端粒酶基因hTRT在胃癌中的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌中端粒酶基因hTRT mRNA表达与临床参数的关系,评价hTRT表达检测在胃癌诊断中的价值。方法用原位杂交的方法检测端粒酶基因hTRT mRNA在胃癌、癌旁组织和胃良性病变中的表达和分布情况。结果57例胃癌中hTRT基因表达阳性率为94.7％(54/57);57例癌旁组织中hTRT基因表达阳性率为0％(0/57);69例胃良性病变中hTRT基因表达阳性率为2.9％(2/69)。胃癌组织中HTRT基因的表达与癌旁组织、胃良性病变比较差异有显著性(P均<0.001)。胃癌组织中hTRT的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移相关(P均<0.05),但与肿瘤分期无相关性(P>0.05)。hTRT表达的阳性分级与淋巴结转移相关(P<0.01)。但与胃癌分化程度和分期无相关性(P均>0.05)。结论端粒酶基因hTRT表达检测在胃癌诊断中可能有一定的价值。

hTRT反义基因转染对肝癌细胞端粒酶亚单位及细胞周期的影响

目的 探讨人端粒酶蛋白催化活性亚单位 (Humantelomerasereversetranscriptase ,hTRT)反义基因转染对HepG2 肝癌细胞株端粒酶亚单位及细胞周期的影响。方法 采用流式细胞仪检测hTRT正义基因转染的HepG2 细胞(HepG2 S)以及hTRT反义基因转染的HepG2 细胞 (HepG2 AS)的细胞周期 ,采用RT PCR法检测上述细胞hTRT、端粒酶RNA(hTR)、端粒酶相关蛋白 1(TP1)以及c myc和bcl 2基因的变化 ,同时采用Westernblot检测hTRT蛋白质的变化。结果 HepG2 AS出现G0 G1 期阻滞 ,增殖指数增加 ,凋亡率亦明显增加 ,进一步研究发现 ,HepG2 AS端粒酶亚单位hTRT在蛋白质和mRNA水平均表达减少 ,而TP1、hTR无明显变化 ,bcl 2和c mycmRNA的表达亦明显下调。结论 hTRT反义基因不仅可以下调HepG2 细胞hTRTmRNA和蛋白质的表达 ,而且可以下调c myc、bcl 2mRNA的表达 ,从而一方面降低端粒酶活性 ,另一方面一定程度增加凋亡细胞的比率 。

胃癌端粒酶活性及端粒酶hTRT表达的研究

目的 :探讨端粒酶活性及端粒酶hTRT表达在胃癌发生及发展中的作用。方法 :分别采用TRAP银染法和RT PCR法对胃粘膜端粒酶活性及端粒酶hTRTmRNA进行检测。结果 :胃癌组织端粒酶阳性率为 1 0 0 % (8/8) ,胃癌前状态组织端粒酶阳性率为 40 % (4/1 0 ) ,浅表性胃炎均为阴性 (0 /9)。胃癌组织hTRTmRNA阳性率为 85 .7% (6/7) ,浅表性胃炎均为阴性 (0 /5 )。结论 :端粒酶激活参与胃癌的形成和发展 ,可能有助于胃癌的早期诊断。胃粘膜端粒酶hTRT表达水平可能反映端粒酶存在和活化的程度。

端粒酶蛋白催化亚基(hTRT)mRNA在口腔鳞癌形成过程中的表达

目的:观察端粒酶催化蛋白基因hTRT在口腔粘膜恶性转化不同阶段中的表达,探讨其与口腔粘膜细胞恶性程度的关系。方法:用原位杂交技术检测82例标本,其中正常口腔粘膜7例、上皮单纯性增生7例、上皮异常增生30例、原位癌8例、口腔粘膜鳞癌30例。结果:正常口腔粘膜、上皮单纯性增生组织中hTRT的mRNA表达较弱,阳性信号仅局限于上皮基底层及副基底层间,阳性率21.4%(3/14);上皮异常增生中hTRTmRNA阳性表达见于多层上皮细胞,并随细胞异形性增高而表达增强,阳性率46.7%(14/30);口腔粘膜鳞癌组织中hTRT的mRNA有较强阳性表达,阳性率81.6%(31/38)。结论:端粒酶hTRT基因的表达与口腔粘膜细胞的恶性程度密切相关。

