福美双对肉鸡生长性能和胫骨软骨发育不良组织病理学变化的影响

用160羽1日龄健康AA肉鸡进行试验,研究福美双对肉鸡生长性能和胫骨软骨发育不良组织病理学变化的影响。将试验肉鸡预饲1周后随机分为2组。对照组饲以基础日粮;试验组饲以基础日粮添加福美双100mg/kg饲料,4 d后继续饲以基础日粮。试验期23 d。在试验的第4、9、16、23天,计算平均日增重(ADG)和料重比(F/G);胫骨软骨发育不良(TD)评分,计算TD发病率,观察病理变化;并进行发病不同阶段组织病理学观察。结果表明,第4天试验组肉鸡TD发病率达到94.44%,料重比增加;第4和第9天肉鸡体增重显著下降,病理剖检症状典型。不同阶段组织病理学观察表明,福美双可促进软骨细胞极剧增殖,引起细胞大量死亡,挤压血管以致血管坏死,基质合成受阻,延缓软骨钙化,最终导致前肥大细胞大量聚集形成软骨栓。因此,对肉鸡短期饲喂福美双100mg/kg可显著影响AA肉鸡生长性能,提高TD发病率,引起与自然发生TD相同的形态学和组织病理学变化,是一个较为理想的研究TD发生发展、筛选各种微营养素预防TD的试验动物模型。

福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良软骨细胞凋亡

为研究肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)软骨细胞的凋亡分布及凋亡相关基因的表达水平,将80羽1日龄健康AA肉鸡基础日粮饲养1周后,随机分为对照组和处理组,处理组饲喂添加100mg·kg-1福美双的日粮,采用HE染色和TUNEL法分别对肉鸡胫骨生长板软骨细胞的形态学和凋亡情况进行观察,同时采用Real-time PCR方法和免疫组化技术分别对软骨细胞中凋亡相关基因的mRNA转录水平及蛋白质表达水平进行检测。结果显示,福美双诱发TD后第1、2、4和6天,肉鸡生长板软骨栓形成逐渐增大,异常软骨细胞增加,TD病变区软骨细胞,尤其是肥大区软骨细胞凋亡程度明显增加。Real-time PCR检测结果显示,与对照组比较,TD生长板促凋亡基因Bax在试验第1、2、4和6天表达量极显著上调(P<0.01);Caspase-3在第1、2和4天表达量极显著增加(P<0.01);抗凋亡基因BAG-1表达下调,在试验第1和2天差异极显著(P<0.01)。免疫组化结果显示,第1和4天处理组Bax的蛋白表达量明显高于对照组。本研究提示肉鸡TD生长板软骨细胞凋亡与促凋亡基因的表达增强和抗凋亡基因的表达下降有关。

福美双对肉仔鸡肝功能和胫骨软骨发育不良的影响

研究了福美双对肉鸡胫骨软骨发育不良、血清相关酶活性、肝脏SOD、MDA及增重的影响。120只1日龄AA肉仔鸡随机分为3组,对照组、低浓度福美双组(50 mg/kg)、高浓度福美双组(100 mg/kg)。每组40只鸡,每组4个重复,每个重复10只鸡,试验进行28 d。结果表明,饲料中添加福美双可以显著提高肉鸡TD发病率(P<0.05),升高血清中AST、ALT和ALP的水平和肝脏MDA的含量(P<0.05),降低肝脏SOD水平和肉鸡的生产性能。福美双可能通过改变肝脏的抗氧化状态,损害肉仔鸡的肝脏功能,影响骨代谢的相关酶活性,导致肉仔鸡胫骨软骨发育不良的发生。

左氟沙星注射液的紫外分光光度法测定

目的 :建立左氟沙星注射液的含量测定方法。方法 :采用紫外分光光度法测定 ,用 0 .1mol·L-1盐酸溶液作溶剂 ,测定波长为 2 93nm。结果 :在 2 .0～ 12 .0 μg·ml-1浓度范围内 ,线性关系良好 ,平均回收率为 10 0 .0 % ,RSD为 0 .3%。结论 :方法简便、快速。

