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表达EB病毒主要膜蛋白gp350/220的非复制型重组痘苗病毒的构建 被引量:10
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作者 魏滨 谷淑燕 +2 位作者 李燕 郭斐 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期29-33,共5页
利用非复制痘苗病毒质粒载体 pNEOCK11β75及 pNEOCK ,改造了表达EB病毒主要膜蛋白 gp35 0 /2 2 0的复制型重组痘苗病毒VMA ,构建了非复制型重组痘苗病毒VMAΔCK。该病毒能在鸡胚原代成纤维细胞 (CEF)中正常繁殖 ,而在人源细胞中不能正... 利用非复制痘苗病毒质粒载体 pNEOCK11β75及 pNEOCK ,改造了表达EB病毒主要膜蛋白 gp35 0 /2 2 0的复制型重组痘苗病毒VMA ,构建了非复制型重组痘苗病毒VMAΔCK。该病毒能在鸡胚原代成纤维细胞 (CEF)中正常繁殖 ,而在人源细胞中不能正常繁殖。在CEF中连续传代至第 2 5代 ,经PCR证明 ,该病毒符合非复制型重组痘苗病毒的特征。经免疫荧光及免疫酶斑法证实 ,VMAΔCK可稳定表达gp35 0 /2 2 0 ,且表达水平与VMA无明显差异。VMAΔCK经腹腔免疫Balb/C小鼠 ,4周后能诱生一定水平的抗 gp35 0 /2 2 0特异性抗体 ,加强免疫 2周后该抗体水平明显升高。这一结果类似于VMA免疫Balb/C小鼠的结果。初免后 ,VMAΔCK免疫组抗痘苗抗体水平明显低于VMA免疫组 ;加强免疫 2周后 ,两组小鼠的抗痘苗抗体水平趋于一致。上述结果证明 ,所构建的非复制痘苗病毒不影响目的抗原的表达 ,也不影响该抗原的免疫原性 ,但导致病毒毒力下降 ,而且用该病毒免疫小鼠后小鼠抗痘苗病毒载体的免疫反应明显下降。 展开更多
关键词 Eoskein-Barr病毒 gp350/220 非复制型重组痘苗病毒 体液免疫 膜蛋白
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gp350胞外段基因表达载体的构建与表达
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作者 杨桦 王昶 +5 位作者 郑萍 镡旭民 李红 邓安春 缪书卉 杨菲 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期661-662,664,F0003,共4页
目的构建gp350与C3d融合基因表达载体,并在体外进行表达和鉴定。方法以pGEX-gp350为模板,经PCR获得长846bp的gp350胞外段(25-870),将该扩增片段插入pSG.SS.C3d3.YL载体,构建pSG.SS.gp350.C3d3.YL表达质粒。经限制性内切酶鉴定和DNA序列... 目的构建gp350与C3d融合基因表达载体,并在体外进行表达和鉴定。方法以pGEX-gp350为模板,经PCR获得长846bp的gp350胞外段(25-870),将该扩增片段插入pSG.SS.C3d3.YL载体,构建pSG.SS.gp350.C3d3.YL表达质粒。经限制性内切酶鉴定和DNA序列测定证实后,将该质粒转染Hela细胞,检测其体外表达。结果免疫细胞化学分析结果表明转染细胞有目的分子的表达。结论构建的重组载体可在真核细胞内正确表达,这为基于gp350的鼻咽癌预防性疫苗下一步的动物实验奠定了基础。 展开更多
关键词 gp350 真核表达 鼻咽癌
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EB病毒膜蛋白gp350对培养CD5^+B细胞产生天然自身抗体的影响
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作者 王琳 刘玉峰 +2 位作者 魏立强 范雪莉 张衍国 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第9期802-804,共3页
目的 :探讨EB病毒膜表面糖蛋白gp35 0是否刺激培养的CD5 + B细胞产生具有天然自身抗体性质的免疫球蛋白 .方法 :无菌采集新生儿脐带血 ,RosetteSepTM法分离总B细胞 ,免疫磁珠分离CD5 + B细胞 ,将分离得到的总B ,CD5 + B和CD5 -B 3组细... 目的 :探讨EB病毒膜表面糖蛋白gp35 0是否刺激培养的CD5 + B细胞产生具有天然自身抗体性质的免疫球蛋白 .方法 :无菌采集新生儿脐带血 ,RosetteSepTM法分离总B细胞 ,免疫磁珠分离CD5 + B细胞 ,将分离得到的总B ,CD5 + B和CD5 -B 3组细胞分别用EB病毒、紫外线照射灭活的EB病毒(UV EBV)、gp35 0及TPA刺激 ,于培养的 1 0~ 30d间 ,每 4d分别留取上清 ,ELISA法检测培养上清中的IgG ,IgM及抗角蛋白自身抗体 (AKautoAb)IgG ,IgM ,阳性对照为健康成人血清 ,阴性对照为未加刺激的培养细胞上清 .结果 :EB病毒感染的3组细胞于培养的第 7日发生转化 ,表现为细胞成团生长 ,体积增大 ,不断增殖 ,1 4d以后的培养上清中IgM ,AKautoAbIgMA值较对照组显著升高 (P <0 .0 1 ) ;紫外线照射灭活的EB病毒、gp35 0刺激的细胞存活 1 5d ,1 4dCD5 + B细胞培养上清中IgMA值高于对照组 (P <0 .0 5 ) ;TPA及未刺激的细胞存活 7d ,培养上清中未检测到免疫球蛋白 .结论 :EB病毒可能通过其膜表面糖蛋白gp35 0刺激培养的CD5 + 展开更多
