补肾增效液对辐射损伤小鼠脾组织p53 mRNA及Caspase-3蛋白表达的影响

目的:研究以补肾填精为主的补肾增效液对辐射损伤小鼠p53 mRNA及Caspase-3蛋白表达的影响。方法:设正常对照组、模型组、中药高、中、低剂量组和阳性药组,共灌胃8天。灌胃7天后,除正常对照组外,其余各组以^(60)Coγ射线照射小鼠造成辐射损伤。造模1天后取脾检测。p53 mRNA表达的检测采用原位杂交法;Caspase-3蛋白表达检测采用免疫组化法。结果:运用病理图像分析系统分析,各用药组均能上调辐射后小鼠脾组织p53 mRNA的表达,且与模型组比较,差异具有非常统计学意义(P<0.01);各用药组能下调Caspase-3蛋白表达,其中,阳性药组、高剂量组和中剂量组与模型组比较,差异具有非常统计学意义(P<0.01)。结论:补肾增效液通过调控与DNA损伤密切相关的p53基因及相关Caspase-3蛋白的表达而促进辐射损伤的修复。

诊断超声照射后人早孕绒毛细胞p53 mRNA bcl-2 mRNA表达改变

目的 探讨诊断超声与人早孕绒毛 p5 3 m RNA和 bcl-2 m RNA表达的关系。方法 对拟进行人工流产的 2 4例早孕 (4 5～ 60 d)妇女随机分为 4组 :对照组、10 m in组、2 0 min组和 3 0 min组。应用 HP-85 0 0彩色多普勒超声诊断仪 ,对孕囊进行不同时间的持续照射 ,照射后 2 4h取材。用原位杂交技术检测上述各组绒毛滋养层细胞 p5 3 m RNA和 bcl-2 m RNA表达情况。结果 超声照射后 10 min组绒毛滋养层细胞 p5 3 m RNA和 bcl-2 m RNA表达率与对照组差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,2 0 min组和 3 0 min组滋养层细胞 p5 3 m RNA表达率明显增加 ,显著大于对照组和 10 min组 (P<0 .0 1) ;而 bcl-2 m RNA表达率却明显下降 ,显著低于对照组和 10 min组 (P<0 .0 1)。结论 诊断超声持续照射早孕孕囊组织 >10 min可引起绒毛滋养层细胞 p5 3 m RNA表达率增加和 bcl-2 m RNA表达率下降 ,从而诱导滋养层细胞凋亡增加。

脑缺血再灌注后神经细胞bcl-2、bax和p53 mRNA的表达

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞 bcl- 2、bax和 p53m RNA表达的变化规律。方法 利用大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,原位杂交技术分别观察缺血 1 .5 h再灌注后 2 h、 6 h、 1 2 h、 1 d、 2 d、 3 d、 7d和 1 4 d不同时间点神经细胞 bcl- 2、 bax和 p53 m RNA的表达。结果 脑缺血再灌注 2 h在缺血周围区 bcl- 2 m RNA开始表达 ,1 d达高峰 ,之后逐渐减弱 ,再灌注 1 4 d接近假手术组水平 ;bax m RNA与 p53 m RNA均于缺血再灌注 6 h出现 ,bax m RNA于 1 d达高峰 ,3 d降至假手术组水平 ,p53 m RNA于 1～ 2 d达高峰 ,7d降至假手术组水平。结论 脑缺血再灌注后 bcl- 2、 bax和 p53m RNA的表达与缺血性损伤有一定关系 。

开心胶囊对糖尿病大鼠心肌p53 mRNA表达的调节

目的 :探讨糖尿病大鼠心肌细胞 p5 3 m RNA表达和开心胶囊的影响。方法 :建立大鼠链尿佐菌素诱导的糖尿病动物模型 ,设立对照组、非治疗组及开心胶囊组 ,用逆转录聚合酶链式反应检测病程 4周和 8周大鼠心肌细胞 p5 3水平。结果 :诱发糖尿病 4周后糖尿病大鼠心肌细胞 p5 3m RNA未见明显表达增强 ,8周时表达较明显 ( P<0 .0 5 ) ;给开心胶囊 8周后 ,p5 3m RNA表达明显下降 ( P<0 .0 5 )。结论 :糖尿病状态下 ,心肌细胞p5 3m RNA高表达可能是高血糖诱发结果 ,开心胶囊可通过减轻 p5 3m RNA异常表达缓解糖尿病心肌损伤。

