胰腺癌中p33^(ING1b)基因变化及其表达研究

目的 检测胰腺癌中p33ING1b蛋白表达及基因变化情况,以了解p33ING1b在肿瘤发生过程中的作用。方法 采用免疫组化、聚合酶链反应单链构象多态性技术(PCR SSCP)和杂合型缺失(LOH)技术,检测胰腺癌中p33ING1b表达及p33ING1b基因变化情况。结果 ING1b蛋白的阳性表达率为85% (34/40),SSCP显示在40例病例中仅1例突变,LOH率为60.9% (14/23)。结论 突变与缺失表达并不是p33ING1b的主要失活形式,染色体改变可能导致p33ING1b功能下降,从而引发肿瘤发生。

p33^(ING1b)基因对人结肠癌细胞SW480生物学行为的影响

目的:构建pcDNA3.1(+)/p33ING1b真核表达载体及观察其对人结肠癌细胞SW480生长的影响。方法:构建人p33ING1b真核表达载体,采用脂质体转染方法,将pcDNA3.1(+)/p33ING1b转染人结肠癌细胞系SW480,G418筛选,挑选阳性克隆,阳性克隆经RTPCR及Westernblot鉴定后,通过生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测高表达p33ING1b基因的SW480细胞体外增殖情况,并用流式细胞仪分析细胞凋亡率的改变。结果:成功构建重组pcDNA3.1(+)/p33ING1b基因的真核表达载体,建立高表达p33ING1b基因的SW480细胞系,p33ING1b基因在SW480细胞中高表达后,其生长速度减慢,细胞凋亡率(15.4±1.7)%较空载体组(2.0±0.6)%及未转染组(1.6±0.8)%明显升高。结论:p33ING1b基因高表达对SW480细胞系具有生长抑制和促进凋亡的作用。

p33^(ING1b)真核表达质粒构建及其对胃癌细胞株生长抑制凋亡的作用

目的:构建pCDNA3/p33ING1b真核表达质粒,探讨其对胃癌细胞株的生长抑制、凋亡的作用,探索新型的肿瘤治疗措施与方法。方法:构建pCDNA3/p33ING1b真核表达质粒,将p33ING1b转染至人胃癌细胞SGC-7901,研究其对胃癌细胞产生的作用。结果:重组pCDNA3/p33ING1b真核表达质粒构建成功,经p33ING1b转染的人胃癌细胞株SGC-7901生长速度减慢,融合时间变长,周期S期变短,G0/G1期延长,凋亡增加。结论:重组pCDNA3/P33ING1b质粒能在胃癌细胞SGC-7901细胞内表达,且能抑制胃癌细胞SGC-7901的生长并促进其凋亡。

p33^(ING1b)基因对SW480细胞生长增殖的影响

背景与目的:p33ING1b基因作为一个新的候选抑瘤基因,具有多种生物学功能。本实验旨在研究p33ING1b基因对人结肠癌细胞SW480生长的影响。方法:经Western印迹和免疫细胞化学鉴定,通过生长曲线绘制、软琼脂集落形成实验和流式细胞仪分析检测p33ING1b基因转入对SW480细胞生长增殖以及细胞周期改变和凋亡率方面的影响,并用Western印迹法,检测3组细胞p53、p21WAF1、Bax及Bcl-2蛋白的表达情况,探讨p33ING1b基因抑瘤的可能分子机制。结果:与未转染组(SW480)和空载体组(pcDNA3.1(+)/SW480)相比,p33ING1b蛋白转染组(pcDNA3.1(+)/p33ING1b/SW480)细胞生长增殖速度减慢(P<0.05);软琼脂集落形成率降低(P<0.01);凋亡率增高(P<0.05),而对细胞周期的改变不明显(P>0.05)。p33ING1b基因在SW480细胞中高表达,能有效抑制SW480细胞的生长,并促进其凋亡。Western印迹法分析显示SW480细胞中p33ING1b基因高表达,导致Bax蛋白表达水平升高、Bcl-2蛋白质表达水平降低,差异有显著性(P<0.05);p53及p21WAF1蛋白表达水平稍有升高,但差异无显著性(P>0.05)。结论:高表达外源性p33ING1b基因后,SW480细胞生长增殖速度减慢,凋亡增加,其机制可能与Bax蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调有关。

