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LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2对肺间质细胞增殖、迁移及侵袭的作用 被引量:1
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作者 王春燕 王萍 +2 位作者 宋龙飞 刘永全 满君 《基础医学与临床》 2024年第1期43-50,共8页
目的研究长链非编码RNA FEZ家族锌指1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法将人肺腺癌细胞系A549分为对照组(control)和模型组... 目的研究长链非编码RNA FEZ家族锌指1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法将人肺腺癌细胞系A549分为对照组(control)和模型组[model,用转化生长因子β1(TGF-β1)20 ng/mL作用48 h,诱导成为肺间质细胞]。用Western blot检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的蛋白表达。RT-qPCR检测细胞中lncRNA FEZF1-AS1和EZH2基因表达。转染组细胞分为转染si NC组、si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组和si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZH2组。CCK-8法检测细胞增殖、细胞划痕检测细胞迁移、Transwell小室法检测细胞侵袭;用Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin及EZH2的蛋白表达,用RNA免疫沉淀(RIP)测定FEZF1-AS1与EZH2的直接结合作用。结果与对照组比较,模型组E-cadherin的蛋白表达水平减少(P<0.05);N-cadherin及vimentin的蛋白表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,模型组lncRNA FEZF1-AS1与EZH2基因的表达水平明显升高(P<0.05);与si NC组相比,si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达降低(P<0.05);与si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组比较,si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZHZ组细胞增殖、侵袭、迁移能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达升高(P<0.05);RIP实验进一步证实了lncRNA FEZF1-AS1与EZH2具有结合作用。结论LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2促进肺间质细胞增殖、侵袭、转移和EMT过程。 展开更多
关键词 特发性肺间质纤维化 FEZ家族锌指1-反义RNA 1(FEZF1-AS1) 上皮细胞-间充质转化(EMT) zeste基因增强子同源物2(EZH2) 人非小细胞肺癌细胞系a549
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Differential Transcriptional Responses in Corneal and Lung Epithelial Cells to Seasonal Influenza With Potential Function of LGALS9
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作者 Yang Han Ting Zhang +6 位作者 Dan Bai Changcheng Wu Beiwei Ye Jianfang Zhou Yingze Zhao George F.Gao Jun Liu 《Infectious Microbes & Diseases》 CSCD 2024年第3期141-151,共11页
Seasonal flu,primarily caused by influenza A H1N1 and H3N2 subtype viruses or influenza B viruses,is the most prevalent respiratory tract infection globally and leads to substantial morbidity andmortality annually.Des... Seasonal flu,primarily caused by influenza A H1N1 and H3N2 subtype viruses or influenza B viruses,is the most prevalent respiratory tract infection globally and leads to substantial morbidity andmortality annually.Despite the influenza virus being initially recognized as a respiratory pathogenwithwell-characterized transmission through respiratory droplets,its impact on the ocular epithelium and associated gene expression remains relatively unexplored.In this study,we investigated the transcriptional profiles of immortalized human corneal epithelial cells(HCE-S)and A549 human lung epithelial cells infected with H1N1 and H3N2 influenza virus.In comparison with A549 cells,a reduced number of differentially expressed geneswas observed in HCE-S upon influenza virus