HPLC法测定毛杨梅树皮中杨梅醇的研究

研究从毛杨梅树皮中提取杨梅醇的工艺条件及用HPLC法测定其含量的色谱条件。实验数据显示，以甲醇作为溶剂，提取时间45min，提取效率最高，可达4．78％。采用Dima ODS柱（4,6mmx250mm，5μm），流动相为矿，V乙腈：V水=80：20，体系流速为lmL·min^-1，紫外检测器（254nm的检测条件下，以实验室制备的杨梅醇为标准品，在2．552～12、76μg，范围内，相关系数为1.00，平均回收率为100．1％。研究结果表明，该方法简便可行、精密度高，稳定性强、重复性好，可作为毛杨梅资源的进一步合理开发的依据及其质量评价的方法。

杨梅醇对A_(549)、HL-60和HepG_2细胞增殖抑制作用的实验研究

目的:观察杨梅醇体外对人肺腺癌A549、人早幼粒白血病HL-60及人肝癌Hep G2细胞的抑制作用。方法:用3H-TdR掺入法观察杨梅醇体外对A549、HL-60及Hep G2细胞的抑制作用,用倒置显微镜观察细胞形态学改变。结果:杨梅醇对A549、HL-60及Hep G2细胞均有很好的抑制作用,并且具有较好的量效关系。结论:杨梅醇具有很强的抗肿瘤作用。

5-对(间、邻)氟苄氧基杨梅醇体外抗A549作用的实验研究

目的筛选出5-氟苄氧基杨梅醇抗人肺腺癌A549作用强的同分异构体。方法通过3H-TdR掺入法观察5-对(间、邻)氟苄氧基杨梅醇体外对人肺腺癌A549细胞的抑制作用,确定抑瘤效果最好的5-氟苄氧基杨梅醇结构。结果 100、50、25、12.5、6.25、3.125μg/mL 5-对(间、邻)氟苄氧基杨梅醇衍生物抑制率:5-对氟苄氧基杨梅醇衍生物对A549细胞抑制率分别为(100.0±0.0)%、(100.0±0.0)%、(99.5±0.8)%、(80.6±6.7)%、(42.0±5.5)%、(26.5±4.3)%;5-间氟苄氧基杨梅醇衍生物对A549细胞抑制率分别为(100.0±0.0)%、(99.9±0.0)%、(90.6±3.2)%、(49.2±8.5)%、(22.1±3.6)%、(0.7±1.0)%;5-邻氟苄氧基杨梅醇衍生物对A549细胞抑制率分别为(100.0±0.0)%、(100.0±0.0)%、(92.5±4.2)%、(60.2±10.6)%、(10.7±2.3)%、(4.8±2.8)%。5-对(间、邻)氟苄氧基杨梅醇衍生物对A549细胞均有较好的抑制作用,随着浓度的降低,抑制作用减弱,其中5-对氟苄氧基杨梅醇抑瘤效果最好(P<0.01),3.125μg/mL浓度也有较好的抑制作用(P<0.01)。结论 5-对(间、邻)氟苄氧基杨梅醇衍生物对A549细胞均有较好的抑制作用,其中5-对氟苄氧基杨梅效果最好。

杨梅中两种化学成分的结构修饰研究

目的:对从杨梅树皮中分离得到的两种环状二芳基庚烷类化合物杨梅醇和杨梅新醇进行结构修饰。方法:通过甲基化、氧化、乙酰化等结构修饰方法对这两个先导化合物进行结构修饰。结果:合成得到5个二芳基庚烷类衍生物。结论:这些实验为将来对环状二芳基庚烷类化合物进行药理活性筛选并完善这类化合物的构效关系研究提供必要的基础和前提。

