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Cloning and Sequence Analysis of Glycoprotein D Gene of Bovine Herpesvirus-1 Strain Luojing
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作者 LIJi-chang TONGGuang-zhi +2 位作者 QIUHua-Ji ZHOUYan-Jun XUEQiang 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2003年第2期137-140,共4页
By means of PCR,the gene encoding gD of bovine herpesvirus-1 (BHV-1) strain Luojing was amplified,cloned and sequenced.The nucleotide sequence of this gD gene was (1 251 bp,)encoding 417 amino acids.Comparied with the... By means of PCR,the gene encoding gD of bovine herpesvirus-1 (BHV-1) strain Luojing was amplified,cloned and sequenced.The nucleotide sequence of this gD gene was (1 251 bp,)encoding 417 amino acids.Comparied with the published P8-2 strain,the homology of the necleotide sequence is 99.92%,and that of the deduced amino acid sequence is 100%.The results indicated that gD of BHV-1 was highly conservative. 展开更多
关键词 bovine herpesvirus-1(BHV-1) d glycoprotein gene(gd) CLONING sequence analysis.
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伪狂犬病病毒Ea株糖蛋白gD基因的表达及基因免疫 被引量:3
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作者 洪文洲 陈焕春 +3 位作者 方六荣 周复春 何启盖 吴斌 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期236-239,共4页
构建了 2个利用人类巨细胞病毒 ( HCMV)的启动子启动表达伪狂犬病病毒 Ea株糖蛋白 g D基因的真核表达质粒 p CIDI和 pc DDI,体外转染 BHK-2 1细胞 ,用间接免疫荧光法检测 ,证实糖蛋白 g D在细胞中得到表达。用表达质粒 p CIDI和 pc DDI... 构建了 2个利用人类巨细胞病毒 ( HCMV)的启动子启动表达伪狂犬病病毒 Ea株糖蛋白 g D基因的真核表达质粒 p CIDI和 pc DDI,体外转染 BHK-2 1细胞 ,用间接免疫荧光法检测 ,证实糖蛋白 g D在细胞中得到表达。用表达质粒 p CIDI和 pc DDI作为核酸疫苗免疫 BALB/c小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中抗伪狂犬病病毒的抗体 ,结果其滴度为 1∶ 1 2 8~ 1∶ 51 2。初步证实 ,用 g D基因作为核酸疫苗免疫动物 。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 Ea株 基因免疫 糖蛋白gd基因 基因表达
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猪伪狂犬病病毒LY株gD基因的克隆与核酸疫苗研究 被引量:3
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作者 马凤龙 王文成 +4 位作者 向华 傅兴伦 赵怀龙 马振宇 宣华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期412-416,429,共6页
