原代培养乳鼠窦房结细胞的形态和kir2.1蛋白表达

目的研究乳鼠窦房结细胞中kir2.1蛋白表达水平,建立一套可靠的乳鼠窦房结定位、细胞培养与鉴定技术,为进一步心脏生物起搏实验奠定基础。方法在石蜡切片中用HE染色、嗜银染色、髓鞘染色和Mallory磷钨酸-苏木素染色法(PTAH)进行乳鼠窦房结定位和形态学观察;取SD乳鼠的窦房结组织进行原代细胞培养,观察培养细胞的形态和搏动频率,免疫组织化学检测其kir2.1蛋白表达。结果综合嗜银染色、髓鞘染色和PTAH染色3种方法可准确定位乳鼠窦房结组织。在培养的窦房结细胞中观察到梭形细胞、三角形细胞和不规则形细胞3种有自发性收缩的细胞,其中梭形细胞最多且形态结构特点和搏动频率符合起搏细胞的特点,三角形和不规则细胞与心房肌细胞特征相似。乳鼠窦房结细胞的kir2.1蛋白表达低于心房和心室肌细胞。结论综合嗜银染色、髓鞘染色和PTAH染色3种方法可以准确定位SD乳鼠窦房结,乳鼠窦房结细胞中kir2.1蛋白表达水平低于心房和心室肌细胞。

兔窦房结的光镜观察

利用显微镜观察了20例成兔心窦房结的连续切片。窦房结位于腔耳角下方,界沟的静脉窦侧,心内外膜之间,长轴与界沟一致。窦房结上中部宽,下300变细。中心区位于中、上1/3交界处或中1/3处。构成窦房结的主要细胞为P细胞和T细胞。P细胞圆形或椭圆形,较小,核大圆,胞质淡染。T细胞形态介于P细胞和心肌细胞之间,位于结的上下端及周边。根据细胞的构筑把结分为P细胞区和T细胞区。结平均为6.25×2.23×0.26mm。

正常人窦房结间质与年龄变化的相关研究

应用网格测微器，半定量测定106例无明显心脏疾病之人体窦房结（SAN）纵切最大面积区域间质所占百分比，旨在探讨SAN间质变化与年龄递增的相互关系。结果：小于10岁，间质极少；11～20岁，间质所占百分比小于10％；21～40岁，为11％～25％；41～50岁，为26％～50％；51～60岁，为51／～75％；61～83岁，多于75％。40岁之前，SAN实质细胞与间质（以胶原纤维为主）均随年龄递增而逐渐增多；40岁后，SAN结细胞逐渐减少，间质相对变多，脂肪开始出现，呈现增龄性生理变化。

兔右冠状动脉缺血再灌注致窦房结与心房肌细胞凋亡及L-精氨酸的干预作用

目的 :观察缺血再灌注 (IR)致兔窦房结及其周围心房肌细胞凋亡及L 精氨酸干预作用。方法 :采用在体兔右冠状动脉缺血再灌注模型 ,分IR组 ,IR +NS组 ,IR +L arg组。结果 :(1)三实验组中细胞凋亡率从结中央、结周边到周围心房肌是加重递增的 ,呈不均一性 ;(2 )IR +L arg组各部位细胞凋亡率明显降低 ,仍显示梯度凋亡 ;(3)光镜下 ,三实验组窦房结周围心房肌细胞损伤程度则较结中央细胞重 ,而IR +L Arg组相同部位细胞损伤程度轻。结论 :缺血再灌注可诱导窦房结及其周围心房肌细胞不均一凋亡 ,且窦房结凋亡率低 ;补充一定量的外源性L 精氨酸可降低缺血再灌注所致的细胞凋亡作用。

人窦房结中突触素增龄性变化的定量研究

为了探讨正常人窦房结中突触素增龄性变化的规律 ,用免疫组织化学方法显示窦房结中的突触素 ,并用计算机图像分析技术测量突触素的免疫阳性物面积。结果显示 :窦房结中的突触素阳性物在 1岁以前较少 ,1岁以后显著增多 ,并在 1～ 2 0岁年龄组达到最多 ,其后随年龄增长而减少 ,70岁以后降到最低。

