溶血葡萄球菌对抗菌药物的敏感性和mecA基因的检测

目的 了解溶血葡萄球菌的耐药情况 ,以指导临床合理用药。方法 对 133株临床分离的溶血葡萄球菌采用微量肉汤稀释法测定 16种抗菌药物的最低抑菌浓度 (MIC) ,多聚酶链反应 (PCR)法检测mecA基因 ,并与普通药敏试验比较 ,对不相符的菌株进行抑制、诱导试验。结果 133株溶血葡萄球菌对利奈唑胺、万古霉素、去甲万古霉素无耐药 ,对替考拉宁的耐药率为 6 .0 % ;对阿米卡星、异帕米星、米诺环素、利福平、氟氧头孢的耐药性较低 ,耐药率 <2 0 % ;对青霉素、苯唑西林的耐药率 >90 %。除米诺环素、青霉素外 ,住院患者分离菌株的耐药率高于门诊患者分离的菌株。mecA基因阳性率为 90 .2 3% ,且PCR产物经克隆测序证实为mecA特异性产物。对 2株mecA基因阳性而苯唑西林MIC≤ 0 .2 5 μg/ml的菌株进行诱导试验后其MIC≥ 0 .5 μg/ml;对 3株mecA基因阴性而MIC≥ 0 .5 μg/ml的菌株进行抑制试验后其MIC值下降 8倍以上。 结论 溶血葡萄球菌对大多数抗菌药物均有较高的耐药性 ,对糖肽类抗生素的敏感性也在下降 ,需引起临床重视。

MecA基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素耐药中的作用

目的:探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中MecA基因表达水平对β-内酰胺类抗生素耐药的机制与作用。方法:利用头孢西丁纸片法筛选MRSA,提取MRSA细菌RNA,反转录成cDNA,实时荧光PCR检测MecA基因的表达水平;琼脂稀释法检测MRSA对头孢西丁、苯唑西林、万古霉素、利奈唑胺的最低抑菌浓度。结果:40株MRSA分为低水平耐药组(12株)、中水平耐药组(15株)、高水平耐药组(13株)。MecA基因的表达水平在MRSA低水平耐药组、中水平耐药组、高水平耐药组分别为58.87±30.30,363.37±200.05,1257.72±446.63,MRSA对头孢西丁、苯唑西林的耐药率为100.0%,没有检测到对万古霉素、利奈唑胺耐药的MRSA,但40株MRSA万古霉素的90%的细菌被抑制的浓度(MIC90)为2.0μg/mL。结论:MecA基因的表达水平可能与MRSA对β-内酰胺类抗生素耐药程度相关。

MRSA中mecA及femB基因的检测与耐药相关性

研究femB、mecA基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的表达与耐药的关系。运用PCR对MRSA的femB、mecA基因进行检测,MRSA耐药检测采用头孢西丁纸片法。40株金黄色葡萄球菌(下简称金葡菌)通过头孢西丁纸片法,检出30株耐头孢西丁的菌株,通过PCR检测这40株金葡菌mecA基因,30株MRSA全部为阳性,femB基因在30株MRSA中全部表达,而甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)的未表达。结果可见,PCR能快速准确地鉴定MRSA,mecA基因是MRSA的耐药基因,femB基因是MRSA的耐药相关基因。

mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的应用m ecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(m eth ic illin res istan tstaphy lococcus aureus,M RSA)。方法临床分离的70株金黄色葡萄球菌,应用m ecA基因PCR扩增法鉴定M RSA,并与苯唑西林纸片扩散法进行比较。结果70株金黄色葡萄球菌用PCR扩增法和纸片扩散法有6株鉴定有差异,4株m ecA基因阳性而纸片扩散法鉴定为敏感,1株m ecA基因阳性纸片扩散法鉴定为临界耐药,1株m ecA基因阴性却表现为苯唑西林耐药,2种方法符合率为91.43%。结论m ecA基因PCR扩增法可以准确、快速判定M RSA,特别是对隐匿型或低水平耐药菌株的检出有重要的价值。

金黄色葡萄球菌中mecA基因的检测及其耐药相关性

目的探讨mecA基因在临床分离金黄色葡萄球菌(SA)中的表达水平与耐药的关系。方法收集临床分离的SA菌株186株,采用纸片扩散法(K-B法)进行药敏试验,并提取DNA,运用PCR扩增mecA基因。结果耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的检出率为30.65%(57/186),其中56株MRSA和129株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)中有10株检出mecA基因阳性;除对万古霉素、利奈唑胺敏感外,MRSA对其他抗菌药物耐药率均高于MSSA,携带mecA基因的菌株抗菌药物耐药率高于不携带mecA基因的菌株,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SA临床分离菌株中含mecA基因的菌株对多种抗菌药物耐药,可见mecA基因在SA的耐药机制中发挥着重要作用。

