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地黄水提液对2型糖尿病大鼠proinsulin基因表达的影响 被引量:16
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作者 孟庆宇 吕秀芳 金秀东 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期397-399,共3页
目的:探讨地黄水提液治疗2型糖尿病(2-DM)的分子生物学机制。方法:以半定量RT-PCR法和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分别检测胰岛素原(proinsulin)基因转录及翻译水平的表达。同时观察空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)的含量,计算胰岛素分... 目的:探讨地黄水提液治疗2型糖尿病(2-DM)的分子生物学机制。方法:以半定量RT-PCR法和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分别检测胰岛素原(proinsulin)基因转录及翻译水平的表达。同时观察空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)的含量,计算胰岛素分泌指数(IS)、β细胞功能指数(HβCI)的变化,来研究不同剂量地黄水提液对上述各指标的影响。结果:与2-DM模型相比,地黄治疗组大鼠proinsulin基因mRNA和蛋白表达显著增高(P<0.01),FPG显著降低,FINS、IS、HβCI升高,差异均有显著性。结论:地黄水提液通过上调2-DM大鼠proinsulin基因mRNA和蛋白表达,可改善胰岛β细胞功能,降低2-DM大鼠血糖。 展开更多
关键词 地黄水提液 2型糖尿病 胰岛素原 基因表达
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Significant association of insulin and proinsulin with clustering of cardiovascular risk factors 被引量:1
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作者 En-ZhiJia Zhi-JianYang +9 位作者 Shi-WeiChen Guang-YaoQi Chun-FaYou Jian-FengMa Jing-XinZhang Zhen-ZhenWang Wei-ChongQian Xin-LiLi Hai-YanWang Wen-ZhuMa 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第1期149-153,共5页
AIM: To investigate the association between true insulin and proinsulin and clustering of cardiovascular risk factors.METHODS: Based on the random stratified sampling principles, 1196 Chinese people (533 males and 663... AIM: To investigate the association between true insulin and proinsulin and clustering of cardiovascular risk factors.METHODS: Based on the random stratified sampling principles, 1196 Chinese people (533 males and 663 females,aged 35-59 years with an average age of 46.69 years) were recruited. Biotin-avidin based double monoclonal antibody ELISA method was used to detect the true insulin and proinsulin, and a risk factor score was set to evaluate individuals according to the number of risk factors.RESULTS: The median (quartile range) of true insulin and proinsulin was 4.91 mIu/L (3.01-7.09 mIu/L) and 3.49 pmol/L (2.14-5.68 pmol/L) respectively, and the true insulin level of female subjects was significantly higher than that of male subjects (P = 0.000), but the level of proinsulin displayed no significant difference between males and females (P = 0.566). The results of covariate ANOVA after age and sex were controlled showed that subjects with any of the risk factors had a significantly higher true insulin level (P = 0.002 for hypercholesterolemia, P = 0.021 for high