福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良的组织病理学变化

120羽1日龄健康AA肉鸡预饲1周后随机分为2组,对照组饲以基础日粮,试验组饲以基础日粮添加100mg/kg福美双,进行了肉鸡胫骨长度、生长板厚度、肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)指数及TD发病率等指标的检测,并进行了形态学和组织病理学观察。结果显示,患病鸡胫骨长度、生长板厚度和TD指数均有显著变化(P<0.01),TD发病率显著上升(P<0.05);病鸡胫骨近端的纵切面有玉白色楔状软骨团块深入干骺端甚至骨髓腔,呈现典型的胫骨软骨发育不良病理学变化。结果提示,100 mg/kg福美双可显著提高AA肉鸡TD发病率,并引起相应的组织病理学变化,为TD分子机理的研究提供了一个理想的实验动物模型。

福美双对肉鸡生产性能、血清相关酶活性及胫骨软骨发育不良的影响

将120只1日龄AA肉鸡随机分为对照组、低浓度福美双组(50mg/kg福美双)、高浓度福美双组(100mg/kg福美双),试验进行28d。结果显示,饲料中添加福美双显著升高了血清AST、ALT和ALP水平(P<0.05),提高了肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)的发病率(P<0.05),降低了肉鸡生产性能。表明福美双能通过损害肉鸡肝脏功能,影响骨代谢相关酶活性,而致发肉鸡TD。

I型胶原和热休克蛋白90在肉鸡胫骨软骨发育不良不同阶段的变化

应用免疫组织化学方法,研究了I型胶原(Col I)和热休克蛋白90(Hsp90)在肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)不同阶段的变化。将80羽1日龄健康AA肉鸡预饲1周后分为2组。对照组饲以基础日粮;试验组在基础日粮中添加福美双100 mg.kg-1,4 d后继续饲以基础日粮。试验历时23 d。应用抗Col I和Hsp90多克隆抗体对试验第4、9、16、23天的肉鸡胫骨生长板进行免疫组织化学研究。结果表明,在饲喂福美双后第4、第9天,Col I和Hsp90的合成在生长板前肥大区和肥大区软骨细胞都明显增加,而第16、第23天时在TD损伤周边的前肥大区软骨细胞出现。由此推测,Col I蛋白合成增加,可能是由于不能正常钙化的反馈调节所致;而上调表达的Hsp90可能在调节软骨细胞发育周期中发挥重要作用,为进一步认识TD提供了新的思路。

日粮中氯、镁水平对肉仔鸡胫骨软骨发育异常和生产性能的影响

采用180只1日龄Arbor Acre肉鸡(♂)研究日粮中氯、镁离子水平对肉仔鸡胫骨软骨发育异常(TD)的影响。日粮中氯为2个水平(0.15％,0.35％);镁为3个水平(0.2％,0.4％,0.6％)。高氯可以诱发TD的产生(P<0.05),镁可以减轻由氯的增加而产生的TD的严重程度。血液中氯、镁离子浓度随日粮中氯离子水平的增加而升高(P<0.05),血钙浓度反而下降(P<0.05)。血磷浓度随镁离子水平的升高而增加(P<0.01)。骨骼中镁离子沉积量增加时,钙的沉积量下降。随日粮中氯离子水平增加,日增重明显增加(P<0.01)。随镁离子水平增加,日增重下降(P<0.01)。试验结果表明,日粮中氯离子含量高时可以诱发TD的产生,同时改善生长速度。