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌mecA基因检测分析

目的:调查耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)耐药现状,分析其耐药表型与基因型的关系,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法:收集临床分离的86株凝固酶阴性葡萄球菌,采用头孢西丁纸片法检测耐药表型、聚合酶链反应(PCR)检测mecA基因,并将两种结果进行对比分析。结果:86株凝固酶阴性葡萄球菌中头孢西丁纸片法阳性64株,检出率为74.4%;mecA基因阳性58株,阳性率为67.4%;其中有1株头孢西丁纸片法阴性而mecA基因阳性,7株头孢西丁纸片法阳性而mecA基因阴性。结论:本地区耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌耐药状况严重;头孢西丁纸片法与PCR检测mecA基因一致率90.7%;PCR检测mecA基因可快速准确判定耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌。

mecA、femA基因PCR联合扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 探讨 m ec A、fem A基因 PCR联合扩增快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA )的敏感性及特异性。方法 用纸片扩散法及 m ec A、fem A基因 PCR联合扩增检测 178株葡萄球菌中的 MRSA,并与琼脂稀释法的结果比较。结果 纸片扩散法筛检 MRSA (耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 ,MRCNS)的敏感性、特异性分别为 94 .4 % (89.5 % )、92 .4 % (73.7% )。在金黄色葡萄球菌中若以 mec A基因阳性为判定 MRSA的指标 ,则敏感性、特异性分别为 91.7%、95 .5 %。在 178株葡萄球菌中若以 mec A、fem A基因阳性作为判定 MRSA的指标 ,特异性提高到 97.9%。结论 PCR m ec A、fem A基因联合扩增既可用于筛检 MRSA,又可免去常规生化鉴定 ,具快速。

头孢西丁纸片法检测mecA基因介导的MRS

目的评价应用头孢西丁纸片扩散法检测mecA基因介导的耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)。方法分别用头孢西丁纸片法扩散法、苯唑西林纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法、VITEK微生物自动分析系统及聚合酶链反应(PCR)mecA基因检测4种方法对MRS进行检测比较,最低抑菌浓度(MIC)测定应用VITEK微生物自动分析系统GPS卡。结果96株葡萄球菌属(金黄色葡萄球菌16株、凝固酶阴性葡萄球菌80株)中苯唑西林纸片法扩散法、苯唑西林琼脂稀释法、VITEK微生物自动分析系统3种方法检出MRS菌株54株(金黄色葡萄球菌2株、凝固酶阴性葡萄球菌52株),而PCR法检出mecA基因48株(金黄色葡萄球菌2株、凝固酶阴性葡萄球菌46株),头孢西丁纸片法扩散法与PCR法一致。结论头孢西丁纸片扩散法与mecA基因检测法高度一致,是筛选和确认mecA基因介导的MRS一种可靠的方法。

用PCR扩增法检测耐甲氧西林葡萄球菌的mecA基因

目的 应用PCR扩增法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的mecA基因。方法 临床分离的 161株葡萄球菌 ,应用PCR扩增法鉴定MRS的mecA基因 ,并与Oxacillin纸片扩散法进行比较。结果 161株葡萄球菌用Oxacillin纸片扩散法和mecA基因法检测MRS有 4株菌有差异 ,mecA基因法鉴定阴性而Oxacillin纸片扩散法鉴定为耐药株 ,3株纸片扩散临界耐药 ,mecA基因法鉴定阳性 ,两种方法的符合率是96 89%。结论 mecA基因检测技术可以准确、快速判定MRS ,特别是在鉴定纸片扩散法临界耐药株具有优势。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MecA基因的实时荧光定量PCR方法学评价

目的 评估实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测临床标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）MecA耐药基因的价值。方法 选择该院2013年6~12月125份临床标本,包括血液40份,痰液52份,创面分泌物33份进行FQ-PCR检测和细菌鉴定,分析结果符合率,以检测FQ-PCR的灵敏度及特异性。结果 FQ-PCR的灵敏度为0.159pg/μL,检测经细菌培养鉴定的菌株,特异性达到100%,与临床标本结果符合率为97.6%。结论 FQ-PCR检测MRSA的MecA基因更加方便、快速,且灵敏度和特异性等性能指标均比较理想,与细菌鉴定结果符合率较高,适合临床广泛应用。

