌4.0718质粒上杀虫晶体蛋白基因的PCR分析

苏云金杆菌 (BacillusThuringiensis) 4 .0 718由本实验室选育是对鳞翅目 (Lepidopteran)昆虫有高毒性的菌株。采用SDS温和提取方法提取此菌株的质粒 ,电泳纯化后获得了其 4种不同分子量的质粒P1,P2 ,P3,P4。利用序列分析软件对已知的cryI类型基因进行阵列比较 ,根据其高度保守区域设计了 1对通用引物 ,对cryI类型基因的扩增产物为 2 77bp左右的片段 ,用此引物对Bacillusthuringiensis 4.0 718的 4种不同质粒进行了PCR分析 ,发现质粒P1,P2 ,P3扩增阳性 ,都产生了 2 77bp的扩增片段 ,而质粒P4没有扩增产物 ,这为进一步的基因定位打下了基础。