infection.Specifically,there was a significant upregulation of the genes IFI44L and OAS1,along with lower release of the CCL5/RANTES protein.Notably,our findings revealed uniquely upregulated LGALS9(encoding galectin-9)in HCE-S following infection with the 2009 pandemic H1N1 virus.Furthermore,targeted knockdown of LGALS9 in these cells resulted in a measurable decrease in viral infection,highlighting its role in the cellular responses to influenza virus and suggesting a novel avenue for antiviral therapy.Overall,our findings provide insight into the distinct mechanisms of influenza virus interactions with different epithelial cells and underscore the importance of studying the ocular surface in understanding influenza pathogenesis. 展开更多
关键词 immortalized human corneal epithelial cell line human pulmonary epithelial cell line influenza A virus transcriptome sequencing LGALS9
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短期机械拉伸加载对人肺腺癌细胞A549细胞的增殖效应
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作者 滕维中 吴文周 +1 位作者 贾建萍 陈维毅 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 2005年第2期67-70,75,共5页
目的测量人肺腺癌细胞株A549对机械拉伸加载的短期响应。方法用加载Flexercell-4000TTM系统在4h内对A549细胞进行正常生理参数范围的应变刺激,并测量细胞的增殖效应。结果细胞的增殖率均有不同程度的提高,增殖响应系数M(%)为:0.5h,M=18%... 目的测量人肺腺癌细胞株A549对机械拉伸加载的短期响应。方法用加载Flexercell-4000TTM系统在4h内对A549细胞进行正常生理参数范围的应变刺激,并测量细胞的增殖效应。结果细胞的增殖率均有不同程度的提高,增殖响应系数M(%)为:0.5h,M=18%;1h,M=22%;4h,M=5%。结论研究证明细胞对短期加载的增殖响应与人成骨细胞特征相似,在1800循环数左右有一峰值,间歇式加载能保持长期高增长率,而过去的研究表明连续加载相反,只会抑制细胞的增长。 展开更多
关键词 人肺腺癌细胞株a549 机械拉伸 增殖响应系数 细胞局域密度
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基于高内涵细胞成像系统研究黄芩苷对人肺癌A549细胞上皮间质转化模型的影响 被引量:6
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作者 徐梦真 许艳 +3 位作者 李媛 陈海红 王栋 朱庆均 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1648-1656,共9页
目的基于高内涵细胞成像系统(HCS)探讨黄芩苷(Baicalin)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法体外培养人肺癌A549细胞,用TGF-β1诱导A549细胞发生上皮间质转化,设立空白对照组(TGF-β1 0 ng... 目的基于高内涵细胞成像系统(HCS)探讨黄芩苷(Baicalin)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法体外培养人肺癌A549细胞,用TGF-β1诱导A549细胞发生上皮间质转化,设立空白对照组(TGF-β1 0 ng·mL^(-1))、TGF-β1模型组(TGF-β1 5 ng·mL^(-1))和黄芩苷干预组(TGF-β1 5 ng·mL^(-1)+黄芩苷5、10、20μmol·L^(-1))。采用MTT法检测黄芩苷对A549细胞活性的影响;以TGF-β1诱导人肺癌A549细胞发生上皮间质转化,并加入不同浓度黄芩苷干预,采用HCS分析细胞肌动蛋白应激纤维(F-actin)纹理强度、细胞面积、细胞圆度和细胞长度等形态学变化,以及细胞黏附能力和运动迁移能力变化;RT-qPCR法检测上皮间质转化相关标志基因Collagen I、FN1、Vimentin和E-cadherin的相对表达量。结果黄芩苷干预A549细胞48 h后半数抑制浓度(IC50)为22.59μmol·L^(-1)。HCS分析结果显示,与空白对照组比较,TGF-β1模型组细胞形态呈间质细胞样(纺锤形)变化,F-actin纹理强度增强(P<0.01),细胞长度和细胞面积增大(P<0.01),细胞圆度减小(P<0.01),黏附率降低(P<0.01),迁移率和迁移速度升高(P<0.01);与TGF-β1模型组比较,黄芩苷干预组细胞形态呈上皮细胞样(不规则多边形)变化,F-actin纹理强度减弱(P<0.05,P<0.01),细胞长度和细胞面积减小(P<0.01),细胞圆度增大(P<0.01),黏附率升高(P<0.01),迁移率和迁移速度降低(P<0.05,P<0.01)。RT-qPCR结果表明,与空白对照组比较,TGF-β1模型组CollagenⅠ、FN1和Vimentin的mRNA相对表达量升高(P<0.01),E-cadherin的mRNA相对表达量降低(P<0.01);与TGF-β1模型组比较,黄芩苷干预组Collagen I、FN1和Vimentin的mRNA相对表达量降低(P<0.05,P<0.01),E-cadherin的mRNA相对表达量升高(P<0.05,P<0.01)。结论黄芩苷能够有效阻止TGF-β1诱导的人肺癌A549细胞上皮间质转化进程,提示HCS是一种多参数系统分析细胞上皮间质转化的有效工具。 展开更多
