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黄颡鱼源维氏气单胞菌Aha和gyrB基因双重PCR检测方法的建立 被引量:6
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作者 朱成科 刘桂嘉 +6 位作者 张争世 李明朔 雷骆 王建 邓星星 周朝伟 郑宗林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期810-814,共5页
为建立一种快速、准确检测黄颡鱼源维氏气单胞菌(A.veronii)的方法,本研究根据A.veronii菌株RC110724黏附素基因(Aha)和促旋酶B亚单位基因(gyrB)序列设计引物,经条件优化建立了A.veronii的双重PCR检测方法。结果显示该方法可以同时扩增... 为建立一种快速、准确检测黄颡鱼源维氏气单胞菌(A.veronii)的方法,本研究根据A.veronii菌株RC110724黏附素基因(Aha)和促旋酶B亚单位基因(gyrB)序列设计引物,经条件优化建立了A.veronii的双重PCR检测方法。结果显示该方法可以同时扩增出A.veronii 419 bp和745 bp两条特异性的片段,而对嗜水气单胞菌、迟缓爱德华菌、副溶血性弧菌、麦氏弧菌、荧光假单胞菌、金黄色葡萄球菌、柱状黄杆菌、肺炎克雷伯氏菌、无乳链球菌、舒伯特气单胞菌扩增结果为阴性;该方法对A.veronii标准株ATCC35624和RC110724基因组DNA和菌体检测下限分别为6.6×10^(-3)ng/μL和3.2×10~2cfu/mL。利用建立的双重PCR方法对30份临床样品进行检测,结果与细菌传统分离鉴定符合率为100%。同时,双重PCR可以检出菌株RC110724人工感染的黄颡鱼肝、脾和肾组织中的细菌DNA,对肝和脾脏组织的样品检测效果最好。本研究建立的双重PCR检测方法特异性好,具有较高的检测灵敏性,可用于黄颡鱼等A.veronii感染病例的快速诊断和流行病学监测。 展开更多
关键词 维氏气单胞菌 aha基因 gyr B基因 双重PCR 检测
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耐氟喹诺酮类药物的大肠埃希菌gyr A 基因点突变检测 被引量:1
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作者 丁建强 马亦林 +1 位作者 龚正 陈亚岗 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 1999年第1期1-3,共3页
目的:研究大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制。方法:对大肠埃希菌标准菌44302和临床收集的3株对氟喹诺酮类药物高度耐药的大肠埃希菌及1株敏感菌,用PCR方法扩增DNA旋转酶gyrA基因的N末端编码区,并进行克隆和... 目的:研究大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制。方法:对大肠埃希菌标准菌44302和临床收集的3株对氟喹诺酮类药物高度耐药的大肠埃希菌及1株敏感菌,用PCR方法扩增DNA旋转酶gyrA基因的N末端编码区,并进行克隆和序列测定。结果:对氟喹诺酮类药物高度耐药的大肠埃希菌的gyrA基因的序列分析,发现3个导致氨基酸改变的基因点突变:丝氨酸-83→亮氨酸;丙氨酸-84→脯氨酸;天冬氨酸-87→天冬酰氨。结论:对氟喹诺酮类药物高度耐药的大肠埃希菌的DNA旋转酶A亚单位存在着基因点突变。 展开更多
关键词 基因点突变 抗感染药 聚合酶链反应 耐氟喹诺酮类药物 大肠埃希菌 gyr a基因
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GYR和GYP对酵母发酵液中RNA和蛋白质的影响
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作者 甘耀坤 《广西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 1996年第3期66-70,共5页
测定酵母发酵液中核糖核酸和蛋白质的含量表明,在GYR培养基中的发酵液核糖核酸和蛋白质的含量比在GYP发酵液中的含量高,且随着培养天数的延长而逐渐增多,培养4d后,GYR中发酵液的核糖核酸和蛋白质含量分别是GYP含量的... 测定酵母发酵液中核糖核酸和蛋白质的含量表明,在GYR培养基中的发酵液核糖核酸和蛋白质的含量比在GYP发酵液中的含量高,且随着培养天数的延长而逐渐增多,培养4d后,GYR中发酵液的核糖核酸和蛋白质含量分别是GYP含量的3.73倍和1.53倍。 展开更多
关键词 酵母 发酵液 核糖核酸 蛋白质 gyr GYP
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Isolation,Identification and Antibiotics Susceptibility Test of Citrobacter freundii from Procambarus clarkia 被引量:1
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作者 Chen Honglian Song Guangtong +2 位作者 He Jixiang Hou Guanjun Wang Yongjie 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2014年第5期238-241,共4页