肉鸡胫骨软骨症发病趋势及组织学研究

本试验采用４８０只１日龄ＡｒｂｒｏＡｃｒｅｓ商品代仔公鸡，研究胫骨软骨症（ＴｉｂｉａｌＤｙｓｃｈ－ｏｎｄｒｏｐｌａｓｉａ，ＴＤ）的发生特征，胫骨软骨症随肉鸡生长的动态发展趋势以及与日粮氯和镁水平之间的关系。试验为２×２×４因子设计，日粮氯、镁分别采用２个水平，氯为０．１５％和０．３５％，镁为０．１５％和０．４０％。时间因素为第三个因子，１０天为一个阶段，共４个阶段。试验期为４０天。实验结果表明，肉鸡胫骨软骨症的发生与发展具有明显的时间性并与肉鸡的生长速度有着紧密的联系。生长较快的鸡，其ＴＤ的发病率多集中在３０日龄之前。日粮氯和镁水平与时间因素共同影响肉鸡的生长速度和ＴＤ发病率，日粮氯元素诱发ＴＤ的作用在肉鸡３０日龄之前呈逐渐增加趋势，３０日龄后作用减弱。病理组织学的研究结果显示，生长快的肉鸡ＴＤ发病率高的机制是因为胫骨软骨繁殖区非成熟的软骨细胞极度增生而形成软骨栓。软骨栓内没有血管生成，不能及时供给软骨细胞发育成熟钙化所需的营养，从而进一步加剧了软骨栓的形成，最终导致胫骨软骨症。日粮氯和镁元素以某种方式影响胫骨软骨繁殖区内血管的生成和发育，以及软骨细胞发育所需的营养供给。

日粮硫、镁水平对肉鸡血液酸碱平衡和胫骨软骨发育不良的影响

在玉米豆粕日粮中，添加３ 个水平的Ｍｇ０ 和（ＮＨ４）２ＳＯ４ ，使日粮中的硫、镁水平分别达到０ ．４０ ％ 、０ ．６５ ％ 、０ ．９０ ％ 和０ ．１７ ％ 、０ ．３７ ％ 、０ ．５７ ％ ，组成９ 个处理日粮，饲喂４０５ 只艾维茵肉用公雏，研究日粮电解质平衡对２１ 日龄肉鸡生长性能、胫骨软骨发育不良（ＴＤ） 发生、血液酸碱平衡的影响。在一定范围内日粮高硫具有诱食作用。日粮高镁同时降低了采食量、日增重和饲料效率（Ｐ＜ ０ ．０５） 。日粮高硫明显降低了ＴＤ 发生率和生长板厚度（Ｐ＜ ０ ．０５） ，高镁则起到相反的作用。日粮电解质平衡与肉鸡ＴＤ 发生率呈线性负相关（Ｒ＝ － ０ ．８２５） 。虽然日粮镁、硫水平对血液ｐＨ 影响不显著，但日粮高硫降低了碱超和碱贮（Ｐ＜ ０ ．０５） ，酸化了血液；日粮高镁则增加了碱超（Ｐ＜ ０ ．０５） ，起到了碱化作用。试验结果表明，由日粮硫、镁水平调节的电解质平衡可能通过改变血液酸碱平衡，成为影响肉鸡胫骨软骨发育的重要因素。

福美双诱发肉鸡胫骨软骨发育不良早期生长板消减cDNA文库的构建

【目的】为应用cDNA芯片技术筛选肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)时序性差异表达基因,本研究构建了早期生长板消减cDNA文库。【方法】将7日龄AV肉鸡随机分为两组,对照组(control,C)饲以基础日粮,试验组(thiram diet-fed,T)饲以基础日粮添加福美双100 mg·kg-1,2 d后继续饲以基础日粮,诱发肉鸡TD。应用抑制消减杂交技术(SSH)构建正反向消减cDNA文库,用PCR验证两个文库中克隆的插入片段,随机抽取100个阳性克隆测序,对所测序列同源性分析和功能预测。【结果】从两个文库共获得2 227个有效阳性克隆,插入片段大小主要分布在200—1 000bp之间;所测序列中有97条ESTs与GenBank中的鸡基因序列同源性达到99%,且非冗余度达到68.7%;此外,有3条ESTs未找到同源序列。这些基因具有构成细胞外基质,参与软骨内骨化和骨的重构,调节骨发育,行使信号转导、血管发生,参与电子传递及能量代谢等功能。【结论】成功构建了消减cDNA文库,将为进一步点制cDNA芯片,筛选不同阶段的差异表达基因奠定了基础,也为肉鸡TD机理研究提供新线索。