关键词 黄芩苷 高内涵细胞成像系统(HCS) 人肺癌a549细胞 上皮间质转化(EMT)模型 特发性肺纤维化 形态学 细胞迁移
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百令胶囊上调miR-145-5p逆转TGF-β_(1)/Smad3通路机制初探
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作者 冯平 姬泽萱 +1 位作者 陈丽萍 王布 《中国药业》 CAS 2023年第16期34-40,共7页
目的探讨百令胶囊(BLC)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺损伤的改善作用,以及对香烟烟雾提取物(CSE)作用下人支气管上皮细胞BEAS-2B生长的影响。方法将60只SD大鼠随机分为正常对照组(A组,灌胃生理盐水2 mL),模型组(B组,灌胃生理盐水2... 目的探讨百令胶囊(BLC)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺损伤的改善作用,以及对香烟烟雾提取物(CSE)作用下人支气管上皮细胞BEAS-2B生长的影响。方法将60只SD大鼠随机分为正常对照组(A组,灌胃生理盐水2 mL),模型组(B组,灌胃生理盐水2 mL),BLC组(C组,灌胃BLC 5.5 mg/kg),miR-145-5p inhibitorNC组(D组,灌胃BLC 5.5 mg/kg+尾静脉注射miR-145-5p inhibitorNC 6μL),miR-145-5p inhibitor组(E组,灌胃BLC 5.5 mg/kg+尾静脉注射miR-145-5p inhibitor 6μL),各12只。以香烟烟雾吸入法复制大鼠COPD模型。建模成功后灌胃相应药物或生理盐水(每日1次),尾静脉注射相应药物(每周1次),连续8周。以0(空白对照),3%,5%,10%,20%CSE,以及加5%,10%,20%,40%的BLC药物血清(BLC-S)孵育细胞48 h。检测大鼠潮气量(TV)、呼气峰流量(PEF)、分钟通气量(MV)、用力肺活量(FVC)和第0.3秒用力呼气容积(FEV_(0.3));观察肺组织病理形态;免疫组化法检测Smad3表达水平,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定转化生长因子(TGF)-β_(1)表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-145-5p mRNA表达水平。采用CCK-8法检测细胞活力。结果与B组比较,C组及D组大鼠TV,PEF,MV,FVC,FEV0.3均显著升高;与D组比较,E组大鼠上述指标均显著降低(P<0.05)。与B组比较,C组及D组大鼠肺组织病理形态显著改善,平均肺泡数显著增加,肺泡直径显著减小;与D组比较,E组大鼠肺组织病理形态未改善,且平均肺泡数显著减少,肺泡直径显著增长(P<0.05)。与5%CSE条件比较,5%CSE+20%BLC-S条件下的细胞活力显著增强(P<0.05)。与B组比较,C组及D组大鼠肺组织中Smad3,TGF-β_(1)的表达水平均显著降低,miR-145-5p mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与D组比较,E组大鼠肺组织中Smad3,TGF-β_(1)的表达水平均显著升高,miR-145-5p mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与5%CSE条件比较,5%CSE+20%BLC-S条件下细胞Smad3和TGF-β_(1)的表达水平均显著降低,miR-145-5p mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与5%CSE+20%BLC-S+inhibitor NC条件比较,同水平inhibitor条件下细胞Smad3及TGF-β_(1)表达水平均显著升高(P<0.05)。结论BLC在体内和体外均显示出对香烟诱导COPD的保护作用,其机制可能与上调miR-145-5p水平逆转香烟暴露激活的TGF-β_(1)/Smad3信号通路有关。 展开更多
关键词 百令胶囊 miR-145-5p 慢性阻塞性肺疾病 TGF-β_(1)/Smad3信号通路 大鼠 人支气管上皮细胞BEAS-2B
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周期性机械拉伸对人肺上皮细胞增殖的影响 被引量:5
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作者 张惠静 杨力 +2 位作者 蔡绍皙 卢晓 王远亮 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第8期51-55,共5页
为了研究周期性拉伸应变对人肺上皮细胞DNA合成的影响 ,应用流式细胞术对拉伸应变下的细胞增殖动力学变化进行了分析。结果表明 :在应变为 15 % ,频率为 2 0次 /min、4 0次 /min的拉伸刺激下 ,在 2 4h ,正常人支气管上皮细胞H72 7的增... 为了研究周期性拉伸应变对人肺上皮细胞DNA合成的影响 ,应用流式细胞术对拉伸应变下的细胞增殖动力学变化进行了分析。结果表明 :在应变为 15 % ,频率为 2 0次 /min、4 0次 /min的拉伸刺激下 ,在 2 4h ,正常人支气管上皮细胞H72 7的增殖活性指数明显降低 ,细胞的DNA合成受到显著抑制 ;4 8h后 ,人肺腺癌细胞A5 49的增殖活性明显降低 ,且拉伸时间越长 ,抑制作用越强。提示周期性拉伸应变抑制人肺上皮细胞的增殖。 展开更多
关键词 周期性机械拉伸 人肺上皮细胞 细胞增殖 DNA合成 流式细胞术 细胞周期
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植物雌激素通过缺氧诱导因子-1α与核因子-κB下调缺氧肺泡上皮细胞膜联蛋白A1的表达 被引量:4
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作者 杨娟 李晓栩 +3 位作者 陈建 官立彬 黄瑊 白志川 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第19期2019-2023,共5页