大肠肿瘤石蜡标本P53 mRNA RT-PCRIS比较研究

目的 :探讨大肠肿瘤P5 3mRNA转录改变。方法 :对 9例大肠癌和 3例良性大肠肿瘤石蜡标本的肿瘤灶、移行区和自身正常肠组织 ,应用反转录原位PCR技术进行了研究。结果 :3例良性肿瘤中仅 1例在肿瘤区组织检出弱阳性。 9例大肠癌中 ,肿瘤区检出 7例阳性 ,移行区检出 4例阳性 ,自身正常肠组织检出 1例阳性。结论 :在肿瘤早期即可能出现P5 3基因mRNA改变 ,应用RT CPRIS检出p5 3mRNA的阳性率高于常规免疫组化法。RT PCRIS具有很高的灵敏度和特异性 。

宫颈癌患者放疗敏感性与癌组织中HPV16-E6、p53 mRNA表达的关系分析

目的探讨宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒(HPV)16-E6、p53 mRNA表达及与放疗敏感性的关系。方法选取2018年1月~2020年1月在我院治疗的宫颈癌患者76例,均给予根治性放射治疗,采用RT-PCR检测放疗前后HPV16-E6、p53 mRNA表达。结果76例患者中,放疗疗效达到完全缓解(CR)10例,部分缓解(PR)45例,疾病稳定(SD)14例,疾病进展(PD)7例,放疗敏感率为72.37%。放疗敏感者放疗后HPV16-E6 mRNA相对表达量为0.22±0.05,明显低于放疗抗拒者(P<0.05),而p53 mRNA相对表达量为1.97±0.21,明显高于放疗抗拒者(P<0.05);放疗前、放疗后HPV16-E6与p53 mRNA相对表达量呈负相关(r=-0.530和-0.754,P<0.05)。结论宫颈癌组织中HPV16-E6、p53m RNA表达与患者放疗敏感性有关。

p53 mRNA、MDM2蛋白在肺癌组织中的表达

目的 探讨原发性肺癌组织中MDM 2、p5 3mRNA表达水平及其与临床预后的关系。方法 采用免疫组织化学DakoEnvisionTM 二步法、逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法 ,分别检测 5 2例肺癌组织中MDM 2、p5 3mRNA的表达情况。 结果在 5 2例肺癌组织中有 2 3例 (4 4 .2 % )MDM 2蛋白表达阳性 ,其中 3例小细胞肺癌全部阳性 ,在非小细胞肺癌中MDM 2蛋白呈过表达 ,低分化癌明显高于高、中分化肺癌 (P <0 .0 1)。有 2 7例 (5 1.9% )肺癌组织 p5 3mRNA表达阳性 ,其中Ⅰ期肺癌占 82 .3 % (14例 ) ,Ⅱ期肺癌占 71.4% (10例 ) ,明显高于Ⅲ期肺癌的 14 .3 % (3例 )。高中分化肺癌的 p5 3mRNA表达显著高于低分化肺癌 (P <0 .0 5 )。结论 MDM 2蛋白在低分化肺癌中呈过表达 ,p5 3mRNA在早期和高中分化肺癌中呈高表达 ,它们分别是肺癌发生发展过程中不同的

高锌与缺锌对鼠胶质瘤细胞野生型-p53 mRNA表达的影响

野生型 -p5 3 (wt-p5 3 )作为关卡基因在DNA受损伤时使细胞停止在G1期 ,使受损细胞修复或发生细胞凋亡。本研究利用RT -PCR法研究高Zn2 + 、缺Zn2 + 作用 2 4小时后对鼠胶质瘤细胞wt-p5 3mRNA表达的影响。取对数生长期的鼠胶质瘤细胞 ,在RPMI - 1640常规培养液中分别加入 0 3mmol L的Zn2 + 和5 μmol L的TPEN培养 2 4h后发现 0 3mmol L的Zn2 + 作用 2 4小时抑制鼠胶质瘤细胞wt-p5 3表达 ,5 μmol L的TPEN作用 2 4小时鼠胶质瘤细胞wt -p5 3mRNA表达水平升高。这表明高Zn2 + 抑制鼠胶质瘤细胞wt -p5 3RNA表达 ,缺Zn2 + 可提高鼠胶质瘤细胞wt-p5

镉致鸡脾淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响

应用吖啶橙/溴化乙锭荧光染色(AO/EB)法、DNA琼脂糖凝胶电泳及半定量RT-PCR法检测了氯化镉在浓度0～30μmol/L范围内对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响.结果表明,浓度为0～30μmol/L的镉能引起鸡脾脏淋巴细胞凋亡及干扰p53mRNA的表达,低浓度镉引起的细胞凋亡与p53mRNA的表达密切相关,而高浓度的镉能够导致鸡脾脏淋巴细胞坏死.