非小细胞肺癌组织中p33^(ING1b) mRNA表达水平及生物学意义

目的探讨p33ING1b mRNA的表达水平与非小细胞肺癌(Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC)临床病理特征的关系及其在NSCLC发生发展中的可能作用及生物学意义。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测58例NSCLC患者中的癌组织及其癌旁组织p33ING1b mRNA表达水平。结果NSCLC组织中p33ING1b mRNA表达强度(0.408±0.156)低于癌旁组织(0.601±0.326),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组织中p33ING1b mRNA表达水平与病理分级、临床分期、淋巴结转移有密切关系(P<0.05),而与年龄、性别、吸烟与否、组织学类型无关(p>0.05)。结论p33ING1b mRNA低水平表达在NSCLC发生发展过程中起重要作用,P33ING1b低水平表达可作为一个预测NSCLC转移潜能以及不良预后的生物学指标。

ING1b基因蛋白在乳腺癌组织的表达及临床意义

目的 :探讨P33ING1b基因表达与乳腺癌组织学类型、分级及其预后的关系。方法 :应用EVISION免疫组化法 ,检测了 80例乳腺癌标本中P33ING1b的表达。结果 :乳腺癌组及对照组中P33ING1b均阳性表达 ,而乳腺癌组织中阳性表达6 5 % (5 2 / 80 )有明显下降。两组之间有显著性差异 (P <0 0 1)。P33ING1b的表达与ER、PR水平呈正相关 ,与肿瘤大小、腋窝淋巴结有无转移呈负相关 (P <0 0 5 )。结论 :ING1b是抑癌基因 ,其蛋白P33ING1b在乳腺癌中低表达 ,对乳腺癌的发生发展可能起重要作用 。

p33^(ING1b)真核表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的抑制作用

目的 构建pCDNA3/ p33ING1b真核表达质粒并探讨其对肝癌细胞SMMU772 1生长的抑制作用。方法 将 p33ING1bcDNA正反义亚克隆至pCDNA3真核表达载体上 ,并经磷酸钙共沉淀法分别转染至SMMU772 1细胞中。转染后 48h,用 0 .8g/LG41 8筛选出阳性克隆 ,检测转染后细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成率的变化及应用流式细胞仪分析细胞凋亡率的改变。结果 重组 pCDNA3/ p33ING1b正反义表达质粒构建成功。经正义 p33ING1b质粒转染的SMMU772 1细胞生长速度减慢 ,快速增长期比对照组推迟 2d ,软琼脂克隆形成率为 (69.0± 1 2 .0 )‰ ,较转染空载体(90 .0± 1 0 .5)‰及反义表达质粒 (1 4 9.0± 1 5 .0 )‰的SMMU772 1细胞减少 ,细胞凋亡率 (2 2 .53 % )亦比空载体组 (8.95 % )及反义组 (7.75 % )上升。结论 重组pCDNA3/ p33ING1b质粒能在SM MU772 1细胞内表达 ,且能抑制SMMU772

原发性肝细胞癌p33^(ING1b)表达水平及其临床诊断意义

目的探讨肝癌p33ING1bmRNA表达水平及与临床病理特征的关系,揭示p33ING1b基因在肝癌发生发展中的作用及临床诊断意义。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测55例原发性肝癌患者癌组织及其癌旁组织p33ING1bmRNA水平。结果63·6%(35/55)癌组织及70·9%(39/55)癌旁组织p33ING1bmRNA呈阳性表达,癌组织p33ING1bmRNA表达量为0·410±0·175,明显低于癌旁组织0·529±0·203,两者比较差异有统计学意义(P<0·05)。p33ING1bmRNA水平与肝癌的病理分级、淋巴结转移、包膜浸润与否有关,而与年龄、性别、肿瘤大小、癌栓形成、合并肝硬化与否无关。结论p33ING1b表达下调在肝癌发生、发展中起重要作用,可以作为肝癌分化、侵袭性及预后的评价指标。