目的从人肺泡上皮细胞甲酰肽受体激动剂——膜联蛋白A1(Annexin A1,AnxA1)的表达变化,探讨植物雌激素影响缺氧肺部炎症浸润的机制。方法人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)接种于60 mm培养皿中常规培养,待培养皿中细胞长满约70%,根据是否用药分为... 目的从人肺泡上皮细胞甲酰肽受体激动剂——膜联蛋白A1(Annexin A1,AnxA1)的表达变化,探讨植物雌激素影响缺氧肺部炎症浸润的机制。方法人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)接种于60 mm培养皿中常规培养,待培养皿中细胞长满约70%,根据是否用药分为:对照组(溶剂DMSO对照)、染料木黄酮(genistein,Gen)组、大豆苷元(daidzein,DD)组,每组细胞再根据是否缺氧再分为常氧组(N)、缺氧组(H)。Gen组、DD组于缺氧处理前分别加入Gen及DD,终浓度均为15μmol/L。缺氧组细胞置于缺氧培养箱(1%O2)24 h。取细胞培养上清及细胞裂解离心上清,结合甲酰肽受体特异性抑制剂tBoc2,通过趋化实验,检测其甲酰肽受体激动活性。用Western blot分析AnxA1、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、核因子-κB(NF-κB)在蛋白水平的变化,用RT2-PCR法分析其mRNA水平的变化。结果缺氧后的细胞冻融上清及培养上清趋化活性显著高于常氧组(P<0.05),而植物雌激素处理后,两种上清的趋化活性均显著高于对照组(P<0.05)。Western blot与RT2-PCR检测结果显示,缺氧组AnxA1在蛋白水平和mRNA水平均高于常氧组(P<0.05),两种植物雌激素不同程度地削弱了缺氧对AnxA1的上调效果,同时对HIF-1α、NF-κB的蛋白水平也产生同样的影响。结论植物雌激素削弱了缺氧对AnxA1基因表达的上调效应,其机制与HIF-1α、NF-κB信号途径有关。 展开更多
关键词 缺氧 肺泡上皮细胞 植物雌激素 膜联蛋白A1
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阿托伐他汀对脂多糖诱导下人肺上皮细胞C反应蛋白表达的影响 被引量:3
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作者 吴尚洁 邢西迁 +2 位作者 甘烨 赵水平 陈平 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期104-108,共5页
目的:探讨阿托伐他汀能否调节脂多糖(LPS)诱导下人肺上皮细胞CRP的表达。方法:对LPS诱导的人肺上皮细胞给予不同浓度的阿托伐他汀干预,同时设置对照组,分别提取细胞RNA,采用RT-PCR方法比较CRP mRNA表达;收集培养上清液,采用ELISA方法比... 目的:探讨阿托伐他汀能否调节脂多糖(LPS)诱导下人肺上皮细胞CRP的表达。方法:对LPS诱导的人肺上皮细胞给予不同浓度的阿托伐他汀干预,同时设置对照组,分别提取细胞RNA,采用RT-PCR方法比较CRP mRNA表达;收集培养上清液,采用ELISA方法比较CRP的浓度。结果:在LPS诱导下,人肺上皮细胞有CRP mRNA的表达及蛋白的分泌,并呈时间和剂量依赖关系;阿托伐他汀明显降低LPS诱导下人肺上皮细胞CRPmRNA的表达及蛋白的分泌,并呈剂量依赖关系。结论:阿托伐他汀能降低LPS诱导的人肺上皮细胞CRP mRNA表达及蛋白分泌,提示阿托伐他汀可能具有直接抗炎作用。 展开更多
关键词 阿托伐他汀 肺上皮细胞 脂多糖 C反应蛋白 慢性阻塞性肺疾病
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阿托伐他汀对脂多糖诱导的人肺上皮细胞分泌PGE_2和IL-6的影响 被引量:8
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作者 吴尚洁 赵水平 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期192-194,共3页
目的 :探讨阿托伐他汀 (atorvastatin)对经脂多糖 (LPS)诱导人肺上皮细胞 (A5 4 9)的炎症细胞因子PGE2 和IL 6分泌的影响。方法 :对LPS诱导的人肺上皮细胞给予不同浓度的阿托伐他汀干预 ,同时设置对照组 ,分别收集其培养上清液 ,采用EL... 目的 :探讨阿托伐他汀 (atorvastatin)对经脂多糖 (LPS)诱导人肺上皮细胞 (A5 4 9)的炎症细胞因子PGE2 和IL 6分泌的影响。方法 :对LPS诱导的人肺上皮细胞给予不同浓度的阿托伐他汀干预 ,同时设置对照组 ,分别收集其培养上清液 ,采用ELISA方法 ,比较PGE2 和IL 6浓度。结果 :①在不同浓度的LPS诱导下 ,肺泡上皮细胞不同时间分泌PGE2 和IL 6浓度明显高于未经LPS诱导的对照组 (P <0 .0 5 )。②阿托伐他汀不同浓度的干预 ,肺上皮细胞PGE2 和IL 6的分泌浓度较无阿托伐他汀干预组均有不同程度的降低 (P <0 .0 5 )。结论 :阿托伐他汀能降低脂多糖诱导的人肺上皮细胞炎症因子PGE2 和IL 6的分泌 。 展开更多
关键词 阿托伐他汀 脂多糖 人肺上皮细胞 炎症细胞因子 前列腺素2 白细胞介素-6
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周期性应变诱导人肺上皮细胞整联蛋白再分布的研究 被引量:2
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作者 张惠静 杨力 +2 位作者 蔡绍皙 卢晓 王远亮 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期421-426,共6页
为了探讨机械拉伸应变对人肺上皮细胞表面整联蛋白α3 、α5和 β1分布的调控作用 ,建立了体外周期性拉伸应变装置 ,并应用胞外基质蛋白———纤连蛋白 (Fn)、胶原蛋白Ⅳ (ColⅣ )裱衬基底膜 ,激光共聚焦显微镜分析了在应变为 15 % ,频... 为了探讨机械拉伸应变对人肺上皮细胞表面整联蛋白α3 、α5和 β1分布的调控作用 ,建立了体外周期性拉伸应变装置 ,并应用胞外基质蛋白———纤连蛋白 (Fn)、胶原蛋白Ⅳ (ColⅣ )裱衬基底膜 ,激光共聚焦显微镜分析了在应变为 15 % ,频率为 4 0次 /min的拉伸刺激下 ,正常人肺上皮细胞H72 7表面α3 、α5和 β1整联蛋白的再分布 .结果表明 :在人肺上皮细胞H72 7中 ,α3 、α5和 β1整联蛋白是对拉伸应变敏感的膜受体 ,周期性拉伸刺激可诱导其激活 ,使之发生分布的重组 ,并向基底层转移 ,形成局部粘附连接 ,增强了整联蛋白受体与其特异性配体的结合能力 .结果提示 :一个有效的局部粘附连接的形成是受体聚集和配体占据共同启动的一个协调反应 ,该反应可能参与了细胞响应机械应力的起始过程 ,可能进一步通过力 化学信号的耦合或张力整合的形式 。 展开更多
