四君子汤复方总多糖口服和注射给药对免疫功能影响的对比研究

目的 :研究四君子汤复方总多糖经口服和注射给药的免疫活性的差异。方法 :采用环磷酰胺造成免疫抑制模型 ,观察四君子汤复方总多糖对小鼠免疫器官重量、溶血素生成反应和迟发型超敏反应的影响 ,同时观察对正常淋巴细胞增殖的影响。结果 :四君子汤复方总多糖能够明显对抗由环磷酰胺诱导的免疫抑制 ,使小鼠免疫器官重量减轻 ,溶血素生成反应减弱和迟发型超敏反应降低明显改善 ,促进淋巴细胞增殖 ,且口服效果有优于注射的趋势。结论 :四君子汤复方总多糖对小鼠体液和细胞免疫功能具有促进作用 ,同时也提示多糖口服给药引起免疫效应有其独特性。文中还对口服多糖引起全身免疫反应的可能机理进行了探讨。

人参皂甙对肺癌细胞和血管内皮细胞增生、凋亡及其周期的影响

目的:探讨中药20(R) 人参皂甙Rg3(Rg3)对肺癌细胞和血管内皮细胞增生、凋亡以及细胞周期的影响。方法:进行人肺腺癌细胞株A549、人脐静脉血管内皮HUVEC304细胞培养,不同浓度Rg3干预,采用MTT法、流式细胞术、透射电镜等技术,了解不同浓度Rg3对上述细胞增生、凋亡以及细胞周期的影响。结果: 3×10 6mol/L的Rg3可导致A549细胞明显凋亡,凋亡率为29. 8%,与对照组( 15. 0% )相比差异有统计学意义(P<0. 05)。Rg3对A549细胞周期的影响无显著差异。1×10 4 mol/L的Rg3对内皮细胞的生长抑制率为12. 53%,显著高于其它组(P<0. 05),不同浓度Rg3对条件培养液(CM)诱导的血管内皮细胞的增生均有明显的抑制作用(P<0. 05),电镜下可见10 6 mol/L浓度的Rg3可使CM诱导的内皮细胞出现凋亡小体。结论:适当浓度的Rg3有抗肿瘤作用和抑制肿瘤新生血管生成的作用。

棉酚对髓系白血病细胞凋亡的影响

目的:本实验拟通过棉酚对3种经典髓系白血病细胞系的研究,探索其治疗白血病的可能。方法:用细胞培养、四唑盐比色试验、形态学、DNA电泳等方法观察棉酚对白血病细胞的凋亡效应。结果:棉酚在浓度>6μmol/L时可选择地抑制白血病细胞的增殖、促进其凋亡,并表现出浓度依赖效应。结论:棉酚对髓系白血病细胞具有选择杀伤作用,表明其可能是一种高效低毒的抗白血病药物。

柿叶黄酮对晚期氧化蛋白产物诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的 :观察柿叶黄酮对晚期氧化蛋白产物 (AOPP)诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响。方法 :体外培养NIH 3T3细胞 ,应用柿叶黄酮与晚期氧化蛋白产物共同进行作用并设立对照进行比较 ,采用非放射性的MTS/PES法确定成纤维细胞的增殖状态。结果 :各组的细胞增殖率分别为对照组 (1 789± 0 2 99) ;AOPP 10 0 μg/ml组(2 0 6 4± 0 14 1) ;AOPP 5 0 μg/ml组 (2 14 9± 0 2 18) ;AOPP 10 μg/ml组 (2 10 8± 0 16 5 ) ,AOPP 1μg/ml组 (2 12 4±0 131) ;AOPP 10 0ng/ml组 (2 0 87± 0 12 5 ) ;柿叶黄酮 5 0 μg/ml组 (1 714± 0 179) ;AOPP 5 0 μg/ml联用柿叶黄酮 5 0μg/ml组 (1 80 7± 0 10 5 )。统计分析显示低至 10 0ng/ml的AOPP仍能明显刺激成纤维细胞的增殖 (P <0 0 5 )。柿叶黄酮单独作用对成纤维细胞增殖率无影响 (P >0 0 5 ) ;柿叶黄酮对AOPP诱导的成纤维细胞增殖有明显的抑制作用(P <0 0 5 )。结论 :柿叶黄酮能明显抑制由晚期氧化蛋白产物刺激的血管外膜成纤维细胞增殖。