日粮硫、镁水平对肉鸡胫骨软骨发育的影响

目的 研究日粮电解质平衡对 2 1日龄肉鸡胫骨软骨发育不良 ( TD)发生、血液酸碱平衡、生长板和干骺端胶原蛋白合成和降解的影响。方法 在玉米 -豆粕日粮中 ,添加 3个水平的Mg O和 ( NH4 ) 2 SO4 ,使日粮中的硫、镁水平分别达到 0 .40 %、0 .65%、0 .90 %和 0 .1 7%、0 .37%、0 .57% ,组成 9个处理日粮 ,饲喂 40 5只 Avian肉用公雏。结果 高硫诱发了肉鸡 TD,日粮中添加镁降低了 TD的发生。日粮电解质平衡与肉鸡 TD发生率呈线性负相关 ( r=- 0 .82 5)。虽然日粮镁、硫水平对血液 p H影响不显著 ,但高硫降低了碱超和碱贮 ( P<0 .0 5) ,酸化了血液 ;高镁则增加了碱超 ( P<0 .0 5) ,起到了碱化作用。日粮高硫降低了血清和生长板酸性磷酸酶 ( ACP)活力 ( P<0 .0 5) ,损害了生长板破软骨细胞的功能 ,降低了胶原蛋白的降解代谢。日粮高镁明显促进了生长板ACP活力以及胶原蛋白的合成和降解代谢 ( P<0 .0 5)。结论 由日粮硫、镁水平调节的电解质平衡可能通过改变血液酸碱平衡 ,影响破软骨细胞的功能及软骨的降解和重吸收 ,最终诱导或制约肉鸡TD的发生。生长板胶原蛋白的降解代谢受阻可能导致

有机锌源对肉鸡生长性能和胫骨软骨症的影响

采用玉米—豆饼型饲粮研究有机锌源对肉鸡生长性能和胫骨软骨症(TD)的影响。结果表明 ,有机锌源与硫酸锌对肉鸡生长和饲料采食量均无显著影响 ,锌的补加提高了胫骨、中趾骨、胰Zn含量、有机锌源的补加并不影响骨灰含量、胫骨长度 。

肉鸡胫骨软骨发育不良分子机理的研究进展

对参与肉鸡胫骨软骨发育不良的酶、生长因子、维生素D及其受体,基因表达水平进行了综述,它们形成一个复杂的网络调控系统。阐述了它们在肉鸡胫骨软骨发育不良中所起的作用和变化。认为对参与干扰软骨细胞分化的各种基因的深入研究将为基因选择、消除机能紊乱、防治胫骨软骨发育不良的发生开辟新的途径。

