miR17-92簇在痛风中的表达及临床意义

目的:探讨miR17-92簇各成员在痛风患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达,预测其可能靶点及作用通路,评估其在痛风中可能的作用机制及临床意义。方法:选取川北医学院附属医院67例痛风性关节炎(GA)患者,其中急性痛风性关节炎(AG)患者22例,间歇期痛风(IG)患者45例,对照组选取35例正常健康体检者(HC)。RT-qPCR检测miR17-92簇、IFN-γ、IL-10及JAK-STAT通路部分成员表达,收集相关实验室指标分析其相关性。结果:miR17、miR18a、miR19a、miR20a、miR19b在AG、IG、HC中表达差异均有统计学意义(H=8.753,P<0.05;H=6.338,P<0.05;H=6.523,P<0.05;H=9.061,P<0.05;H=9.729,P<0.01)。JAK3、STAT2在AG、IG、HC三组中表达差异有统计学意义(H=10.349,P<0.01;H=14.801,P<0.01)。IFN-γ在三组间表达差异有统计学意义(H=8.734,P<0.05)。AG患者miR18a表达与IBIL、Crea、MO、HGB呈负相关,miR19a表达与TC、UA、HGB呈负相关,miR20a表达与Crea呈负相关,miR19b表达与UA、HGB呈负相关。IG患者miR17表达与IBIL、WBC、LY、MO均呈负相关,miR18a表达与ALP呈正相关,miR19a表达与TC、UA呈负相关,miR20a表达与ADA、UA呈负相关。结论:miR17-92簇可能通过靶向JAK-STAT通路调控痛风发生发展、参与痛风临床生理病理过程。

IFN-β通过STAT1诱导SARI表达抑制AML细胞增殖并促进凋亡

目的:探讨IFN-β诱导SARI表达对急性粒细胞性白血病(AML)细胞增殖、凋亡的作用,并筛选其潜在的调控分子。方法:qPCR、Western blot筛选SARI低表达的AML细胞作为实验细胞株;不同浓度IFN-β干预AML细胞,于不同时间采用qPCR、Western blot检测SARI表达,选取IFN-β作用的适当浓度和时间;采用RNA-Seq转录组测序及KEGG富集分析初步筛选IFN-β诱导AML细胞SARI表达的潜在调控分子;通过相应分子抑制剂联合IFN-β处理AML细胞,MTS法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;明确该分子参与IFN-β诱导SARI表达对AML细胞增殖及凋亡的作用。结果:HL60和NB4细胞SARI表达相对较低,选为实验细胞株;1 ng/ml IFN-β作用12 h后AML细胞SARI表达升高且细胞增殖被抑制,凋亡增多;筛选STAT1为IFN-β诱导SARI表达的潜在调控分子;抑制STAT1后,IFN-β对AML细胞SARI表达、增殖抑制、凋亡促进的作用被明显逆转。结论:IFN-β可通过STAT1诱导AML细胞SARI表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

表达IFN-α的重组猪繁殖与呼吸综合病毒的构建及生物学特性分析

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害我国生猪业的重要疫病之一,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),是一种免疫抑制性病毒。干扰素(IFN)是一类具有免疫调节功能和抗病毒作用的细胞因子。IFN-α除更直接的抗病毒作用外,还可以调节宿主的先天性和适应性免疫。论文构建表达IFN-α的重组PRRSV,分析重组病毒的生物学特性以及IFN-α的生物学活性。通过反向遗传操作方法将IFN-α插入到PRRSV ORF1b和ORF2a之间,重组质粒转染细胞后可以拯救出重组病毒(rGXAM-P-IFN-α)。插入到PRRSV基因组中的IFN-α可遗传稳定9代。重组病毒生长特性分析可发现rGXAM-P-IFN-α复制能力显著低于亲本病毒。rGXAM-P-IFN-α感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)可显著上调抗病毒基因(PKR,ISG15和ISG54)mRNA表达水平,为进一步研发新型PRRSV疫苗提供参考。