将伪狂犬病病毒LY株的免疫糖蛋白基因(gD基因)分别克隆到核酸疫苗载体pIRESneo、pEGFP-C1的多克隆位点上,成功地构建了含有相应目的基因的重组质粒pIgD、pFgD和PRRSVLX-1株的E基因的双基因共表达二联核酸疫苗质粒pID-E。将构建的各核酸... 将伪狂犬病病毒LY株的免疫糖蛋白基因(gD基因)分别克隆到核酸疫苗载体pIRESneo、pEGFP-C1的多克隆位点上,成功地构建了含有相应目的基因的重组质粒pIgD、pFgD和PRRSVLX-1株的E基因的双基因共表达二联核酸疫苗质粒pID-E。将构建的各核酸疫苗质粒,通过脂质体法分别转染到BHK-21细胞中,经ELISA检测所有目的蛋白均得到表达,表达产物也均具有一定的反应原性。小鼠免疫试验证实这些核酸疫苗质粒具有很好的免疫原性,能诱导小鼠产生特异性抗体,第3次免疫后,抗体阳性率为100%,pIgD抗体效价均不低于1∶160,最高可达1∶640。pIE与pIgD的联合应用时,不影响各自特异性抗体的产生。构建的含有PRRSVE基因和PRVgD基因的双基因共表达质粒pID-E,脂质体转染BHK-21细胞后,经ELISA检测,相应的PRRSV和PRV的目的蛋白均获得了瞬时表达;小鼠免疫试验表明E和gD2种糖蛋白基因能在小鼠体内共表达,且能诱导免疫小鼠产生针对PRRSV和PRV的相应中和抗体。上述研究为进一步探讨PRRSVE蛋白及PRVgD蛋白的免疫生物学特性,进而为开展PRRSV与PRV相关基因在哺乳动物细胞中的联合表达及基因免疫提供理论基础。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 Gd基因 核酸疫苗 基因表达 免疫
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牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株gD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:2
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作者 庄东明 王建华 +4 位作者 吴春涛 霍蕾 侯艳梅 赵祥平 牛钟相 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期1-5,共5页
用PCR方法从感染牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株的MDBK细胞中扩增gD基因,将之克隆到pGEM-T Easy载体。根据对gD基因的结构分析,设计合成3对引物,以获得的克隆质粒为模板,PCR扩增gD胞外域基因,将之分别亚克隆到pGEX-4T-2和pET-32a表达载... 用PCR方法从感染牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu/67株的MDBK细胞中扩增gD基因,将之克隆到pGEM-T Easy载体。根据对gD基因的结构分析,设计合成3对引物,以获得的克隆质粒为模板,PCR扩增gD胞外域基因,将之分别亚克隆到pGEX-4T-2和pET-32a表达载体中构建成表达质粒pGEX-4T-gDQ、pGEX-4T-gDQB、pGEX-4T-gDHB和pET-gDQ、pET-gDQB、pET-gDHB,利用上述质粒分别转化大肠杆菌BL21和BL21(DE3),IPTG诱导后SDS-PAGE检测,结果pGEX-4T-gDQ、pGEX-4T-gDQB、pGEX-4T-gDHB和pET-gDQ四个表达质粒出现表达且符合预期大小,Western blot表明表达产物均有抗原性。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒Ⅰ型 gd糖蛋白基因 克隆 原核表达
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由反转录病毒载体转移的马立克病毒糖蛋白D基因在感染细胞中的表达 被引量:6
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作者 段玉友 崔治中 +3 位作者 秦爱建 殷震 杨冠珍 吴祥甫 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期151-157,共7页
用EcoRI、PstI将已分离和克隆的马立克氏病病毒糖蛋白D(gD)基因从重组pMgD18质粒中切出,克隆进反转录病毒质粒载体(RCAS)的连接质粒载体pUCCla112N的相同位点。用ClaI再将gD重组pUCCl... 用EcoRI、PstI将已分离和克隆的马立克氏病病毒糖蛋白D(gD)基因从重组pMgD18质粒中切出,克隆进反转录病毒质粒载体(RCAS)的连接质粒载体pUCCla112N的相同位点。用ClaI再将gD重组pUCCla112N中的gD基因切出,构建于RCAS的ClaI位点。通过原位杂交筛选重组RCAS,并结合酶切分析鉴定出gD插入方向正确的重组RCAS。用磷酸钙沉淀法将gD重组RCAS转染鸡胚成纤维细胞(CEF),转染后第9天收集细胞上清,用其感染原代CEF,在感染后第4天和第6天收集CEF。提取CEF基因组DNA,用Digoxigenin(Dig)标记gD基因片段作为探针,通过Dot和Southernblot检测基因转移情况。用上述上清再次感染原代CEF,在第6天用异硫氰酸胍-氯化铯离心法提取感染细胞总RNA,用Dig和32P标记gDDNA为探针,分别用Dot和Northernblot检测MDVgDmRNA。结果表明,转染的重组RCAS不仅在细胞内成熟为具传染性的完整病毒。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 反转录病毒质粒 糖蛋白 d基因
