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甜蛋白thaumatin基因高效植物表达载体的构建 被引量:4
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作者 牛苏燕 蒋素华 +3 位作者 武思 张国付 崔波 叶永忠 《江西农业学报》 CAS 2012年第1期109-111,共3页
根据thaumatin氨基酸序列及植物蛋白质表达密码子的偏爱性,设计了thaumatinⅠ的全基因序列引物,采用重叠延伸PCR法,人工合成了thaumatinⅠ全长基因,克隆至载体pMD19-T上,序列测序表明,克隆的DNA序列与原设计序列完全相同,利用表达载体pR... 根据thaumatin氨基酸序列及植物蛋白质表达密码子的偏爱性,设计了thaumatinⅠ的全基因序列引物,采用重叠延伸PCR法,人工合成了thaumatinⅠ全长基因,克隆至载体pMD19-T上,序列测序表明,克隆的DNA序列与原设计序列完全相同,利用表达载体pRI101-ON,构建了高效植物表达载体pRI101-thaumatin。 展开更多
关键词 甜蛋白 thaumatin pRI101-thaumatin 表达载体
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甜味蛋白thaumatin基因转入烟草的研究 被引量:3
2
作者 孔建强 赵琦 +2 位作者 杨奇志 潘宁 王振莲 《西北植物学报》 CAS CSCD 2004年第13期2243-2249,共7页
利用基因工程技术 ,将分别克隆在两个不同载体上的甜味蛋白 thaum atin c DNA基因片段连接成一个完整的 c DNA基因 ,并将该基因克隆进 p BI12 1,构建成表达载体 p BI12 1- tha.通过冻融法导入农杆菌 ,农杆菌介导叶盘法转入烟草 ,经过组... 利用基因工程技术 ,将分别克隆在两个不同载体上的甜味蛋白 thaum atin c DNA基因片段连接成一个完整的 c DNA基因 ,并将该基因克隆进 p BI12 1,构建成表达载体 p BI12 1- tha.通过冻融法导入农杆菌 ,农杆菌介导叶盘法转入烟草 ,经过组培 ,得到转基因的植株 .提取转基因烟草总 DNA,经 PCR,PCR- Southern和 Southern杂交证实 ,甜味蛋白基因已整合到烟草基因组中 .RT- PCR结果证明 ,thaumatin基因已在转基因烟草中转录成 m RNA,但SDS- PAGE和甜味尝试都表明 展开更多
关键词 thaumatin 农杆菌 烟草 SOUTHERN RT-PCR 甜味蛋白
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植物甜蛋白thaumatin基因重组表达质粒的构建 被引量:3
3
作者 杨成丽 范文韬 +1 位作者 刘德立 段媛媛 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期219-221,共3页
利用 DNA重组技术 ,将植物甜蛋白 thaumatin基因克隆至植物表达载体 p BI1 2 1中 ,成功地构建了重组植物表达质粒 p BI1 2 1
关键词 甜蛋白基因 thaumatin 基因克隆 植物表达载体 基因重组 质粒 构建
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甜味蛋白thaumatincDNA基因的合成与筛选 被引量:10
4
作者 高音 赵琦 +3 位作者 万平 何红伟 杨志伟 华振玲 《首都师范大学学报(自然科学版)》 2000年第4期71-74,共4页
采用大肠杆菌偏爱的密码子 ,合成 30个寡聚脱氧核苷酸 ,在体外进行退火和连接合成甜味蛋白thaumatincDNA基因 ,将连接得到的DNA产物克隆到质粒 pBluescript SK上 ,转化大肠杆菌DH5α细胞 ,进行诱导表达筛选 ,将筛选的克隆进行cDNA全序... 采用大肠杆菌偏爱的密码子 ,合成 30个寡聚脱氧核苷酸 ,在体外进行退火和连接合成甜味蛋白thaumatincDNA基因 ,将连接得到的DNA产物克隆到质粒 pBluescript SK上 ,转化大肠杆菌DH5α细胞 ,进行诱导表达筛选 ,将筛选的克隆进行cDNA全序列测定 . 展开更多
关键词 甜味蛋白 基因合成 thaumatinCDNA基因 大肠杆菌 诱导表达筛选 序列分析
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植物甜蛋白Thaumatin研究进展 被引量:15
