三阴性乳腺癌患者术前血清miR-218表达水平与术后生存的关系

目的研究三阴性乳腺癌患者术前血清miR-218表达水平及术后生存情况,并分析两者间的关系。方法回顾性分析2021年1月至2022年12月期间焦作市人民医院收治的88例三阴性乳腺癌患者(观察组)的临床资料和术后生存情况,另选取60例经体检合格的健康女性作为对照组。采集三阴性乳腺癌患者术前血清和健康体检者血清并检测其miR-218表达水平;比较不同血清miR-218表达水平三阴性乳腺癌患者的临床病理特征;术后对观察组患者进行1年的随访,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同血清miR-218水平三阴性乳腺癌患者术后的生存情况;采用多因素Cox模型分析三阴性乳腺癌患者术后预后不良的影响因素。结果观察组患者的血清miR-218水平为1.98±0.69,明显低于对照组的3.24±0.93,差异有统计学意义(P<0.05);三阴性乳腺癌患者的年龄、月经状态、分化程度、淋巴结转移、组织学分级等病理特征不会影响患者血清miR-218水平(P>0.05),其血清miR-218水平仅与患者的肿瘤直径和TNM分期有关(P<0.05);三阴性乳腺癌患者术前血清miR-218高水平组1年累计生存率为95.65%(44/46),明显高于血清miR-218低水平组的78.57%(33/42),差异有统计学意义(P<0.05);多因素Cox回归分析结果显示,三阴性乳腺癌患者术前血清miR-218水平、淋巴结转移、TNM分期均是其术后预后的独立危险因素(P<0.05)。结论采用术前血清miR-218表达水平预测三阴性乳腺癌患者的生存情况具有很好的效能,且操作过程更加简便,具有临床应用价值。

miR-218-5p靶向PDE7A调节人非小细胞肺癌A549细胞的糖酵解

目的:探究miR-218-5p靶向磷酸二酯酶7A(PDE7A)调节人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞糖酵解过程的机制。方法:常规培养A549细胞,用Lipo3000将miR-218-5pmimic、mimic-NC、PDE7A过表达质粒(PDE7A-oe)和PDE7A对照质粒(PDE7A-NC)转染A549细胞,记为miR-218-5pmimic组、mimic-NC组、PDE7A-oe组和PDE7A-NC组。qPCR法验证转染效率,WB法检测糖酵解关键酶蛋白的表达,葡萄糖测定法和乳酸生成测定法检测各转染组A549细胞中2脱氧葡萄糖和乳酸含量,双萤光素酶报告基因实验验证miR-218-5p与PDE7A靶向结合关系,用TCGA数据库数据分析PDE7AmRNA在肺癌组织中的表达水平。结果:在A549细胞中成功地过表达了miR-218-5p(P<0.01)。过表达miR-218-5p均能显著抑制A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达(均P<0.01)、葡萄糖摄取量和乳酸生成量(均P<0.01)。过表达PDE7A均可显著促进A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达(均P<0.01),以及葡萄糖摄取量和乳酸生成量(均P<0.01)。A549细胞中miR-218-5p可与PDE7AmRNA的3´-UTR直接结合。数据库数据分析结果显示,PDE7AmRNA在肺鳞状细胞癌组织中呈高表达(P<0.01)。结论:miR-218-5p靶向PDE7A调控A549细胞中HK2和PKM2的表达水平,进而抑制糖酵解过程,miR-218-5p/PDE7A可能是NSCLC临床诊断和治疗的潜在靶点。

