麝香配伍冰片对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑含水量及血脑屏障通透性的影响

【目的】观察麝香配伍冰片对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑含水量及血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性的影响。【方法】将SD大鼠30只随机分为6组:假手术组、模型组、麝香组(剂量为1 mg.kg-.1d-1)、冰片组(剂量为3 mg.kg-.1d-1)、麝香配伍冰片组、尼莫地平组(剂量为12 mg.kg-.1d-1);采用颈内动脉线栓法复制大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,干湿质量法观察脑含水量的变化,通过收集透出脑血管外的伊文思蓝(Evans blue,EB)来示踪BBB的变化。【结果】脑缺血2 h再灌注24 h,模型组较假手术组脑含水量及脑皮质EB含量显著性增加(P<0.01),血脑屏障遭到破坏;麝香配伍冰片组脑含水量较模型组显著性降低(P<0.05),而且麝香配伍冰片组及冰片组脑皮质EB含量较模型组显著性降低(P<0.01)。【结论】麝香配伍冰片可有效降低脑缺血再灌注后脑含水量及血脑屏障的通透性,对血脑屏障结构具有一定的保护作用。

龟板对局灶性脑缺血后神经干细胞的作用

【目的】探讨补肾中药龟板对局灶性脑缺血后神经干细胞的作用。【方法】采用大脑中动脉线栓法造成局灶性脑缺血大鼠模型 ,应用免疫组织化学技术检测神经上皮干细胞蛋白 (Nestin)的表达 ,观察龟板对脑缺血后神经上皮干细胞蛋白的影响。【结果】龟板可降低神经病评分和增强脑缺血后Nestin表达。【结论】提示补肾中药龟板可减轻神经损伤症状和对局灶性脑缺血后神经干细胞有促进增殖作用。

黄芩苷对局灶性脑缺血大鼠的保护作用

【目的】观察黄芩苷对局灶性脑缺血模型大鼠的保护作用及可能的机制。【方法】将大鼠随机分为假手术组、模型组及黄芩苷组;采用线栓法复制大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),造模前、后及造模后8 h黄芩苷组分别腹腔注射给药1次(剂量为100 mg.kg-1.d-1);造模后24 h记录大鼠神经功能行为得分,并采用分光光度法测定缺血侧脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)的含量。【结果】黄芩苷能降低MCAO模型大鼠的神经功能缺损评分,升高缺血侧脑组织中SOD、GSH-Px、CAT的含量,降低MDA的含量,与模型组比较具有显著性差异(均P<0.05或P<0.01)。【结论】黄芩苷对局灶性脑缺血大鼠的神经功能具有保护作用,其机制可能与其减少氧化损伤从而保护脑组织有关。

芳香开窍法对全脑缺血再灌注大鼠脑组织NO含量及NO合酶表达的影响

[目的]研究以麝香、冰片为代表的芳香开窍中药对大鼠脑组织一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶内皮细胞型(eNOS)、一氧化氮合酶诱导型(iNOS)表达量的影响。[方法]Pulsinelli的4VO法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,采用硝酸还原酶法测定NO及免疫组织化学染色技术观察脑微血管eNOS、iNOS及神经元iNOS表达,并进行半定量分析。[结果]芳香开窍中药和尼莫通能减少缺血再灌注大鼠脑组织中NO的含量,并接近于正常,与模型组比较P<0.01,与假手术组比较P>0.05。对NOS的两个亚型iNOS和eNOS分析提示芳香开窍药能提高脑微血管eNOS的表达,降低神经元及脑微血管iNOS表达(与模型组比P<0.01)。[结论]芳香开窍药有促进内皮细胞产生合成NO,同时也能降低神经元及微血管iNOS表达,从而减少总NO的生成量,降低缺血引起的NO毒性作用,对脑组织具有一定的保护作用。

龟板对大鼠局灶性脑缺血模型3种NOS亚型的作用

目的探讨补肾中药龟板对局灶性脑缺血后脑组织3种NOS亚型的作用。方法采用大脑中动脉线栓法造成大鼠局灶性脑缺血模型,应用免疫组织化学技术检测脑组织3种亚型NOS(nNOS、iNOS、eNOS)的表达,观察龟板对脑缺血后3种亚型NOS的作用。结果龟板组缺血侧皮层和尾壳核nNOS、iNOS表达显著低于模型对照组(P<0.01),而eNOS表达显著高于模型对照组(P<0.01)。结论中药龟板能部分下调脑缺血所致nNOS、iNOS的异常表达,上调eNOS表达,这可能是其治疗缺血性脑血管疾病的机理之一。