重组GSTA3蛋白对福美双诱导的肉鸡TD中抗凋亡基因BAG-3表达的影响

【目的】肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)是肉鸡常见的一种骨骼性疾病,研究重组GSTA3蛋白对福美双诱导的TD肉鸡软骨细胞中抗凋亡基因BAG-3表达的影响,为治疗TD提供新的思路和方法。【方法】将120羽1周龄肉雏鸡随机分为6组(编号为A、B、C、D、E、F组)。A、B、C组为基础日粮对照组,D、E、F组为添加福美双日粮诱导TD组。试验饲喂福美双2 d诱发TD,在添加福美双第1、3、5、7天,腿部肌肉注射重组鸡GSTA3蛋白和磷酸盐缓冲液,A组与D组注射(100μg·kg^-1)磷酸盐缓冲液;B组与E组注射低剂量(100μg·kg^-1)GSTA3;C组与F组注射高剂量(200μg·kg^-1)GSTA3。试验历时23 d。添加福美双后1、2、4、6、10和15 d采集胫骨生长板。通过Real-time qPCR检测BAG-3基因的mRNA水平,利用免疫组化来检测BAG-3蛋白表达水平。【结果】Real-time qPCR结果显示,TD损伤修复期内,相比较于基础日粮对照组,福美双对照组肉鸡胫骨生长板中BAG-3 mRNA的表达水平基本都显著上调(P<0.05);相比较于福美双对照组,E和F组在第2、4、10、15天都有显著差异,且在第10和15天显著低于福美双对照组(P<0.05),表明与D组相比恢复较快。免疫组化结果表明BAG-3蛋白在肉鸡胫骨软骨细胞的增殖区和前肥大区无表达,只在肥大区细胞质中表达;福美双组与空白对照组相比,BAG-3蛋白表达增加;福美双高低剂量组与未注射蛋白的福美双组相比,重组GSTA3增加了肥大区的蛋白表达水平(第10和15天)。【结论】在福美双诱导肉鸡发生TD的过程中,GSTA3重组蛋白能够通过调控BAG-3表达参与凋亡途径,抑制细胞凋亡。在TD损伤修复期,注射GSTA3后使抗凋亡基因BAG-3蛋白表达增强,从而可参与细胞凋亡来缓解TD损伤,使得肉鸡TD生长板功能较快地恢复正常。

福美双和铜对肉鸡胫骨软骨发育不良的影响

本试验旨在研究福美双和铜对肉鸡胫骨软骨发育不良、血清相关酶活性和组织铜含量的影响。100羽1日龄AA肉鸡随机分为4组,从8日龄起分别给予基础日粮(对照组),福美双日粮(基础日粮+福美双100 mg/kg),福美双低铜日粮(基础日粮+福美双100 mg/kg+CuSO4.5H2O 50 mg/kg),福美双高铜日粮(基础日粮+福美双100 mg/kg+CuSO4.5H2O 100 mg/kg),试验期至21日龄。结果表明:(1)日粮中添加福美双(100 mg/kg)能显著增加肉鸡TD的发生率;添加铜能降低福美双的这种作用,两者之间存在明显的互作关系;(2)与对照组相比,福美双组和福美双高铜日粮组肉鸡血清钙、磷水平明显升高(P<0.05);血清ALT水平在各组之间无显著差异;血清ALP、AST水平,福美双高铜日粮组与其余各组相比明显升高,差异显著(P<0.05);(3)与对照组相比,其余各组肉鸡胫骨长度均显著下降(P<0.05);(4)日粮中铜添加可提高各组织中铜的沉积;添加福美双能提高肝脏、肾脏、胰腺中铜的沉积,同时降低铜在肾脏中的沉积,而铜的添加能够降低福美双所引起的肾脏铜的增加。提示福美双可能通过损伤肝、肾功能,影响机体组织对铜的生物利用从而诱导肉鸡胫骨软骨发育不良的发生。

处于酸性环境中的肉鸡胫骨生长板软骨细胞发育周期时相

本文采用离体细胞培养技术，观察了环境酸碱度对肉鸡生长板软骨细胞发育周期时相的影响。将生长板软骨分别用０．２５％胰蛋白酶和０．２％Ⅱ型胶原酶消化以分离软骨细胞，用含有２０ｍＭＨＥＰＥＳ、１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培养基，３７℃培养，培养基ｐＨ值用１Ｎ盐酸调成ｐＨ７．４、７．２、７．０三组，每３天更换１次培养基。每日用倒置显微镜观察细胞形态变化及生长规律，到第９天时取培养细胞用流式细胞术做周期时相分析。同时取正常鸡及患ＴＤ病鸡生长板软骨细胞做周期时相分析。结果表明，酸性环境使生长板软骨细胞生长发育迟缓，Ｓ期与Ｇ２期细胞减少，Ｇ２期ＤＮＡ含量与Ｇ１期ＤＮＡ含量之比成不整倍性。ＴＤ病患鸡生长板软骨细胞之Ｓ期与Ｇ２期细胞数极度减少，与正常鸡生长板软骨细胞差异明显，酸性环境下生长板软骨细胞发育周期时相的变化与ＴＤ病患鸡生长板软骨细胞变化的结果相一致。