ER、bcl-2和p53在鸡与鹌鹑属间杂交种早期胚胎中的mRNA表达

通过人工授精获得鸡（♂10只）与鹌鹑（♀100只）属间杂交种蛋并同机入孵，采用Wpkci引物和多重PCR鉴定66～120h的鸡（♂）与鹌鹑（♀）属间杂交种活胚的性别后，选取不同时间点雌、雄胚胎共300枚，以β-actin为内标，通过RT-PCR分别测定雌激素受体（职）和细胞凋亡因子（bcl-2、p53）的mRNA相对丰度；探讨ER、bcl-2和p53对杂交种早期胚胎发育及性别分化的影响。结果表明：（1）杂交种胚胎ERmRNA表达在66～84h期间雌性极显著高于雄性（P〈0．01=，由此推测杂交种的性分化时间大致在胚胎发育的66～84h范围内；（2）bcl-2和p53的mRNA表达在杂交胚胎发育过程中具有明显的时序性，说明bcl-2和p53基因对早期杂交胚的发育具有重要的影响。

肝癌中医证型与野生型p53mRNA、N-ras蛋白表达相关性研究

目的:观察肝癌中医证型与野生型p53mRNA、N-ras表达相关性。方法:选择肝癌脾虚证36例和湿热证患者24例,应用原位杂交和免疫组化方法分别检测其肝癌组织野生型p53mRNA和N-ras蛋白表达,比较2组之间的差异。结果:脾虚证组野生型p53mRNA表达水平显著低于湿热证组(P<0．05);脾虚证组N-ras蛋白表达水平略低于湿热证组(P>0．05)。结论:野生型p53mRNA表达与旰癌中医证型有关,野生型p53 mRNA低表达是区别脾虚证和湿热证的特征之一。

病理性瘢痕中p53和cyclinD_1的mRNA表达的实验研究

目的 探讨病理性瘢痕中p5 3、cyclinD1的表达及在瘢痕疙瘩与增生性瘢痕中表达的区别,以进一步了解瘢痕疙瘩与增生性瘢痕的形成及发展的机理。方法 手术切取病理性瘢痕标本作为实验组,以普通瘢痕作为对照组,运用RT -PCR方法测定病理性瘢痕中p5 3和cyclinD1的mRNA表达情况。结果 病理性瘢痕中p5 3和cyclinD1的mRNA表达与对照组比较差异有显著意义(P <0 .0 5 ) ;而瘢痕疙瘩中p5 3的mRNA表达明显高于增生性瘢痕,两者比较差异有显著意义(P <0 .0 5 )。结论 病理性瘢痕中p5 3和cyclinD1的异常表达,在病理性瘢痕的形成及发展中起重要作用。

加味香砂六君子汤对大鼠胃癌前病变胃黏膜Bax、Bcl-2、P53mRNA表达的影响

目的:加味香砂六君子汤在胃癌前病变(PLGC)模型大鼠胃黏膜的Bax、Bcl-2、P53mRNA表达方面的影响及作用机理研究。方法:120只健康Wistar大鼠按照随机数字表法分为空白对照组和模型组、维霉素组、加味香砂六君子汤高、中及低剂量组,造模后给予药物干预治疗,通过免疫组化法,检测Bcl-2、Bax及P53mRNA表达水平。结果:加味香砂六君子汤各剂量组Bcl-2蛋白阳性表达率较模型组及维霉素组显著降低(P<0.05),各剂量组Bax蛋白阳性表达率较模型组及维霉素组明显增高(P<0.05)。各干预组p53mRNA蛋白表达不同程度降低,且明显低于模型组(P<0.05);其中加味香砂六君子汤中剂量组的作用效果最显著,与其他各组相比,差异显著(P<0.05)。结论:加味香砂六君子汤可调控胃癌前期病变大鼠胃黏膜Bcl-2、Bax表达水平,降低p53mRNA的表达,具有治疗PLGC的作用。