关键词 EB病毒 gp350 免疫球蛋白 自身抗体
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EB病毒膜糖蛋白gp350研究进展
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作者 张衍国 《国外医学(免疫学分册)》 2003年第3期135-137,共3页
gp3 5 0是EB病毒包膜糖蛋白 ,可与C3d受体CD2 1结合并表现出广泛的生物活性。本文就gp3 5 0蛋白分子功能区、表达系统。
关键词 EB病毒 膜糖蛋白 gp350 研究进展 C3d受体 CD21 分子功能区 表达系统 生物活性
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gp350及gp350-C3d3融合基因真核载体的构建及其免疫功能研究
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作者 宋天喜 曹朝晖 +2 位作者 江伟凡 董世访 杨桦 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期390-393,397,共5页
目的构建EB病毒包膜糖蛋白gp350全长序列及其与3个补体片段C3d串联基因在人体真核细胞中表达的载体,并进行其免疫功能的初步研究。方法将gp350基因序列分别与经BglⅡ和BamHⅠ双酶切的真核表达载体pSG.SS.YL和pSG.SS.C3d3.YL连接,转化后... 目的构建EB病毒包膜糖蛋白gp350全长序列及其与3个补体片段C3d串联基因在人体真核细胞中表达的载体,并进行其免疫功能的初步研究。方法将gp350基因序列分别与经BglⅡ和BamHⅠ双酶切的真核表达载体pSG.SS.YL和pSG.SS.C3d3.YL连接,转化后挑取阳性克隆进行PCR、酶切鉴定并测序;将重组载体利用脂质体法分别转染人类Hela细胞培养16~24 h后,用Western blot及细胞免疫组化染色检测gp350蛋白和gp350-C3d3融合蛋白的表达。结果成功构建含gp350全长基因序列的载体pSG.SS.gp350.YL和pSG.SS.gp350.C3d3.YL,并能够转染人类Hela细胞;经细胞免疫组织化学染色及Westernblot蛋白检测转染组均能常规水平表达,对照组则无该蛋白表达,但两转染组的表达量无明显差异。结论构建成功含有gp350的2个真核表达质粒并能够在人体细胞中表达相应蛋白,为下一步进行检测功能性试验奠定基础。 展开更多
关键词 EB病毒 鼻咽癌 gp350 DNA疫苗
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EB病毒gp350/220抗原T-B联合表位生物信息学预测 被引量:1
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作者 彭菁 李蓓 吴移谋 《中南医学科学杂志》 CAS 2020年第3期292-296,共5页
为预测EB病毒(EBV)gp350/220抗原T-B联合表位,采用在线软件IEDB和SYFPEITHIT分别预测gp350/220抗原B细胞表位和T细胞表位,寻找该抗原B细胞和T细胞共同的区域即T-B联合表位。gp350/220抗原存在潜在的T-B联合表位区域:28-43、49-55、59-64... 为预测EB病毒(EBV)gp350/220抗原T-B联合表位,采用在线软件IEDB和SYFPEITHIT分别预测gp350/220抗原B细胞表位和T细胞表位,寻找该抗原B细胞和T细胞共同的区域即T-B联合表位。gp350/220抗原存在潜在的T-B联合表位区域:28-43、49-55、59-64、69-79、85-91、99-111、119-129、135-144。本文运用生物信息学方法确定了gp350/220分别存在5个T细胞抗原表位﹑6个B细胞表位和3个T-B细胞联合表位区域,为进一步研发gp350/220高价优势表位疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 gp350/220 T-B联合表位 生物信息学
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Gp350-anchored extracellular vesicles: promising vehicles for delivering therapeutic drugs of B cell malignancies
