脑源性神经营养因子对缺氧胚鼠脑皮质神经元的保护作用

目的 观察胚鼠皮质神经元遭受缺氧刺激时脑源性神经营养因子 (BDNF)对其的保护作用 ,并探讨该过程中酪氨酸激酶 B信使核糖核酸 (Trk Bm RNA)表达的变化。方法 对胚鼠皮质神经元进行体外培养 ,用流式细胞术检测不同缺氧时点实验组 (加入 BDNF)与对照组 (不加入 BDNF)的细胞活性差别 ;同时用原位杂交法检测 BDNF受体 Trk Bm RNA表达的改变。结果 BDNF对缺氧神经元有确切保护作用 ,加入 BDNF可引起Trk Bm RNA表达的上调。结论 BDNF可减轻神经元所遭受的缺氧损害 ,而 Trk Bm RNA表达上调可能是 BDNF发挥其对缺氧神经元保护作用的机理之一。

胶原蛋白与胎脑神经细胞移植入脑缺血大鼠的形态学研究

目的 观察胶原蛋白 (Collagen)与胎脑神经细胞 (FBN)联合培养 2天后 ,神经细胞与胶原蛋白的吸附情况 ;观察胶原蛋白与胎脑神经细胞 (CFBN)移植入脑缺血大鼠后神经细胞的生长情况。方法 取孕 14天的胎脑神经细胞接种在胶原蛋白上 ;制备大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ;将CFBN植入到脑缺血大鼠中 ,将移植的大鼠分别在 2、6、10、30天进行光镜和电镜观察。结果 CFBN植入 2天后 ,机体产生轻微的免疫反应 ,部分中性粒细胞和淋巴细胞浸润 ,6天后免疫反应消失。HE和尼氏染色可见实验组植入神经细胞生长良好。结论 CFBN在脑缺血大鼠中生长良好 。

脑源性神经营养因子对缺氧胚脑皮质神经元的保护作用

目的 通过胚鼠皮质神经元的体外培养 ,观察遭受缺氧刺激时 ,脑源性神经营养因子 (BDNF)对神经元的保护作用。方法 用台盼蓝染色法动态观察培养神经元的存活率及加入BDNF对生理培养状态的皮质神经元的作用 ;同时用四氮唑盐 (MTT)比色法观察不同缺氧时间实验组及对照组神经元活性的差异。结果 BDNF对正常皮质神经元有维持存活效应 ;对缺氧神经元有确切保护作用 ,该保护作用有时间依赖性 ,缺氧前2 4h加入BDNF对缺氧神经元的保护效果较缺氧即刻加入为好。结论 体外实验证实BDNF可维持皮质神经元存活 。

胎脑提取液对坐骨神经损伤大鼠脊髓运动神经元酶活性的影响

目的:研究大鼠坐骨神经损伤后,胎脑提取液对脊髓运动神经元乙酰胆碱酯酶(AChE)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的影响。方法:Wistar大鼠,随机分为实验组、对照组和正常组,前两组再随机分成术后3个时间组。无菌条件下制作坐骨神经钳夹损伤模型,酶组织化学方法结合显微图像分析,观察各组大鼠脊髓运动神经元AChE和SDH活性的变化。结果:术后1 w实验组及对照组均比正常组明显降低;术后2 w实验组开始升高,对照组进一步降低;术后3 w实验组与正常组相近,对照组开始升高。结论:胎脑提取液对脊髓前角运动神经元的溃变有保护作用,可促进大鼠受损神经元的恢复。

氚水β射线照射对大鼠胚胎脑细胞增殖的影响

采用流式细胞术、MTT方法、细胞色素C还原法、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)及脉冲电场凝胶电泳方法(PFGE),分别检测大鼠受0～3.7×106Bq/mL氚水(HTO)作用后神经元细胞的凋亡、增殖抑制、超氧阴离子(O2-)释放、p53基因表达与DNA断裂损伤,观察氚水β射线照射对体外培养大鼠胚胎脑细胞的损伤效应。结果显示,随着氚水放射性浓度的增大,神经元细胞的凋亡率、增殖抑制率与p53mRNA表达量均增大,DNA断裂损伤程度随之加重,而O2-释放量随之减少。这说明氚水β辐射能使神经元细胞DNA双链断裂、促进其p53基因表达引发细胞凋亡及减少O2-释放来抑制增殖。