中波紫外线照射对HaCaT细胞p53mRNA和p53蛋白表达的影响

目的:研究中波紫外线(UVB)照射对永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞的p53mRNA和p53蛋白表达的影响。方法:以一定剂量UVB照射HaCaT细胞,分别用RT-PCR法和Western blot方法检测照射后不同时间点的p53mRNA和p53蛋白的表达水平;同时检测不同剂量UVB照射后同一特定时间点p53mRNA和p53蛋白的表达水平。结果:30mJ/cm2的UVB照射后HaCaT细胞的p53mRNA和p53蛋白表达逐渐增加,4h达到峰值,后逐渐恢复至照光后24h接近正常值;不同剂量UVB照射4h后,p53mRNA和p53蛋白表达随剂量增加而增加。结论:HaCaT细胞p53mRNA和p53蛋白表达与UVB照射存在一定的时间和剂量关系。

高强度次声作用小鼠后海马内P53mRNA表达的变化

目的:研究高强度次声作用小鼠后海马内P53mRNA表达的变化。方法:BALB/C小鼠暴露于16Hz声压130dB次声。每天作用2h,分别作用1、7、14、21和28d后,采用原位杂交的方法观察小鼠海马内P53mRNA表达的改变。结果:130dB次声作用后,海马区域内P53mRNA表达明显增多;在相同声压级强度的次声作用下,随着作用次数的增加,海马内P53mRNA的杂交阳性反应产物增多。结论:一定参数次声作用后,脑内P53mRNA表达的增高,提示脑组织的结构和功能发生变化,导致DNA损伤,神经元受到损害。这一效应与次声的声强和暴露时间有关。P53mRNA在次声导致脑组织损害过程中亦起着非常重要的作用。

脑胶质瘤组织中DNA聚合酶β、Fas、p53基因mRNA的表达

目的:研究脑胶质瘤组织中DNA聚合酶β(polβ)、Fas、p53基因mRNA的表达。方法:采用RT-PCR扩增及半定量分析方法,对22例脑胶质瘤、7例良性脑肿瘤及其相应瘤旁正常脑组织中DNApolβ、Fas、p53基因mR-NA进行检测。结果:与相应瘤旁正常脑组织相比,脑胶质瘤及良性脑肿瘤组织中DNApolβ、Fas基因mRNA高表达,p53基因mRNA低表达(P均<0.01)。脑肿瘤组织中DNApolβ与Fas基因mRNA的表达呈正相关((r=0.611,P<0.05)),与p53基因mRNA的表达无关;p53与Fas基因mRNA的表达亦无关。结论:p53基因mRNA低表达及DNApolβ和Fas基因mRNA高表达与脑肿瘤的发生发展及恶性程度有关。

压力对大鼠纯化视网膜神经节细胞中bcl-2、bax及p53mRNA表达的影响

目的 :通过检测不同压力下纯化培养的大鼠视网膜神经节细胞 (Retinalganglioncells,RGCs)中bcl - 2 ,bax ,p5 3mRNA表达情况 ,了解压力对视网膜神经节细胞凋亡的影响。方法 :用SD系大鼠脑源性星型胶质细胞同化培养液双界面法[1] 培养羊抗鼠Thy1.1单克隆抗体纯化的SD系大鼠RGCs;在纯化培养的RGCs上分别施加 0 ,2 0mmHg ,4 0mmHg ,6 0mmHg和 80mmHg气压 ,培养 2 4h及 4 8h后TUNEL法检测各组细胞的凋亡 ,原位杂交检测细胞中bcl- 2 ,bax及p5 3mRNA的表达。结果 :纯化的RGCs培养 12h及 2 4h用羊抗鼠FITC -Thy - 1.1单克隆抗体进行鉴定阳性 ,纯度为 97%。传三代后星型胶质细胞用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)单克隆抗体标记和鉴定阳性。培养 2 4h组TUNEL法检测对照组极少数细胞凋亡 ,2 0mmHg组见较多细胞凋亡 ,随着压力的增高细胞凋亡数增多 ,凋亡指数增高 ;与对照组相比差异均有显著性。培养 4 8h组压力≥ 2 0mmHg各组较相同压力培养 2 4h组凋亡指数增高 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。压力≥ 4 0mmHg时bcl-2mRNA表达逐渐减少 ,压力≥ 2 0mmHg时bax及 p5 3mRNA表达则逐渐增加 ;与对照组相比均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :高于 2 0mmHg压力时间超过 2 4h可激活体外培养的视网膜神经节细胞的相关凋亡基因导致细?