7
作者 Huiqing Xiu Xi Nan +9 位作者 Danfeng Guo JiaoliWang Jiahui Li Yanmei Peng Guirun Xiong Shibo Wang Changjun Wang Gensheng Zhang Yunshan Yang Zhijian Cai 《Asian Journal of Pharmaceutical Sciences》 SCIE CAS 2022年第3期462-474,共13页
Although chimeric antigen receptor-modified(CAR)T cell therapy has been successfully applied in the treatment of acute B lymphocytic leukemia,its effect on Burkitt lymphoma(BL)and chronic B lymphocytic leukemia(B-CLL)... Although chimeric antigen receptor-modified(CAR)T cell therapy has been successfully applied in the treatment of acute B lymphocytic leukemia,its effect on Burkitt lymphoma(BL)and chronic B lymphocytic leukemia(B-CLL)is unsatisfactory.Moreover,fatal side effects greatly impede CAR T cell application.Extracellular vesicles(EVs)are excellent carriers of therapeutic agents.Nevertheless,EVs mainly accumulate in the liver when administered without modification.As an envelope glycoprotein of Epstein–Barr viruses,gp350 can efficiently bind CD21 on B cells.Here,gp350 was directly anchored onto red blood cell EVs(RBC-EVs)via its transmembrane region combined with low-voltage electroporation.The results showed that gp350 could anchor to RBC-EVs with high efficiency and that the resulting gp350-anchored RBC-EVs(RBC-EVs/gp350^(Etp))exhibited increased targeting to CD21+BL and B-CLL relative to RBC-EVs.After the loading of doxorubicin or fludarabine,RBC-EVs/gp350^(Etp) had powerful cytotoxicity and therapeutic efficacy on CD21+BL or B-CLL,respectively.Moreover,RBC-EVs/gp350^(Etp) loaded with a drug did not exhibit any apparent systemic toxicity and specifically induced the apoptosis of tumor B cells but not normal Bcells.Therefore,our findings indicate that drug-loaded RBC-EVs/gp350^(Etp) may be adopted in the treatment of CD21+B cell malignancies. 展开更多
关键词 Extracellular vesicles gp350 CD21 Red blood cells B cell malignancies
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一组单克隆抗体对杆状病毒表达的EB病毒gp350的识别是构象依赖性的
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《国际病毒学杂志》 1994年第2期61-61,共1页
一组单克隆抗体对杆状病毒表达的EB病毒gp350的识别是构象依赖性的[英]/[ZhangPF...JGenVirol.-1993,74.2171~2179]EB病毒(EBV)的主要膜蛋白gp350能够诱导在体外中和病... 一组单克隆抗体对杆状病毒表达的EB病毒gp350的识别是构象依赖性的[英]/[ZhangPF...JGenVirol.-1993,74.2171~2179]EB病毒(EBV)的主要膜蛋白gp350能够诱导在体外中和病毒的感染性的抗体,是EBV疫苗的-... 展开更多