冰片与川芎配伍抗脑缺血再灌注损伤作用机理的研究

【目的】探讨冰片与川芎配伍抗脑缺血再灌注损伤的作用机理。【方法】用结扎双侧颈总动脉法 ,造成大鼠脑缺血再灌注模型 ,观察冰片与川芎配伍对急性脑缺血再灌注脑组织中一氧化氮 (NO)及自由基含量的影响。【结果】冰片与川芎配伍使缺血再灌注脑组织过氧化脂质 (LPO)生成明显减少 (P<0 .0 1) ,并升高超氧化物歧化酶 (SOD)活性 (P <0 .0 1) ,对NO含量也有明显降低的作用 (P <0 .0 1) ,作用明显优于单用川芎或冰片。【结论】提示冰片与川芎配伍可能是通过减少缺血脑组织中NO的生成 ,减轻NO介导的神经毒性作用 ,提高自由基清除酶的活性 ,抑制脂质过氧化反应 ,而对缺血性脑组织损伤起保护作用 ,伍用冰片后可增强川芎对脑缺血再灌注损伤的保护作用。

脑醒喷鼻剂治疗急性缺血性中风66例

[目的]探讨脑醒喷鼻剂(活血开窍方)治疗急性缺血性中风(acute ischemic stroke,AIS)的临床疗效及其药理作用机制。[方法]采用随机对照双盲观察法将100例AIS患者分为2组,脑醒喷鼻剂组(治疗组)66例,尼莫通组(对照组)34例。观察脑醒喷鼻剂的临床疗效及其对血液流变学与自由基的影响。[结果]治疗组和对照组的总有效率分剐为90.9％和88.2％,显效率分别为72.7％和58.8％,两组比较差异均元显著性(P>0.05)。实验结果显示脑醒喷鼻剂能降低血粘度和红细胞压积,抑制红细胞和血小板聚集;提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷光甘肽过氧化物酶(GSH—Px)活性。[结论]脑醒喷鼻剂治疗AIS疗效肯定(与尼莫通相当)。并显示该方能改善AIS患者血液流变性,改善脑的循环灌注,缓解脑缺血;促进自由基清除,减轻自由基损伤,保护脑细胞。

补阳还五汤对全脑缺血模型大鼠恢复脑血流灌注后的皮层神经元钙信号的影响

【目的】观察补阳还五汤预干预对全脑缺血大鼠皮层神经元L型Ca2+通道的影响,探讨Ca2+信号异常参与缺血性神经元损伤的机制及补阳还五汤抗脑缺血的分子机制。【方法】72只SD大鼠随机分为12组,即假手术组(2组)、模型组和补阳还五汤组(此2组各分为缺血再灌注后2、12、24、48、72 h 5个时间点组);补阳还五汤各组按0.64 g/kg剂量灌胃,每天2次,连续5 d。除假手术组外,各组均参照改良的Pulsinelli 4血管闭塞法复制全脑缺血大鼠模型,缺血后的大鼠分别在存活2、12、24、48、72 h后进行皮层神经细胞急性分离,单通道电流经EPC-9膜片钳放大器放大,采用Pulse&Pulsefit采集入计算机,检测各组大鼠血流再灌注后不同时间点的L型Ca2+通道的平均开放时间和开放概率。【结果】模型大鼠皮层神经元L型Ca2+通道因缺血激活而开放,其开放时间在再灌后各时间点均比假手术组延长,开放概率分别在再灌注2 h和24h时出现高峰;而补阳还五汤组的皮层神经元L型Ca2+通道的开放时间在再灌72 h时比模型组降低(P<0.01),其开放概率在模型组出现第1个高峰时(再灌2 h)被显著性地降低至与假手术组相仿水平(与模型组比较P<0.01,与假手术组比较P>0.05)。【结论】补阳还五汤在缺血再灌早期(再灌2 h),主要通过降低L型Ca2+通道开放概率,即影响L型Ca2+通道的可利用性以减少Ca2+内流。而在缺血再灌后期(再灌72 h),主要通过降低L型Ca2+通道开放时间,即影响L型Ca2+通道开放特性以减少Ca2+内流。