5
作者 杨成丽 刘德立 《武汉植物学研究》 CSCD 2001年第2期153-157,共5页
Sweet protein thanmatin is a noncaloric sweetener that has many advantages such as high sweetness intensity,low calories,no toxicity and nice sweet taste.The review is given about the structure,quality and possible sw... Sweet protein thanmatin is a noncaloric sweetener that has many advantages such as high sweetness intensity,low calories,no toxicity and nice sweet taste.The review is given about the structure,quality and possible sweet mechanism of sweet protein thaumatin.The development and application of sweet protein thaumatin will have broad prospect in the aspects of foodstuff industry and plant reformation. 展开更多
关键词 甜蛋白 thaumatin 甜味诱发蛋白 类甜蛋白 甜味机理
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农杆菌介导的Thaumatin基因转化烟草的研究 被引量:2
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作者 崔波 蒋素华 +3 位作者 田云芳 武振江 袁秀云 马杰 《江西农业学报》 CAS 2013年第7期50-52,56,共4页
以暗培养3 d的烟草叶片为受体,以Thaumatin为目的基因,应用根癌农杆菌介导法对烟草进行遗传转化,同时以烟草叶片为材料,对影响转化的几个因素进行优化研究,结果表明:侵染20 min、美罗培南浓度为25 mg/L时有利于提高转化率;经浓度为2.0 m... 以暗培养3 d的烟草叶片为受体,以Thaumatin为目的基因,应用根癌农杆菌介导法对烟草进行遗传转化,同时以烟草叶片为材料,对影响转化的几个因素进行优化研究,结果表明:侵染20 min、美罗培南浓度为25 mg/L时有利于提高转化率;经浓度为2.0 mg/L的PPT筛选获得的抗性植株经PCR、GUS组织化学染色和Southern杂交分析鉴定,初步证明外源基因Thaumatin已整合到烟草的基因组中。 展开更多
关键词 thaumatin基因 烟草 根癌农杆菌 遗传转化
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甜味蛋白thaumatin表达载体的构建 被引量:3
7
作者 赵琦 孔建强 高音 《首都师范大学学报(自然科学版)》 2003年第2期64-67,共4页
将克隆在不同质粒上的thaumatin基因的两个片段连接起来 ,连接产物克隆到质粒pUC18上 .测序结果表明 ,连接产物是一个完整的thaumatincDNA基因 .将此基因通过基因重组技术 ,克隆到植物表达载体pBI12 1中 ,构建了一个新的转化植物的表达... 将克隆在不同质粒上的thaumatin基因的两个片段连接起来 ,连接产物克隆到质粒pUC18上 .测序结果表明 ,连接产物是一个完整的thaumatincDNA基因 .将此基因通过基因重组技术 ,克隆到植物表达载体pBI12 1中 ,构建了一个新的转化植物的表达载体—pBI12 1 tha. 展开更多
关键词 甜味蛋白 thaumatin基因 基因重组 基因克隆 植物表达载体 基因工程
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甜味蛋白thaumatin-PDI二价植物表达载体的构建 被引量:1
8
作者 杨奇志 陈少敏 赵琦 《首都师范大学学报(自然科学版)》 2005年第2期59-62,68,共5页