low-density lipoprotein cholesterol, P = 0.003 for low high-density lipoprotein cholesterol, and P = 0.000 for other risk factors) and proinsulin level (P = 0.001 for low high-density lipoprotein cholesterol, and P = 0.000 for other risk factors)than those with no risk factors. Furthermore, subjects with higher risk factor scores had a higher true insulin and proinsulin level than those with lower risk factor scores (P = 0.000). The multiple linear regression models showed that true insulin and proinsulin were significantly related to cardiovascular risk factor scores respectively (P = 0.000).CONCLUSION: True insulin and proinsulin are significantly associated with the clustering of cardiovascular risk factors. 展开更多
关键词 True insulin proinsulin Cardiovascular diseases
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Level of proinsulin in association with cardiovascular risk factors and sleep snoring
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作者 En-Zhi Jia Zhi-Jian Yang +8 位作者 Shi-Wei Chen Guang-Yao Qi Chun-Fa You Jian-Feng Ma Jing-Xin Zhang Zhen-Zhen Wang Wei-Chong Qian Hai-Yan Wang Wen-Zhu Ma 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第32期5047-5052,共6页
AIM: To explore the relationship between the level of proinsulin with cardiovascular risk factors and sleep snoring.METHODS: Based on the random stratified sampling principle, 1 193 Chinese residents in Pizhou City, J... AIM: To explore the relationship between the level of proinsulin with cardiovascular risk factors and sleep snoring.METHODS: Based on the random stratified sampling principle, 1 193 Chinese residents in Pizhou City, Jiangsu Province (530 males and 663 females, aged 35-59 years with an average age of 46.69 years) were recruited. Their sleep snoring habits were investigated. Biotin-avidin based double mAbs ELISA was used to detect specific insulin and proinsulin, and a risk factor score was established to evaluate the individuals according to the number of their risk factors.RESULTS: The results of Spearman correlation analysis and covariate ANOVA analysis after age and sex were controlled, indicated that not only the level of proinsulin (r = 0.156, P = 0.000, F= 5.980 P = 0.000), but also cardiovascular risk factors score (r = 0.194, P = 0.000,F= 11.135, P = 0.000) significantly associated with the frequency of sleep snoring, and the significant relationship between true insulin and frequency of sleep snoring was only shown in the covariate ANOVA analysis (F = 2.868,P = 0.022). The result of multivariate stepwise logistic regression after age, sex, body