冰片与川芎配伍对脑缺血再灌注损伤的保护作用

用结扎双侧颈总动脉法 ,造成大鼠脑缺血再灌注模型 ,观察冰片与川芎配伍对急性脑缺血再灌注脑组织含水量、形态学及超微结构的影响。结果显示 ,冰片与川芎配伍可明显减轻缺血再灌注脑组织含水量 ;明显减轻细胞间质水肿和神经细胞的损伤 ;对脑缺血再灌注所致脑组织超微结构的破坏也有明显的保护作用。提示冰片与川芎配伍可通过保护血管内皮细胞功能、基膜的完整性 ,改善微循环 ,减轻脑水肿程度 ,从而对脑缺血再灌注损伤起保护作用。冰片与川芎配伍后 。

补阳还五汤含药血清对缺氧缺糖损伤PC12细胞凋亡影响的正交试验研究

【目的】观察补阳还五汤对缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤PC12细胞凋亡的影响,筛选补阳还五汤中抑制OGD损伤PC12细胞凋亡的主要药味。【方法】将补阳还五汤中7种单味药即黄芪、赤芍、当归尾、地龙、川芎、桃仁、红花作为实验因素,每个因素选取有或无2个水平,按L8(27)正交试验表安排试验。采用OGD细胞模型,运用中药血清药理学方法和流式细胞术技术,以细胞凋亡率为评价指标,利用直观分析和方差分析法,比较空白血清组(有氧+含糖培养基+空白血清)、模型组(缺氧+无糖培养基+空白血清)和补阳还五汤(缺氧+无糖培养基+含药血清)以及各拆方对OGD损伤PC12细胞凋亡的影响。【结果】与空白血清组比较,模型组PC12细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,补阳还五汤组的凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。正交试验分析显示:补阳还五汤中对OGD损伤PC12细胞凋亡具有显著性影响的药味为桃仁、红花、赤芍(P<0.01),其余药味作用不显著(P>0.05),含赤芍的拆方细胞凋亡率低于不含赤芍的拆方。【结论】补阳还五汤具有抑制OGD损伤PC12细胞凋亡的作用,其中发挥作用的主要药味为赤芍。

藏医“白脉病疗法”对脑缺血再灌注大鼠CD34、VEGF1、GAP-43蛋白表达的影响

目的:基于CD34、VEGF1、GAP-43探讨藏医"白脉病疗法"对缺血再灌注大鼠神经血管再生的影响。方法:线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型;再灌注7天、14天通过免疫组化染色观察CD34蛋白、VEGF1蛋白、GAP-43蛋白的表达情况。结果:脑缺血再灌注损伤后7天,白脉病疗法组、如意珍宝丸组模型组CD34、VEGF1、GAP-43阳性表达明显较高,与模型组比较,有显著差异,P <0.05。14天白脉病疗法组、如意珍宝丸组、阳性对照组CD34、VEGF1、GAP-43阳性细胞表达均高于模型组,P <0.05,白脉病疗法组CD34、GAP-43的表达高于如意珍宝丸组。结论:白脉病疗法可以促进微血管增生,诱导侧支循坏的建立和微血管网的再建,促进血管再生,起到神经保护的作用。

补阳还五汤对大鼠全脑缺血再灌注的药效研究

【目的】比较补阳还五汤复方胶囊与原方汤剂保护和修复大鼠全脑缺血再灌注损伤神经细胞的作用,并从抗氧化角度探讨其作用机制。【方法】选用SD雄性大鼠,随机分为假手术组,模型组,补阳还五汤原方汤剂组(剂量为10 g.kg-1.d-1),复方胶囊高、中、低剂量组(剂量分别为7.56、3.78、1.89 g.kg-1.d-1);采用4血管闭塞法复制全脑缺血再灌注模型,比较补阳还五汤复方胶囊和原方汤剂对海马CA1区病理形态结构的修复程度,并对血清及脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及脑组织含水量进行测定。【结果】原方汤剂组及复方胶囊各剂量组对海马CA1区神经元细胞病理形态变化均有康复改善作用,且复方胶囊中剂量组作用最为显著;在血清和脑组织中,原方汤剂组及复方胶囊组均可使SOD活性显著升高,MDA含量显著下降(P<0.01),且以复方胶囊中剂量组作用最为明显;原方汤剂组及复方胶囊各剂量组均可显著降低脑组织含水量(P<0.01),其中复方胶囊高剂量组作用最明显。【结论】补阳还五汤原方汤剂及复方胶囊对大鼠全脑缺血再灌注损伤均有保护作用,但复方胶囊疗效更为确切。