CircBICD2调节miR-218-5p/RhoA轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探讨环状RNA(CircRNA)·BICD2调节miR-218-5p/Ras同源基因家族成员A·(RhoA)轴对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western·blot分别检测OSCC组织、癌旁组织、人口腔上皮细胞系HOEC及OSCC细胞系HSC-4、CAL-27、SCC-15中Circ·BICD2、miR-218-5p表达及Rho·A蛋白表达;将SCC-15细胞分为Ct组(A,未转染对照)、si-NC组(B)、si-Circ·BICD2组(C)、miR-NC组(D)、miR-218-5p组(E)、si-Circ·BICD2+anti-NC组(F)、si-Circ·BICD2+anti-miR-218-5p组(G),qRT-PCR检测细胞中Circ·BICD2、miR-218-5p表达;·CCK-8法和平板克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;·Western·blot检测Rho·A、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin表达;双荧光素酶验证Circ·BICD2与miR-218-5p、miR-218-5p与Rho·A的关系。结果:在OSCC组织和细胞中,Circ·BICD2、Rho·A蛋白高表达,miR-218-5p低表达,在SCC-15细胞中miR-218-5p相对表达量最低,Circ·BICD2表达及Rho·A蛋白相对表达量最高(P<0.05)。后续实验取SCC-15细胞为研究对象;与B组比较,C组Circ·BICD2、Rho·A蛋白表达降低,miR-218-5p表达升高(P<0.05);与D组比较,E组miR-218-5p表达上调,Rho·A蛋白表达下调(P<0.05);与C组、F组相比,G组miR-218-5p表达降低,Rho·A蛋白表达升高(P<0.05)。下调Circ·BICD2或过表达miR-218-5p均可抑制SCC-15细胞增殖和EMT,促进细胞凋亡;下调miR-218-5p减弱了沉默Circ·BICD2对SCC-15细胞增殖、EMT的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用;·Circ·BICD2靶向调控miR-218-5p/Rho·A轴。结论:沉默Circ·BICD2可能通过上调miR-218-5p来抑制Rho·A表达,抑制SCC-15细胞增殖、EMT,促进细胞凋亡。

miR-218-5p调控安哥拉兔毛囊毛乳头细胞增殖的研究

本文旨在探讨miRNA-218-5p对兔毛乳头细胞毛囊发育相关基因的影响,为研究家兔毛囊发育中的作用机制提供理论依据。用酶消化法分离兔毛乳头细胞,用MSCM培养基培养毛乳头细胞。将培养的毛乳头细胞分为4组,分别转染miR-218-5p mimics、miR-218-5p mimics NC、miR-218-5p inhibitor、miR-218-5p inhibitor NC。培养48 h后,收集细胞。使用RNA提取试剂盒提取各组RNA,使用RT-qPCR检测各组miR-218-5p的mRNA表达水平和毛囊生长发育相关基因表达水平。使用CCK-8检测各组细胞增殖情况。结果发现,在兔DPCs(Dermal Papilla Cells)中过表达miR-218-5p能够显著上调毛囊生长发育相关基因如CCND1、CTNNB1、LEF1的mRNA表达水平,显著下调TGF-β1、BMP4的mRNA表达水平;敲减miR-218-5p能够显著下调毛囊生长发育相关基因如CCND1、CTNNB1、LEF1的mRNA表达水平,显著上调TGF-β1、BMP4的mRNA表达水平。过表达miR-218-5p后,极显著上调了毛乳头细胞的增殖。敲减miR-218-5p后,极显著下调了毛乳头细胞的增殖。本研究发现,miR-218-5p能上调家兔毛囊生长发育相关基因CCND1、CTNNB1、LEF1的表达水平,下调TGF-β1、BMP4的表达水平,同时具有促进毛乳头细胞增殖的功能。

CircRASSF2靶向miR-218-5p调控胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的研究

背景胃癌是常见的消化道肿瘤,具有较高的发病率和死亡率.环状RNAs(circular RNAs,circRNAs)被认为是多种人类癌症进展的关键调控子,包括胃癌.研究显示circRASSF2作为促癌因子调控癌症进程.然而其在胃癌进展中的作用及潜在分子机制尚不清楚.目的探讨circRASSF2影响胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的分子机制.方法用实时荧光定量PCR分析胃癌组织、癌旁组织及GES-1、HGC-27和AGS细胞中circRASSF2和miR-218-5p的表达;双荧光素酶报告实验分析靶向关系;将HGC-27和AGS细胞分为si-circRASSF2组、si-NC组、miR-218-5p mimic组、miR-NC组、si-circRASSF2+anti-miR-NC组、si-circRASSF2+miR-218-5p Inhibitor组;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐检测细胞抑制率;克隆形成实验检测克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell检测细胞迁移数.结果胃癌组织中circRASSF2表达上升,miR-218-5p表达下降,且二者表达呈负相关(P<0.05);在胃癌HGC-27和AGS细胞中,circRASSF2表达上调,而miR-218-5p表达下调(P<0.05).circRASSF2靶向调控miR-218-5p;敲低circRASSF2或过表达miR-218-5p促进HGC-27和AGS细胞抑制率和凋亡率,而降低克隆形成数和迁移细胞数(P<0.05).下调miR-218-5p可逆转circRASSF2敲低对细胞增殖、迁移、凋亡的影响.结论circRASSF2通过靶向miR-218-5p加速胃癌细胞增殖、迁移、抑制凋亡.