关键词 周期性拉伸应变 人肺上皮细胞 整联蛋白 局部粘附连接
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机械拉伸下人肺上皮细胞增殖及整联蛋白再分布 被引量:2
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作者 张惠静 杨力 +2 位作者 蔡绍皙 卢晓 王远亮 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第14期1254-1257,共4页
目的 探讨机械拉伸应变对人肺上皮细胞增殖及其膜受体———整联蛋白α5、β1 再分布的调控作用。方法 建立体外周期性拉伸装置 ,应用流式细胞术测定细胞的增殖活性 ,激光共聚焦显微镜分析整联蛋白α5、β1 再分布。结果 在应变为 15... 目的 探讨机械拉伸应变对人肺上皮细胞增殖及其膜受体———整联蛋白α5、β1 再分布的调控作用。方法 建立体外周期性拉伸装置 ,应用流式细胞术测定细胞的增殖活性 ,激光共聚焦显微镜分析整联蛋白α5、β1 再分布。结果 在应变为 15 % ,频率为 2 0次 min、40次 min的拉伸刺激下 ,2 4h后 ,细胞的增殖活性指数明显降低 ,H72 7细胞的DNA合成受到显著抑制。在 40次 min的拉伸频率下 ,整联蛋白α5、β1 的分布发生重组并向基底层转移 ,形成局部粘附连接。结论 整联蛋白α5、β1 展开更多
关键词 机械应力 人肺上皮细胞 整联蛋白 粘着斑
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异钩藤碱上调miR-192-5p对TNF-α诱导的人支气管上皮细胞凋亡和炎症因子释放的作用及其机制 被引量:4
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作者 侯从岭 芦晓帆 +2 位作者 雷小婷 李彬 赵润杨 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期595-607,共13页
目的:探讨异钩藤碱(IRN)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人支气管上皮细胞(16HBE)凋亡和炎症因子释放的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:采用不同浓度[(0(对照组)、2.5、5.0、10.0、20.0、30.0和40.0μmol·L^(-1)]IRN处理16HBE... 目的:探讨异钩藤碱(IRN)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人支气管上皮细胞(16HBE)凋亡和炎症因子释放的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:采用不同浓度[(0(对照组)、2.5、5.0、10.0、20.0、30.0和40.0μmol·L^(-1)]IRN处理16HBE细胞24 h后,采用20 mg·L^(-1)TNF-α处理细胞18 h。将16HBE细胞分为对照组、TNF-α组(20 mg·L^(-1))、IRN组(20μmol·L^(-1))、TNF-α+IRN组(20 mg·L^(-1)TNF-α和20μmol·L^(-1)IRN)、TNF-α+IRN+miR-192-5p inhibitor组(20 mg·L^(-1)TNF-α、20μmol·L^(-1)IRN和50 nmol·L^(-1)miR-192-5p inhibitor)以及TNF-α+IRN+pcDNA3.1 CXCR5组[20 mg·L^(-1)TNF-α、20μmol·L^(-1)IRN和2μmol·L^(-1)pcDNA3.1-C-X-C趋化因子受体5(CXCR5)]。采用CCK-8法检测各组16HBE细胞活性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组16HBE细胞中miR-192-5p和CXCR5 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组16HBE细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、Bcl-2、Cleaved-Caspase3、CXCR5以及磷酸化的p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、c-Jun和核因子-κB(NF-κB)p65蛋白表达水平,ELISA法检测各组16HBE细胞上清液中IL-1β和MCP-1水平,流式细胞术检测各组16HBE细胞凋亡率,TargetScan7.1网站预测靶基因并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-192-5p与CXCR5之间的靶向结合关系。结果:与对照组比较,不同浓度TNF-α组细胞活性明显降低(P<0.05);与对照组组比较,5.0、10.0、20.0和30.0μmol·L^(-1)IRN组细胞活性升高(P<0.05)。与对照组比较,TNF-α组16HBE细胞中miR-192-5p和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),IL-1β、MCP-1、Cleaved-Caspase-3、p-p38、p-JNK、p-c-Jun和p-NF-κBp65蛋白表达水平,细胞凋亡率以及上清液中IL-1β和MCP-1水平明显升高(P<0.05);与TNF-α组比较,TNF-α+IRN组16HBE细胞中miR-192-5p和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05),IL-1β、MCP-1、Cleaved-Caspase-3、p-p38、p-JNK、p-c-Jun和p-NF-κBp65蛋白表达水平,细胞凋亡率以及上清液中IL-1β和MCP-1水平明显降低(P<0.05);与TNF-α+IRN+NC inhibitor组比较,TNF-α+IRN+miR-192-5p inhibitor组16HBE细胞中miR-192-5p和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),IL-1β、MCP-1、Cleaved-Caspase-3、p-p38、p-JNK、p-c-Jun和p-NF-κBp65蛋白表达水平,细胞凋亡率以及上清液中IL-1β和MCP-1水平明显升高(P<0.05)。