将thaumatincDNA和PDI基因的上游分别连上启动子,下游连上终止子,通过基因重组技术,克隆到植物表达载体pCAMBIA130 2中,构建成一个同时含有thaumatin基因和PDI基因的新的植物二价表达载体pCAMBIA130 2 tha PDI.经测序,该表达载体中的th... 将thaumatincDNA和PDI基因的上游分别连上启动子,下游连上终止子,通过基因重组技术,克隆到植物表达载体pCAMBIA130 2中,构建成一个同时含有thaumatin基因和PDI基因的新的植物二价表达载体pCAMBIA130 2 tha PDI.经测序,该表达载体中的thaumatin基因与PDI基因的编码阅读框序列完全正确. 展开更多
关键词 植物表达载体 甜味蛋白 构建 二价 thaumatin 基因重组技术 cDNA I基因 n基因 启动子 PD 终止子 完全正 克隆 测序
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植物甜蛋白基因Thaumatin Ⅱ转化番茄的初步鉴定
9
作者 杨飞 李志邈 +3 位作者 杨悦俭 叶青静 王荣青 阮美颖 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期167-172,共6页
以番茄无菌苗的子叶为外植体,以抗卡那霉素的NPTⅡ作为选择标记基因,通过根癌农杆菌介导法,将甜蛋白Thaumatin Ⅱ基因导入番茄中,共获得10株独立的抗性转化株系。对抗性转化株系进行了PCR和Southern blotting鉴定,PCR检测得到了预期的... 以番茄无菌苗的子叶为外植体,以抗卡那霉素的NPTⅡ作为选择标记基因,通过根癌农杆菌介导法,将甜蛋白Thaumatin Ⅱ基因导入番茄中,共获得10株独立的抗性转化株系。对抗性转化株系进行了PCR和Southern blotting鉴定,PCR检测得到了预期的特异条带,Southern blotting结果表明其中1个转化株系插入了2个拷贝的Thaumatin Ⅱ cDNA。以上试验结果证明Thaumatin Ⅱ基因已经整合到转基因番茄植株的基因组中,为最终获得在蛋白质水平表达Thaumatin Ⅱ的无选择标记的转基因番茄打下了基础。 展开更多
关键词 番茄 植物甜蛋白 thaumatin Ⅱ基因 遗传转化
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最甜的蛋白质—Thaumatin 被引量:2
10
作者 刘树楷 郑建仙 《中国甜菜糖业》 1992年第4期47-59,共13页
引言没有人会想到从一种粗陋而长期被人忽略的水果中提取出来的一种蛋白质竟然有甜味,而且很可能是至今地球上发现的最甜物顷。更没人想到它竟还有良好的改善风味之功效。
关键词 甜蛋白 thaumatin 甜味剂
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甜味蛋白Thaumatin研究进展及在食品工业中的应用 被引量:5
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作者 杨阳 李淑燕 倪元颖 《中国食品添加剂》 CAS 北大核心 2012年第5期171-176,共6页
Thaumatin是一种天然植物甜味蛋白,具有甜度高、能量低、安全性好等优点。文章综述了其来源、结构和安全性、生产现状、在食品工业中的应用情况及国内外审批现状,以期为Thaumatin的国内研究、应用和审批提供参考。
关键词 甜味蛋白 索马甜 安全性 审批 甜味剂 食品添加剂
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THAUMATIN:一种强力甜味蛋白 被引量:2
12
作者 洛科.菲尔曼 《生命的化学》 CAS CSCD 1994年第5期39-42,共4页
THAUMATIN:一种强力甜味蛋白洛科·菲尔曼(南开大学生物化学与分子生物学系,天津300071)关键词甜味蛋白,Thaumatin近二十年来,无毒性和低热量甜味剂的生物化学研究取得了很大进展,并且带来重大的经... THAUMATIN:一种强力甜味蛋白洛科·菲尔曼(南开大学生物化学与分子生物学系,天津300071)关键词甜味蛋白,Thaumatin近二十年来,无毒性和低热量甜味剂的生物化学研究取得了很大进展,并且带来重大的经济效益。在这些甜味剂中有一些是蛋白质。... 展开更多
关键词 蛋白 甜味蛋白 thaumatin
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外源甜蛋白THAUMATINII基因转入烟草的研究 被引量:4
13
作者 周平 潘乃 +1 位作者 刘春清 陈章良 《植物学通报》 CSCD 1994年第4期17-20,共4页