miR-218靶向Wnt2B抑制卵巢癌细胞转移侵袭功能

目的研究miR-218对卵巢癌细胞A2780转移侵袭的影响及可能机制。方法 miR-218mimics转染A2780细胞,实时定量PCR检测转染效率;对转染前后细胞进行划痕及Transwell实验,并采用Western blot分析Wnt2B蛋白表达的改变。采用双萤光素酶报告基因检测系统验证Wnt2B是否为miR-218靶基因。结果 A2780细胞转染miR-218mimics后,细胞运动侵袭功能受到明显抑制,Wnt2B蛋白表达明显下降,其为miR-218直接作用的靶基因。结论 miR-218可能通过靶向Wnt2B抑制卵巢癌细胞A2780的转移侵袭功能。

miR-218表达水平与宫颈癌侵袭转移及预后的关系

目的探讨miR-218与宫颈癌侵袭转移和不良预后因素之间的关系。方法用qRT-PCR的方法检测112例宫颈癌患者和21例正常对照的宫颈组织和外周血中miR-218的表达水平,所得数据结合临床资料进行相关分析。结果 miR-218在宫颈癌组织的表达水平明显低于宫颈正常上皮组织,差异有统计学意义(P<0.001)。miR-218的表达水平与宫颈癌FIGO分期、淋巴结转移、深间质浸润、阴道壁累及、脉管浸润有关。结论miR-218在宫颈癌组织中表达下调,且与宫颈癌侵袭转移和不良预后因素密切相关,提示miR-218在宫颈癌的侵袭转移机制中发挥了重要作用。

miR-218对新藤黄酸抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖作用的影响及机制研究

目的研究miR-218对新藤黄酸抑制人宫颈癌He La细胞增殖作用的影响及其可能的分子机制。方法人宫颈癌He La细胞转染过表达真核表达载体pmiR-218,real-time PCR检测He La细胞miR-218的表达。将He La细胞分为空白对照组、新藤黄酸组、pmiR-218组、质粒对照组、新藤黄酸联合pmiR-218组。MTT法检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测各组细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、E-cadherin表达;real-time PCR检测Bcl-2、Bax和E-cadherin的mRNA表达水平。结果 miR-218真核表达载体pmiR-218转染He La细胞后,细胞内miR-218表达水平明显增加(P<0.05)。miR-218可提高He La细胞对新藤黄酸的敏感性,高表达miR-218能促进新藤黄酸对He La细胞的增殖抑制作用,促进细胞凋亡,下调新藤黄酸对He La细胞Bcl-2/Bax蛋白的表达水平。结论 miR-218可提高He La细胞对新藤黄酸的敏感性,miR-218能增强新藤黄酸对He La细胞增殖抑制作用,并促进He La细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2/Bax的表达有关。

miR-218在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的:研究miR-218在上皮性卵巢癌组织中的表达水平及其与临床病理特征之间的相关性,并进一步探讨miR-218在卵巢上皮性癌细胞株HEY中的表达和生物学功能。方法:采用实时定量PCR法分别检测25例卵巢良性肿瘤、54例上皮性卵巢癌以及卵巢上皮性癌细胞株中的miR-218表达水平,并结合临床病理特征进行分析。采用ROC曲线评价miR-218作为上皮性卵巢癌诊断截断点的可能性。转染miR-218 mimics、miR-218 inhibitor后,采用MTT法检测改变miR-218的表达对卵巢癌细胞增殖的作用。结果:上皮性卵巢癌组织中miR-218表达水平显著高于良性肿瘤组织(P<0.05)。miR-218表达与卵巢癌患者的FIGO分期有关,晚期(Ⅲ、Ⅳ期)高于早期(Ⅰ、Ⅱ期)(P<0.05);但与年龄、分化程度和淋巴结转移无关(P>0.05)。ROC曲线下面积为0.8054(95%CI为0.7140~0.8968),最佳截断点为0.0085。上调miR-218的表达水平可促进卵巢上皮性癌细胞株HEY的增殖能力。结论:miR-218表达的上调可能与上皮性卵巢癌的发生及进展有关。