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逆转录病毒介导的PrVEa株gD基因转基因细胞系的建立 被引量:1
6
作者 石德时 兰盛银 +2 位作者 洪文洲 吴美洲 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期48-53,共6页
采用逆转录病毒介导的方法,将PrVEa株gD基因整合进PK 15细胞染色体中,建立起表达gD蛋白的细胞系PKD。通过荧光观察,发现PKD表达的gD分布在细胞膜上,具备原有的免疫反应性;同时,还发现gD蛋白在PKD细胞膜上呈明显极性分布。PCR技术和间接... 采用逆转录病毒介导的方法,将PrVEa株gD基因整合进PK 15细胞染色体中,建立起表达gD蛋白的细胞系PKD。通过荧光观察,发现PKD表达的gD分布在细胞膜上,具备原有的免疫反应性;同时,还发现gD蛋白在PKD细胞膜上呈明显极性分布。PCR技术和间接免疫荧光染色法对PKD进行检测的结果表明该细胞系具有良好的遗传稳定性。在相同培养条件下,PKD细胞的生长速度及形态与正常PK 15细胞无明显差异。用脂质体介导的方法,将PrVEa株基因组转染PKD细胞,在转染后30h细胞发生典型病变,表明PKD细胞对脂质体的毒害具有耐受性。TCID50测定结果显示:PKD对PrVEa株增殖尽管有明显的抑制作用,但PrVEa株仍能在其上正常增殖。上述研究结果提示:所构建的细胞系PKD可用于构建PrVEa株gD基因缺失毒株,为PrVEa株gD基因缺失毒株的构建提供了必备的工具。 展开更多
关键词 PK d细胞 逆转录病毒介导 正常 细胞系 基因缺失 转基因细胞 Ea株 毒株 生长速度
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牛传染性鼻气管炎病毒gD基因表达质粒免疫小鼠的试验研究 被引量:1
7
作者 李继昌 童光志 仇华吉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期494-497,共4页
基因疫苗是近几年来发展起来的一种新型疫苗,具有使用安全,生产、运输、贮存方便,免疫效果稳定持久的特点。实验采用PCR方法将从洛阳种牛场西门塔尔牛精液中分离的牛传染性鼻气管炎(Infectiousbovinerhino tracheitisvirus,IBRV)洛精株g... 基因疫苗是近几年来发展起来的一种新型疫苗,具有使用安全,生产、运输、贮存方便,免疫效果稳定持久的特点。实验采用PCR方法将从洛阳种牛场西门塔尔牛精液中分离的牛传染性鼻气管炎(Infectiousbovinerhino tracheitisvirus,IBRV)洛精株gD基因进行了扩增,经序列测定确证后构建了gD基因的真核表达质粒。将其单独或连同脂质体肌肉注射于BALB/c小鼠,应用ELISA定期检测血清抗体水平。结果表明,含IBRVgD基因的表达质粒能够引起小鼠的特异性血清抗体反应。 展开更多
关键词 传染性 鼻气管炎 病毒 gd 基因表达 质粒 免疫小鼠 试验
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牛疱疹病毒1型洛精株gD基因的分子克隆及序列分析 被引量:1
8
作者 李继昌 童光志 +3 位作者 仇华吉 周艳君 薛强 刘忠贵 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2002年第6期3-6,共4页
根据已发表的牛疱疹病毒 1型 (BHV 1)P8 2株 gD基因的核苷酸序列设计了 1对特异性引物 ,对我国BHV 1洛精株 gD基因进行PCR扩增 ,并对其克隆、测序和分析。结果表明 ,gD基因的核苷酸长度为 12 5 1bp ,其编码 417个氨基酸 ;BHV 1洛精株gD... 根据已发表的牛疱疹病毒 1型 (BHV 1)P8 2株 gD基因的核苷酸序列设计了 1对特异性引物 ,对我国BHV 1洛精株 gD基因进行PCR扩增 ,并对其克隆、测序和分析。结果表明 ,gD基因的核苷酸长度为 12 5 1bp ,其编码 417个氨基酸 ;BHV 1洛精株gD与国外报道的P8 2株的 gD基因的核苷酸的同源性高达 99.92 % ,氨基酸的同源性高达 10 0 %。这说明BHV 1的 展开更多
关键词 牛疱疹病毒 gd糖蛋白 基因克隆 序列分析
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HSV-1 SM44株糖蛋白D基因真核表达载体的构建及其免疫效果观察 被引量:4
9
作者 余颖 马文煜 杨乔欣 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 2000年第4期308-310,共3页
