血清Ⅱ型鸡马立克氏病毒的分离鉴定及SW14分离株pp24基因的序列分析

为了解鸡马立克氏病毒(MDV)在我国鸡群中的流行情况,本研究于2021年从福建省已免疫鸡马立克氏病(MD)疫苗鸡群且发生疑似MD病例的鸡场采集21份疑似发病蛋鸡外周血,分离其淋巴细胞接种鸡胚成纤维细胞(CEF),5 d后收集病毒,盲传1~2代后获得21株能够形成典型MDV蚀斑的分离株,依次命名SW1~SW21,采用PCR分别扩增MDV血清Ⅰ型(MDV-1) Meq基因、Ⅱ型(MDV-2) ORF873基因、Ⅲ型(MDV-3) US3基因进行MDV分型鉴定,扩增鸡传染性贫血病毒(CAV) VP3基因、禽网状内皮组织增殖病病毒(REV) LTR基因、禽白血病病毒A亚群(ALV-A)、B亚群(ALV-B)、J亚群(ALV-J)的env基因进行外源病毒检测,结果显示MDV-1均为阴性,MDV-2均为阳性,MDV-3阳性率为38.1%(8/21),未检测到外源病毒基因。在MDV-2分离株中选择SW14株进行pp24基因的PCR扩增,测序后与MDV-2参考株SB-1、301B/1、HPRS24的pp24基因进行基因序列比对分析,结果显示,SW14和SB-1株同源性(96.3%)最高。通过透射电镜观察SW14,可见分离株呈双环型,直径约110 nm,符合MDV病毒粒子形态特征。本研究证实该鸡场中存在MDV-2流行,可能会影响疫苗的免疫效果,但其致病性有待进一步研究。本研究从疑似发病蛋鸡中分离到新的MDV-2株,为我国MDV-2的研究提供重要参考依据,同时为我国MD疫情防控提供有价值的研究材料。

马立克氏病病毒CV1988株pp24基因的克隆与表达

根据马立克氏病病毒 (MDV)国际参考强毒GA株 pp2 4基因序列 ,设计和合成了一对引物 ,其两端分别含SalI和EcoRI的酶切位点。以CV1988株基因组DNA为模板 ,通过PCR技术 ,扩增其pp2 4基因。PCR产物经纯化后 ,按正确的阅读框架定向克隆到表达性载体pGEX_6P_1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游 ,并用序列测定验证。将重组质粒转化的大肠杆菌BL2 1,在 1.0mMIPTG和 37℃条件下诱导 ,GST_pp 2 4基因获得了表达。诱导菌体的裂解物经 12 %的SDS聚丙烯凝胶电泳 (SDS_PAGE)和Westernblot试验验证 ,得到大小为 4 3kD的融合蛋白 ,与预期大小一致。将该融合蛋白的凝胶带切下研碎后免疫小鼠三次后 ,其血清与MDV感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)