This experiment was conducted to clarify species and drug resistance of pathogen from the diseased Procambarus clarkia. Pathogenic bacteria from hepatopancreas of the diseased P. clarkia were examined using convention... This experiment was conducted to clarify species and drug resistance of pathogen from the diseased Procambarus clarkia. Pathogenic bacteria from hepatopancreas of the diseased P. clarkia were examined using conventional methods,and then were isolated. The further tests and analysis of the isolated strain were developed,including the regression experiment to P. clarkia,the morphology,physiological and biochemical characteristics,sequence analysis of their 16 S rRNA and gyr B genes,and the susceptibility test to antibiotics. Large colonies with similar morphology and color were obtained. Strain X120523 was identified as Citrobacter freundii,proved to have strong pathogenicity,and was susceptible to quinolones and aminoglycosides. 展开更多
关键词 Procambarus clarkia Isolation and identification Citrobacter freundii 16S rRNa gene gyr B gene antibiotics susceptibility test
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我国南方地区鱼源气单胞菌不同种类的流行特征 被引量:27
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作者 张德锋 刘礼辉 +4 位作者 李宁求 任燕 林强 石存斌 吴淑勤 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期673-682,共10页
为加深对我国南方地区养殖鱼类中不同种类气单胞菌流行特征的认识,选取2009年至2014年间我国南方地区70口池塘患病的草鱼、鲢鱼、鳙鱼、鲫鱼、鳜鱼、斑点叉尾和乌鳢等15种鱼类体内分离的143株气单胞菌为研究对象,通过细菌生理生化特征... 为加深对我国南方地区养殖鱼类中不同种类气单胞菌流行特征的认识,选取2009年至2014年间我国南方地区70口池塘患病的草鱼、鲢鱼、鳙鱼、鲫鱼、鳜鱼、斑点叉尾和乌鳢等15种鱼类体内分离的143株气单胞菌为研究对象,通过细菌生理生化特征分析以及保守基因gyr B和rpo D的序列测序分析进行病原菌的鉴定,143株气单胞菌中有维氏气单胞菌80株,嗜水气单胞菌40株,简氏气单胞菌9株,舒氏气单胞菌10株和水生气单胞菌4株。调查分析结果表明,近年来我国南方地区养殖鱼类气单胞菌病的病原具有较高的种类多样性,其中维氏气单胞菌(80/143,56%)的出现比例最高,该菌主要感染草鱼、鲢鱼和鳜鱼等;嗜水气单胞菌次之(40/143,28%),其主要感染鳙鱼、团头鲂和斑点叉尾等;简氏气单胞菌(9/143,6%)亦常常在感染的草鱼、鳙鱼、广东鲂和锦鲤等鱼类中检出;目前,舒氏气单胞菌(10/143,7%)的感染宿主则较为单一,仅在患病乌鳢中分离得到该病原;水生气单胞菌(4/143,3%)目前仅在患病美国红鱼中发现。研究结果表明,我国南方地区鱼类气单胞菌败血症主要是由维氏气单胞菌和嗜水气单胞菌感染引起,并且常出现这两种菌的复合感染。本研究将为我国南方地区养殖鱼类气单胞菌病的流行病学分析、疾病预防和治疗奠定理论基础。 展开更多
关键词 气单胞菌 gyr B基因 RPO D基因 流行病学
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海南罗非鱼致病性维氏气单胞菌分离鉴定及药敏特性研究 被引量:26
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作者 李聪 蔡岩 +6 位作者 周永灿 袁卫 曹可 刘海天 谢珍玉 郭伟良 王世锋 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期640-646,共7页