mass index, waist circumference and true insulin were controlled showed that proinsulin (division by interval of quartile) was an independent risk factor for sleep snoring (OR = 1.220,95%CI: 1.085-1.373, P = 0.001).CONCLUSION: The interaction of cardiovascular risk factors clustering, high proinsulin level and sleep breathing disorder may be a syndrome, which has not been recognized in human beings so far. 展开更多
关键词 True insulin proinsulin SNORING EPIDEMIOLOGY
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Studies on the Renaturation with Simultaneous Purification of Recombinant Human Proinsulin with Unit of Simultaneous Renaturation and Purification of Protein in Semi-preparative Scale
4
作者 Quan BAI Yu KONG Xin Du GENG 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2003年第8期824-827,共4页
The renaturation and purification of recombinant human proinsulin (rh-proinsulin) expressed in E. coli with the unit of simultaneous renaturation and purification of protein (USRPP) in semi-preparative scale was studi... The renaturation and purification of recombinant human proinsulin (rh-proinsulin) expressed in E. coli with the unit of simultaneous renaturation and purification of protein (USRPP) in semi-preparative scale was studied. The result shows that rh-proinsulin extracted with 8.0 mol/L urea can be renatured and purified simultaneously in 45 minutes with the USRPP (1050 mm ID). The purity of rh-proinsulin was found to be more than 90% and the mass recovery to be more than 80%. The renaturation effect of rh-proinsulin with the USRPP was tested by enzyme cleavage for obtaining insulin. In addition, the result was further confirmed with RPLC, SDS-PAGE electrophoresis, and MALDI-TOF, respectively. 展开更多
关键词 Liquid chromatography hydrophobic interaction chromatography RENATURATION preparation recombinant human rh-proinsulin biotechnology.
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Quantitative Regeneration of Native Disulfide Bonds of Human Proinsulin
5
作者 余宣传 邹承鲁 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1993年第16期1402-1406,共5页
It is well known that protein disulfide isomerase (PDI) catalyzes the thiol-disulfide exchange reactions and is believed to be responsible in the formation of disulfides during the synthesis of disulfide containing pr... It is well known that protein disulfide isomerase (PDI) catalyzes the thiol-disulfide exchange reactions and is believed to be responsible in the formation of disulfides during the synthesis of disulfide containing proteins. It has been reported in this laboratory that the native disulfide bonds of insulin can be regenerated from the scrambled or S-sulfonated chains with reasonably good yields and from the Al-B29 crosslinked 展开更多