miR-218-5p靶向VEGFA基因促进宫颈癌HeLa细胞凋亡并抑制迁移

目的探究miR-218-5p靶向VEGFA基因对宫颈癌HeLa细胞凋亡和迁移的影响。方法培养宫颈癌细胞HeLa,细胞分为miR-NC组、miR-218-5p组、si-NC组、si-VEGFA组、miR-NC+pcDNA-VEGFA组、miR-218-5p+pcDNA-VEGFA组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-218-5p和VEGFA mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bax、基质金属蛋白酶(MMP2)、MMP9蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测miR-218-5p和VEGFA的靶向关系。结果与正常宫颈上皮细胞NC104比较,宫颈癌细胞HeLa、CaSki、C33A、SiHa中miR-218-5p表达降低,VEGFA mRNA表达升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,细胞凋亡率升高,细胞迁移数降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-VEGFA组细胞凋亡率升高,细胞迁移数降低(P<0.05)。miR-218-5p靶向调控VEGFA表达,上调VEGFA表达可以逆转miR-218-5p过表达对宫颈癌细胞凋亡和迁移的影响(P<0.05)。结论miR-218-5p靶向VEGFA基因促进宫颈癌HeLa细胞凋亡并抑制迁移。

miR-218对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

背景与目的:miR-218在鼻咽癌组织中表达显著下调。本研究探讨过表达miR-218对人鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:使用脂质体将成熟miR-218序列模拟物(miR-218 mimics)转染人鼻咽癌细胞株5-8F,以无关序列(Scramble mimics)作为阴性对照。采用qRT-PCR技术验证miR-218 mimics转染细胞中miR-218的表达水平;通过MTS法及Transwell侵袭实验观察miR-218过表达对5-8F细胞增殖和侵袭力的影响。结果:在5-8F细胞中,转染miR-218 mimics细胞中miR-218的表达量是Scramble mimics细胞的17倍。过表达miR-218的细胞与对照细胞相比,增殖速度明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,转染miR-218 mimics后,与Scramble mimics细胞相比,5-8F细胞的侵袭力明显减慢(P<0.05)。结论:miR-218能抑制鼻咽癌细胞增殖及侵袭,在鼻咽癌的发生和进展中发挥重要作用。

miR-218-5p靶向EGLN3抑制肺腺癌增殖、迁移和侵袭

目的 微小RNA(microRNAs, miRNA)参与了多种癌症的发生发展,有研究证明微小RNA-218-5p(microRNA-218-5p, miR-218-5p)在癌症的发展中发挥着重要作用。然而,miR-218-5p影响肺腺癌(lung adenocarcinoma, LUAD)发展的具体机制尚未明确。方法 通过癌症基因组图谱(the cancer genome atlas, TCGA)数据分析肺腺癌组织中miR-218-5p的表达情况,实时荧光定量PCR(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测miR-218-5p和EGLN3在人肺正常细胞系和人肺腺癌细胞系中的表达。蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-218-5p对AKT/mTOR信号通路关键蛋白表达的影响以及细胞中EGLN3的蛋白表达。使用生物信息学方法预测并通过荧光素酶报告基因检测证实miR-218-5p与EGLN3的靶向关系。细胞活力和细胞毒性检测(cell counting kit-8, CCK-8)、细胞克隆形成、细胞划痕、Transwell实验检测miR-218-5p与EGLN3对肺腺癌细胞功能的影响。结果 miR-218-5p在肺腺癌中低表达,过表达miR-218-5p可抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭,并抑制AKT/mTOR信号通路的激活。miR-218-5p的下游靶基因EGLN3在肺腺癌中高表达。过表达EGLN3减弱了miR-218-5p过表达对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-218-5p靶向下调EGLN3抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭,这些结果为肺腺癌的新治疗方法和检测手段的开发提供了新的参考依据。