2014年3—5月海南省罗非鱼主养区多个养殖场发生爆发性疾病,从患病尼罗罗非鱼不同组织中分离获得12株优势菌。经人工回归感染试验,从肝脏和脑中分离获得的HN-G-03和HN-B-02菌株具较强的致病力,HN-G-03和HN-B-02菌株对罗非鱼的的半致死... 2014年3—5月海南省罗非鱼主养区多个养殖场发生爆发性疾病,从患病尼罗罗非鱼不同组织中分离获得12株优势菌。经人工回归感染试验,从肝脏和脑中分离获得的HN-G-03和HN-B-02菌株具较强的致病力,HN-G-03和HN-B-02菌株对罗非鱼的的半致死密度分别为7.12×105cfu/尾和1.32×105cfu/尾。经16S rRNA和gyr B基因序列分析,同时结合细菌的形态学特征、生理生化特征,菌株HN-G-03和HN-B-02分别被鉴定为维氏气单胞菌的维氏生物型和温和生物型。体外药物药敏试验结果显示,两株菌均对左氧氟沙星、强力霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、庆大霉素等5种药物高度敏感,对呋喃妥因等3种药物中度敏感,对青霉素等12种药物较强耐药。 展开更多
关键词 罗非鱼 维氏气单胞菌 16S RRNa gyr B基因 药物敏感性
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副溶血性弧菌实时荧光单引物等温扩增方法的建立 被引量:1
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作者 王建昌 胡连霞 +2 位作者 段永生 李静 王金凤 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1212-1218,共7页
以副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)gyr B基因特异序列为靶序列,设计RNA-DNA组合引物和链终止序列,优化反应体系,建立实时荧光单引物等温扩增(Real-time fluorescence single primer isothermal amplification,实时荧光SPIA)检测... 以副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)gyr B基因特异序列为靶序列,设计RNA-DNA组合引物和链终止序列,优化反应体系,建立实时荧光单引物等温扩增(Real-time fluorescence single primer isothermal amplification,实时荧光SPIA)检测副溶血性弧菌的方法。实时荧光SPIA在40 min反应时间内,对3株副溶血性弧菌和16株其他食源性致病菌进行实时荧光SPIA检测,结果表明除3株副溶血性弧菌外,其他细菌均未扩增出荧光曲线。进一步研究表明,实时荧光SPIA检测副溶血性弧菌纯培养DNA的灵敏度为8.2 fg/μL,对副溶血性弧菌菌悬液的检测灵敏度为13.5 CFU/m L;对鳕鱼、海蟹、牡蛎和咸鸭蛋等4种模拟样品中副溶血性弧菌的检出限均为14.7 CFU/g。研究结果表明,实时荧光SPIA检测副溶血性弧菌灵敏度高,特异性强,耗时短,方法简便。 展开更多
关键词 实时荧光单引物等温扩增 副溶血性弧菌 gyr B基因
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某铁矿中白钨的综合回收试验研究 被引量:2
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作者 薛香恒 《中国矿业》 北大核心 2010年第12期68-70,共3页
对某铁矿磁选尾矿中白钨矿进行了探索性选矿试验研究。试验表明:采用碳酸钠作pH调整剂,水玻璃做抑制剂,GYR作为捕收剂,闭路浮选获得含WO3品位61.92%,回收率74.82%的指标。该工艺流程所获指标较高,且工艺流程稳定可靠、药剂制度简单、生... 对某铁矿磁选尾矿中白钨矿进行了探索性选矿试验研究。试验表明:采用碳酸钠作pH调整剂,水玻璃做抑制剂,GYR作为捕收剂,闭路浮选获得含WO3品位61.92%,回收率74.82%的指标。该工艺流程所获指标较高,且工艺流程稳定可靠、药剂制度简单、生产易于实现。 展开更多
关键词 白钨矿 gyr 闭路浮选 综合回收
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黄瓜白粉病的生防细菌筛选及鉴定 被引量:10
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作者 李卫利 何鹏飞 +2 位作者 吴毅歆 祁超 何月秋 《中国农学通报》 2015年第16期160-165,共6页
为开发黄瓜白粉病的生防资源,与三七根腐病菌、禾谷镰刀菌和柑橘炭疽病菌进行平板对峙培养,从25株黄瓜根际土细菌和91株烟草内生细菌中筛选出具拮抗功能的菌株;以盆栽试验从拮抗功能菌株中筛选能够防治黄瓜白粉病的生防菌株;用PCR扩增... 为开发黄瓜白粉病的生防资源,与三七根腐病菌、禾谷镰刀菌和柑橘炭疽病菌进行平板对峙培养,从25株黄瓜根际土细菌和91株烟草内生细菌中筛选出具拮抗功能的菌株;以盆栽试验从拮抗功能菌株中筛选能够防治黄瓜白粉病的生防菌株;用PCR扩增生防菌株的gyr B基因,结合菌株的菌落形态和部分生理生化特征,确定生防菌株分类地位。结果表明,在116株对峙培养细菌中,18株对三七根腐病菌、禾谷镰刀菌和柑橘炭疽病菌有较好拮抗效果。在盆栽试验中,烟草内生菌YN-201490和黄瓜根际菌株WL-1对黄瓜白粉病防效较好,其中YN-201490的1.81×108cfu/m L和WL-1的1.6×108cfu/m L稀释液连续施用3次后的防效分别达64.86%和61.26%。最终YN-201490被鉴定为枯草芽孢杆菌,WL-1被鉴定为解淀粉芽孢杆菌。 展开更多
关键词 黄瓜白粉病菌 生物防治 内生细菌 gyr B基因
