桃儿七种子休眠解除过程中细胞壁代谢及种皮超微结构的变化

为探究低温层积过程中桃儿七种子细胞壁代谢及种皮超微结构与休眠解除的内在联系,该研究通过低温层积解除桃儿七种子休眠,分析休眠解除过程中种子不同部位细胞壁组分及相关代谢酶的变化,同时利用扫描电镜对种皮的超微结构进行观察。结果表明,(1)桃儿七种皮主要由角质层、栅状石细胞层及海绵组织层3层构成,在层积过程中,种皮内部的海绵组织逐步疏松膨胀,种皮表面破损加剧;(2)种子不同部位的细胞壁组分具有明显差异,整个层积过程中,种胚、种皮和胚乳中的纤维素含量均在层积中期(45 d和60 d)降至最低,3个部位的纤维素酶活性在层积中期对应升高;种胚和种皮内的半纤维素含量均在层积中期显著下降,种皮中甘露聚糖酶活性和木糖苷酶活性在层积中期时相应达到最大;3个部位的果胶含量均在层积后期(75 d和90 d)时显著下降,而种皮和胚乳中多聚半乳糖醛缩酶活性也在层积后期相应升高;(3)种胚和胚乳内过氧化物酶活性在层积75 d和90 d时明显下降,而SOD活性在此时显著上升。(4)种子不同部位3种木质素单体的组成比例具有明显区别,同时3种木质素单体含量均随层积时间的延长而显著降低,且胚乳和种皮中的S-木质素含量对种子萌发存在显著的负向影响关系。研究认为,在低温层积过程中,桃儿七种子内细胞壁组分纤维素、半纤维素及木质素的逐步酶解,活性氧作用下的细胞壁松弛以及海绵组织层的疏松膨胀和种皮的破裂,破坏了细胞壁的刚性结构,促使种子机械束缚力降低,吸水性能提高、胚根生长能力增强,最终导致其休眠解除。

桃儿七的研究进展

主要综述了国内外对桃儿七的研究进展。介绍了桃儿七的地理分布、系统发育、化学成分、生物学特性、资源现状及解决办法 ,特别介绍了利用植物组织培养、细胞培养、生物反应器、毛状根培养等生物技术方法来生产鬼臼毒素的研究新进展。

桃儿七内生菌及产鬼臼类物质菌株的筛选

目的寻找扩大获得鬼臼类物质资源的新途径。方法采用常规无菌方法从桃儿七植株中分离纯化内生菌;利用细菌和真菌的常规鉴定方法对所分离的菌进行鉴定;用薄层层析(TLC)法检测发酵产物。结果分离得到6株细菌,20株真菌,其中4株真菌(Tc,Td,Te,Mi)可产鬼臼毒素类物质,2株真菌(Mh,Id)可产鬼臼毒素单糖甙。结论桃儿七部分内生真菌具有产生与其宿主相同或相似生理活性成分的能力。

基质固相分散提取桃儿七根中鬼臼毒苷和异鬼臼苦酮

利用基质固相分散法(MSPO)提取桃儿七根中的鬼臼毒苷和异鬼臼苦酮,并采用高效液相色谱法对提取结果进行了分析.结果表明,对于鬼臼毒苷,以硅胶作为分散剂,以甲醇或乙醇作为洗脱剂时其提取率最高;对于异鬼臼苦酮,以硅藻土作为分散剂,以甲醇或乙醇作为洗脱剂时其提取率最高.本方法对鬼臼毒苷和异鬼臼苦酮的提取率分别为18.40和0.60 mg/g,高于传统的甲醇回流提取(分别为17.55和0.38 mg/g),尤其对异鬼臼苦酮的提取率明显高于甲醇回流提取.

桃儿七化学成分研究

目的:对药材桃儿七的化学成分进行研究。方法:利用大孔吸附树脂柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、ODS柱色谱、硅胶柱色谱进行分离纯化,通过理化常数和波谱分析技术进行结构鉴定。结果:从桃儿七中分离得到9个化合物,分别鉴定为:异苦去氧鬼臼毒素(Ⅰ)、3β-羟基-7α-甲氧基-24β-乙基-胆甾-5-烯(Ⅱ)、5α,8α-过氧-(22E,24R)-麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(Ⅲ)、7β-羟基-谷甾醇(Ⅳ)、β-谷甾醇(Ⅴ)、胡萝卜苷(Ⅵ)、α-棕榈酸甘油酯(Ⅶ)、α-D-葡萄糖(Ⅷ)、5-羟甲基糠醛(Ⅸ)。结论:化合物Ⅰ～Ⅳ、Ⅶ～Ⅸ为首次从该属植物中分离得到。

藏药小叶莲的化学成分研究

目的 :对藏药小叶莲的化学成分进行研究。方法 :采用硅胶色谱柱进行分离 ,通过物理、化学和光谱学方法鉴定各化合物的结构。结果 :分离并鉴定了 6个化合物 ,分别为去氧鬼臼毒素 (deoxypodophyllotoxin)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、4′-去甲去氧鬼臼毒素 (4′- demethdeoxypodophyllotoxin)、8-异戊烯基山柰酚 (8- prenylkeamf-erol)、柠檬酚 (citrusinol)和β-谷甾醇。结论 :各化合物均为首次从小叶莲中分得 ,其中 8- prenylkeamferol和