异丙酚通过miR-218抑制人食管鳞癌细胞系KYSE150的侵袭和迁移

目的探讨异丙酚对人食管鳞癌细胞系KYSE150侵袭和迁移的影响及其机制。方法以0、2.5、5和10μg/L异丙酚处理KYSE150细胞,24 h后分别采用Transwell小室法和划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力;RT-qPCR检测细胞中miR-218的表达;Western blot检测HMGB1蛋白的表达;生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因实验检测miR-218和HMGB1的靶向关系,观察miR-218对HMGB1蛋白的调控作用。采用脂质体法转染miR-218抑制剂或pcDNA3.1-HMGB1-GFP过表达载体质粒后,观察miR-218和HMGB1蛋白的表达以及下调miR-218或上调HMGB1表达对10μg/L异丙酚处理的KYSE150细胞侵袭和迁移的影响。结果异丙酚呈浓度依赖性地抑制KYSE150细胞侵袭、迁移和细胞中HMGB1蛋白的表达,并促进miR-218的表达(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实HMGB1是miR-218的靶基因,miR-218可负向调控HMGB1蛋白的表达(P<0.05)。下调miR-218表达可逆转异丙酚对KYSE150细胞侵袭和迁移的抑制作用(P<0.05);同时上调HMGB1表达可逆转异丙酚对KYSE150细胞侵袭和迁移的抑制作用(P<0.05)。结论异丙酚抑制食管鳞癌KYSE150细胞侵袭和迁移,其作用机制可能与miR-218靶向调控HMGB1有关。

miR-218通过下调Bmi-1表达抑制人视网膜母细胞瘤细胞生长

目的:探讨miR-218在人视网膜母细胞瘤中的表达、临床意义及其分子机制。方法:实时定量PCR检测miR-218在视网膜母细胞瘤及瘤旁组织中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。检测miR-218在视网膜母细胞瘤细胞系中的表达,并用miR-218模拟物转染Y79细胞,MTT及流式细胞仪检测Y79细胞的增殖、凋亡情况,RT-PCR和Western-blot法检测Bmi-1 mRNA及蛋白的表达。结果:miR-218在视网膜母细胞瘤组织中的表达水平显著低于对应瘤旁组织;miR-218低表达与神经浸润、分化程度密切相关;miR-218可显著抑制Y79细胞的增殖并促进其凋亡,并下调Bmi-1的mRNA及蛋白表达水平。结论:miR-218在人视网膜母细胞瘤组织中表达下调,并与临床病理相关,miR-218抑制Y79细胞增殖、促进凋亡的作用可能与下调Bmi-1有关。

非小细胞肺癌组织中lncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p的表达及临床意义

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中长链非编码RNA(LncRNA)MNX1-AS1、微RNA(miR)-218-5p表达及临床意义。方法选取2015年1月至2017年1月湖北省中医院诊治的120例NSCLC患者,取术中获取的NSCLC组织和癌旁组织,应用荧光定量PCR检测LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p表达。分析NSCLC组织中LncRNA MNX1-AS1与miR-218-5p的相关性及与临床病理特征的关系。以LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p相对表达量的均值(2.321、1.213)为界分为高、低表达组,分析其对NSCLC患者生存预后的影响。结果NSCLC组织中LncRNA MNX1-AS1表达高于癌旁组织,miR-218-5p表达低于癌旁组织(P<0.05)。LncRNA MNX1-AS1与miR-218-5p呈负相关(r=-0.561,P<0.01)。不同淋巴结转移、肿瘤分期患者LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA MNX1-AS1高表达组生存曲线低于LncRNA MNX1-AS1低表达组,miR-218-5p低表达组生存曲线低于miR-218-5p高表达组(P<0.05)。结论NSCLC组织中LncRNA MNX1-AS1表达升高,miR-218-5p表达降低,两者与患者预后不良有关,可能作为预后评估指标。

miR-218在调控肝癌的形成和发展中的功能

目的探讨miR-218在肝癌形成和发展中的功能。方法将miR-218 mimics转染后肝癌细胞株后,检测其细胞增殖及细胞周期。并构建稳定过表达的miR-218慢病毒载体,感染肝癌细胞后得到稳定细胞株,并通过克隆增生检测其增殖情况。将miR-218稳定表达的肝癌细胞注射到裸鼠背部皮下,通过测定肿瘤体积、重量及免疫组化来评估其对肝癌形成发展的影响。结果miR-218 mimics抑制细胞增殖及引起细胞周期抑制,稳定过表达miR-218抑制肝癌细胞的克隆增生,并且在裸鼠体内异位成瘤,过表达miR-218组显示出较小的肿瘤,显示出其对肿瘤的抑制效果。结论miR-218体内体外抑制肝癌形成和发展。