关键词 proinsulin protein DISULFIDE ISOMERASE DISULFIDE
原文传递
对于胰岛素敏感性指数1/(FPG×FINS)应用中某些问题的解答 被引量:13
6
作者 李光伟 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 1998年第1期60-61,共2页
关键词 糖尿病 胰岛素 敏感性指数 proinsulin
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正常糖耐量、糖耐量受损及新诊断2型糖尿病人群胰岛β细胞功能的变化 被引量:26
7
作者 赵咏莉 叶山东 +1 位作者 陈燕 谈敏 《中华糖尿病杂志(1006-6187)》 CSCD 北大核心 2005年第1期17-18,共2页
胰岛β细胞功能自NGT到IGT再到T2DM呈进行性下降,所依证据是HOMA β,ΔI30/ΔG30、前胰岛素和C肽的比值(PI/CP)。PI/CP可能是测定胰岛β细胞功能的较好指标。
关键词 胰岛Β细胞功能 诊断 糖耐量受损 正常 病人 人群 2型糖尿病 CP 进行性 NGT
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人胰岛素原基因胰外表达重组体的构建及鉴定 被引量:7
8
作者 袁凤山 张坤 +2 位作者 杨立新 王大会 尤春暖 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期321-323,共3页
目的 :构建胰外表达成熟胰岛素的重组体。方法 :将人胰岛素原基因进行二处突变 ,突变后的胰岛素原基因与逆转录病毒载体 pLXSN重组并转染肝癌细胞。提取肝癌细胞基因组DNA ,PCR方法鉴定人胰岛素原基因与载体重组结果及在肝癌细胞基因组... 目的 :构建胰外表达成熟胰岛素的重组体。方法 :将人胰岛素原基因进行二处突变 ,突变后的胰岛素原基因与逆转录病毒载体 pLXSN重组并转染肝癌细胞。提取肝癌细胞基因组DNA ,PCR方法鉴定人胰岛素原基因与载体重组结果及在肝癌细胞基因组中整合情况。同时测定成熟胰岛素的表达。结果 :胰岛素原基因已整合到肝癌细胞基因组。突变的胰岛素原可被广泛存在的furin酶识别 ,在培养基内检测到较高浓度的成熟胰岛素。结论 :成功构建胰外表达成熟胰岛素的突变人胰岛素原基因逆转录病毒重组体。 展开更多
关键词 人胰岛素原基因 逆转录病毒载体 基因重组 基因表达
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血清胰岛素原在静脉葡萄糖耐量试验中的分泌和释放 被引量:7
9
作者 顾卫琼 洪洁 +3 位作者 张翼飞 唐金凤 陈名道 宁光 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 2004年第1期14-17,共4页
目的 研究不同水平的胰岛素抵抗和 β细胞功能状态下的血清胰岛素原水平以及静脉葡萄糖负荷后的胰岛素原分泌情况。 方法  2 5例单纯性肥胖、2 1例糖耐量受损 (IGT)、19例 2型糖尿病 (T2DM )患者和 11名正常对照者在完成静脉葡萄糖... 目的 研究不同水平的胰岛素抵抗和 β细胞功能状态下的血清胰岛素原水平以及静脉葡萄糖负荷后的胰岛素原分泌情况。 方法  2 5例单纯性肥胖、2 1例糖耐量受损 (IGT)、19例 2型糖尿病 (T2DM )患者和 11名正常对照者在完成静脉葡萄糖耐量试验 (IVGTT)后 ,采用放射免疫测定法 (RIA)测定其血清空腹胰岛素原水平 ,并进行相关性分析。 结果 单纯性肥胖组、IGT组和T2DM组患者的空腹胰岛素原水平明显高于正常对照组 (对照组 ) ,3组间差异无显著意义。葡萄糖负荷后的胰岛素原分泌曲线在 4组中均呈单峰式 ,但高峰在单纯肥胖、IGT组和T2DM组中后移。总的胰岛素原分泌曲线下面积在 3组间差异无显著意义 ,均显著高于对照组。 结论 空腹胰岛素原水平很大程度上取决于机体的胰岛素抵抗和血糖 (空腹或餐后 )的水平。葡萄糖负荷后的胰岛素原释放在胰岛素抵抗人群中显著增加 ,释放高峰后移。单纯肥胖阶段的高胰岛素血症被高胰岛素原血症所修饰 ,预示在该阶段可能已出现 展开更多
关键词 血清 胰岛素原 静脉葡萄糖耐量试验 IVGTT 2型糖尿病 血糖
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人胰岛素原类似物(BKRA)基因的合成与表达 被引量:6
10
作者 房德兴 王永山 +3 位作者 周宗安 翟春生 顾志香 王元伦 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第5期518-524,共7页
为了利用基因工程生产胰岛素,按照已知的人胰岛素A、B链氨基酸序列和大肠杆菌偏爱的氨基酸密码子设计并合成了人胰岛素原类似物(BKRA)基因,其中以赖(K)-精(R)二肽编码区取代人胰岛素原C肽编码区.为了避免其编码蛋白... 为了利用基因工程生产胰岛素,按照已知的人胰岛素A、B链氨基酸序列和大肠杆菌偏爱的氨基酸密码子设计并合成了人胰岛素原类似物(BKRA)基因,其中以赖(K)-精(R)二肽编码区取代人胰岛素原C肽编码区.为了避免其编码蛋白在大肠杆菌中表达时被降解,通过人工接头将2个BKRA基因串联起来,接头部分氨基酸序列为Arg-Arg-Asn-Ser.将串联的BKRA基因克隆到表达载体pET-28a(+),实现了在大肠杆菌中的融合表达,表达产物以包含体形式存在,约占细菌总蛋白24%.表达产物氨基末端具有六组氨酸肽段,以HiTrap凝胶进行亲和层析,一步纯化可达纯度95%以上.放射免疫测定表明,纯化的融合蛋白具有胰岛素抗原活性. 展开更多