响应面法优选桃儿七中的鬼臼毒素的超声提取工艺

以桃儿七为原料,采用超声提取的方法提取鬼臼毒素,考察了超声提取时间、乙醇体积分数、料液比和超声功率等因素对提取工艺的影响,并通过响应面法进行工艺优化,得到提取过程优化的工艺条件:乙醇体积分数为55.43%、料液比为1∶9.97、超声时间和功率分别为49.87min和206.71W。最佳条件下的验证实验表明:桃儿七鬼臼毒素提取率13.36%,浸膏纯度为2.78%。拟合得到的模型较好的符合实际。

桃儿七中黄酮类成分的分离与鉴定

目的对桃儿七的95%(φ)乙醇提取物的化学成分进行研究。方法利用反复硅胶、SephadexLH-20、开放ODS柱色谱等方法进行分离纯化;根据理化性质及波谱分析对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果分离得到8个黄酮类化合物,分别鉴定为山柰酚(kaempferol,1)、槲皮素(querce-tin,2)、杨梅素-3',4'-二甲醚(myricetin-3',4'-dimethyl ether,3)、3-O-甲基-槲皮素(3-O-methyl-quercetin,4)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside,5)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside,6)、芦丁(rutin,7)、山柰酚-3-O-芸香糖苷(kaempfer-ol-3-O-rutinoside,8)。结论化合物3、4、8为首次从该属植物中分离得到。

植物桃耳七中鬼臼毒素的提取及HPLC分析

采取化学提取及层析分离，从植物桃耳七中分离出高纯度鬼臼毒素，并利用ＨＰＬＣ对其进行分析，测定结果证明产品中鬼臼毒素的含量不低于９８％ ，有关物质含量不超过２％ 。

响应面分析法在优化桃儿七鬼臼毒素CO_2超临界萃取工艺中的应用

在单因素试验基础上,以萃取压力、萃取温度、萃取时间为影响因素,鬼臼毒素提取率为响应值,根据中心组合试验设计原理采用3因素3水平的响应面分析法,对桃儿七中鬼臼毒素的二氧化碳超临界萃取(CO2-SFE)条件进行优化.结果表明:CO2-SFE萃取桃儿七中鬼臼毒素的最佳工艺条件为:萃取压力38MPa,萃取温度50℃,萃取时间52min,在此条件下鬼臼毒素的提取率可达11.38%.

桃儿七不同外植体愈伤组织诱导研究

旨在建立一种桃儿七愈伤组织诱导培养体系,筛选出最佳诱导培养基和最适外植体。以MS为基本培养基,采用正交试验法研究6-BA、2,4-D和TDZ 3个因素及其组合对桃儿七成熟叶片、叶柄和茎段愈伤组织诱导率的影响。研究结果表明:3种外植体均可诱导出愈伤组织,叶片愈伤组织诱导率最高,达44.3%,其次是叶柄,达24.7%,茎的愈伤组织诱导率为18.1%,最佳愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+TDZ 0.1 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L,细胞分裂素6-BA和TDZ联合使用有利于提高愈伤组织诱导率并改善愈伤组织质地。与茎段和叶片所得愈伤组织相比,以叶柄为外植体获得的愈伤组织质地较疏松,呈明显的黄绿色颗粒状,更适合进一步细胞培养和诱导分化。本研究建立了一种高效的桃儿七愈伤组织诱导培养体系,为桃儿七体细胞胚的培养提供了材料。

高纯鬼臼毒素制备新工艺

以桃儿七为原料 ,甲醇作溶剂 ,70℃回流提取 3次 ,每次 2h。所得浸膏 ,用苯在 80℃加热回流溶解 ,过滤、浓缩、放置结晶 ,得浅黄色粗品。用无水乙醇溶解粗品 ,经活性炭脱色后 ,浓缩成树脂状 ,用苯悬浮溶解 ,弃去不溶物。采用二步结晶法 ,先用苯作溶剂 ,除去绝大部分杂质后 ,再用苯 乙醇〔V(苯 )∶V(乙醇 ) =2∶1〕为溶剂 ,重结晶 ,得白色针状溶剂加合物结晶 (熔点 92～ 93℃ ) ,12 5℃烘干 2h ,脱去溶剂分子后 ,即得精品鬼臼毒素 ,其质量分数 >96 % ,产率为 1 7%