关键词 单克隆抗体 杆状病毒表达 EB病毒 gp350 依赖性 重组蛋白质 糖苷化 构象 免疫斑点 免疫印迹法
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EB病毒对脐带血细胞产生免疫球蛋白的影响
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作者 王琳 王映梅 +2 位作者 刘玉峰 魏立强 张衍国 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期1-3,17,共4页
探讨EB病毒是否使培养的脐带血B细胞、CD5+B细胞产生免疫球蛋白及具有天然自身抗体性质的免疫球蛋白。无菌采集新生儿脐带血,RosetteSepTM法分离全B细胞,免疫磁珠分离CD5+B细胞,将分离得到的全B,CD5+B,CD5-B三组细胞分别用EB病毒、紫外... 探讨EB病毒是否使培养的脐带血B细胞、CD5+B细胞产生免疫球蛋白及具有天然自身抗体性质的免疫球蛋白。无菌采集新生儿脐带血,RosetteSepTM法分离全B细胞,免疫磁珠分离CD5+B细胞,将分离得到的全B,CD5+B,CD5-B三组细胞分别用EB病毒、紫外线照射灭活的EB病毒(UVEBV)、TPA刺激,于培养的第10~30d,每间隔4d分别留取上清,ELISA法检测培养上清中的IgG,IgM及抗角蛋白自身抗体(AKautoAb)IgG,IgM,阳性对照为健康成人血清,阴性对照为未加刺激的培养细胞上清。EB病毒感染的3组细胞于培养的第7d发生转化,14d以后的培养上清中IgM,AKautoAbIgMOD值较对照组显著升高(p<0.01);UVEBV刺激细胞存活15d,其第14d的CD5+B细胞培养上清中IgMOD值高于对照组(p<0.05);TPA及未刺激的细胞存活7d,培养上清中未检测到免疫球蛋白。可见,EB病毒能使培养的脐带血B细胞、CD5+B细胞产生可能具有天然自身抗体性质的免疫球蛋白。 展开更多
关键词 EB病毒 gp350 免疫球蛋白 天然自身抗体
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EB病毒体外诱导CD5^+B细胞产生IL-6及免疫球蛋白的意义 被引量:1
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作者 王琳 夏汝山 +2 位作者 刘玉峰 魏立强 张衍国 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期288-290,共3页
目的 观察EB病毒 (Epstein Barrvirus,EBV)及其膜表面糖蛋白 35 0 (gp35 0 )对分离的脐带血CD5 + B细胞产生IL 6和免疫球蛋白的影响。方法 无菌采集新生儿脐带血 ,RosetteSepTM法分离总B细胞 ,免疫磁珠分离CD5 + B细胞 ,用EBV及纯化的... 目的 观察EB病毒 (Epstein Barrvirus,EBV)及其膜表面糖蛋白 35 0 (gp35 0 )对分离的脐带血CD5 + B细胞产生IL 6和免疫球蛋白的影响。方法 无菌采集新生儿脐带血 ,RosetteSepTM法分离总B细胞 ,免疫磁珠分离CD5 + B细胞 ,用EBV及纯化的gp35 0刺激细胞 ,ELISA法检测培养上清液中的IL 6和免疫球蛋白IgG、IgM ,对照为未加刺激的培养细胞上清液。结果 CD5 + B细胞于刺激的第 2 4h开始分泌IL 6 ,OD值较对照组显著升高 (P <0 .0 1) ;EBV刺激的CD5 + B细胞 13d以后的培养上清液中能检测到免疫球蛋白IgM和抗角蛋白自身抗体 (AKautoAb)IgM ;gp35 0刺激的CD5 + B细胞存活 15d ,其第 13、15天的细胞培养上清液中能检测到免疫球蛋白IgM ;未刺激的细胞存活 7d ,培养上清液中未检测到IL 6和免疫球蛋白。结论 EBV可能通过其膜表面糖蛋白gp35 0刺激培养的CD5 + B细胞产生IL 6和具有天然自身抗体性质的免疫球蛋白。 展开更多
关键词 EB病毒 EB病毒膜表面糖蛋白350 免疫球蛋白 白细胞介素-6
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试用“悠悠游” F350 GPS
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作者 曹楠 莽超 《汽车与运动》 2007年第5期119-119,共1页
“悠悠游F350”是一款由汽车电子用品的专业提供商——飞戈电子推出的GPS导航产品,该机外形设计小巧,手持与车载使用都非常方便。虽然个头不大,可“肚子”里包容万象,SiRF
关键词 F350 GPS
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