关键词 胰岛素原类似物 基因合成 融合表达 纯化
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重组羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用 被引量:6
11
作者 李素霞 田丽萍 +3 位作者 张晓彦 夏文超 龚毅 袁勤生 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期387-391,共5页
用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中以包涵体方式获得高表达。SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35%,表达产物融合了表达质粒上的6His。在变性条件下,经Ni-... 用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中以包涵体方式获得高表达。SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35%,表达产物融合了表达质粒上的6His。在变性条件下,经Ni-NTA柱纯化,得到羧肽酶原B,在复性液中进行稀释复性后,胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B,然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B(28.5mg/L),比活为13.5u/mg。用RP-HPLC分析胰蛋白酶+羧肽酶B酶解胰岛素原C肽三聚体的酶解产物,证明该重组的羧肽酶B可替代提取的羧肽酶B应用于胰岛素原C肽的制备工艺中。 展开更多
关键词 羧肽酶原B 羧肽酶B 融合表达 分离纯化 胰岛素原C肽
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糖耐量减低人群胰岛β细胞功能的变化 被引量:7
12
作者 叶山东 赵咏莉 +5 位作者 康冬梅 陈燕 王卫东 谈敏 莫蔚林 胡世莲 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期7-8,共2页
131例正常糖耐量,120例糖耐量减低和107例2型糖尿病患者的研究显示,胰岛素原(PI)呈递增,而胰岛素敏感指数、HOMA-β和△I30/△G30呈递减倾向。肥胖组HOMAβ-,胰岛素、C肽和胰岛素原的曲线下面积均高于非肥胖组。
关键词 糖耐量受损 胰岛素抵抗 功能 β细胞 胰岛素原
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超重及肥胖高血压患者空腹胰岛素、胰岛素原、瘦素水平与高血压的关系 被引量:10
13
作者 高鑫 江孙芳 +1 位作者 赵耐青 陆志强 《复旦学报(医学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第4期318-321,共4页
目的 研究超重和肥胖高血压组和超重肥胖正常血压组病人的临床特征和代谢特点 ,比较血清胰岛素、胰岛素原、瘦素水平 ,并探讨这些因素与高血压的关系。方法 选择肥胖 /超重病人 15 2例 ,年龄 2 0~ 6 5岁 ,BMI≥ 2 5。男性 84例 ,女性... 目的 研究超重和肥胖高血压组和超重肥胖正常血压组病人的临床特征和代谢特点 ,比较血清胰岛素、胰岛素原、瘦素水平 ,并探讨这些因素与高血压的关系。方法 选择肥胖 /超重病人 15 2例 ,年龄 2 0~ 6 5岁 ,BMI≥ 2 5。男性 84例 ,女性 78例。高血压组 78例 ,正常血压组 74例。采用HOMA指数评价胰岛素抵抗程度。比较两组间体脂参数、代谢紊乱特点、空腹血清胰岛素、胰岛素原、瘦素水平 ,分析超重及肥胖病人发生高血压的危险因素。结果 两组胰岛素抵抗程度相同 ,高血压组腰臀比增加 ,糖代谢异常、脂代谢异常程度均大于正常血压组 ,胰岛素原水平高于正常血压组。两组之间空腹瘦素水平差异无显著性。超重及肥胖病人的增龄、腰臀比增加、胰岛素原水平、伴糖代谢异常和脂代谢异常是发生高血压的危险因素 ,经BMI校正后这一关系不再显著。结论 肥胖伴高血压病人呈内脏型肥胖趋势 ,糖代谢、脂代谢紊乱的程度高于正常血压组。肥胖病人发生高血压时已存在胰岛细胞受损。瘦素可能对肥胖病人高血压的发生没有重要作用。该组超重和肥胖病人发生高血压的主要危险因素是BMI增高目的 研究超重和肥胖高血压组和超重肥胖正常血压组病人的临床特征和代谢特点 ,比较血清胰岛素、胰岛素原、瘦素水平 ,并探讨这些因素与高? 展开更多
关键词 肥胖 高血压 胰岛素原 瘦素 BMI 胰岛素
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胰岛素原和胰淀素原水平与胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能的相关性研究 被引量:5
14
作者 郑晓雅 任伟 +1 位作者 张素华 阳萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期169-172,共4页