银椴苷通过调控miR-218/NEDD9轴影响肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡

目的探讨银椴苷对肝癌细胞生物学行为的影响和分子机制。方法采用不同浓度(0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mmol/L)的银椴苷分别处理肝癌细胞Huh748h,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Transwell实验检测细胞活力、凋亡率以及迁移、侵袭能力。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-218和神经元细胞表达发育下调基因9(NEDD9)mRNA的表达水平,蛋白质印迹(Westernblot)检测NEDD9蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Westernblot验证miR-218和NEDD9的靶向调控关系。将miR-218抑制物(anti-miR-218)转染Huh7细胞,检测干扰miR-218表达联合银椴苷处理对Huh7细胞活力、凋亡、迁移和侵袭的影响。结果与空白组比较,银椴苷处理组Huh7细胞活力、迁移和侵袭数、NEDD9mRNA和蛋白表达显著降低,凋亡率、miR-218表达显著升高(均P<0.05)。miR-218可与NEDD9直接结合。过表达miR-218后NEDD9表达水平降低(均P<0.05),干扰miR-218后NEDD9表达水平升高(均P<0.05)。干扰miR-218表达可逆转银椴苷对Huh7细胞增殖、迁移侵袭、凋亡的影响(均P<0.05)。结论银椴苷可诱导肝癌细胞凋亡,抑制其增殖、迁移和侵袭,其机制可能是通过上调miR-218/NEDD9轴实现的。

电穿孔与脂质体lipofectamine转染miR-218进入肝癌细胞效率的比较

目的:比较采用电穿孔和脂质体lipofectamine两种方法转染人肝癌细胞的效率优劣。方法:分别采用电穿孔和脂质体转染miR-218进入人肝癌细胞Hep G2,采用RT-PCR、Western blot、流式细胞仪、Tunel检测等方法比较两种方法的转染后对人肝癌细胞的影响。结果:采用两种方法都可以成功将miR-218转染进人肝癌细胞Hep G2中,降低了Hep G2中miR-218靶基因RNA编辑酶ADAR1的表达,使得细胞凋亡增加,但电穿孔转染组效率更高。结论:电穿孔转染是一种安全、高效的转染方法,值得推广。

过表达miR-218对舌鳞癌细胞系SCC-4和SCC-9的增殖和侵袭的影响

目的:探讨miR-218在舌鳞癌细胞中的表达,以及对细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:在人舌鳞癌细胞系SCC-4和SCC-9中分别转染negative control、miR-218模拟物和抑制剂,然后利用MTT法检测细胞增殖活性;通过流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;通过Transwell实验检测细胞侵袭能力,采用GraphPad 7.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与对照组相比,转染miR-218抑制剂的SCC-4和SCC-9细胞,细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和侵袭能力无显著改变;而转染miR-218模拟物的细胞,增殖能力变弱,凋亡数增加,侵袭能力显著降低。结论:miR-218在口腔癌中的表达量和细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和侵袭能力相关,提示miR-218与口腔癌的发生、发展有一定关系。

miR-218靶向SFMBT1影响肺癌细胞凋亡的研究

目的:探讨miR-218对肺癌细胞凋亡的影响。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞A549、SPC-A1、H322和支气管黏膜上皮细胞16HBE中miR-218表达水平。以A549细胞为研究对象,预测miR-218的靶基因可能为含有4个mbt的Scm相关蛋白(SFMBT1),双荧光素酶报告基因鉴定靶基因,细胞转染miR-218模拟物、模拟物阴性序列、SFMBT1小干扰RNA、小干扰RNA阴性序列,以不处理的细胞为对照,qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞中miR-218和SFMBT1表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:miR-218在肺癌细胞中表达水平明显低于支气管黏膜上皮细胞16HBE,并且A549细胞中miR-218水平最低。miR-218模拟物和野生型的SFMBT1共转染后细胞荧光素酶活性降低。转染miR-218模拟物后细胞中miR-218水平升高,细胞凋亡率升高,细胞中SFMBT1 mRNA和蛋白水平降低。转染SFMBT1小干扰RNA后细胞中SFMBT1 mRNA和蛋白水平降低,细胞凋亡率升高。结论:miR-218可以负调控靶基因SFMBT1的表达促进肺癌细胞凋亡。