原花青素抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE_2生成的机制

目的:观察原花青素对脂多糖诱导RAW264.7细胞PGE2生成的影响及其作用机制。方法:放射免疫法(RIA)检测原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE2生成的影响;LPS诱导RAW264.7细胞9h,再加不同浓度原花青素作用30min,放射免疫(RIA)法检测原花青素对COx-2酶活性的影响;半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)法检测原花青素对COx-2 mRNA表达的影响;提取核蛋白,蛋白免疫印迹(western blot)法检测原花青素对NF-κB/p65蛋白表达的影响;电泳迁移率变动分析(EMSA)法检测原花青素对NF-κB与DNA结合活性的影响。结果:0.8,4和20mg·L-1原花青素抑制LPS诱导RAW264.7细胞PGE2生成;0.8,4和20mg·L-1原花青素不影响LPS诱导RAW264.7细胞COx-2酶活性;0.8,4和20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞COx-2 mRNA表达;4,20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB/p65蛋白表达;0.8,4和20mg·L-1的原花青素可明显降低LPS诱导下RAW264.7细胞的NF-κB活化。结论:原花青素显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞PGE2生成的作用与原花青素抑制COx-2 mRNA表达有关,此作用可能是通过抑制NF-κB/p65蛋白表达和抑制NF-κB的DNA结合活性来实现。

原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞NF-κB DNA结合活性的抑制作用

目的:观察原花青素对脂多糖(L PS)诱导的RAW2 6 4 .7细胞核转录因子- κB(nuclear factor Kappa B,NF- κB)结合活性的影响。方法:L PS诱导RAW2 6 4 .7细胞,加入不同质量体积浓度原花青素孵育1h,提取核蛋白,电泳迁移率变动分析检测NF-κB与DNA的结合活性。结果:L PS诱导小鼠巨噬细胞肿瘤细胞株RAW2 6 4 .7后,其NF-κB的核结合活性明显增高。0 .8、4和2 0 mg/L的原花青素可明显降低L PS诱导下RAW2 6 4 .7细胞的NF-κB活化。结论:原花青素对NF-κB活化的抑制作用可能是其抗炎的作用机理之一。