N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的研究新合成的全反式维甲酸(ATRA)衍生物[N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺]对人肺腺癌A549细胞株体外增殖及凋亡的影响。方法3种浓度的ATRA衍生物和ATRA(1、5、10mg/L)分别处理A549细胞1、2、3、7d,应用MTT法和流式细胞技术分别观察该ATRA衍生物对A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响;Western blot分析凋亡相关蛋白表达的变化。结果ATRA衍生物处理组A549细胞增殖抑制率随药物浓度的增加而提高,分别为9.1%、17.8%、47.0%;抑制率亦随药物作用时间的延长而提高,分别为18.1%、20.6%、40.4%、83.4%。10mg/LATRA衍生物可明显诱导A549细胞凋亡,凋亡率达到40.9%,G0～G1期细胞比例明显下降,细胞凋亡峰较对照组明显提前,凋亡过程伴随Bcl-2表达下降,而Bax、Bak、酶原形式的Caspase-3、p53、NF-κB的表达无明显变化。结论ATRA衍生物对A549细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;并诱导细胞凋亡,可能与Bcl-2蛋白的表达下调有关。

柿叶黄酮对晚期糖基化终产物诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的观察柿叶黄酮对晚期糖基化终产物诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响。方法体外培养成纤维细胞,应用柿叶黄酮与晚期糖基化终产物共同进行作用并设立对照进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定成纤维细胞的增殖状态。结果各组的细胞增殖率分别为对照组(0.840±0.061);细胞增殖率分别为(1.330±0.055)、(1.210±0.119)和(0.792±0.060)、柿叶黄酮50 μg /ml组(0.829±0.056);AGEs 50 μg /ml联用柿叶黄酮50 μg /ml组(0.947±0.072)。统计分析显示低至10 μg/ml 的AGEs仍能明显刺激成纤维细胞的增殖(P<0.05),并呈现剂量依赖性(P<0.05)。柿叶黄酮单独作用对成纤维细胞细胞增殖率无影响(P>0.05);柿叶黄酮对AGEs诱导的成纤维细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05)。结论柿叶黄酮能明显抑制由晚期糖基化终产物刺激的血管外膜成纤维细胞增殖,

丹参酮ⅡA对人肺癌细胞株A549/CDDP细胞增殖和凋亡的影响

目的研究丹参酮ⅡA（TanⅡA）对人耐药非小细胞肺癌细胞株（A549/CDDP）增殖与凋亡的影响。方法体外培养A549/CDDP,以不同剂量组TanⅡA干预A549/CDDP,在48、72、96小时后用四氮唑盐（MTT）法检测活细胞OD值;采用Heochst33258荧光染色观察TanⅡA干预后细胞凋亡的形态学变化;半定量RT-PCR检测用药后A549/CDDP survivin和Bax基因表达;流式细胞术检测TanⅡA干预后细胞周期分布。结果在0.6-5.0 mg/L浓度范围内,TanⅡA对A549/CDDP均有增殖抑制作用,并呈剂量依赖趋势,在96小时各组增殖抑制率达高峰;5.0mg/L 72小时组,形态学观察细胞凋亡明显;2.5、5.0 mg/L 72小时组,survivin DNA条带强度较对照组减弱,BaxDNA条带强度较对照组明显增强;流式细胞术检测显示TanⅡA明显抑制A549/CDDP进入增殖周期,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 TanⅡA可诱导凋亡抑制A549/CDDP增殖并影响细胞周期,其分子机制可能与survivin下调,Bax上调有关。

天花粉蛋白抑制乳腺癌生长的实验研究

目的探讨天花粉蛋白(TCS)对MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞及乳腺癌裸鼠移植瘤的影响。方法四唑盐比色法(MTT)检测TCS处理前后细胞的增殖情况;流式细胞术(FCM)检测TCS处理前后细胞周期变化和凋亡率;将MDA-MB-231细胞接种于裸鼠,成瘤后分为对照组、TCS组和盐水组。检测各组裸鼠移植瘤体积、瘤重和肝、肾功能、血常规变化。结果随着TCS作用时间延长、浓度增大、MDA-MB-231和MCF-7细胞生长受到明显抑制;TCS处理后细胞阻滞于G0/G1期,并可检测到凋亡峰;TCS组裸鼠移植瘤体积和瘤重较对照组明显缩小,TCS对荷瘤裸鼠肾功能、血常规无明显影响,可引起谷丙转氨酶轻度升高。结论TCS可抑制MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞增殖和乳腺癌裸鼠移植瘤生长。