胎脑提取液对衰老小鼠大脑皮质神经元的影响

目的 观察胎脑提取液对衰老小鼠大脑皮质神经元酸性磷酸酶 (ACP)活性和尼氏体含量的影响 ,探讨胎脑提取液的抗衰老作用。方法 选用健康昆明种小白鼠 30只 ,随机分为 3组 ;采用D -半乳糖制备亚急性衰老模型 ;组织化学方法显示大脑皮质神经元内的酸性磷酸酶 (ACP)和尼氏体 ;显微图像分析仪进行定量分析。结果 衰老模型组与正常对照组相比 ,小鼠大脑皮质神经元ACP活性明显升高 ,尼氏体含量明显减少 ;给药组与衰老模型组相比 ,小鼠大脑皮质神经元ACP活性明显降低 ,尼氏体含量明显增加。结论 胎脑提取液可以稳定大脑皮质神经元的内环境 ,减少神经元的损伤 ,促进神经元蛋白质的合成 ,具有一定的抗衰老作用。

神经一氧化氮合酶与胎儿缺血缺氧性脑损伤的关系及其抑制剂的治疗作用

目的:探讨神经一氧化氮合酶(nNOS)与胎鼠缺血缺氧性脑损伤的关系及左旋硝基精氨酸(L-NNA)的保护作用。方法:建立胎鼠宫内窘迫模型。分为对照组、急性缺血组、治疗组(于缺血前1.5h孕鼠腹腔内注射L-NNA4mg/kg)。以比色法测定脑组织匀浆的NO值;RT-PCR检测nNOSmRNA的表达量;以TTC染色计算脑组织的相对缺血面积,并行定量分析。结果:①治疗组缺血5、15min的脑组织匀浆NO值明显低于急性缺血组(P<0.05),但仍高于对照组。缺血30min时,急性缺血组与治疗组差异无显著性意义,但均高于对照组(P<0.05)。②缺血5min、15min、30min的胎鼠脑组织中nNOS的OD值均明显高于对照组(P<0.01)。孕鼠在术前1.5h腹腔注射L-NNA后,缺血5min、15min的胎鼠脑组织中nNOS的OD值明显低于急性缺血组相应时间点的表达水平(P<0.05);而缺血30min时虽经治疗,nNOS的OD值与急性缺血组该时间点相比差异无显著性意义(P>0.05),但均明显高于正常组(P<0.05)。③胎鼠急性缺血5min、15min、30min的脑组织缺血面积均明显高于对照组(P<0.05)。孕鼠经治疗后,胎鼠于缺血5min、15min时的缺血面积明显小于急性缺血组(P<0.05);而缺血30min时的缺血面积与急性缺血组相比P>0.05。但各时间点的缺血面积仍大于正常组(P<0.05)。

人类神经元蛋白 P17.3 全长 cDNA 的克隆及表达特征分析

从人胎脑ｃＤＮＡ文库分离到一个长５９５ｂｐ的ｃＤＮＡ，它含一个编码１５３个氨基酸的完整开放阅读框，５ＵＴＲ长１８ｂｐ，３ＵＴＲ长１１８ｂｐ；在３ＵＴＲ中，含有非典型的加尾信号序列“ＡＡＴＴＡＡＡ”和长１５ｂｐ的ｐｏｌｙＡ序列。由阅读框推导的编码蛋白质的分子量为１７．３ＫＤ，等电点为４．８９。由于它与小鼠神经元蛋白ＮＰ１５．６呈高度同源，尤其是二者的推导氨基酸序列一致性高达８１．２％，故将这一新ｃＤＮＡ序列推导的蛋白命名为神经元蛋白Ｐ１７．３。用ＰＣＧＥＮＥ软件包的ＧＧＢＳＭ程序推导该蛋白质的二级结构，发现该蛋白中３２．６％的氨基酸参与组成α螺旋结构，１５．０％的氨基酸参与组成β折叠片；用位点检测分析软件的ＰＥＳＴＦＩＮＤ程序分析，发现它的第４８～６８位氨基酸残基区为快速衰变蛋白特征性的“ＰＥＳＴ”结构域。

人神经干细胞在宿主鼠脑内分化成神经元呈脑位点特征

目的研究人胎脑神经干细胞植入年幼大鼠脑后的成神经元分化作用,探讨神经干细胞替代治疗小儿脑病的可行性。方法自孕16周的胎脑组织分离培养出神经干细胞球,在小儿脑脊液中培养诱导分化以证明其分化潜能。将培养14 d的神经干细胞球移植10 d龄鼠的侧脑室内,于移植后第4、7、14天杀鼠取脑,切片,行人神经丝特异性标志的免疫荧光分析,显示神经元的分布和细胞形态。结果培养获得典型神经干细胞球,呈漂浮生长,在小儿脑脊液中能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。用抗人神经丝混合单抗检测移植物的成神经元分化,移植后的第4天,观察到阳性反应细胞在颗粒层表现为颗粒性细胞,锥体细胞层则出现长突起的锥体细胞,还有连接神经元样中间神经元,小脑内有单层排列的浦肯野细胞。对比各时间点的观察结果,阳性细胞分布位置未变。随着移植后天数的后延,阳性细胞数量呈减少趋势,但锥体细胞的突起明显加长。结论体外培养获得的人神经干细胞脑室途径移植年幼大鼠,在脑内发生迁移,并分化成形态上与其临近宿主细胞一致的神经元。提示宿主脑组织局部微环境在引导移植物分化成神经元中发挥了重要作用。