重组GSTA3蛋白对福美双诱导的TD肉鸡生长性能的影响

胫骨软骨发育不良(TD)是在快速生长的肉鸡中常发的一种骨骼性疾病,给禽类养殖带来了严重的经济损失。试验在基础日粮中添加福美双,诱导产生TD肉鸡,然后分4次注射谷胱甘肽硫转移酶A3蛋白(GSTA3),探究谷胱甘肽硫转移酶A3蛋白(GSTA3)对于TD肉鸡生长性能的影响。结果表明,注射了GSTA3蛋白的TD肉鸡精神恢复快,增质量恢复快。试验结果证明重组外源GSTA3蛋白对TD肉鸡有促生长作用,可为TD肉鸡生长性能的恢复奠定理论基础。

重组鸡Ex-FABP蛋白对福美双诱导的TD肉鸡血清中Bcl-2含量的影响

为研究细胞外脂肪酸结合蛋白Ex-FABP对胫骨软骨发育不良(TD)肉鸡血清中凋亡因子B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)的影响,试验采用连续2 d饲喂含有福美双的日粮来诱导构建肉鸡TD模型,共设置4组正常日粮组(健康组)、4组添加福美双日粮组(福美双组)和1组空白对照组,然后注射Ex-FABP蛋白。结果表明,福美双组和健康组分别注射重组Ex-FABP蛋白后,血清中Bcl-2蛋白浓度相比福美双对照组、健康对照组和空白对照组显著升高。重组鸡Ex-FABP蛋白可能通过刺激机体血清中Bcl-2蛋白的表达,从而抑制软骨生长板细胞凋亡,以发挥治疗TD的作用。研究结果可为TD肉鸡的治疗提供新的思路和方法。

巴戟天多糖对胫骨软骨发育不良的肉鸡生产性能、胫骨指数、胫骨钙磷灰分和血清电解质的影响

[目的]旨在探究巴戟天多糖(Morinda officinalis How polysaccharides,MOP)对福美双诱导的胫骨软骨发育不良(tibial dyschondroplasia,TD)肉鸡生产性能、胫骨指数、胫骨钙磷灰分和血清电解质的影响。[方法]选取1日龄健康AA肉仔鸡120只,随机分为3组,每组4个重复,每个重复10只肉鸡。对照组(CON组)饲喂基础日粮;福美双诱导TD组(TD组)饲喂基础饲料,在第4天到第7天的饲料中添加100 mg/kg的福美双进行TD模型建立;巴戟天多糖组(MOP组)在接受TD造模处理后,在第7天到第15天的饲料中添加400 mg/kg的巴戟天多糖。[结果]与CON组相比,从试验开始到试验第7天,TD组肉鸡的平均采食量和平均日增重显著(P<0.05)降低,料肉比增加(P>0.05);在试验第7天、第11天和第15天时,TD组肉鸡的胫骨生长板宽度和生长板宽度系数显著(P<0.05)增加,胫骨重量和胫骨长度显著(P<0.05)降低,胫骨重量指数降低(P>0.05),胫骨灰分含量显著(P<0.05)降低,并且血清中电解质紊乱;与TD组相比,在试验第11天和第15天时,MOP组肉鸡的料肉比有降低的趋势(P>0.05),MOP组肉鸡的生长板宽度和生长板宽度系数显著降低(P<0.05),胫骨重量、胫骨长度和胫骨重量指数均显著(P<0.05)提高;在试验第11天时,MOP组肉鸡的胫骨灰分含量显著(P<0.05)提高;随着试验时间的延长,MOP组肉鸡的血清电解质含量趋于平衡。[结论]饲料中添加巴戟天多糖可以有效缓解和改善由福美双诱导的肉鸡TD症状。