NO对兔窦房结自律性的影响

目的 :观察外源性NO供体硝普钠 (SNP)和吗啉 斯德酮亚胺 (SIN 1)对离体兔窦房结起搏细胞 (SANC)自律性的影响 ,并初步探讨其作用机制。方法 :利用细胞内微电极技术记录SANC动作电位 ,分析APA(动作电位幅值 ) ,Vmax(0期最大除极速率 ) ,VDD(舒张期除极速率 ) ,RPF(起搏细胞放电频率 )的变化。结果 :SNP(10 -5- 10 -2 mol/L)增快SANC自发放电频率 (RPF)和舒张期除极速率 (VDD) ,并呈浓度依赖性。 10 -3 mol/LSNP使RPF(beats/min)由 16 3± 10 .8增至 195 .0± 13.1,VDD(mV/s)由 5 0 .3± 9.6增至 70 .2± 12 .1(P <0 .0 1)。SIN 1(10 -3 - 10 -2mol/L)亦使RPF和VDD增快 (P <0 .0 1)。鸟苷酸环化酶抑制剂 10 -4mol/L甲基美兰 (MB)完全阻断了 1mmol/LSNP引起的RPF和VDD增长 (P <0 .0 1)。If阻断剂 2mmol/LCsCl部分阻断了 1mmol/LSNP引起的正性变时作用和VDD增长 (P <0 .0 5 )。ICa L阻断剂 0 .4 6 μmol/LNIF对于 1mmol/LSNP所致的RPF和VDD的增长无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论 :外源性NO可增快离体兔SANC自律性 ,此效应通过NO cGMP途径产生 ,至少部分与If增强有关 ,ICa L对此无显著作用。

大鼠窦房结光镜和电镜观察

对14只SD大鼠心脏窦房结进行了光镜和电镜观察。窦房结位于界嵴静脉窦侧的心外膜下。窦房结内的主要细胞是P细胞和T细胞,P细胞位于结中心,圆形或多边形,核大胞浆淡染。电镜下P细胞肌微丝量少,核大,有电子致密颗粒。T细胞位于结的周边部位,形态和大小界于P细胞与心房肌细胞之间。

兔心窦房结的亚微结构观察

本文观查了8例杂种成免心脏窦房结的亚微结构。窦房结主要由P细胞和T细胞构成。P细胞多成团存在。细胞圆形或多边形,胞核大,可见双核细胞;胞质内肌原纤维和线粒体较少;核糖体、糖原颗粒、高尔基氏器、粗面和滑面内质网均较丰富;高尔基氏器附近有电子密度较高的球形颗粒;胞膜下见到许多小凹和小囊;P细胞间有散在的中间连接。T细胞的形态和结构介于P细胞和心肌细胞之间。最后对窦房结内各细胞的功能特点加以讨论。

急性缺血对单个窦房结起搏细胞起搏电流的影响

目的探讨急性缺血对窦房结起搏细胞起搏电流(If)影响的机制。方法将兔窦房结起搏细胞分为三组,均先灌流正常台式液,电流稳定后实验Ⅰ、Ⅱ组分别灌流含5.4、10 mmol/L KCl的缺血样台式液,实验Ⅲ组灌流含10 mmol/L KCl台式液,灌流5~8 min,再用正常台式液冲洗;采用穿孔膜片钳技术记录If。结果实验Ⅰ组If电流密度在舒张期膜电位(-60^-70 mV)无显著变化;实验Ⅱ组If电流密度在测试电位(-60^-110mV)均显著增强(P<0.05);而实验Ⅲ组If电流密度亦显著增强(P<0.05)。结论急性缺血伴有细胞外高钾可显著增强兔窦房结起搏细胞If电流密度,其机制可能与细胞外高钾有关。