5-对氟苄氧基杨梅醇对人肺腺癌A549-Homo BIRC5体内增殖的抑制作用及机制研究

目的 研究5-对氟苄氧基杨梅醇(myricanol 5-fluorobenzyloxy ether,5FEM)对人肺腺癌A549-Homo BIRC5体内增殖的抑制作用及机制。方法 构建A549-Homo BIRC5裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组、溶剂(聚乙二醇400,2.5 mL·kg^(–1))组和5FEM低、中、高剂量(20,40,80 mg·kg^(–1))组,每组8只。各组每日腹腔注射给药,连续5周,每周测量移植瘤体积用于绘制肿瘤生长曲线,实验结束后处死裸鼠,剥离瘤体并称重。TUNEL法检测移植瘤组织细胞凋亡情况;RT-qPCR测定移植瘤组织中Caspase-9、PARP、Bax、Bcl-2和Survivin的mRNA表达水平;ELISA法检测瘤组织中Caspase-9、Survivin和PARP蛋白含量;免疫组化法检测瘤组织中Survivin、Caspase-9、Cleaved caspase-9、PARP和Cleaved PARP蛋白水平。结果 与模型组相比,5FEM(20,40,80 mg·kg^(–1))能够显著减小移植瘤体积和减轻瘤重,呈一定剂量依赖性。TUNEL染色结果显示5FEM干预后肿瘤细胞凋亡较模型组明显增多。RT-qPCR结果显示,5FEM(20,40,80 mg·kg^(–1))可以诱导瘤组织中Caspase-9和Bax的mRNA表达显著升高,并诱导Bcl-2、PARP和Survivin的mRNA表达降低。ELISA结果显示,5FEM(40,80 mg·kg^(–1))可以显著增加瘤组织中Caspase-9蛋白表达量,并显著降低瘤组织中PARP和Survivin蛋白的表达量。免疫组化结果显示,5FEM(80 mg·kg^(–1))处理后瘤组织中Caspase-9、Cleaved caspase-9和Cleaved PARP蛋白表达均显著升高,而PARP和Survivin蛋白表达被不同程度抑制。结论 5FEM可下调Survivin表达,促进Caspase-9和PARP活化,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肺腺癌A549-Homo BIRC5裸鼠移植瘤生长。

杨梅醇对人肝癌HepG2细胞Caspase-9、Bcl-2、p21和Bax表达水平的影响

目的:检测杨梅醇体外对人肝癌Hep G2细胞肿瘤相关基因表达的影响。方法:采用q RT-PCR和Western blot分别检测杨梅醇处理前后Hep G2细胞肿瘤相关基因在m RNA和蛋白质水平的表达变化。结果:杨梅醇降低了Caspase-9和Bcl-2基因和蛋白的表达水平,同时提高了p21基因和蛋白以及Bax蛋白的表达水平。结论:杨梅醇通过下调Caspase-9和Bcl-2基因表达,同时上调p21和Bax基因表达而发挥抑制Hep G2细胞增殖的作用。

青龙衣抗肿瘤有效部位的化学成分研究

目的研究抗肿瘤中药青龙衣（核桃楸Juglans mandshurica未成熟的外果皮）的化学成分。方法采用溶剂萃取,反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、高效液相制备色谱等方法对青龙衣抗肿瘤活性部位即氯仿和醋酸乙酯萃取部位进行分离提纯。依据主要理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果从青龙衣抗肿瘤活性部位中分离鉴定了13个化合物,分别为4（R）-乙氧基-8-羟基-α-四氢萘醌（1）、4（R）-核桃酮（2）、没食子酸乙酯（3）、对羟基苯乙酸甲酯（4）、8-羟基蒽醌-1-羧酸（5）、4（R）,5-二羟基-α-四氢萘酮（6）、杨梅醇（7）、胡桃宁B（8）、5-去氧杨梅酮（9）、5-羟基-1-（4′-羟苯基）-7-（4″-羟基-3″-甲氧基）-3-庚酮（10）、6,5′-二异戊烯基槲皮素（11）、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷（12）、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷（13）。结论化合物3～5,7,9～13为首次从青龙衣中分离得到,首次从胡桃属植物中分离得到了异戊烯基取代黄酮。

杨梅醇与5-对氟苄氧基杨梅醇的制备及其对人肝癌HepG_2细胞活性的影响

目的体外观察杨梅醇与5-对氟苄氧基杨梅醇(myricanol 5-fluorobenzyloxy ether,5FEM)对人肝癌细胞HepG_2活性的影响。方法制备杨梅醇与5FEM,杨梅醇(25,12.5,6.25μg·m L^(-1))、5FEM(25,12.5,6.25μg·m L^(-1))作用于HepG_2细胞,实时细胞分析系统记录96 h细胞指数,观察杨梅醇与5FEM对HepG_2细胞增殖和迁移的影响。结果杨梅醇与5FEM对HepG_2细胞的增殖和迁移均有较好的抑制作用,且呈现较好的量效关系,相等剂量下,5FEM的作用优于杨梅醇。结论杨梅醇与5FEM能有效抑制HepG_2细胞的增殖和迁移。