与NC mimic和NC inhibitor组比较,miR-192-5p mimic组16HBE细胞中CXCR5 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),miR-192-5p inhibitor组16HBE细胞中CXCR5mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,TNF-α组16HBE细胞中CXCR5蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),上清液中IL-1β和MCP-1水平明显升高(P<0.05);与TNF-α组比较,TNF-α+IRN组16HBE细胞中CXCR5蛋白表达水平明显降低(P<0.05),细胞活性明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),上清液中IL-1β和MCP-1水平明显降低(P<0.05);与TNF-α+IRN+pcDNA3.1组比较,TNF-α+IRN+pcDNA3.1 CXCR5组16HBE细胞中CXCR5蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),上清液中IL-1β和MCP-1水平明显升高(P<0.05)。结论:IRN能减轻TNF-α诱导的人支气管上皮细胞凋亡和炎症因子释放,其作用机制可能与miR-192-5p/MAPKs/NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 异钩藤碱 慢性阻塞性肺疾病 支气管上皮细胞 miR-192-5p C-X-C趋化因子受体5
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TLR基因在人肺腺癌细胞和支气管上皮细胞中的表达 被引量:1
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作者 喻钧 潘铁成 +4 位作者 魏翔 李军 潘友民 刘立刚 胡敏 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期282-285,共4页
目的探讨Toll样受体家族(Toll-like receptors,TLRs)基因在人肺腺癌细胞(A549细胞)和人支气管上皮细胞(HBE细胞)中的表达及意义。方法通过GenBank网站查找基因全序列,根据引物设计原则应用软件Primer 5.0设计TLR2、TLR3、TLR9和内参β-a... 目的探讨Toll样受体家族(Toll-like receptors,TLRs)基因在人肺腺癌细胞(A549细胞)和人支气管上皮细胞(HBE细胞)中的表达及意义。方法通过GenBank网站查找基因全序列,根据引物设计原则应用软件Primer 5.0设计TLR2、TLR3、TLR9和内参β-actin引物。体外培养A549细胞和HBE细胞,提取细胞总RNA并逆转录得到cDNA,采用实时定量荧光PCR检测TLRs基因mRNA在这2种细胞中的表达。琼脂糖凝胶电泳检测各扩增产物片段大小。采用Western blot检测TLR2、TLR3、TLR9蛋白的表达。结果 TLR2、TLR3、TLR9基因在A549细胞中的表达丰度均比在HBE细胞中高(P<0.01)。琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物符合预期片段大小。TLR2、TLR3、TLR9蛋白在A549细胞中的表达相对值分别为(0.472 8±0.010 3)、(0.319 3±0.011 2)和(0.856 9±0.007 9),而在HBE细胞中的表达相对值分别为(0.258 5±0.005 7)、(0.160 7±0.003 0)和(0.699 1±0.010 0),A549细胞中TLR2、TLR3、TLR9表达的相对值均高于HBE细胞(均P<0.01)。结论 TLR2、TLR3、TLR9基因在A549细胞中的表达高于HBE细胞,提示TLRs基因可能参与人肺腺癌的发生发展。 展开更多
关键词 TOLL样受体 人肺腺癌细胞 人支气管上皮细胞 基因表达
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支气管上皮中GULP1蛋白的表达与慢性阻塞性肺疾病严重程度的关系研究 被引量:5
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作者 张扬帆 郝尧 《临床肺科杂志》 2018年第4期670-673,共4页
目的探讨支气管上皮中GULP1蛋白的表达与慢性阻塞性肺疾病患者严重程度的关系。方法选取2015年1月-2016年1月期间我院收治的100例慢性阻塞性肺疾病患者作为研究对象,设为观察组,根据其疾病进展分为轻中度组(n=64)和重度组(n=36),选取同... 目的探讨支气管上皮中GULP1蛋白的表达与慢性阻塞性肺疾病患者严重程度的关系。方法选取2015年1月-2016年1月期间我院收治的100例慢性阻塞性肺疾病患者作为研究对象,设为观察组,根据其疾病进展分为轻中度组(n=64)和重度组(n=36),选取同期非慢性阻塞性肺疾病患者作为对照组(n=50),比较不同组患者的GULP1蛋白表达阳性率,并对GULP1蛋白表达与慢阻肺分级以及肺泡巨噬细胞数量相关性进行分析。结果观察组患者支气管上皮中GULP1蛋白的表达阳性率(69.0%)显著高于对照组(2.0%)(P<0.05);重度组患者的支气管上皮中GULP1蛋白的表达阳性率(97.2%)显著高于轻中度组(53.1%)(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示支气管上皮中GULP1蛋白的表达评分与慢阻肺分级呈显著正相关(r=0.145,P=0.003);Spearman相关性分析结果显示慢阻肺患者支气管上皮中GULP1蛋白的表达与肺泡巨噬细胞数量呈显著正相关(r=0.432,P=0.015)。结论慢阻肺疾病患者支气管上皮中GULP1蛋白的表达水平显著增加,且与疾病的严重程度呈正相关,GULP1蛋白参与慢阻肺疾病调控过程可能与肺泡巨噬细胞相关,值得进一步深入研究。 展开更多
关键词 支气管上皮 GULP1蛋白 慢性阻塞性肺 肺气肿 肺泡巨噬细胞
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机械拉伸对人肺上皮细胞粘附及[Ca^(2+)]i的影响
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作者 张惠静 秦建 +3 位作者 蔡绍皙 卢晓 王远亮 杨力 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期953-956,共4页