目的构建HSV 1型SM44株糖蛋白D(gD)基因的真核表达载体 ,并用此重组质粒直接免疫小鼠 ,探讨HSV 1gD基因作为基因疫苗的可能性。方法从HSV 1基因组中扩增 gD的全编码基因 ,克隆入载体 pUC19中 ,测序鉴定后转入真核表达载体 pcDNA3.1( +)... 目的构建HSV 1型SM44株糖蛋白D(gD)基因的真核表达载体 ,并用此重组质粒直接免疫小鼠 ,探讨HSV 1gD基因作为基因疫苗的可能性。方法从HSV 1基因组中扩增 gD的全编码基因 ,克隆入载体 pUC19中 ,测序鉴定后转入真核表达载体 pcDNA3.1( +)。所得重组质粒pcDNA gD以电穿孔法转染CHO细胞 ,并以荧光染色法鉴定表达效果。用 pcDNA gD免疫小鼠 ,ELISA法检测基因免疫的应答效果。结果成功地构建了可在真核细胞中有效表达的HSV 1gD真核表达载体 ,用其直接免疫小鼠可引起较高水平的特异性抗体应答。结论 gD的真核表达载体有可能作为HSV 1的基因疫苗 ,为进一步研究基于 gD的表位生物学和表位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 HSV-1 糖蛋白d 真核表达 基因免疫 载体构建
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HSV-2病毒gD基因的扩增和测序 被引量:1
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作者 梁俊 徐金华 郑志忠 《中国麻风皮肤病杂志》 2007年第9期749-752,共4页
目的:确定单纯疱疹病毒-2型(HSV-2)糖蛋白D的基因序列。方法:从3位生殖器疱疹患者中分离出3株HSV-2,提取标本中病毒DNA,通过PCR扩增gD基因并进行测序,用CLUSTALW排序软件和GENEDOC32软件进行分析。结果:样品1:有4个碱基发生突变,碱基序... 目的:确定单纯疱疹病毒-2型(HSV-2)糖蛋白D的基因序列。方法:从3位生殖器疱疹患者中分离出3株HSV-2,提取标本中病毒DNA,通过PCR扩增gD基因并进行测序,用CLUSTALW排序软件和GENEDOC32软件进行分析。结果:样品1:有4个碱基发生突变,碱基序列的一致性为99.66%,并引起了4个氨基酸发生突变,氨基酸序列的一致性为99.24%。样品6:有1个碱基发生突变,碱基序列的一致性为99.92%,并引起了1个氨基酸发生突变,氨基酸序列的一致性为99.75%。样品8:有1个碱基发生突变,碱基序列的一致性为99.92%,并引起了1个氨基酸发生突变,氨基酸序列的一致性为99.75%。结论:三株野生株的gD基因序列与已公布的序列基本一致,说明HSV-2型的gD基因具有较强的保守性,可成为HSV-2型基因疫苗的侯选抗原。 展开更多
关键词 生殖器疱疹 单纯疱疹病毒2型 糖蛋白d 基因序列
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鸡传染性喉气管炎病毒gD基因在重组痘病毒中表达及其免疫效力
11
作者 杨明凡 崔保安 +3 位作者 陈红英 张素梅 魏战勇 李祥瑞 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期90-94,共5页
将鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)河南长葛株gD基因重组到鸡痘病毒基因组中,获得了能高效表达糖蛋白D的重组鸡痘病毒(rFPV-gD)。将rFPV-gD经皮下刺种途径接种30日龄的固始鸡,用ILTV商品弱毒疫苗经滴鼻、点眼途径免疫试验鸡,同时设非免疫对... 将鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)河南长葛株gD基因重组到鸡痘病毒基因组中,获得了能高效表达糖蛋白D的重组鸡痘病毒(rFPV-gD)。将rFPV-gD经皮下刺种途径接种30日龄的固始鸡,用ILTV商品弱毒疫苗经滴鼻、点眼途径免疫试验鸡,同时设非免疫对照鸡群。分别于免疫后7、14、21、28、35和42 d采血分离血清,用微量血清中和试验测定ILTV抗体效价,并于免疫后42 d用ILTV强毒攻击所有试验鸡只。血清中和抗体检测结果表明:疫苗对照组与重组病毒组差异不显著(P>0.05),而重组病毒组和疫苗对照组与空白对照组相比差异均显著(P<0.05)。免疫42 d攻毒后鸡的发病情况表明,重组病毒组和疫苗对照组对ILTV强毒攻击的保护率均为96.67%,而空白对照组为6.67%,说明该重组病毒作为弱毒疫苗能够抵抗ILTV强毒的攻击,对免疫鸡群有较好的保护作用。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 Gd基因 重组病毒 免疫效力
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马立克氏病病毒(MDV)糖蛋白D基因的分离克隆、定序及其在大肠杆菌中的表达 被引量:1
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作者 段玉友 崔治中 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期544-550,共7页