胃癌及癌前病变中hTRT基因的表达

目的探讨端粒酶基因与胃癌及癌前病变恶性转化的关系及其作用。方法应用原位杂交方法检测端粒酶基因hTRT在121例不同病变胃黏膜组织的表达。结果在慢性浅表性胃炎(CSG),慢性萎缩性胃炎(CAG),胃息肉(GP),残胃(GR),胃溃疡(GU)和胃癌(GC)中端粒酶hTRT的阳性表达率分别为0%,25.00%,0%,7.14%、13.64%和82.14%。结论端粒酶基因hTRT的表达与胃癌前病变的恶性转化密切相关,其重新激活可能在胃癌的发生中起关键作用。

SBHL对HeLa细胞c-myc,H-ras和hTRT基因表达的研究

目的观察澳洲茄胺盐酸盐对HeLa细胞c-myc，H—ras和hTRT基因表达的影响．方法用鼠抗人c-mycMcAb，H-ras McAb和hTRTPcAb作为一抗，生物素化羊抗鼠IgG作为二抗，用免疫组化方法测定澳洲茄胺盐酸盐对HeLa细胞c-myc，H—ms和hTRT基因的表达．结果澳洲茄胺盐酸盐处理的HeLa细胞与对照组相比，c-myc，H-ras和hTRT基因的表达均明显降低（P〈0．05）．结论澳洲茄胺盐酸盐下调HeLa细胞c-myc和H-ras基因的表达，抑制细胞增殖，诱导分化；澳洲茄胺盐酸盐下调HeLa细胞hTRT基因的表达，抑制端粒酶活性，抑制细胞生长．

端粒酶hTRT基因反义寡核苷酸逆转前列腺癌细胞恶性表型的研究

目的 探讨反义技术阻断人类端粒酶催化亚单位 (hTRT)基因表达对前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法 设计、合成异硫氰酸荧光素标记的hTRT基因反义寡核苷酸 (ASODN) ,在脂质体介导下转染前列腺癌细胞系PC3 M ,运用荧光显微镜观察ASODN在癌细胞内的分布 ,MTT比色分析、流式细胞仪、克隆形成实验检测癌细胞体外生长活性 ,RT PCR和PCR ELISA法检测hTRT基因表达及端粒酶活性。结果 0 5～ 2 0 μmol/LASODN转染 12～ 36h后 ,ASODN逐渐聚集于细胞核 ,PC3 M细胞增殖活性抑制 34 1%～ 79 6 % (P <0 0 1) ,细胞周期阻滞于G0 /G1期 ,克隆形成能力抑制 6 1 2 6 % (P <0 0 1) ,hTRTmRNA水平降低 2 4 4 8%～ 86 73% (P <0 0 1) ,端粒酶活性抑制 2 4 74 %～ 76 72 % (P <0 0 1)。结论 运用ASODN阻断hTRT基因表达 ,降低端粒酶活性 。

Inhibiting effect of antisense hTRT on telomerase activity of human liver cancer cell line SMMC-7721

Objective: To induce changes in biological character of human liver cancer cell line SMMC-7721 by blocking the expression of telomerase genes hTRT and to explore its value in cancer gene therapy. Methods: The vehicle for eukaryotic expression of antisense hTRT was constructed and then transfected into SMMC-7721 cells. The effects of antisense hTRT gene on telomerase activity, cancer cell growth and malignant phenotypes were analyzed. Results: The obtained transfectants that could express antisense hTRT gene stably showed marked decrease in telomerase activity; the shortening of telomere was obvious; cells presented contact growth inhibition; in nude mice transplantation, the rate of tumor induction dramatically decreased. Conclusion: Antisense hTRT gene expression can significantly inhibit telomerase activity of cancer cells and decrease malignant phenotypes in vitro and in vivo. Therefore, as a telomerase inhibitor, antisense hTRT gene may be a new pathway for cancer therapy.

反转录病毒介导端粒酶基因对人口腔黏膜角化细胞寿命的影响

目的：以pBABE-tert重组反转录病毒为载体,介导端粒酶反转录酶基因（hTRT）转染体外培养的人口腔角化细胞,探讨端粒酶对细胞寿命的影响。方法：将含有hTRT的pBABE-tert重组反转录病毒载体扩增后,转染体外培养的人口腔角化细胞,挑选阳性克隆进行传代培养,以PCR-ELISA和PCR-PAGE电泳检测端粒酶活性。结果：获得端粒酶活性稳定表达的口腔角化上皮细胞克隆,寿命可延长至8~9代。结论：转导端粒酶反转录酶基因的人口腔角化细胞寿命延长1倍,但不能永生化,说明人口腔上皮角化细胞的永生化是复杂和多点调控的过程,端粒酶活性增加是细胞永生化的关键但不是唯一原因。