目的 探讨周期性拉伸应变对人肺上皮细胞H72 7的力学性质及其 [Ca2 + ]i的调控作用。方法 应用微管吸吮系统测定细胞与基底间的粘附力和细胞的铺展面积 ,用荧光探针Fluo 3 /AM测定拉伸应变对人肺上皮细胞H72 7[Ca2 + ]i的影响。结果... 目的 探讨周期性拉伸应变对人肺上皮细胞H72 7的力学性质及其 [Ca2 + ]i的调控作用。方法 应用微管吸吮系统测定细胞与基底间的粘附力和细胞的铺展面积 ,用荧光探针Fluo 3 /AM测定拉伸应变对人肺上皮细胞H72 7[Ca2 + ]i的影响。结果 在应变为 15 %,频率为 40次 min的拉伸刺激下 ,与其静态对照组相比 ,细胞与基底间的粘附力和细胞的铺展面积均增加 ;拉伸 5min后 ,[Ca2 + ]i比对照组有明显增加 ,用三七总皂苷阻断胞内Ca2 + 离子通道后 ,细胞对应变的响应仍表现出 [Ca2 + ]i的升高 ,但与未加三七总皂苷的实验组相比 ,[Ca2 + ]i响应应变后的升高由原来的 3 .4倍的增加降低为 1.5倍的增加。结论 在人肺上皮细胞H72 7响应周期性拉伸应变的过程中 ,[Ca2 + ]i的升高既有胞外钙内流的参与 ,也有胞内钙库的释放作用 。 展开更多
关键词 拉伸 人肺上皮细胞 粘附 胞内钙
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卡介苗对人肺腺上皮细胞表达Fall-39 mRNA及抗菌活性的影响
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作者 朱玲 冯云 +2 位作者 黄宁 王伯瑶 陈嘉钰 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期618-621,649,共5页
目的 探讨卡介苗能否增强 Fall- 39在人肺腺上皮 SPC- A- 1细胞中的表达 ,分离鉴定卡介苗刺激作用的有效胞壁蛋白组份 ,并检测其抗菌活性。方法 根据 Gen Bank中人 Fall- 39的 c DNA序列资料 ,设计特异性引物 ,应用 RT- PCR法检测 SPC... 目的 探讨卡介苗能否增强 Fall- 39在人肺腺上皮 SPC- A- 1细胞中的表达 ,分离鉴定卡介苗刺激作用的有效胞壁蛋白组份 ,并检测其抗菌活性。方法 根据 Gen Bank中人 Fall- 39的 c DNA序列资料 ,设计特异性引物 ,应用 RT- PCR法检测 SPC- A - 1细胞 Fall- 39m RNA的表达 ,采用超声破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、SephadexG- 75柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组份 ;采用琼脂糖弥散杀菌法检测 SPC- A- 1细胞培养上清的抗菌活性。结果 卡介苗刺激 SPC- A - 1细胞 Fall- 39m RNA的表达明显增强 ,而且这种诱导增强表达在一定范围内具有刺激物剂量和时间依赖性。卡介苗胞壁蛋白层析所得 6个组份中 ,组份 4 (相对分子质量范围约 2 1~ 2 9× 10 3)诱导 SPC-A- 1细胞 Fall- 39m RNA的表达增强约 8.5倍 ,其培养上清的抗菌活性显著增强。结论  BCG胞壁蛋白是 Fall- 39基因的激活因子 。 展开更多
关键词 人肺腺上皮细胞 FALL-39 诱导表达 卡介苗 MRNA
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CD46、Nectin-4在麻疹病毒感染人肺泡上皮细胞中的作用
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作者 蔡天晶 黎志良 +1 位作者 金凌应 甘云波 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期991-994,共4页
目的:探讨CD46、Nectin-4在麻疹病毒感染人肺泡上皮细胞中的作用。以及CD46和Nectin-4之间的相互作用。方法:分为麻疹病毒感染前处理组和感染后2 h组,均用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理人肺泡上皮细胞,并设对照组。检测细胞内病毒滴... 目的:探讨CD46、Nectin-4在麻疹病毒感染人肺泡上皮细胞中的作用。以及CD46和Nectin-4之间的相互作用。方法:分为麻疹病毒感染前处理组和感染后2 h组,均用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理人肺泡上皮细胞,并设对照组。检测细胞内病毒滴度的变化,采用Western blot和Real-time PCR检测NP蛋白的表达水平,并运用免疫共沉淀检测CD46与Nectin-4的相互作用。结果:与对照组相比,麻疹病毒感染前用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理的人肺泡上皮细胞内麻疹病毒滴度显著降低,分别为对照组的48.03%和49.53%,同时用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理使病毒滴度下降为27.15%,差异均有统计学意义(P<0.01)。然而,在麻疹病毒感染2 h后用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理,人肺泡上皮细胞内麻疹病毒滴度和NP蛋白量未见显著减少。Western blot和Real-time PCR结果与上述结果一致;免疫共沉淀实验显示,CD46与Nectin-4存在相互作用。结论:CD46、Nectin-4在麻疹病毒感染肺泡上皮细胞中起到介导作用,CD46与Nectin-4可能存在协同作用,该作用对麻疹病毒的感染起到了增强效果。 展开更多
关键词 麻疹病毒 人肺泡上皮细胞 CD46 Nectin-4
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脂多糖对人肺泡上皮细胞一氧化氮分泌的影响
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作者 邱容 何正光 +2 位作者 文富强 刘代顺 赵勇 《西部医学》 2008年第3期499-500,共2页