永磁磁场对胎鼠大脑皮质神经元细胞的影响

目的以磁源空间磁场定量计算为依据,研究不同强度永磁磁场对胎鼠大脑皮质神经元细胞的影响。方法选取极面中心磁感应强度为3.9、8.0、12.1、20.5、27.0、80.0、170.0、400.0 mT的8组圆片磁源(即A、B、C、D、E、F、G、H组),采用有限元数值法计算其空间磁场,得出磁感应强度。取孕17d胎鼠大脑,分离皮质神经元细胞;将8种不同磁感应强度的磁源分别作用于大鼠脑皮质神经元细胞进行体外培养,6 d后分别用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞活力。设非加磁培养大鼠脑皮质神经元细胞为空白对照组。对各组大鼠脑皮质神经元细胞做统计学分析。结果各加磁组皮质神经元细胞光密度(OD)(A组1.204±0.003,B组1.210±0.003,C组1.202±0.004,D组1.220±0.001,E组1.172±0.002,F组1.223±0.012,G组1.235±0.010,H组1.028±0.060)均比空白对照组OD(1.275±0.002)低,其中A、B、C、D、E、H组与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05或0.01),F、G组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05);各加磁组皮质神经元细胞上清液中LDH水平(A组13.33±0.33,B组12.33±0.33,C组8.33±2.33,D组10.67±2.33,E组11.33±4.33,F组10.00±1.00,G组9.00±0.30,H组9.67±0.33)均比空白对照组LDH水平(8.330±0.003)高,其中A、B、D、E、F、H组与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05或0.01),C、G组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论实验所使用各磁感应强度组磁场对胎鼠大脑皮质神经元细胞代谢有一定抑制作用。

胎脑皮质移植物神经元发育的组织学观察

本实验用E_(15)胎脑皮质作供体植入到中年Wistar大鼠大脑皮质3、1、2区内,移植后7天的移植物中成熟的神经元数量少,未成熟神经元占大多数,15天的移植物成熟神经元占多数,未成熟神经元数量少.30天神经元发育成熟.神经元发育过程比原位大脑皮质神经元至少推迟8天.移植后30天内神经元发育过程占主导地位.

产前用药对胎鼠缺血缺氧性脑损伤血清NSE和S-100含量的影响

目的 研究氟桂利嗪、拉莫三嗪及两药联合经孕鼠给药，对胎鼠寓内缺血缺氧性脑损害的保护作用。方法 将孕20天wistar大鼠40只，随机分为A组（氟桂利嗪组，n=10），B组（拉莫三嗪组，n=10），C组（氟棒利嗪＋拉莫三嗪组，n=10）和D组（对照组，n=10）。前三组于动物脑缺血缺氧术前3天开始胃管给药，每天1次，剂量分别为氟桂利嗪0．5mg（kg·d），拉莫三嗪10mg（kg·d），氟桂利嗪0．5mg（kg·d）＋拉莫三嗪10mg（kg·d）。第二次给药后3小时，每组取8只孕鼠制作宫内缺血缺氧模型，取2只孕鼠不作缺血缺氧处理，剖宫产取胎鼠，每胎5只。于缺血缺氧后6小时、12小时、24小时、48小时分别取胎鼠血清0．5ml，采用ELISA法分别测定血清NSE、S-100水平。结果 孕鼠缺血缺氧后，胎鼠血清NSE和S-100水平较不缺血的明屁升高，氟桂利嗪组、拉莫乏嗪组及两药合用组与对照组缺血缺氧后胎鼠各个时问点血清NSE和S-100水平相比较均降低，差异有显著性意义（P〈0．01）。联合用药较单个药物应用效果更明湿，组间比较差异有显著性意义（P〈0．01）。结论 产前预防性口服氟棒利嗪、拉莫三嗪对官内缺血缺氧性脑损伤具有保护作用，联合用药效果更明显。

神经元型一氧化氮合酶在人胎脑的表达

目的研究神经元型一氧化氮合酶（nNOS）在2～7月龄正常人胎脑大脑皮质和海马结构的表达情况。方法采用免疫组织化学技术，光镜下观察nNOS在不同月龄正常人胎脑大脑皮质和海马结构的表达情况；利用计算机图像分析技术测量不同月龄额叶皮质和海马结构内嗅区皮质nNOS表达的平均吸光度。结果光镜下2月龄时人胎脑大脑皮质和海马结构中没有nNOS表达，3月龄时上述部位开始出现nNOS阳性产物的表达，阳性产物主要存在于神经细胞的胞质和突起，胞核不着色。4月龄时阳性产物增多（P〈0．05），5月龄与4月龄之间相比变化不明显（P〉0．05），6、7月龄nNOS表达持续增强（P〈0．05）。结论nNOS在3～7月龄的人胎脑大脑皮质和海马结构中有表达，其表达与胎脑神经细胞的发育规律一致，表明其产物一氧化氮（NO）与人胎脑的发育密切相关。