双歧杆菌粘附素对脂多糖和H_2O_2调节肠上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的研究双歧杆菌分泌型粘附素对脂多糖(LPS)和H2O2体外调节肠上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法用3H-TdR掺入法、流式细胞仪和荧光染色等方法观察肠上皮细胞增殖和凋亡的情况。结果100 μg/L LPS对细胞增殖和凋亡均有促进作用,200 μmol/L H2O2可抑制肠上皮细胞增殖,促进凋亡。丫啶橙荧光染色见细胞核染色质致密浓染或裂解成碎片。预先经双歧杆菌分泌型粘附素处理后,LPS组细胞增殖和凋亡率均显著下降,H2O2组细胞凋亡明显减少。结论在体外,双歧杆菌分泌型粘附素能抑制LPS和H2O2对肠上皮细胞的损害作用,维持肠上皮细胞增殖与凋亡的平衡。

MicroRNA-21靶向PDCD4对胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨MicroRNA-21对胃癌细胞中PDCD4表达、细胞增殖与凋亡的影响。方法将MGC-803人胃癌细胞分为5组,分别为空白对照组(不转染)、阴性对照组(转染不相关siRNA)、mir 21组(转染miRNA-21质粒)、mir 21 Inhibitor组(转染miRNA-21抑制物)、PDCD4 siRNA组(转染PDCD4 siRNA)。分别于转染后36、48、72小时收集细胞,采用实时定量PCR及细胞爬片免疫组织化学检测细胞中PDCD4基因及蛋白水平,运用MTS法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与空白、阴性对照组比较,mir 21组PDCD4表达量下降,细胞增殖能力增强(均P<0.05);mir 21 Inhibitor组PDCD4表达量增多(P<0.05),细胞增殖受到抑制(P<0.01),细胞总凋亡比例增高(P<0.05);PDCD4 siRNA组PDCD4表达几乎完全被抑制,细胞增殖能力增强(均P<0.01),36小时时细胞总凋亡比例减少(P<0.05)。而阴性和空白对照组比较,细胞PDCD4表达量、细胞增殖与凋亡都无明显差异(P>0.05)。结论 MicroRNA-21能靶向调控PDCD4,抑制胃癌细胞MicroRNA-21的表达后可上调PDCD4表达,发挥抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡的作用。

褪黑素联合全反式维甲酸对NB4细胞株的影响

目的观察褪黑素(MLT)联合全反式维甲酸(AT-RA)对人早幼粒细胞白血病细胞株NB4的增殖、凋亡、分化及细胞周期的影响。方法 1mmol/L的MLT与1μmol/LATRA联合作用于NB4细胞,1mmol/L的MLT和1μmol/LATRA作为对照组,药物作用24、48、72h后进行试验。流式细胞术检测细胞凋亡率、细胞膜表面抗原CD11b的表达阳性率,观察细胞周期的变化情况。结果 MLT联合ATRA作用于NB4细胞24、48、72h后,促进细胞的凋亡率为16·23%±0·38%、31·03%±0·51%和55·65%±2·68%,细胞表面CD11b的阳性率为22·66%±0·36%、57·31%±3·12%和81·74%±0·47%,对细胞周期的影响则表现为G1期细胞增多(68·1%±0·3%、73·3%±0·4%和83·2%±0·2%),S期细胞减少(23·1%±0·1%、23·2%±0·5%和8·2%±0·1%),均优于单用MLT组或ATRA组(P<0·05)。结论 MLT和ATRA联合用药的作用优于单用药。

龟甲提取物对骨髓间充质干细胞增殖过程中核受体的影响

【目的】观察龟甲(也称龟版或龟板)提取物对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖过程中核受体 (nuclear receptor,NR)表达的影响。【方法】采用密度梯度法分离大鼠MSC进行培养,经5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)标记和 CD44免疫组化染色鉴定后,分别以高、中、低剂量的龟甲提取物(3 333、333．3、33．33μg／mL)加入到体外培养的MSC中, 与龟甲提取物作用12、24、72、120 h后,采用免疫组化法和免疫荧光细胞化学法检测MSC的视黄酸受体(retinoic acid receptor-α,RARα)、维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、雌激素受体(estrogen reeepror,ER)、糖皮质激素受体 (glucocorticoid receptor,GR)、甲状腺激素受体(thyroid hormone receptor-α,TRα)和过氧化物酶体增殖物活化受体(peroxisome proliferator activated receptor-δ,PPARδ)的表达。【结果】高、中、低剂量龟甲提取物组的MSC的RARα、VDR表达阳性细胞均高于对照组(P<0．05或P<0．01),且呈剂量依赖性;作用24 h后RARα表达达峰值,作用72 h后VDR表达达峰值。未检测到ER、GR、PPARδ、TRα阳性反应细胞。【结论】视黄酸受体α和维生素D受体可能为龟甲提取物促MSC增殖的药理靶点。