利用土壤农杆菌系统,将高甜度的外源甜蛋白thaumatinI1基因转入烟草细胞,并得到大量转基因植株及其后代。经分子杂交分析确证thanmatinII基因已整会到烟草植株的基因组中,并在转录水平检测到表达。标记基因胭... 利用土壤农杆菌系统,将高甜度的外源甜蛋白thaumatinI1基因转入烟草细胞,并得到大量转基因植株及其后代。经分子杂交分析确证thanmatinII基因已整会到烟草植株的基因组中,并在转录水平检测到表达。标记基因胭脂碱合成酶(NOS)基因及新霉素磷酸转移酶(NPTII)基因也在转基因植株中正常表达。 展开更多
关键词 烟草 转基因植物 甜蛋白
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索马甜(Thaumatin) 被引量:2
14
《中国食品添加剂》 CAS 2000年第4期72-73,共2页
本标准由JECFA于1999年制订并公布,作为一种高倍甜味剂(蔗糖甜度的3000倍)和风味增强剂.文中介绍了定义、特性、纯度及测试方法.附有索马甜的来源、功能和已批准使用的国家等.
关键词 索马甜 高倍甜味剂 风味增强剂 定义 特性 纯度 测试方法
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荔枝落果中A型低聚原花青素抑制类甜蛋白促炎机制
15
作者 罗杨合 曾诗蔼 +5 位作者 李洛欣 谢翀 闫景坤 李玉婷 罗英捷 赵雷 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第8期145-152,共8页
以荔枝落果中的A型低聚原花青素为研究对象,探讨其对荔枝类甜蛋白(litchi thaumatin-like protein,LcTLP)促炎的抑制机理。采用乙醇提取、大孔吸附树脂纯化以及制备液相色谱仪等从荔枝落果中分离得到A型低聚原花青素(A-type oligomeric ... 以荔枝落果中的A型低聚原花青素为研究对象,探讨其对荔枝类甜蛋白(litchi thaumatin-like protein,LcTLP)促炎的抑制机理。采用乙醇提取、大孔吸附树脂纯化以及制备液相色谱仪等从荔枝落果中分离得到A型低聚原花青素(A-type oligomeric proanthocyanidins,A-OPC)纯化物,并对A-OPC结构鉴定,主要成分为原花青素A2、2个A型原花青素三聚体和1个A型四聚体,纯度达88.69%。利用LcTLP诱导构建RAW264.7细胞炎症模型,A-OPC的添加可抑制LcTLP诱导RAW264.7细胞的一氧化氮、细胞炎症因子白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α的分泌,在120μg/mL质量浓度下,抑制率分别可达58.38%、39.80%和86.31%(P<0.01)。蛋白免疫印迹分析发现,在120μg/mL质量浓度下A-OPC可降低诱导型一氧化氮合酶和环氧合酶2的表达量,并显著降低p65、核因子κB抑制蛋白、c-Jun氨基末端激酶、细胞外信号调节蛋白激酶和p38的磷酸化水平,说明A-OPC通过下调核转录因子-κB和丝裂原活化蛋白激酶通路中下游蛋白的磷酸化水平抑制LcTLP诱导的炎症反应。 展开更多
关键词 荔枝落果 A型低聚原花青素 荔枝类甜蛋白 抗炎机制
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重组荔枝类甜蛋白的高效表达、纯化及活性鉴定
16
作者 曹琳彩 文舜华 +4 位作者 王凯 刘旭炜 胡卓炎 赵雷 沈兴 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期92-98,共7页
荔枝类甜蛋白(litchi thaumatin-like protein,LcTLP)是导致部分人群过量食用荔枝引起机体炎症反应的主要原因之一,为深入探究其引起的机体炎症机制,揭示其晶体结构与促炎活性位点等生物学特性,需获得大量高纯度LcTLP。然而现有报道中... 荔枝类甜蛋白(litchi thaumatin-like protein,LcTLP)是导致部分人群过量食用荔枝引起机体炎症反应的主要原因之一,为深入探究其引起的机体炎症机制,揭示其晶体结构与促炎活性位点等生物学特性,需获得大量高纯度LcTLP。然而现有报道中鲜见大量获取高纯度可溶性LcTLP的提取方法,因此该研究对LcTLP基因进行密码子优化后构建了表达载体pCold-NusA-LcTLP,并成功表达了可溶重组蛋白NusA-LcTLP。通过亲和层析与凝胶过滤层析两步纯化法,最终得到的重组蛋白产量可达36.26 mg/L,纯度达90%以上,表明该纯化方案可高效制得高纯度重组LcTLP。经RAW264.7细胞炎症活性验证,重组LcTLP在1、2μg/mL时刺激细胞NO分泌量分别为12.75、14.68μmol/L,为空白组的2.91、3.36倍,验证了重组LcTLP具有一定的促炎活性。该表达载体与纯化方案高效表达得到了可溶性重组LcTLP,为后续深入研究LcTLP在细胞生命活动中的功能机制奠定了基础。 展开更多