目的分析糖代谢异常个体血清胰岛素原(proinsulin,PI)、胰岛素(insulin,INS)和胰淀素原(proamylin,PA)、胰淀素(amylin,AMY)的变化,探讨胰岛素原和胰淀素原水平与胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能的关系。方法研究对象分为正常组、糖调节异常... 目的分析糖代谢异常个体血清胰岛素原(proinsulin,PI)、胰岛素(insulin,INS)和胰淀素原(proamylin,PA)、胰淀素(amylin,AMY)的变化,探讨胰岛素原和胰淀素原水平与胰岛素抵抗和胰岛β细胞功能的关系。方法研究对象分为正常组、糖调节异常组(IGR组)、2型糖尿病(T2DM)1组(FBG<10 mmol/L)和T2DM2组(FBG>15 mmol/L)。分别测定人体测量学指标、血生化指标,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(HOMA-B)。结果不同血糖水平的个体PI和AMY差异无统计学意义(P>0.05),但4组间PA、PI/INS和PA/AMY有显著性差异(P<0.05);PI和PI/INS对HOMA-IR有显著性影响(P<0.01),PA和PA/AMY对HOMA-B有显著性影响(P<0.01)。结论胰岛素原在胰岛素抵抗产生中可能起着重要的作用,而胰淀素原在胰岛β细胞功能障碍中可能起着重要的作用。 展开更多
关键词 2型糖尿病 胰岛素原 胰淀素原 胰淀素 胰岛素抵抗
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(His)_6-Arg-Arg-人胰岛素原在大肠杆菌中的高效表达(英文) 被引量:4
15
作者 李晓红 余蓉 +2 位作者 曾蓉 彭先凤 杨继虞 《药物生物技术》 CAS CSCD 2003年第3期144-148,共5页
为了提高胰岛素原的表达量 ,用pQE 40质粒构建了 (His) 6 Arg Arg 人胰岛素原 [(His) 6 Arg Arg humanProinsulin ,RRhPI]的大肠杆菌表达系统。通过培养条件的优化 ,在摇瓶培养的条件下 ,目标产物RRhPI以包涵体形式获得了高效表达 ,每... 为了提高胰岛素原的表达量 ,用pQE 40质粒构建了 (His) 6 Arg Arg 人胰岛素原 [(His) 6 Arg Arg humanProinsulin ,RRhPI]的大肠杆菌表达系统。通过培养条件的优化 ,在摇瓶培养的条件下 ,目标产物RRhPI以包涵体形式获得了高效表达 ,每升培养基收获湿菌体约 2 7g ,包涵体 6g(干重 1 .8g) ,RRhPI约5 4 0mg。该水平已超过现有文献报道的摇瓶培养的最高水平。 展开更多
关键词 人胰岛素原 大肠杆菌 表达
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睡前皮下注射人中效胰岛素对胰岛功能评估的影响 被引量:3
16
作者 张玫 张林 +3 位作者 黄明洁 熊中云 郭丹 安振梅 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期989-991,共3页
目的在皮下注射人中效胰岛素治疗的过程中,停用胰岛素对评估胰岛功能的影响。方法30例采用中效胰岛素治疗的2型糖尿病患者,连续2 d进行100 g标粉馒头餐试验,试验前一天晚上睡前22∶00点继续按原剂量使用中效胰岛素,试验当天清晨进行100 ... 目的在皮下注射人中效胰岛素治疗的过程中,停用胰岛素对评估胰岛功能的影响。方法30例采用中效胰岛素治疗的2型糖尿病患者,连续2 d进行100 g标粉馒头餐试验,试验前一天晚上睡前22∶00点继续按原剂量使用中效胰岛素,试验当天清晨进行100 g馒头餐试验(以下简称未停用组),随后试验当天晚上睡前22∶00点则停用注射中效胰岛素,次日进行100 g馒头餐试验(以下简称停用组),分别检测空腹及餐后1、2和3 h的血糖、胰岛素、C肽、胰岛素原水平,评估β细胞功能。结果1与未停用组相比,停用组次日空腹及餐后1、2、3 h的血糖水平均明显增高(P<0.05),而各时点胰岛素水平均明显降低(P<0.05)。2停用组的空腹及餐后1、2 h的C肽水平均高于未停用组(P<0.05),餐后3 h的C肽水平也高于未停用组,但两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。3停用组空腹及餐后1、2、3 h的胰岛素原水平均高于未停用组。4与未停用组相比,停用组胰岛素曲线下面积降低(P<0.05),而C肽曲线下面积增高(P<0.05)。结论在应用人中效胰岛素治疗糖尿病的过程中,不能停用人中效胰岛素再来评估治疗过程中的胰岛功能。 展开更多
关键词 胰岛素 糖尿病 Β细胞功能 C肽 胰岛素原
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人血清胰岛素原单克隆抗体夹心酶联免疫法的建立 被引量:16
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作者 黎明 杨静 +1 位作者 吴从愿 张葵 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 1999年第3期157-159,共3页
目的建立灵敏、特异的酶联免疫分析法测定人血清胰岛素原,用以评价胰岛β细胞功能。方法选用可同时与胰岛素原形成夹心结合的抗人C肽单抗和抗人胰岛素单抗,分别包被塑料微孔条作团相抗体和生物素化后作液相抗体,再以亲和素连接的辣... 目的建立灵敏、特异的酶联免疫分析法测定人血清胰岛素原,用以评价胰岛β细胞功能。方法选用可同时与胰岛素原形成夹心结合的抗人C肽单抗和抗人胰岛素单抗,分别包被塑料微孔条作团相抗体和生物素化后作液相抗体,再以亲和素连接的辣根过氧化物酶放大检测信号,通过酶底物显色,判定胰岛素原浓度。结果方法的灵敏度为0.9pmol/L,曲线工作范围0.9~200pmol/L,批内批间变异系数分别小于8.9%和11.2%,平均回收率94%(82%~114%),稀释曲线和标准曲线平行,方法与高浓度的人胰岛素和C肽(5000pmol/L)均未见交叉反应。结论本方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便和无同位素污染等优点,适于大批量标本测定胰岛素原及其临床意义的深人探讨。 展开更多
关键词 胰岛素原 单克隆抗体 ELISA 胰岛B细胞 功能