Nuc和mecA基因在金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性检测中的初步应用

目的为获得金黄色葡萄球菌对甲氧西林的耐药信息,评估通过PCR扩增nuc基因、mecA基因检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。方法收集获得63株临床分离鉴定的金黄色葡萄球菌,采用传统药敏检测方法进行菌株药敏测试;再用PCR方法检测菌株是否携带nuc基因和mecA基因,以传统药敏检测结果为参照,评估用PCR扩增技术检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。结果 1.样本菌株中有24株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphyococcus aureus,MRSA),39株为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(Methicillin-sensitive Staphyococcus aureus,MSSA)。来自重症医学科的分离株中MRSA数量较多。2.样本菌株nuc基因携带率为85.7%,其中nuc基因在MRSA菌株中的携带率为87.50%,在MSSA菌株中携带率为84.62%;3.样本菌株mecA基因的携带率为19.05%,其中MRSA菌株的mecA基因携带率为50.0%,MSSA中均不携带mecA基因。来自重症医学科的MRSA中同时携带mecA基因和nuc基因的比例为77.78%。结论用PCR技术检测nuc基因、mecA基因来快速鉴定金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性可能存在一定比例的误诊结果。

浙江、江西地区MRSA耐mecA、qacA/B基因检测

目的了解浙江、江西地区临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(meticillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)中mecA基因及qacA/B基因存在状况. 方法在2004年1～12月间分别从浙江、江西地区住院患者中分离到42株和31株MRSA,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析技术检测mecA基因及qacA/B基因. 结果 73株MRSA中mecA基因均为阳性(100%),qacA/B基因34株(46.6%)阳性,其中浙江地区qacA/B基因阳性率为52.4%,江西地区为38.7%. 结论浙江、江西地区临床分离的MRSA中mecA基因和qacA/B基因携带率很高或较高.

耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因的LAMP检测方法研究

mecA是耐甲氧西林葡萄球菌携带的耐药基因。本实验根据克隆的mecA基因序列,在保守区设计了一套环介导等温扩增(LAMP)引物,通过条件优化,建立了耐甲氧青霉素mecA基因LAMP检测方法,其最佳工作条件为:甜菜碱浓度为0.8 mol/L,Mg2+浓度为20 mmol/L,反应温度63℃,时间50 min。此方法可在60 min左右完成对mecA基因的检测,特异性好,mecA基因的LAMP检测灵敏度比PCR高100倍。对38株葡萄球菌分离株的mecA基因的检测表明,阳性携带率为44.7%。

医院获得性金黄色葡萄球菌mecA基因的表达及耐药性分析

目的分析医院获得性金黄色葡萄球菌(HA-SA)中mecA基因的表达和耐药性。方法收集2015年5月至2016年8月在郑州大学第五附属医院治疗的HA-SA肺炎患者中分离出的金黄色葡萄球菌(SA),应用聚合酶链反应(PCR)对HA-SA进行mecA基因扩增,采用纸片扩散法(K-B法)测定12种抗菌药物的耐药情况。结果分离出HA-SA 70株,其中医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HA-MRSA) 57株,mecA基因均阳性;医院获得性甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(HA-MSSA) 13株,有3株携带mecA基因。HA-MRSA和HA-MSSA对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺均敏感,对复方新诺明耐药率相近,分别为61.4%和51.6%。对青霉素、苯唑西林、头孢西丁、利福平、庆大霉素、克林霉素、红霉素、左氧氟沙星耐药率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MRSA在HA-SA肺炎患者中发病率高。HA-MRSA的耐药性高于HA-MSSA。mecA基因在HA-SA对β-内酰胺类药物耐药中起主要作用。

安徽池州地区金黄色葡萄球菌MecA基因的检测及耐药性分析

目的利用PCR技术扩增池州地区金黄色葡萄球菌(SA)mecA基因,同时分析其耐药性并探讨两者的关联。方法临床各科室送检标本中分离出79株金黄色葡萄球菌,应用西门子Microscan-walkway 96plus鉴定及药敏分析仪进行常规药敏检测,计算耐药率;采用苯唑西林MIC法、头孢西丁MIC法筛选耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA);同时设计特异性引物,采用聚合酶链式反应(PCR)检测Mec A基因,用凝胶成像仪观察结果。结果 79株金黄色葡萄球菌中苯唑西林MIC法阳性33株,头孢西丁MIC法36株,mecA基因扩增阳性36株,MRSA检出率为45.57%(扩增法);发现3株苯唑西林敏感的MRSA。mecA(+)与mecA(–)均未发现万古霉素、利奈唑胺、达托霉素耐药菌株,但对青霉素都高度耐药,两者的差异无统计学意义(P>0.05);MSSA对庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、红霉素、四环素等耐药率均低于MRSA,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论池州地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌已较为常见,其主要耐药机制为携带mecA基因,PCR扩增阳性菌株耐药性明显高于阴性,两者差异有统计学意义。已出现苯唑西林敏感的MRSA(OS-MRSA)。