用聚合酶链式反应(PCR)技术,从马立克氏病病毒(MDV)GA株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)基因组DNA中扩增出MDV糖蛋白D(gD)抗原基因1209bp编码序列。将该PCR扩增产物于EcoRI和KpnⅠ位点克隆进... 用聚合酶链式反应(PCR)技术,从马立克氏病病毒(MDV)GA株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)基因组DNA中扩增出MDV糖蛋白D(gD)抗原基因1209bp编码序列。将该PCR扩增产物于EcoRI和KpnⅠ位点克隆进pUC18质粒载体中。将gD重组pUC18质粒DNA用Digoxigenin(Dig)标记后,在Southernblot中,该探针能识别MDV基因组DNA的BamHI-A克隆中的A片段DNA(含gD全基因)。重组质粒序列分析结果表明,MDVGA株gD与MDVRB1B株gD在DNA和氨基酸序列组成上略显差异。将gD基因从重组的pUC18质粒中切出,插入表达性质粒pEZZ18载体中的葡萄球菌A蛋白(SPA)的信号肽基因的下游。对含gD重组pEZZ18质粒插入序列进行部分测序,结果表明,gD阅读框与pEZZ18中SPA信号肽的阅读框是吻合的。gD重组pEZZ18质粒在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达gD,即gD与SPA的信号肽(14000)相连。根据SPA的信号肽可与IgG结合的特性,用兔IgG结合的Sepharose4B制备的亲和凝胶柱来纯化表达的gD融合蛋白。纯化的表达产物经SDS-PAGE鉴定后,? 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 糖蛋白d 聚合酶链式反应 克隆
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Immune Responses in Mice Injected with gD Plasmid DNA of Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus
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作者 LIJi-chang TONGGuang-zhi QIUHua-ji 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2004年第1期87-89,共3页
The gene encoding gD of isolate Luojing of infectious bovine rhinotracheitis virus(IBRV)was amplified, sequenced, and cloned into plasmid pcDNA 3.1, resulting in a recombinant pcDNA-gD. Groups of BALB/c mice were inj... The gene encoding gD of isolate Luojing of infectious bovine rhinotracheitis virus(IBRV)was amplified, sequenced, and cloned into plasmid pcDNA 3.1, resulting in a recombinant pcDNA-gD. Groups of BALB/c mice were injected with 100 μg of plasmid only or together with liposome. After immunization, serum samples were collected from mice every 2 weeks for a 10-week period and tested for protein-specific antibody with enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA). It was showed that the plasmid encoding IBRV glycopretein D developed gene-specific antibody. This report indicates the potential of DNA injection as a method of vaccination. 展开更多
关键词 IBRV glycoprotein d gene gene vaccination ELISA
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Ⅰ型单纯疱疹病毒gD基因片段的高效表达及抗原性分析
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作者 易俊波 雷明军 +2 位作者 陈少娟 黄德新 李凌云 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期49-53,共5页