川芎嗪对缺氧大鼠海马神经元凋亡及bcl-2、p53基因表达的影响

【目的】观察川芎嗪对缺氧大鼠海马神经元凋亡及bcl-2、p53基因表达的影响,探讨脑缺血后神经元损伤途径以及川芎嗪的保护作用机制。【方法】采用大鼠海马神经元体外原代培养法复制缺氧模型。海马神经元培养第14天,分为模型对照组及川芎嗪高、中、低剂量组(剂量分别为800、200、50μg/mL),分别持续缺氧1.5 h。采用流式细胞仪定量分析神经细胞凋亡率,原位杂交法检测海马神经元bcl-2、p53 mRNA的表达。【结果】川芎嗪中剂量组在缺氧1.5 h凋亡率与模型对照组及其他剂量组比较均有显著性差异(P<0.05)。对缺氧1.5 h大鼠海马神经元bcl-2、p53 mRNA原位杂交阳性信号进行分析,川芎嗪中剂量组bcl-2、p53 mRNA的表达与其他各组比较均有显著性差异(P<0.05)。【结论】在无血清培养条件下给予缺氧处理证实了凋亡是脑缺血后神经元损伤途径之一。一定剂量范围的川芎嗪具有抑制神经细胞凋亡的作用,而抑制p53基因的过度表达,上调bcl-2基因表达可能是其作用机制之一。

补阳还五汤对慢性脑缺血大鼠大脑皮层血流量及全血粘度的影响

【目的】探讨补阳还五汤对慢性脑缺血大鼠大脑皮层血流量及全血粘度的影响。【方法】选用SPF级SD大鼠,采用双侧颈总动脉结扎法复制慢性脑缺血大鼠模型,再将合格模型动物随机分为模型组,金纳多组(剂量为45 mg·kg-1·d-1),中药高、低剂量组(剂量分别为40、20 g·kg-1·d-1),假手术组,比较各组大鼠的大脑皮层血流量及全血粘度指标。【结果】模型组皮层血流量显著下降(P<0.05),补阳还五汤高剂量组和金纳多组大脑皮层血流量显著升高(P<0.05);模型组全血粘度在切变率150、30、5 s-1时与假手术组比较均显著升高(P<0.05),各用药组均能明显降低全血粘度,补阳还五汤高剂量在切变率1 s-1、低剂量在切变率150、30、5、1 s-1时与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】补阳还五汤能明显改善慢性脑缺血大鼠的大脑皮层血流量,该作用可能与降低其全血粘度有关。

脑醒喷鼻剂对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织超微结构的影响

目的研究脑醒喷鼻剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织超微结构的影响。方法将30只Wistar大鼠随机分为脑醒喷鼻剂高剂量组(高剂组)、脑醒喷鼻剂中剂量组(中剂组)、脑醒喷鼻剂低剂量组(低剂组)、尼莫通腹腔注射组(对照组)、生理盐水喷鼻剂组(NS组)、假手术组(正常组),给药3d后,用线栓法阻断大鼠左侧大脑中动脉建立左大脑中动脉栓塞(L-MCAO)模型,缺血1h再灌注24h后,取左额叶皮层脑组织作电镜观察。结果脑醒喷鼻剂高、中剂组的神经细胞、胶质细胞及毛细血管等超微结构的损伤程度明显低于NS组,其中以高剂组损伤最轻,与尼莫通对照组无明显差别。结论从组织形态学角度证实,脑醒喷鼻剂能减轻脑缺血大鼠大脑皮层神经组织的损伤,对脑组织的缺血再灌注损伤有明显的保护作用。

银杏酮酯卵磷脂复合物对脑缺血损伤的保护作用

目的研究银杏酮酯卵磷脂复合物(ComplexEGb,C-EGb)对脑缺血损伤的保护作用。方法(1)参照ZeaLonga法制作大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,测定其行为障碍和脑梗塞范围。(2)建立小鼠全脑缺血再灌注模型,测定4项生化指标:超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)。结果银杏酮酯卵磷脂复合物可显著改善大鼠局灶性脑缺血所致的神经症状,明显减小脑梗塞的体积,显著减轻小鼠脑缺血再灌注对脑组织SOD、GSH-Px和CAT活性的抑制,减少MDA的生成。结论银杏酮酯卵磷脂复合物对脑缺血损伤具有较好的保护作用,其效果优于等剂量(总黄酮)的杏灵颗粒和银杏磷脂混合物。