脑胶质瘤细胞polβ基因突变及其与Fas、p53基因mRNA水平表达的研究

目的研究脑胶质瘤细胞中DNA聚合酶β(polβ)基因突变及其与Fas、p53基因mRNA水平表达的关系。方法应用RNA提取、逆转录、PCR扩增、基因克隆及DNA序列分析法,对22例脑胶质瘤、7例良性脑肿瘤及1例肺部转移性鳞状细胞癌标本中的polβ基因进行检测;半定量分析法对脑胶质瘤和良性脑肿瘤标本及其周围正常脑组织中的polβ、Fas、p53基因进行mRNA水平检测及对比。结果30例脑肿瘤标本中,polβ基因突变7例,其中胶质瘤6例,突变率为27.3%(6/22),肺部转移性鳞状细胞癌1例。2例polβ基因二级结构图有明显变异。脑胶质瘤组织中均存在polβ和Fas基因mRNA水平高表达及p53基因低表达,有显著性差异(P<0.01),良性脑肿瘤与正常脑组织p53基因表达无显著性差异(P>0.05);各种脑肿瘤中polβ与Fas基因表达具有正相关性,而polβ、Fas与p53基因表达呈负相关性。结论脑胶质瘤细胞存在polβ基因突变,其突变率为27.3%。脑胶质瘤组织中均存在polβ和Fas基因mRNA水平高表达及p53基因低表达,提示脑胶质瘤的发生和发展可能与polβ基因突变有关,且恶性程度越高,突变越明显;另外,p53基因低表达及polβ、Fas基因高表达可能与脑胶质瘤的发生发展及恶性程度相关。

hTERT mRNA、p53蛋白在胃黏膜病变中的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系

目的:探讨人端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA、p53蛋白在胃黏膜病变中的表达和幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法:对未经抗Hp治疗且被确诊为慢性浅表性胃炎(CSG)和胃癌前病变者,检测胃黏膜Hp感染状况,并分别用RT-PCR和SP免疫组化方法检测hTERT mRNA和p53蛋白的表达。结果:在胃癌前病变组中,hTERT mRNA和p53蛋白的阳性表达率均显著高于CSG组(P<0.05)。在胃癌前病变组中,Hp阳性亚组hTERTmRNA和p53蛋白的表达率分别显著高于Hp阴性亚组的表达率(P<0.05)。在CSG组中,Hp感染和hTERTmRNA、p53蛋白的表达无明显关系。在24例Hp阳性的胃癌前病变组中,p53蛋白和hTERT mRNA的表达有相关性,Pearson相关系数为0.608(P<0.05)。结论:在Hp致胃癌前病变的发生过程中,p53基因的变异和hTERT基因的激活起重要作用,且存在相关关系,这可能是Hp引起胃黏膜病变发生发展的作用机制之一。

大鼠胃黏膜组织Syk、Survivin蛋白、P53及AMP-18 mRNA表达和胃癌病变程度的相关性

目的探讨大鼠胃黏膜组织Syk、P53、Survivin及AMP-18 mRNA表达和胃癌病变程度的相关性。方法将48只体重180~200 g SD大鼠分为A、B、C、D 4组。A组给予生理盐水作为对照组。B组、C组和D组,采用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导建立大鼠胃癌模型,1~8周给予大鼠自由饮水,水中的MNNG溶液浓度为100μg/ml(内含4 mg/l吐温20和20 mg/l的维生素D3);9~16周MNNG溶液浓度增加至150μg/ml,17~24周MNNG溶液浓度为180μg/ml。分别于第8周(B组)、第16周(C组)及第24周(D组)处死大鼠取材。HE染色切片观察大鼠胃黏膜组织病理改变,并采用Western blot检测胃黏膜Syk蛋白和Survivin蛋白水平,Q-PCR法测定胃黏膜P53和AMP-18 mRNA的表达。结果HE染色结果显示A组、B组胃黏膜组织结构正常,无炎性细胞浸润;C组胃黏膜局部有破损,细胞核增大、轻度异型,提示胃癌早期;D组胃黏膜下层及肌层有炎性细胞浸润,细胞形态不规则,核质比增大,表明胃癌进展期。免疫组化提示B组、C组和D组胃黏膜组织Syk蛋白水平明显下降(P<0.05),Survivin蛋白含量显著增加,与A组均有统计学差异(P<0.05)。Q-PCR表明C组和D组胃黏膜组织P53 mRNA表达上调,AMP-18 mRNA表达下调,且D组胃癌进展后,P53和AMP-18 mRNA水平与B组有统计学差异(P<0.05)。结论大鼠胃黏膜组织Syk蛋白、AMP-18 mRNA表达随着胃癌病变程度的进展明显下降,而Survivin蛋白、P53表达则显著上升。