关键词 荔枝 重组类甜蛋白 诱导表达 纯化 活性鉴定
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索马甜研究现状及发展趋势
17
作者 吴晶晶 高彦祥 《中国食品添加剂》 CAS 2024年第5期317-323,共7页
随着生活水平的不断提高以及减糖行动的广泛开展,低卡路里、高甜度的天然甜味剂越来越受重视。索马甜由非洲竹芋提取而成的一种高甜、低热量、安全、无毒的天然甜味蛋白,在食品和医药等领域具有较高的商业价值。本文对索马甜来源、理化... 随着生活水平的不断提高以及减糖行动的广泛开展,低卡路里、高甜度的天然甜味剂越来越受重视。索马甜由非洲竹芋提取而成的一种高甜、低热量、安全、无毒的天然甜味蛋白,在食品和医药等领域具有较高的商业价值。本文对索马甜来源、理化性质、生产现状、安全性评价及开发应用做简要概述。索马甜具有很好的热力学稳定性和抗压性,但因其蛋白特性,在某些条件下极易发生变性,导致其甜味消失或下降。关于索马甜对人体代谢的影响,现有的研究数据得出了相左的结论,仍需进行深入探索。低浓度的索马甜可以有效地增强食品风味,已成功应用于乳制品、糖果及其他食品。目前,正试图利用基因工程实现索马甜的大批量生产。 展开更多
关键词 天然甜味剂 索马甜 理化性质 安全性 基因工程
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Cloning and expression of three thaumatin-like protein genes from Polyporus umbellatus
18
作者 Mengmeng Liu Dawei Zhang +1 位作者 Yongmei Xing Shunxing Guo 《Acta Pharmaceutica Sinica B》 SCIE CAS CSCD 2017年第3期373-380,共8页
Genes encoding thaumatin-like protein(TLPs) are frequently found in fungal genomes.However, information on TLP genes in Polyporus umbellatus is still limited. In this study, three TLP genes were cloned from P. umbella... Genes encoding thaumatin-like protein(TLPs) are frequently found in fungal genomes.However, information on TLP genes in Polyporus umbellatus is still limited. In this study, three TLP genes were cloned from P. umbellatus. The full-length coding sequence of PuTLP1, PuTLP2 and PuTLP3 were 768, 759 and 561 bp long, respectively, encoding for 256, 253 and 187 amino acids. Phylogenetic trees showed that P. umbellatus PuTLP1, PuTLP2 and PuTLP3 were clustered with sequences from Gloeophyllum trabeum, Trametes versicolor and Stereum hirsutum, respectively. The expression patterns of the three TLP genes were higher in P. umbellatus with Armillaria mellea infection than in the sclerotia without A. mellea. Furthermore, over-expression of three PuTLPs were carried out in Escherichia coli BL21(DE3) strain, and high quality proteins were obtained using Ni-NTA resin that can be used for preparation of specific antibodies. These results suggest that PuTLP1, PuTLP2 and PuTLP3 in P. umbellatus may be involved in the defense response to A. mellea infections. 展开更多