补阳还五汤及拆方对脑缺血再灌注模型血清、脑组织的SOD、MDA及NO含量影响

目的 揭示补阳还五汤及拆方抗脑缺血再灌注损伤的作用机理,并研究方剂配伍的意义。方法 通过四血管结扎法制作SD大鼠脑缺血再灌注模型,观察总方组与拆方黄芪组、活血组药物对模型血清、脑组织SOD、MDA及NO含量的影响。结果 模型组大鼠血清、脑组织MDA及NO含量明显增高,SOD含量明显降低;总方组与拆方黄芪组、活血组能降低MDA及NO含量,升高SOD含量,总方组作用最强。结论 补阳还五汤及拆方通过抗自由基,达到抗脑缺血再灌注损伤作用。总方组的疗效明显优于拆方组,符合方剂学“整体取性原理”。

补阳还五汤含药血清对星形胶质细胞谷氨酸转运体1和谷氨酰胺合成酶的影响

【目的】观察补阳还五汤含药血清对体外缺氧缺糖后星形胶质细胞谷氨酸转运体1(GLT-1)及谷氨酰胺合成酶(GS)蛋白表达的影响。【方法】体外培养新生SD乳鼠大脑星形胶质细胞,采用抗神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)单克隆抗体确认星形胶质细胞。缺氧缺糖2 h后,应用Western blot法检测各组星形胶质细胞复氧复糖后各个时间点(12、24、48 h)GLT-1、GS蛋白表达的变化情况,采用谷氨酸试剂盒测定细胞外液谷氨酸浓度。【结果】与正常组比较,缺氧缺糖对照组各时间点星形胶质细胞GLT-1、GS蛋白表达均显著下降(P<0.05);补阳还五汤含药血清组于复氧复糖24 h后GLT-1、GS蛋白表达均显著上调达到最高水平,与缺氧缺糖对照血清组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);与此一致的是补阳还五汤含药血清组显著降低了24 h后细胞培养液中谷氨酸的浓度(P<0.05)。【结论】补阳还五汤可通过上调星形胶质细胞GLT-1、GS表达促进缺氧缺糖后谷氨酸的转运,进而降低谷氨酸的毒性作用。

步长脑心通对脑缺血再灌注大鼠脑组织一氧化氮合酶表达的影响

【目的】探讨步长脑心通对脑缺血的保护作用机制。【方法】选用Wistar大鼠,随机分为正常组、假手术组、模型组与治疗组,再分为12 h和24 h 2个亚组,治疗组给予步长脑心通灌胃(剂量为0.45 g.kg-1.d-1);采用大脑中动脉线栓法复制大鼠脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SP法检测大鼠脑组织一氧化氮合酶iNOS、eNOS的表达,采用图像分析仪测定光密度值,光镜下分析阳性细胞百分率。【结果】与模型组比较,治疗组iNOS表达显著降低(P<0.05),eNOS表达显著增高(P<0.05)。【结论】步长脑心通能降低脑缺血再灌注大鼠脑组织iNOS表达、增强eNOS表达,从而抑制神经细胞凋亡,发挥脑保护作用。

脑力苏胶囊对血管性痴呆大鼠低氧诱导因子-1α的影响

【目的】通过观察中药复方脑力苏胶囊对血管性痴呆(VD)大鼠海马低氧诱导因子-1α(HIF-1α)阳性细胞表达的影响,探讨其改善VD大鼠认知障碍的作用机制。【方法】选用雄性SD大鼠90只,随机分为假手术组,模型组,脑力苏高、低剂量组(剂量分别为2.5、1.25 g.kg-1.d-1),喜得镇组(剂量为0.6 mg.kg-1.d-1);采用双侧颈总动脉结扎法复制VD大鼠模型,采用Morris水迷宫测试法检测VD大鼠学习、记忆改善状况,免疫组化法检测大鼠海马(CA1区)HIF-1α阳性细胞数。【结果】脑力苏高、低剂量组大鼠学习记忆能力显著改善(P<0.01),海马HIF-1α阳性细胞表达较模型组显著降低(P<0.01)。【结论】脑力苏胶囊治疗VD的作用与其能降低海马HIF-1α表达,提高缺血脑组织细胞内氧浓度有关。