中药“拮新康”对白血病细胞株的作用研究

目的 :观察中药拮新康对白血病细胞株HL - 6 0、K5 6 2、Jurkat增殖的影响 ,为临床治疗白血病提供依据。方法 :采用细胞毒性实验检测拮新康对HL - 6 0、K5 6 2、Jurkat细胞增殖的影响。结果 :拮新康对三种白血病细胞株均有抑制作用 ,拮新康不同剂量对白血病细胞的抑制率有着不同程度的改变 ,随着剂量的增加 ,抑制率逐渐增强 ,且具有一定的量效关系。结论 :拮新康对白血病细胞有抑制作用 ,且具有一定量效关系 ,并有增强化疗的作用。

5-氮杂-5'-脱氧胞嘧啶核苷的合成及其抗肿瘤活性筛选

目的合成并分离5-氮杂-5'-脱氧胞嘧啶核苷(5-aza-5'dC)的α,β异构体,并研究其抗肿瘤活性。方法以氰基胍为原料合成并分离5-aza-5'dC的α,β异构体,用不同浓度的5-aza-5'dC作用于肝癌细胞株BEL-7402,胃癌细胞株SCG-7901,MTT法观察细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期分布情况。结果通过1H-NMR、13C-NMR和HR-MS确认5-aza-5'dC的α,β异构体的结构,药理活性实验表明β异构体能够显著抑制肿瘤细胞的生长,α异构体作用较弱;流式细胞检测表明经过5-aza-5'dC作用后,肝癌细胞株BEL-7402呈现G0/G1期和G2/M期双期阻滞,胃癌细胞株SCG-7901呈现G2/M期阻滞。结论 5-aza-5'dC的合成方法简单易行,其β异构体对BEL-7402、SCG-7901肿瘤细胞具有抑制增殖和细胞周期阻滞作用。

多西环素对小细胞肺癌H446细胞增殖及HIF表达的影响

目的探讨多西环素对小细胞肺癌H446细胞增殖及HIF-1α和HIF-2α表达的影响。方法采用MTT法检测多西环素对H446细胞增殖抑制作用。采用倒置相差光学显微镜观察多西环素对细胞凋亡形态的影响。通过流式细胞仪合并Cell Fit软件对细胞周期分布进行分析,采用Annexin V-FITC荧光染色检测细胞凋亡率。采用细胞健康分析软件检测细胞内线粒体膜电位。实时荧光定量PCR检测HIF-1α和HIF-2α表达。Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。结果多西环素(2.5、5、10、20、40、80 mg/L作用24或48小时)呈剂量-时间依赖性抑制H446细胞增殖。经光学显微镜可明显观察到多西环素能导致H446细胞凋亡,呈时间-剂量依赖性。流式细胞仪结果显示,10、20、40 mg/L多西环素作用48小时能阻滞H446细胞周期S期,并且随着细胞凋亡率增加,呈剂量依赖性。浓度为10、20、40 mg/L多西环素作用48小时的细胞线粒体膜电位低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);经10、20、40 mg/L多西环素作用48小时的细胞HIF-1α、HIF-2αmRNA表达均低于对照组(均P<0.05),HIF-1α、HIF-2α蛋白表达量低于对照组,且HIF-1α和HIF-2α变化趋势均相同,随着多西环素浓度增加、表达量降低(P<0.05)。结论多西环素对小细胞肺癌H446细胞具有增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,可阻滞细胞于S期,降低线粒体膜电位,下调HIF-1α、和HIF-2α蛋白表达,且伴随有H446细胞凋亡的现象。

黄芩茎叶总黄酮对体外培养的人胎儿平滑肌细胞增殖的抑制作用

利用体外细胞培养技术，通过ＭＴＴ测定、细胞计数等方法，观察了黄芩茎叶总黄酮对人胎儿平滑肌细胞的保护作用。结果表明：黄岑茎叶总黄酮能抑制平滑肌细胞的增殖，呈明显的剂量依赖关系；可显著抑制高脂血清对平滑肌细胞（ＳＭＣ）的促增殖作用。提示：黄草茎叶总黄酮对动脉粥样硬化的防治可能具有一定的积极作用。

绿茶多酚抑制晚期糖基化终产物诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖(英文)