成人心传导系统的超微结构

目的 进一步观察成人心传导系统的超微结构。方法 对窦房结、房室结采用纵切法 ,分别于其头、体、尾部切取 1mm3 组织各两块 ;房室束分叉部采用横切法切取其分叉部的近、远段组织各两块 ,用透射电镜观察。结果 (1)窦房结头部或头体交界部见P细胞 3～ 4个环抱成团 ,团内细胞互相广泛连接 ,构成一个电传导装置 ;(2 )窦房结和房室结可见有功能下降的明细胞与代偿性功能增强的暗细胞相并列 ;(3)结细胞退行性变与纤维组织增生并举 ;(4)窦房结的退行性变化从外侧部、尾部开始。

右冠状动脉缺血再灌注致窦房结及其周围心房肌细胞的不均一凋亡

目的 观察右冠状动脉缺血再灌注(IR)致兔窦房结及其周围心房肌细胞的凋亡规律。方法 成年家兔2 2只,其中模型对照组10只,IR模型组12只用于在体右冠状动脉根部结扎或放松制作窦房结缺血6 0 min、再灌注6 0 min模型,采用末端标记TU NEL 法检测窦房结中央、窦房结周边及其周围心房肌细胞凋亡率及光、电镜下结构变化。结果 (1) IR组有8只(8/ 12 )窦房结及其周围心房肌均有细胞凋亡现象,其凋亡率(% )分别为11.3±3.7、15 .0±4 .5和2 4 .4±5 .9;(2 )光镜下,IR组窦房结起搏细胞边界不清,胞核固缩,胞浆嗜酸性增强,细胞呈腺样排列;电镜下,心房肌细胞呈明显凋亡征象。结论 IR可诱导窦房结及其周围心房肌细胞呈梯度不均一凋亡,且窦房结中央凋亡率最低。

用于膜片钳研究的乳鼠窦房结细胞的分离与鉴定

目的比较"酶解+差速贴壁"法和"酶解+差速贴壁+5-溴脱氧尿嘧啶核苷(常规培养)"法体外分离培养乳鼠窦房结细胞,寻找可行的用于膜片钳实验的分离方法。方法取Wistar乳鼠的窦房结组织,分别采用"酶解+差速贴壁"和常规培养法分离培养窦房结细胞,观察细胞形态结构、搏动频率、膜片钳实验难易程度及成功率。同样方法分离培养心房肌细胞作为对照。结果培养的窦房结细胞中梭形细胞最多、心房肌细胞中三角形细胞最多。两种方法分离的窦房结细胞中均为梭形细胞最多并均可记录到自发性动作电位,其中"酶解+差速贴壁"法分离的细胞活性更好,进行膜片钳实验的成功率更高。结论"酶解+差速贴壁"法能成功分离出乳鼠窦房结细胞,操作步骤简单,细胞损伤小、活性好,能更好地进行膜片钳实验研究。

人心窦房结的光镜观察

本文对11例人心窦房结的形态和位置作了连续切片观察。窦房结位于界嵴上部的心外膜深面约1mm 左右,结的长轴与界嵴长轴一致,其形状多种多样。成人结的大小为14×3.6×1.09mm^3;儿童结的大小为6.9×2.3×0.8mm^3.窦房结组织染色淡(HE 染色),组织致密,结中心有较大动脉穿过。结细胞明显较一般心房肌细胞小,其中P 细胞类似原始心肌细胞,核大、胞质肌原纤维少,染色淡.T 细胞为短柱状,核较小染色深浅介于P 细胞和心房肌细胞之间状态.上述两种细胞位于胶原纤维相互交织的网眼内。

