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DSB修复基因hKu70反义RNA真核表达载体构建
被引量:
1
1
作者
刘起展
庄志雄
+2 位作者
江高峰
何云
杜柳涛
《卫生毒理学杂志》
CSCD
北大核心
2002年第4期197-199,共3页
目的 构建人DNA双链断裂 (DSB)修复基因hKu70反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,为以后的hKu70基因功能和毒理学研究提供实验材料。方法 提取人胚肺成纤维细胞 (HLF)总RNA ,逆转录酶 多聚酶链式反应 (RT PCR)扩增hKu70基因cDNA保守序...
目的 构建人DNA双链断裂 (DSB)修复基因hKu70反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,为以后的hKu70基因功能和毒理学研究提供实验材料。方法 提取人胚肺成纤维细胞 (HLF)总RNA ,逆转录酶 多聚酶链式反应 (RT PCR)扩增hKu70基因cDNA保守序列 ,经与pGEM T载体连接、筛选、克隆、抽提质粒和双酶切后 ,将纯化的hKu70基因cDNA保守序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP C1中 ,筛选、克隆、抽提质粒 ,从而构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K。结果 经RT PCR获得 467bp含限制性内切酶位点的DNA片段 ,T载体克隆后经双酶切、测序 ,确定该片段为hKu70基因cDNA ,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,并双酶切 ,测序确证。结论 成功构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,为建立该基因低表达细胞株。
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关键词
DNA双链断裂
hKn
70
逆转录酶-多聚酶链式反应
修复基因
真核表达载体
反义RNA
DNA损伤
卫生毒理学
下载PDF
职称材料
双链断裂修复蛋白hKu70缺陷细胞株的建立及其生物学特性
被引量:
1
2
作者
刘起展
江高峰
+2 位作者
何云
杜柳涛
庄志雄
《中华劳动卫生职业病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第2期105-107,共3页
目的 建立并鉴定DNA双链断裂 (DSB)修复蛋白hKu70缺陷细胞株 ,并观察该缺陷细胞的某些生物学效应 ,用于hKu70基因功能及职业有害因素对DNA双链断裂修复影响的研究。方法 用构建的hKu70基因反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体 (pEGFP C1 ...
目的 建立并鉴定DNA双链断裂 (DSB)修复蛋白hKu70缺陷细胞株 ,并观察该缺陷细胞的某些生物学效应 ,用于hKu70基因功能及职业有害因素对DNA双链断裂修复影响的研究。方法 用构建的hKu70基因反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体 (pEGFP C1 K)转染人胚肺成纤维细胞 (HLF) ,用蛋白免疫印迹法鉴定转染细胞中hKu70基因的表达水平。同时观察转染细胞生长形态 ,绘制生长曲线 ,软琼脂培养法鉴定恶性程度。结果 pEGFP C1 K载体在转染细胞内可较稳定表达 ,hKu70蛋白缺陷细胞株hKu70基因的蛋白表达水平下降了 42 % ,转染后hKu70蛋白缺陷细胞生长形态、生长速度无明显变化 ,软琼脂培养未见细胞集落。结论 成功建立和鉴定了hKu70蛋白缺陷细胞株 。
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关键词
DNA双链断裂
hku
70
基因
蛋白兔疫印迹法
基因表达
原文传递
题名
DSB修复基因hKu70反义RNA真核表达载体构建
被引量:
1
1
作者
刘起展
庄志雄
江高峰
何云
杜柳涛
机构
中山大学公共卫生学院卫生毒理学教研室
深圳市疾病预防控制中心
出处
《卫生毒理学杂志》
CSCD
北大核心
2002年第4期197-199,共3页
基金
国家自然科学基金资助 (39970 636)
文摘
目的 构建人DNA双链断裂 (DSB)修复基因hKu70反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,为以后的hKu70基因功能和毒理学研究提供实验材料。方法 提取人胚肺成纤维细胞 (HLF)总RNA ,逆转录酶 多聚酶链式反应 (RT PCR)扩增hKu70基因cDNA保守序列 ,经与pGEM T载体连接、筛选、克隆、抽提质粒和双酶切后 ,将纯化的hKu70基因cDNA保守序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP C1中 ,筛选、克隆、抽提质粒 ,从而构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K。结果 经RT PCR获得 467bp含限制性内切酶位点的DNA片段 ,T载体克隆后经双酶切、测序 ,确定该片段为hKu70基因cDNA ,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,并双酶切 ,测序确证。结论 成功构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,为建立该基因低表达细胞株。
关键词
DNA双链断裂
hKn
70
逆转录酶-多聚酶链式反应
修复基因
真核表达载体
反义RNA
DNA损伤
卫生毒理学
Keywords
DNA double\|strand break
hku 70
Reverse transcriptase\|polymerase chain reaction
Repair gene
Eukaryotic expression vector
Antisense RNA
分类号
Q754 [生物学—分子生物学]
R99 [医药卫生—毒理学]
下载PDF
职称材料
题名
双链断裂修复蛋白hKu70缺陷细胞株的建立及其生物学特性
被引量:
1
2
作者
刘起展
江高峰
何云
杜柳涛
庄志雄
机构
中山大学公共卫生学院卫生毒理学教研室
深圳市疾病预防控制中心
出处
《中华劳动卫生职业病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第2期105-107,共3页
基金
国家"973"计划资助项目(2002CB512 90 4 )
国家自然科学基金资助项目(39970 6 36 )
文摘
目的 建立并鉴定DNA双链断裂 (DSB)修复蛋白hKu70缺陷细胞株 ,并观察该缺陷细胞的某些生物学效应 ,用于hKu70基因功能及职业有害因素对DNA双链断裂修复影响的研究。方法 用构建的hKu70基因反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体 (pEGFP C1 K)转染人胚肺成纤维细胞 (HLF) ,用蛋白免疫印迹法鉴定转染细胞中hKu70基因的表达水平。同时观察转染细胞生长形态 ,绘制生长曲线 ,软琼脂培养法鉴定恶性程度。结果 pEGFP C1 K载体在转染细胞内可较稳定表达 ,hKu70蛋白缺陷细胞株hKu70基因的蛋白表达水平下降了 42 % ,转染后hKu70蛋白缺陷细胞生长形态、生长速度无明显变化 ,软琼脂培养未见细胞集落。结论 成功建立和鉴定了hKu70蛋白缺陷细胞株 。
关键词
DNA双链断裂
hku
70
基因
蛋白兔疫印迹法
基因表达
Keywords
DNA damage
RNA,antisense
Blotting,Western
hku 70
gene
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
DSB修复基因hKu70反义RNA真核表达载体构建
刘起展
庄志雄
江高峰
何云
杜柳涛
《卫生毒理学杂志》
CSCD
北大核心
2002
1
下载PDF
职称材料
2
双链断裂修复蛋白hKu70缺陷细胞株的建立及其生物学特性
刘起展
江高峰
何云
杜柳涛
庄志雄
《中华劳动卫生职业病杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003
1
原文传递
已选择
0
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引用分析
参考文献
引证文献
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