目的本研究观察绿茶多酚对晚期糖基化终产物(AGEs)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)应用不同浓度的AGEs分别刺激VSMCs并设立对照组进行比较,将不同剂量的绿茶多酚与AGEs共同作用并设立对照组进行比较,采用非放射性的MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。结果与对照组相比,晚期糖基化终产物对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用。在晚期糖基化终产物刺激下,绿茶多酚可明显抑制血管平滑肌细胞的生长。AGEs对p44/42 MAPK磷酸化蛋白表达有显著的增强作用,此作用可被绿茶多酚抑制。结论本研究提示绿茶多酚可抑制晚期糖基化终产物诱导的血管平滑肌细胞增殖及p44/p42 MAPK磷酸化蛋白的表达。

Evn-50对人乳腺癌MCF-7耐三苯氧胺细胞株生长和凋亡的影响

目的:通过研究黄荆子的乙酸乙酯提取物Evn-50在体外对人乳腺癌MCF-7和耐三苯氧胺细胞株(MCF-7/TAM-R)的生长和凋亡的影响,探索Evn-50在逆转乳腺癌耐药中的作用及其可能机制。方法:构建MCF-7/TAM-R细胞系,分别用DMSO、5μmol/L TAM、5μmol/L TAM+50μg/ml Evn-50和50μg/ml Evn-50处理细胞。然后,采用MTT法测定细胞存活率,PI单染流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期分布情况,免疫蛋白印记法观察Evn-50和TAM单独或联合作用时的机制。结果:Evn-50单药或与TAM联合均可以降低人乳腺癌MCF-7和三苯氧胺耐药细胞株MCF-7/TAM-R的存活率,两药联合作用更为明显,同单用TAM组相比差异有统计学意义(P<0.01)。Evn-50单药或与TAM联合应用对两株细胞的凋亡均有明显影响,且随着作用时间的延长细胞凋亡逐渐增多,其中以72 h时细胞凋亡率和G2期细胞比例最为明显(P<0.01)。TAM和Evn-50联合处理无论是对MCF-7细胞还是对三苯氧胺耐药细胞MCF-7/TAM-R,均能明显下调p-AKT(Ser473)和p-MAPK44/42(Thr202/Tyr204)蛋白水平。结论:Evn-50能够抑制MCF-7和MCF-7/TAM-R细胞株的生长并诱导细胞凋亡,尤其在Evn-50与TAM联合处理时更为明显。其作用机制可能与AKT和MAPK信号通路的下调相关,但需要进一步研究证实。

GPR30在子宫平滑肌瘤细胞增殖中的作用研究

目的探讨跨膜G蛋白偶联受体30(G protein-coupled receptor30,GPR30)在子宫平滑肌瘤细胞中的表达及其对肌瘤中平滑肌细胞的增殖作用。方法培养子宫平滑肌瘤原代细胞,应用免疫组织化学、免疫荧光及蛋白质印迹法检测GPR30的表达。应用蛋白印迹检测GPR30干扰后,其下游信号通路的变化。应用MTT检测在雌激素刺激下,正常子宫平滑肌细胞及平滑肌瘤细胞的生长活性。结果子宫平滑肌瘤细胞中有GPR30蛋白的高表达,其主要位于细胞质中,在细胞核上无明显表达。在未处理组平滑肌细胞中,雌激素刺激雌激素信号通路中的ERK1/2表达增强。在GPR30干扰后的平滑肌细胞中,雌激素刺激后ERK1/2表达无显著改变。MTT结果表明在雌激素作用下,未处理组细胞存活和生长率显著增加;干扰组细胞的存活和生长率显著下降。结论 GPR30在子宫肌瘤平滑肌细胞的细胞质中高表达,可能参与子宫平滑肌细胞的增殖。

奈达铂联合顺铂对人食管癌细胞株(Eca-109)抑制作用机制的研究

目的研究奈达铂(NDP)联合顺铂(DDP)对人食管癌细胞株Eca-109的增殖及凋亡的影响,并探讨其机制。方法采用MTT法检测NDP联合DDP对Eca-109细胞的增殖抑制率,中效原理法判断联合用药的相互作用;采用RT-PCR和蛋白印迹法分析Ki-67及Bax表达的变化。结果NDP、DDP均明显抑制Eca-109细胞的生长,且呈剂量依赖性;两者联合使用低浓度时呈拮抗效应,高浓度时呈协同效应;IC50浓度的NDP、DDP和1/2IC50(NDP)+1/2IC50(DDP)对Eca-109细胞的抑制率分别为(41.9±4.1)%、(47.4±2.9)%和(52.5±0.9)%;与单独用药组比较,联合用药组Ki-67基因(蛋白)表达显著降低,而Bax基因(蛋白)表达显著增高。结论1/2IC50浓度NDP和DDP联合应用与两药IC50浓度单独应用相比,对Eca-109细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡能力均有明显增强。