多重PCR检测临床分离金黄色葡萄球菌lukS/F-PV和mecA基因

目的建立一种新的多重PCR方法,检测临床分离金葡菌的杀白细胞素毒力基因(lukS/F-PV)和甲氧西林耐药基因(mecA)。方法收集我院2006年1—12月从临床多种标本中分离鉴定的不重复金葡菌,应用多重PCR技术,优化反应条件,同时扩增葡萄球菌属特异性基因16S rRNA、金葡菌种特异性基因nuc、lukS/F-PV基因和mecA基因,扩增产物经凝胶成像系统分析。结果217株金葡菌经多重PCR检测,31株是16S rRNA+nuc+lukS/F-PV+mecA基因型,3株是16SrRNA+nuc+lukS/F-PV基因型,135株是16S rRNA+nuc+mecA基因型,40株是16S rRNA+nuc基因型,其中5株仅扩增出16S rRNA基因,3株仅扩增出nuc基因。lukS/F-PV基因和mecA基因测序显示与GenBank中的已有序列具有高度同源性,其阳性率分别为15.7%(34/217)和76.5%(166/217);34株lukS/F-PV基因阳性的分离株中,31株为MRSA,占91.2%(31/34)。结论本方法适用于快速检测和鉴定产杀白细胞素MRSA,lukS/F-PV基因阳性的菌株以MRSA为主,应加强监控。

聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因

建立聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳ．ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）ｍｅｃＡ基因的技术。四种ＤＮＡ提取方法检测灵敏度依次为超声裂解法（５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ）、溶菌酶表面活性剂法（５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ），表面活性剂法（１×１０７ＣＦＵ／ｍｌ）和直接煮沸法（１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ），直接煮沸法具有简便性。引物的正链位于１８１～２００、负链位于３１１～３３０，序列分别为５＇－ＧＡＡＡＴＧＡＣＴＧＡＡＣＧＴＣＣＧＡＴ，５＇－ＧＣＧＡＴＣＡＡＴＧＴＴＡＣＣＧＴＡＧＴ，其扩增产物长度为１５０ｂｐ。五种常见菌证明本法具有较高特异性。苯唑青霉素ＭＩＣ水平与ｍｅｃＡ基因之间具有很好的相关性，ＭＩＣ≥４μｇ／ｍｌ的２２株菌均检出ｍｅｃＡ基因，提示苯唑青霉素常规检测ＭＲＳＡ的可行性。ＰＣＲ方法对于隐匿型耐药株的检出具有重要价值。

PCR及核酸探针检测耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因的研究

为了解耐甲氧西林葡萄球菌在畜禽间的存在情况,试验建立针对mecA基因的PCR方法及地高辛标记核酸探针技术,分别用两种方法对75株葡萄球菌分离株进行检测。结果显示,经PCR方法检出42株耐甲氧西林葡萄球菌,占分离株的56.0%;经核酸探针方法检出47株耐甲氧西林葡萄球菌,占分离株的62.7%,两种方法的总符合率为93.3%。通过研究证实,在畜禽的体表及体内能够分离到耐甲氧西林葡萄球菌,且有较高的分离率,应该引起兽医工作者的足够重视。

MecA、Nuc基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测中的应用

目的通过对180株金黄色葡萄球菌临床分离株MecA、Nuc基因的检测,以期选择出一种适合临床的并能简便、快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的方法。方法细菌鉴定及药敏采用全自动细菌鉴定和药敏分析仪。MecA、Nuc基因检测采用荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)法。结果 FQ-PCR对180株金黄色葡萄球菌MecA、Nuc基因检出率为75.0%,全自动细菌鉴定和药敏分析仪对180株金黄色葡萄球菌的MRSA检出率为72.8%,2种检测方法比较差异无统计学意义(P>0.05)。全自动细菌鉴定和药敏分析仪对MRSA的检测正确率为94.8%。结论 FQ-PCR检测MRSA正确率高,只需要1~2 h即可完成。该方法快速、简便、准确,值得推广应用。

耐苯唑西林乳酸杆菌mecA基因的分析

目的研究耐苯唑西林乳酸杆菌mecA基因的携带情况,分析其与耐药表型的关系,了解携带该基因质粒的可传递性。方法PCR检测mecA基因,双向测序得到基因序列,质粒电转化试验检测其传递性。结果耐受苯唑西林乳酸杆菌中81.6%的基因组总DNA、质粒DNA、质粒p5.8上均扩增出mecA基因序列保守区域,与GenBank中金黄色葡萄球菌的mecA基因、米酒乳杆菌的类mecA基因相似性分别为100%和59%。质粒p5.8成功电转化入乳酸乳球菌MG1363。结论乳酸杆菌苯唑西林的耐药表型与mecA基因的携带情况基本相符,携带耐药基因的质粒可通过人工转化,在部分细菌间水平传递,乳酸杆菌耐受苯唑西林的原因还需进一步探讨。