桃儿七营养器官解剖结构的地理差异

运用植物解剖学技术对云南、四川、甘肃和宁夏等6个居群桃儿七(Sinopodophyllum emodi)营养器官的结构进行了比较研究。结果显示,(1)桃儿七为多年生草本,根状茎发达,其次生结构包括周皮、皮层和维管组织三部分。(2)各居群间的差异主要表现在木栓层厚度、维管束个数和大小、导管分布格局以及淀粉粒的分布位置。其中:根初生结构由表皮、皮层和中柱构成,各居群间的差异主要表现在皮层厚度、初生木质部类型以及淀粉粒的分布位置;茎由表皮、皮层和维管柱构成,维管束均为外韧型维管束,仅具束中形成层,髓维管束与正常维管束之间形成腔隙,差异主要表现在基本组织厚度、维管束数量及大小。(4)桃儿七叶片构造类似于一般双子叶植物,由表皮、叶肉、叶脉三部分构成,下表皮气孔较多且孔下室发达,差异主要表现在叶片厚度等方面。研究表明,桃儿七营养器官的结构既表现出一定的耐旱性,又与阴生环境相适应,各居群的结构特点与其分布区生态环境密切相关。

太白七药桃儿七研究进展

综述了桃儿七在化学成分、药理活性、临床应用方面的研究进展,特别介绍了为了降低鬼臼毒素的毒性、扩大其临床用途而利用制剂新技术制备的鬼臼毒素相关产品的研究新进展,对促进桃儿七进一步研究开发及规范其临床应用等方面具有重要意义。

桃儿七愈伤组织培养体系的建立及鬼臼毒素含量测定

利用组织培养技术研究桃儿七不同外植体、不同生长调节剂浓度配比和不同蔗糖浓度对桃儿七愈伤组织生长的影响,建立桃儿七愈伤组织增殖培养技术体系,同时采用高效液相色谱法测定桃儿七愈伤组织中鬼臼毒素含量。结果表明,桃儿七愈伤组织诱导的最佳外植体是叶柄;愈伤组织的最佳增殖培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+TDZ 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,碳源蔗糖浓度为40.0 g/L,获得疏松颗粒状生长旺盛的愈伤组织,愈伤组织中鬼臼毒素含量为1.56%,为野生桃儿七根茎中鬼臼素素含量的68.4%。因此,可通过对桃儿七愈伤组织的培养获取鬼臼毒素。

桃儿七的抗肿瘤作用

桃儿七根及根茎的乙醇提取物对体外培养的人红白血病K_(562)细胞、小鼠白血病L_(1210)细胞及L_(7712)细胞,用小孔板法,10.0、5.0、2.5及1.0μg/ml终浓度剂量,24h后残留率分别为44.17％、47.63％、64.43％、79.57％,42.84％、50.73％、63.21％、75.10％及39.76％、46.36％、61.42％、75.24％;该药品小鼠单次腹腔注射LD_(50)为76.3～60.6mg/kg;对小鼠移植性肿瘤EAC、U_(14)及H_C,该药品用14.0mg/kg及7.0mg/kg剂量,瘤重抑制率分别为42.2％、37.8％,38.8％、33.3％及41.5％、35.6％。

HPLC测定藏边大黄中的藏黄苷A

目的测定不同来源藏边大黄中的藏黄苷A。方法采用HPLC法,色谱柱为Kromasil C18、Shim-pack C18(250mm×4.6mm,5μm),检测波长为320nm,流动相为乙腈-水(15:85),流速为1.0ml·min-1,柱温为30℃。结果藏黄苷A0.17～17.00μg与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999,n=6),平均加样回收率为100.30%,RSD=1.0%(n=6);5份藏边大黄中藏黄苷A的含量均大于7.5%。结论所建方法简单、稳定,藏黄苷A的含量可作为藏边大黄的品质评价依据。

微波技术提取大黄蒽醌类物质的最佳工艺研究

目的优选微波技术提取大黄游离蒽醌的工艺。方法先采用单因素考察,然后采用正交试验法考察微波输出功率、乙醇浓度、浸出时间、料液比4个因素对提取率的影响,优选大黄游离蒽醌的最佳浸出方案。结果采用70%乙醇溶液在微波输出功率中高火,用70%乙醇,料液比为1∶8,提取5min,提取2次,大黄游离蒽醌提取率为1.31%,相对提取率达到88.52%。结论用微波浸提法提取大黄中的蒽醌类成分效率高、操作简便、省时。

桃儿七国内外研究进展

桃儿七为著名的珍稀濒危药用植物。在阐述桃儿七化学成分提取及药理作用研究的基础上,综述了桃儿七生物学特性及人工栽培技术,并对其遗传多样性,鬼臼毒素生产的其它途径等方面的研究进展进行了阐述,同时对当前研究中存在的问题及今后的研究方向进行了展望。

藏边大黄的化学成分研究

目的研究蓼科波叶组藏边大黄的化学成分。方法采用硅胶、聚酰胺和ODS柱层析法。结果分离得到11个化合物,经化学方法和波谱学鉴定,确定结构分别为:大黄酚(Ⅰ)、大黄素甲醚(Ⅱ)、大黄素(Ⅲ)、β-谷甾醇(Ⅳ)、trans-3,5,3,′4′-四羟基芪(Ⅴ)、d-儿茶素(Ⅵ)、胡萝卜苷(Ⅶ)、trans-3,5,3,′4′-四羟基芪-4-′O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅷ)、trans-3,5,3,′4′-四羟基芪-4′-O-β-D-(6′′-O-没食子酰)-吡喃葡萄糖苷(Ⅸ)、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅹ)和大黄酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅺ)。结论其中Ⅸ系首次从该植物中分得。