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带信号肽人胰岛素原突变体的构建及在COS-7细胞中的表达 被引量:3
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作者 兰丽珍 邓华聪 +4 位作者 孙辽 郑丹 弓军胜 刘东方 郑宏庭 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2004年第5期563-566,575,共5页
目的 :构建带信号肽人胰岛素原突变体的真核表达载体并在COS - 7细胞表达出成熟的人胰岛素。方法 :采用PCR体外定点突变技术 (PCR -SDM) ,将普通细胞内furin蛋白酶的识别和切割位点Arg -X -Lys -Arg -样序列 ,引入人胰岛素原C肽两端 ,... 目的 :构建带信号肽人胰岛素原突变体的真核表达载体并在COS - 7细胞表达出成熟的人胰岛素。方法 :采用PCR体外定点突变技术 (PCR -SDM) ,将普通细胞内furin蛋白酶的识别和切割位点Arg -X -Lys -Arg -样序列 ,引入人胰岛素原C肽两端 ,同时加上信号肽、Kozak序列和限制性内切酶的酶切位点并克隆至载体pcDNA3.1(+)中 ,构建成人胰岛素原突变体的真核表达载体 ,经测序验证后转染COS - 7细胞 ,RT -PCR、Western印迹、放射免疫法检测其在COS - 7细胞中的表达。结果 :DNA测序结果表明在预期位点突变符合要求 ,经RT -PCR、Western印迹、放射免疫鉴定 ,构建的人胰岛素原突变体的真核表达载体转染的COS - 7细胞可表达、分泌人成熟胰岛素。结论 :构建了人胰岛素原突变体的真核表达载体 ,并成功地在COS - 展开更多
关键词 胰岛素原 定点突变 克隆 基因表达 COS细胞
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TCF7L2基因RNA干扰对胰岛素原水平的影响及机制 被引量:4
19
作者 郑晓雅 任伟 +3 位作者 张素华 汤为学 许丹 毕健琨 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期607-611,共5页
目的:研究转录因子7类似物2(transcription factor 7 like 2,TCF7L2)表达下调对胰岛素原水平的影响,进一步探讨TCF7L2通过前蛋白转化酶(proprotein convertase,PC)基因影响胰岛素原水平的机制。方法:在体外培养Beta-TC-6细胞株,通过构建... 目的:研究转录因子7类似物2(transcription factor 7 like 2,TCF7L2)表达下调对胰岛素原水平的影响,进一步探讨TCF7L2通过前蛋白转化酶(proprotein convertase,PC)基因影响胰岛素原水平的机制。方法:在体外培养Beta-TC-6细胞株,通过构建TCF7L2的RNA干扰慢病毒转染细胞,下调TCF7L2的表达,实验分为3组,分别为空白对照组、乱序对照组和TCF7L2干扰组,采用qRT-PCR和Western blot检测TCF7L2和PC基因mRNA及蛋白水平的变化;收集上清液,采用ELISA方法测定基础和葡萄糖刺激状态下胰岛素和胰岛素原水平的变化。结果:慢病毒感染Beta-TC-6细胞48 h后,在荧光显微镜下观察慢病毒感染效率达95%以上,与空白对照组比较,TCF7L2 mRNA的干扰率约为75%(0.25±0.03 vs.0.97±0.11,P=0.000),蛋白质水平的干扰率约为50%(0.29±0.08 vs.0.57±0.09,P=0.008)。与乱序对照组比较,TCF7L2干扰组葡萄糖刺激后胰岛素水平明显降低(7.47±0.21)mU/L vs.(10.53±0.38)mU/L(P=0.000),而胰岛素原水平却明显增加(10.73±0.51)pmol/L vs.(7.81±0.29)pmol/L(P=0.001),且PC1和PC2的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:TCF7L2基因的RNA干扰可能通过降低PC基因的表达,进而减少该酶对胰岛素原的加工,从而影响胰岛素原的水平。 展开更多
关键词 转录因子7类似物2 2型糖尿病 胰岛素原 前蛋白转化酶
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小C肽人胰岛素原类似物(B-Arg-Arg-A)和人胰岛素原(B-C-A)A、B链重组条件的研究 被引量:5
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作者 陈来同 张明军 胡美浩 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2000年第5期217-219,共3页
目的 :获得更佳的变复性条件和提高人胰岛素原的重组率。方法 :采用特有的重组方法 ,将小C肽人胰岛素原类似物 (B Arg Arg A)与人胰岛素原 (B C A)进行重组条件的比较。 结果 :发现二者在 pH10 .6左右处重组率达到最大 ,且在相同的条件... 目的 :获得更佳的变复性条件和提高人胰岛素原的重组率。方法 :采用特有的重组方法 ,将小C肽人胰岛素原类似物 (B Arg Arg A)与人胰岛素原 (B C A)进行重组条件的比较。 结果 :发现二者在 pH10 .6左右处重组率达到最大 ,且在相同的条件下B Arg Arg A蛋白质的重组率 (94% )较B C A蛋白质 (82 % )的高。结论 :进一步验证了“胰岛素的A、B链含有足够使二硫键正确配对的结构信息”的论点。 展开更多
关键词 胰岛素原 类似物 人胰岛素质
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