右冠状动脉急性缺血/再灌注时窦房结细胞凋亡与iNOS蛋白的表达

目的 观察在体兔右冠状动脉急性缺血/再灌注(L/R)时窦房结细胞凋亡与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的关系。方法 在体兔右冠状动脉根部结扎或放松制作窦房结缺血/再灌注模型,健康成年新西兰兔70只分7组:假手术对照组、I2h组、I2hR2h组、I2h+NS(生理盐水)组、I2h+SMT(iNOS抑制剂Smethylisothiourea,SMT)组、I2hR2h+NS组和I2hR2h+SMT组。采用末端标记TUNEL法、SP免疫组化法结合彩色图像分析技术,检测窦房结细胞凋亡指数(AI)及iNOS蛋白表达的积分光密度(A)值。结果 ①I2hR2h组AI及iNOS A值明显高于12h组(P<0.01);②应用iNOS抑制剂后,I2h+SMT组、I2hR2h+SMT组AI及iNOS A值均明显低于I2h组和I2hR2h。组(P<0.05或P<0.01)。结论 缺血诱导窦房结细胞凋亡,再灌注加重细胞凋亡和增加iNOS表达,且细胞凋亡指数与iNOS表达变化相一致。提示iNOS生成增多可能与缺血再灌注窦房结细胞凋亡密切相关。

交感神经化学切除后大鼠心窦房结区神经递质的变化

，王健本用６－羟多巴胺（６－ＯＨＤＡ）化学切除大鼠心内交感神经后，用免疫组织化学结合图像分析法和放免测定观察窦房结（ＳＡＮ）区神经肽Ｙ（ＮＰＹ）及降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）的变化；同时应用组织化学方法结合图像分析、生物化学测定观察了ＳＡＮ区去甲肾上腺素（ＮＡ）及乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）的变化。实验发现，静脉注射６－ＯＨＤＡ５０ｍｇ／ｋｇ一周后，ＳＡＮ区ＮＡ及ＮＰＹ含量明显减少，ＡＣｈＥ活性显著增加，ＣＧＲＰ含量增加不明显。

大鼠窦房结中央区细胞类型的形态特征和数量分析

目的:为研究起搏机需辨认,计数和分离大鼠窦房结起搏(P)细胞.方法:根据最早起搏点和细胞电位记录确定大鼠窦房结中央区位置,取窦房结连续切片.HE和Masson染色,以光镜,图像仪及电镜辨认、分析窦房结内各类细胞形态特点和各类细胞数量.结果:从细胞大小,外形,染色浓淡,核/胞浆比,核面积和核灰度,肌原纤维分化程度等指标,可区分各类细胞,并算出各类细胞的数量比.结论:确立了各类细胞的辨别标准,中央区P细胞总数1200～2000个,占细胞总数的13.1%.过渡细胞占44%.纤维细胞占17.1%.

强心复脉方含药血清对乳鼠受损窦房结细胞动作电位的影响

目的研究强心复脉方含药血清对乳鼠受损窦房结细胞动作电位的影响。方法分离培养Wistar乳鼠窦房结细胞,分为6组:正常组、模型组、100μl含药血清组、200μl含药血清组、300μl含药血清组、空白血清组。除正常组外,其余各组均模拟缺血-再灌注制备细胞损伤模型。采用膜片钳技术在电流钳模式下记录各组细胞自发性动作电位,测量各组细胞复极至20%、50%、90%动作电位时程(APD20、APD50、APD90)、最大舒张电位(MDP)及动作电位幅值(APA)。结果于造模后细胞外液分别加入100μl、200μl、300μl强心复脉方含药血清,与模型组比较,100μl含药血清组、200μl含药血清组、300μl含药血清组APD20缩短,分别为[(77.2±5.5)ms vs.(35.7±7.1)ms]、[(77.2±5.5)ms vs.(50.1±7.5)ms]、[(77.2±5.5)ms vs.(39.7±4.3)ms],差别均具有统计学意义(P均<0.01);APD50缩短,分别为[(147.5±5.1)ms vs.(90.6±5.8)ms]、[(147.5±5.1)ms vs.(111.0±4.1)ms]、[(147.5±5.1)ms vs.(109.0±2.4)ms],差别均具有统计学意义(P均<0.05)。与正常组比较,经缺血-再灌注造模后(模型组)细胞的MDP上升,APA减小,为[(-61.9±5.4)m V vs.(-54.5±4.6)m V],[(84.7±5.0)m V vs.(71.4±4.7)m V],差异均具有显著性统计学意义(P均<0.01)。于造模后细胞外液分别加入100μl、200μl、300μl强心复脉方含药血清,与模型组比较,各组MDP值无明显改变,无统计学意义(P均>0.05)。100μl含药血清组和300μl含药血清组APA均较模型组增大,分别为[(83.2±5.9)m V vs.(71.4±4.7)m V]和[(82.2±6.4)m V vs.(71.4±4.7)m V],差异均具有显著统计学意义(P均<0.01)。结论强心复脉方含药血清能缩短乳鼠受损窦房结细胞动作电位的APD20、APD50,增大APA,缩短动作电位时程,进而加快细胞自发性搏动频率。