关键词 Polyporus umbellatus thaumatin-like protein DEFENSE Gene cloning EXPRESSION
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小麦类甜蛋白基因的转化及转基因植株的抗病性分析 被引量:18
19
作者 邢莉萍 王华忠 +4 位作者 蒋正宁 倪金龙 曹爱忠 于玲 陈佩度 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期349-354,共6页
目前已克隆出许多类甜蛋白基因并成功转化马铃薯、水稻和小麦等植物,均可引起植株抗病性的提高。在以往的研究中我们从小麦中克隆了一个类甜蛋白基因(Ta-Tlp),该基因在高抗白粉病的小麦6VS/6AL易位系中能够高水平表达,推测它与白粉病抗... 目前已克隆出许多类甜蛋白基因并成功转化马铃薯、水稻和小麦等植物,均可引起植株抗病性的提高。在以往的研究中我们从小麦中克隆了一个类甜蛋白基因(Ta-Tlp),该基因在高抗白粉病的小麦6VS/6AL易位系中能够高水平表达,推测它与白粉病抗性密切相关。为进一步研究该基因的功能,本研究构建了包含在ubi强启动子控制下的Ta-Tlp基因的表达载体pAHC-TlP,用基因枪将其导入小麦品种扬麦158的幼胚愈伤组织,在含除草剂的选择培养基上经两轮筛选和分化,获得再生抗性植株。对T0、T1和T2代植株进行PCR、Southern杂交与RT-PCR分析,结果表明Ta-Tlp基因已整合进受体基因组并且能够表达。对T0代及其衍生的T1代(来自6个T0代阳性株系的183个单株)和T2代(来自6个T0代阳性株系的241个单株)转化植株进行白粉病抗性鉴定,Ta-Tlp基因超量表达的转基因植株,能延缓白粉病发病进程,其白粉病抗性有一定提高。对T2代阳性转化植株进行赤霉病抗性鉴定表明,其抗性与受体对照相比无显著差异。 展开更多
关键词 小麦类甜蛋白基因 基因枪 遗传转化 白粉病 抗性鉴定
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植物类甜蛋白基因家族研究进展 被引量:11
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作者 刘潮 韩利红 +2 位作者 王海波 高永 唐利洲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期9-17,共9页
类甜蛋白(Thaumatin-like proteins,TLPs)在植物对抗胁迫过程中发挥重要作用。该家族属多基因家族,蛋白分子量较小,具有典型的thaumatin结构域,且高度保守;典型的TLP蛋白由16个半胱氨酸残基对形成8个二硫键,三维解析结构具有功能域Ⅰ、... 类甜蛋白(Thaumatin-like proteins,TLPs)在植物对抗胁迫过程中发挥重要作用。该家族属多基因家族,蛋白分子量较小,具有典型的thaumatin结构域,且高度保守;典型的TLP蛋白由16个半胱氨酸残基对形成8个二硫键,三维解析结构具有功能域Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ 3个保守功能域,表面具有"V"形酸性裂缝,保证了蛋白的催化功能;多数物种TLP蛋白归为10个聚类组,各组发生了不均衡扩增;TLP蛋白具有抗真菌、葡聚糖酶、过敏原等活性,能被激素、逆境胁迫等多种信号诱导表达,能被生物或非生物因子诱导表达,广泛参与了植物生长发育、抵御胁迫等多项生命进程,在植物先天免疫中发挥作用。通过基因工程手段,越来越多具有抗真菌潜力的TLP家族基因被用于提高植物抗病性。从类甜蛋白结构、进化、生物学功能及其应用等方面对近期研究成果进行了综述,以期为后续研究提供参考。 展开更多
关键词 类甜蛋白 抗真菌活性 转基因 植物胁迫
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