目的探讨脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导人肺泡上皮细胞(A549)一氧化氮(Nitric oxide,NO)分泌的影响。方法对A549给予不同浓度的LPS,分别收集其培养上清液,用硝酸还原法检测NO浓度。结果不同浓度LPS诱导A549,NO分泌量高于未经LPS... 目的探讨脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导人肺泡上皮细胞(A549)一氧化氮(Nitric oxide,NO)分泌的影响。方法对A549给予不同浓度的LPS,分别收集其培养上清液,用硝酸还原法检测NO浓度。结果不同浓度LPS诱导A549,NO分泌量高于未经LPS诱导的对照组,且具有浓度、时间依赖性。结论LPS诱导A549NO的分泌,提示LPS具有诱导肺泡上皮细胞急性炎症和氧化应激的作用。 展开更多
关键词 肺泡上皮细胞(a549) 脂多糖 一氧化氮(NO)
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基于Notch通路研究化痰降气胶囊含药血清对人支气管上皮细胞MRP1的影响 被引量:2
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作者 李妮妮 蒋成君 +1 位作者 郭艳 汪电雷 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1442-1448,共7页
目的基于Notch通路探讨化痰降气胶囊含药血清对人支气管上皮细胞(16HBE)中多药耐药相关蛋白1(MRP1)表达和外排功能的影响。方法根据血清药理学的方法制备化痰降气胶囊含药血清和空白血清,然后将含药血清分为5%、10%、15%、20%4个浓度对1... 目的基于Notch通路探讨化痰降气胶囊含药血清对人支气管上皮细胞(16HBE)中多药耐药相关蛋白1(MRP1)表达和外排功能的影响。方法根据血清药理学的方法制备化痰降气胶囊含药血清和空白血清,然后将含药血清分为5%、10%、15%、20%4个浓度对16HBE细胞进行干预,CCK-8法检测细胞增殖率筛选出最佳作用浓度;细胞分为空白血清组、香烟烟雾提取物(CSE)+空白血清组、CSE+含药血清组、化痰降气胶囊含药血清组、Notch通路抑制剂DAPT+空白血清组、DAPT+含药血清组,用Western Blot法检测各组Notch1、Hes1、MRP1蛋白表达;以5-羧基二乙酸荧光素(5-CFDA)为底物,采用流式细胞术检测细胞内荧光强度的变化评价MRP1的外排功能;免疫荧光法检测Notch1的胞内段(NICD)核移位活性。结果化痰降气胶囊含药血清的最佳作用浓度为15%。与空白血清组比较,含药血清组Notch1、Hes1、MRP1蛋白表达呈浓度依赖性升高(P<0.05,P<0.01),MRP1转运体的外排能力明显提高(P<0.01),细胞核内NICD的荧光强度有所增强;而CSE+空白血清组蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与CSE+空白血清组比较,CSE+化痰降气胶囊含药血清组的Notch1、Hes1、MRP1蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01);与化痰降气胶囊含药血清组比较,DAPT+化痰降气胶囊含药血清组的Notch1、Hes1、MRP1蛋白表达水平均降低(P<0.05,P<0.01),MRP1的外排能力也降低(P<0.01),胞质胞核荧光强度均减弱。结论化痰降气胶囊含药血清可能通过Notch通路上调16HBE细胞中MRP1的表达和外排功能,这可能是其治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的作用机制之一。 展开更多
关键词 化痰降气胶囊含药血清 慢性阻塞性肺疾病 多药耐药相关蛋白1 Notch信号通路 人支气管上皮细胞
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脐带间充质干细胞来源的外泌体通过抑制上皮间质转化缓解肺纤维化 被引量:14
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作者 杨静 胡华钟 +7 位作者 张书勤 姜琳瑞 程远雄 谢浩俊 王小燕 姜交华 王红 张群 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期988-994,共7页
目的研究人脐带间充质干细胞外泌体(hUCMSC-EXOs)的抗纤维化作用及其潜在机制。方法采用随机数字表法将24只C57 BL/6小鼠平均分为4组,6只/组。空白组:气管内注射生理盐水(3 mg/kg);肺纤维化组:气管内注射1.5 mg/mL博来霉素溶液(生理盐... 目的研究人脐带间充质干细胞外泌体(hUCMSC-EXOs)的抗纤维化作用及其潜在机制。方法采用随机数字表法将24只C57 BL/6小鼠平均分为4组,6只/组。空白组:气管内注射生理盐水(3 mg/kg);肺纤维化组:气管内注射1.5 mg/mL博来霉素溶液(生理盐水配成,3 mg/kg);EXOs1组:气管内注射1.5 mg/mL博来霉素溶液(3 mg/kg)和hUCMSC-EXOs(造模第2天尾静脉注射,100μg/250μL);EXOs2组:气管内注射1.5 mg/mL博来霉素溶液(3 mg/kg)和hUCMSC-EXOs(造模第11天尾静脉注射,100μg/250μL)。造模后21 d处死小鼠,取小鼠双侧肺组织,计算肺系数,分别通过HE染色和Masson染色进行肺组织病理学和胶原蛋白沉积检查,ELISA实验检测血清中TGF-β1的表达水平,免疫组化法检测vimentin、E-cadherin和p-Smad2/3的表达水平。在体外A549细胞模型上,CCK8实验观察hUCMSC-EXOs对细胞增殖的影响,Western blotting观察hUCMSC-EXOs对p-Smad2/3、vimentin和E-cadherin的表达水平的影响。结果hUCMSC-EXOs显著降低肺纤维化小鼠的肺系数(P<0.05)、改善肺组织切片胶原沉积和肺组织病理变化,减少小鼠TGF-β1的表达(P<0.05),抑制p-Smad2/3、vimentin的表达而增加E-cadherin的表达,且外泌体一组的治疗效果优于外泌体二组;hUCMSC-EXOs对细胞增殖无明显影响(P>0.05),且可抑制p-Smad2/3、vimentin的表达而促进E-cadherin的表达。结论hUCMSC-EXOs可以通过抑制TGF-β1/Smad2/3信号通路激活的上皮-间质转化而缓解小鼠肺纤维化程度,且在第2天给予缓解效果更加明显。 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞外泌体 肺纤维化 上皮间质转化 TGF-β1/Smad2/3
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