人胚脑提取液对神经细胞生长影响的研究

用水囊引产3～5个月胎龄的人胚大脑皮层神经细胞进行培养,观察不同浓度(蛋白量0.05～0.4g/L)人胚脑提取液(FBE)对大脑皮层神经细胞生长的影响.结果表明,培养14天神经细胞存活数在0.05g/L和0.1g/L FBE组与对照组(培养液中不加FBE)之间无明显差异,0.2g/L FBE组明显高于对照组,而0.4g/L FBE组存活细胞少于对照组.进一步观察可见0.2g/L FBE组神经细胞突起数目、长度、胞体面积均高于对照组(P<0.05),神经细胞存活天数及细胞总蛋白含量明显增加.结果提示,0.2g/L FBE对体外培养大脑皮层神经细胞的生长有一定促进作用.

三碘甲腺原氨酸对大鼠神经元Goα基因表达的影响

目的分析3,3’,5-三碘甲腺原氨酸(T3)对体外培养的大鼠大脑皮层神经元G蛋白Go的α亚单位(Goα)基因表达的影响。方法取孕19 d的胚胎大鼠大脑皮层神经元,于含15％胎牛血清的DMEM培养基中培养。7 d后神经元分为5组,分别置于不同的培养基:DMEM+15％胎牛血清(A组); DMEM+15％去甲状腺激素的胎牛血清(B组);含0．5 nmol／L T3的DMEM+15％去甲状腺激素的胎牛血清(C组);含5 nmol／L T3的DMEM+15％去甲状腺激素的胎牛血清(D组);含50 nmol／L T3的DMEM+ 15％去甲状腺激素的胎牛血清(E组)。继续培养7 d,收集细胞,抽提总RNA,以竞争性RT-PCR分析各组神经元GoαmRNA水平。结果B、D和E组神经元GoαmRNA水平显著低于A组(均P<0．01);C组神经元GoαmRNA水平显著高于A、B、D和E组(P<0．01);B、D和E组之间则差异无统计学意义(P> 0．05)。结论T3对体外培养的神经元Goα基因的表达有双重调节作用:在一定浓度范围内T3对培养的神经元Goα基因的表达有下调作用;但如果培养基中缺乏T3,神经元Goα基因的表达水平也很低。甲状腺激素对神经元Goα基因表达的调节作用可能是其调节脑发育的机制之一。

HPLC-EC法定量分析移植神经元递质含量

应用立体定向法将胎兔脑干中缝核未分化的5-HT能性神经元移植至成年兔大脑中动脉阻断型(MCAO)脑缺血灶内。2个月后用高效液相色谱电化学法(HPLC-EC)定量分析其5-HT含量。结果证实移植组5-HT含量显著高于对照组(P<0.05)。提示移植细胞在宿主体内存活良好。HPLC-EC是一个超微量测定递质的先进方法。

皮质酮对体外培养发育中胎鼠脑皮层神经元迁移蛋白LIS1表达的影响

目的研究皮质酮对发育中胎鼠脑皮层神经元迁移蛋白Lissencephaly 1(LIS1)表达的影响。方法体外原代培养Wistar胎鼠脑皮层神经元并分为对照组、低浓度干预组和高浓度干预组,各组给予含有不同浓度皮质酮(对照组:0μmol/L,低浓度干预组:0.1μmol/L,高浓度干预组:1.0μmol/L)的培养基干预,分别于干预后1、4、7 d收集细胞,采用Werstern blot法及免疫细胞化学染色法观察神经元LIS1蛋白表达的变化。结果 Western blot结果显示干预后7 d,低浓度干预组及高浓度干预组胎鼠脑皮层神经元胞浆及胞核内LIS1表达均明显低于对照组(P<0.05),且高浓度干预组胞浆内LIS1表达明显低于低浓度干预组(P<0.05)。免疫细胞化学染色法结果显示皮质酮干预后1、4、7 d,高浓度干预组LIS1平均光密度值明显低于对照组及低浓度干预组(P<0.05),且干预后7 d,低浓度干预组LIS1平均光密度值明显低于对照组(P<0.05)。结论皮质酮可下调体外培养发育中胎鼠脑皮层神经元迁移蛋白LIS1的表达水平,且与皮质酮浓度高低、作用时间长短相关。