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迟缓爱德华氏菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:3
10
作者 杨俊 聂福平 +9 位作者 李应国 张欢 王昱 刘生峰 袁飞 张雷 吴蕊 唐昌杰 陈冉越 王国民 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期953-957,共5页
为建立一种快速、敏感检测迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的方法,本研究根据E.Tarda的促旋酶B亚单位基因(gyr B)保守区设计特异性引物和Taq Man探针,并优化检测反应条件,建立了E.tarda的Taq Man实时荧光PCR检测方法。结果显示... 为建立一种快速、敏感检测迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的方法,本研究根据E.Tarda的促旋酶B亚单位基因(gyr B)保守区设计特异性引物和Taq Man探针,并优化检测反应条件,建立了E.tarda的Taq Man实时荧光PCR检测方法。结果显示,该方法仅对E.tarda的靶基因扩增呈阳性,而对创伤弧菌、福氏志贺氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、单核增生性李斯特菌、肠炎沙门菌、溶藻弧菌、阪崎肠杆菌、大肠杆菌O157、温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、霍乱弧菌等相关致病菌检测结果均为阴性,特异性良好;该方法对E.tarda检测的灵敏度为20 CFU/m L;重复性试验表明,该方法的变异系数在0.95%~2.44%之间,具有良好的重复性。本研究结果表明,建立的E.tarda Taq Man实时荧光PCR方法灵敏、快速、特异性强、重复性好,适用于E.tarda检疫、疫情监测及流行病学调查。 展开更多
关键词 迟缓爱德华氏菌 实时荧光PCR gyr B基因
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结核分枝杆菌喹诺酮类药物耐药与gyr基因突变的初步研究 被引量:1
11
作者 梁庆福 林淑芳 +4 位作者 陈求扬 逄宇 林建 魏淑贞 赵永 《中国预防医学杂志》 CAS 2014年第7期641-643,共3页
目的初步了解福建省结核分枝杆菌分离株喹诺酮类药物耐药性与gyr基因突变的关系。方法对来源于福建省结核病耐药性监测30个监测点纳入的75株耐多药结核分枝杆菌分离菌株,行包含gyrA、gyrB基因喹诺酮类药物耐药决定区(QRDR)序列测定,以... 目的初步了解福建省结核分枝杆菌分离株喹诺酮类药物耐药性与gyr基因突变的关系。方法对来源于福建省结核病耐药性监测30个监测点纳入的75株耐多药结核分枝杆菌分离菌株,行包含gyrA、gyrB基因喹诺酮类药物耐药决定区(QRDR)序列测定,以结核分枝杆菌H37Rv标准株DNA序列为参比序列进行比较分析。结果 75株耐多药结核分枝杆菌中,56株氧氟沙星敏感株均未检测到gyrA基因发生突变,19株氧氟沙星耐药株检测到16株(84.21%,16/19)gyrA基因发生突变,其中9株突变发生在第91位密码子,4株发生在第94位密码子,3株发生在第95位密码子,发现Ser95Asn为新突变类型;所有菌株均未检测到gyrB基因发生突变。结论 gyrA基因突变是耐喹诺酮结核分枝杆菌耐药性的主要分子机制;gyrA基因的突变主要发生在第91位、94位、95位密码子上。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耐药性 喹诺酮 gyr基因 突变
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海洋生境芽孢杆菌HTTAZ10-03菌株的抑菌作用
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作者 周小江 张久明 +1 位作者 史振平 田黎 《农药》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期458-460,共3页
[目的]研究海洋生境芽孢杆菌HTTAZ10-03的抑菌应用潜力。[方法]通过gyr B序列同源性等分析鉴定菌株,96孔板和抑菌率法测试MIC值和抑菌谱,PCR扩增菌株2个重要生防基因,盆栽实验测定菌株对番茄叶霉病和油菜菌核病的防治效果。[结果]HTTAZ1... [目的]研究海洋生境芽孢杆菌HTTAZ10-03的抑菌应用潜力。[方法]通过gyr B序列同源性等分析鉴定菌株,96孔板和抑菌率法测试MIC值和抑菌谱,PCR扩增菌株2个重要生防基因,盆栽实验测定菌株对番茄叶霉病和油菜菌核病的防治效果。[结果]HTTAZ10-03菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),菌株具有与抑菌活性有关的fen D,itu C基因簇,茄链格孢病菌抑菌MIC值为2 m L/L,对番茄灰霉等8种植物病原菌抑制率74.1%~85.4%,番茄叶霉病和油菜菌核病菌的防效为62.1%~63.6%。[结论]芽孢杆菌HTTAZ10-03具有较好的杀菌剂开发潜力。 展开更多
关键词 海洋生境芽孢杆菌 gyr B基因 FEN D与itu C基因 抑菌与防效
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