L-精氨酸对模拟缺血再灌注培养乳兔窦房结细胞损伤的影响

目的:观察模拟缺血再灌注(IR)培养乳兔窦房结细胞(SANC)损伤及左旋精氨酸(L-Arg)干预作用。方法:对SANC模拟低糖缺氧培养,添加L-Arg和L-Arg+L-NAME与培养细胞共同孵育,观察细胞形态变化。细胞分为7组:正常对照组;I120组;I120R120组;I120+L-Arg组;I120R120+L-Arg组;I120+L-Arg+L-NAME组;I120R120+L-Arg+L-NAME组。结果:I120组、I120+L-Arg+L-NAME组较多细胞核浓缩,胞质嗜酸性增强为紫红色;AO荧光染色示凋亡细胞体积明显缩小,核呈黄绿色,断裂为多个碎块状,碎裂的核由膜包裹着凸起于细胞表面呈黄绿色凋亡小体,与I120组、I120R120组比较,I120+L-Arg组、I120R120+L-Arg组凋亡率明显降低(P<0.05);而I120+L-Arg+L-NAME组和I120R120+L-Arg+L-NAME组无明显改善(P>0.05);电镜下,凋亡细胞核染色质固缩,聚集于核膜呈境界分明的块状或新月形小体,染色质凝聚于核周边;细胞核分解成大小不等的浓缩团块,游离于胞浆中。结论:①模拟缺血一定时间后可以诱导SANC凋亡,再灌注后细胞损伤加重;②NO底物L-精氨酸可减轻模拟缺血-再灌注窦房结细胞结构损伤。

人胎心脏窦房结的定位及结构

对胎龄在17～21周的8例人胎右心房作连续石蜡切片、间隔贴片法,进行了胎儿窦房结定位和观察。结果表明:窦房结位于腔静脉窦与固有心房交界处的心外膜下,偏向腔静脉窦壁。主体部分在界嵴上方、腔静脉窦与固有心房有完整隔壁的水平。窦房结结细胞着色较腔静脉窦肌细胞淡、较固有心房肌细胞深,胞质内空泡少,分布密度较高。窦房结可有完整的包膜,内有纤细的结缔组织网及窦房结中央动脉。提示要定位窦房结,取材应包括部分上腔静脉及完整的腔耳连接部,横向切片更易捕捉窦房结。

内皮素对家兔窦房结起搏细胞电活动的影响

本文用细胞内微电极技术观察了ＥＴ－１对家兔窦房结起搏细胞电生理活动的影响。所得结果如下：（１）在以ＥＴ－１作表面灌流时，起搏细胞的４相自动去极化的速度（ＶＤＤ）显著减慢，且呈浓度依赖性，结果导致起搏细胞的自发放电频率（ＲＰＦ）降低。（２）由ＥＴ－１引起的ＶＤＤ和ＲＰＦ下降，可由事先投用ＥＴ＿Ａ＾受体选择性阻断剂ＢＱ－１２３（２０，１００μｇ／Ｌ）所阻断。这一结果有力提示，ＥＴ－１对起搏细胞的电生理效应是由ＥＴ＿Ａ受体亚型介导的。（３）事先投用Ｋ＿（ＡＴＰ）通道阻断剂格列苯脲（１０μｍｏｌ／Ｌ），可完全消除ＥＴ－１对起搏细胞的负性频率作用。根据上述结果，似可认为，ＥＴ－１与ＥＴ＿Ａ受体的结合可激活Ｋ＿（ＡＴＰ）通道，致使Ｋ￣＋电流增加和起搏细胞的ＶＤＤ减慢。