目的:获得高表达的I型单纯疱疹病毒(HSV)被膜糖蛋白gD(简称gD1)基因的工程菌。方法:通过计算机分析,筛选出疱疹病毒gD1中优势抗原决定簇的基因片段。将克隆的基因片段插入表达载体pTrxA内,转化大肠杆菌Rosetta,以异丙基βD硫代半乳糖苷... 目的:获得高表达的I型单纯疱疹病毒(HSV)被膜糖蛋白gD(简称gD1)基因的工程菌。方法:通过计算机分析,筛选出疱疹病毒gD1中优势抗原决定簇的基因片段。将克隆的基因片段插入表达载体pTrxA内,转化大肠杆菌Rosetta,以异丙基βD硫代半乳糖苷诱导表达。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分析表达产物。结果:PCR扩增出约930bp的gD1编码基因目的片段,与预期片段大小相符,经测序鉴定无基因突变。所构建pTrxAgD1重组表达质粒阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致。含有pTrxAgD1重组质粒的大肠杆菌Rosetta诱导后得到了高效表达,SDSPAGE显示表达产物约48kDa。免疫印迹结果表明表达产物具有较好的抗原性。结论:成功构建了pTrxAgD1表达质粒,实现了成熟gD1蛋白在大肠杆菌中的高效表达,表达产物具有好的抗原性。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 糖蛋白gd 基因克隆 质粒表达
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鸭瘟病毒gD基因胞外区的原核表达及ELISA检测方法的建立与应用 被引量:4
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作者 范薇 程安春 +2 位作者 汪铭书 隋丽华 孙岩松 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期488-494,共7页
为研究分离鉴定的鸭瘟病毒gD基因(GenBank登录号:EU195085)及其编码蛋白的应用,采用PCR方法从鸭瘟病毒CHv毒株DNA中获取编码gD胞外区基因729bp片段,构建重组表达载体pET32a-gD,转化受体菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组gD蛋白。结... 为研究分离鉴定的鸭瘟病毒gD基因(GenBank登录号:EU195085)及其编码蛋白的应用,采用PCR方法从鸭瘟病毒CHv毒株DNA中获取编码gD胞外区基因729bp片段,构建重组表达载体pET32a-gD,转化受体菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组gD蛋白。结果显示,该重组蛋白分子质量约为31ku,为gD胞外区与载体6个组氨酸的融合表达产物,与gD胞外区预期大小一致(27.5ku);经离心收集菌体,超声裂解后,SDS-PAGE分析结果显示,gD蛋白主要以包涵体形式表达;将包涵体溶解后进行Ni-NTA亲和层析可较好地纯化重组蛋白。Western-blot检测显示,gD蛋白能与兔抗鸭瘟病毒血清特异结合,具有较好的免疫反应性。利用该蛋白建立了ELISA检测方法,优化了该方法的各个反应条件,并进行了初步应用,为该方法的临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 Gd基因 原核表达 酶联免疫吸附试验
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传染性喉气管炎病毒gD基因重组禽痘病毒的制备、纯化及初步鉴定 被引量:1
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作者 杨明凡 崔保安 +2 位作者 陈红英 王学斌 魏战勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期351-353,共3页
目的制备传染性喉气管炎病毒(ILTV)gD基因重组禽痘病毒,并进行纯化及初步鉴定。方法将含有ILTV河南长葛株gD基因的禽痘病毒转移载体转染禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞,采用蓝色蚀斑筛选纯化重组禽痘病毒,并经PCR及间接免疫荧光试验(IFA... 目的制备传染性喉气管炎病毒(ILTV)gD基因重组禽痘病毒,并进行纯化及初步鉴定。方法将含有ILTV河南长葛株gD基因的禽痘病毒转移载体转染禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞,采用蓝色蚀斑筛选纯化重组禽痘病毒,并经PCR及间接免疫荧光试验(IFA)进行鉴定。结果经过5轮蚀斑筛选纯化,获得1株重组禽痘病毒rFPV-ILTV-gD,其PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,可见约1400bp的ILTVgD特异性条带。IFA检测显示重组禽痘病毒中的ILTVgD基因得到了表达。结论已成功制备并纯化了ILTVgD基因重组禽痘病毒,为预防ILT提供了新的途径。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 Gd基因 重组禽痘病毒
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