结核分枝杆菌特异性IFN-γ、IL-2联合检测在肺结核与细菌性肺炎鉴别诊断中的应用

目的评价结核分枝杆菌特异性细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)双因子联合检测在肺结核与细菌性肺炎鉴别诊断中的应用价值。方法选择阜阳市人民医院2022年1月-2023年10月呼吸科住院患者91例,明确诊断为肺结核患者45例(肺结核组)和细菌性肺炎患者46例(肺炎组),均进行双因子联合检测,比对分析双因子联合检测与C反应蛋白(CRP)对肺结核和细菌性肺炎鉴别诊断的效果。结果使用双因子联合检测对肺结核与细菌性肺炎进行鉴别诊断,灵敏度为86.7%、特异度为84.8%,受试者工作特征曲线下面积(AUC)值为0.928(95%CI:0.870~0.986),与CRP的鉴别诊断效果相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论结核分枝杆菌特异性细胞因子IFN-γ、IL-2联合检测在鉴别肺结核与细菌性肺炎时具有较高的应用价值,能为临床肺结核和细菌性肺炎的鉴别诊断提供依据。

不同基质松节油膏对骨性关节炎大鼠的疗效及关节炎症的影响

目的比较以羊油和酥油为基质制作的松节油膏和以凡士林为基质制作的松节油膏对骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)大鼠的疗效及关节炎症的影响。方法选取SD雄性大鼠90只为研究对象,10只作为空白组,其余80只大鼠关节注射单碘乙酸钠(Monoiodoacetate,MIA)建立OA模型,造模成功后,随机分为模型对照组(不用任何药物)、阳性对照组(外用消肿止痛酊0.5 mL/次)、松节油膏高剂量组(80 mg/kg)、松节油膏中剂量组(40 mg/kg)、松节油膏低剂量组(20 mg/kg)、凡士林高剂量组(80 mg/kg)、凡士林中剂量组(40 mg/kg)、凡士林低剂量组(20 mg/kg),各给药组3次/d,连续7 w。各组大鼠给药50 d后断尾取血,比较各组大鼠关节炎指数、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)的水平、白细胞(White blood count,WBC)中性粒细胞(Neutrophils,NEU)计数。结果与空白组比较,模型对照组大鼠关节指数,血清IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平,WBC及NEU计数均升高(P<0.05);与模型对照组比较,松节油膏高、中、低剂量组和凡士林高、中、低剂量组大鼠关节指数、大鼠血清IL-1β、TNF-α、IFN-γ、WBC及NEU计数显著降低(P<0.05);与松节油膏中剂量组比较,凡士林高中低剂量组大鼠关节指数、大鼠血清IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平相对较高(P<0.05)。结论以羊油和酥油为基质制作的松节油膏和以凡士林为基质制作的松节油膏均能改善关节功能,减轻炎症反应和软骨破坏,尤以羊油和酥油为基质制作的松节油膏效果更明显。

他克莫司联合激素在重症肌无力患者中的效果及对IFN-γIL-4和TGF-β的影响

目的探讨他克莫司联合激素在重症肌无力(MG)患者中的治疗效果及对干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)及转化生长因子-β(TGF-β)的影响。方法选取2022-05—2023-09郑州大学第一附属医院的MG患者96例为对象,信封法分为2组各48例。对照组采用激素治疗,观察组采用他克莫司联合激素治疗,2组患者均完成4周治疗,比较2组重症肌无力日常生活量表(MG-ADL)、重症肌无力定量评分体系(QMGS评分)、生化指标水平及安全性。结果干预后MG-ADL评分观察组(2.95±0.79)低于对照组(4.59±1.12,P<0.05),QMGS评分观察组(8.51±1.69)低于对照组(12.69±2.24,P<0.05),2组干预后日常生活及肌力均得到提高,疲劳耐受性增强,观察组较对照组改善更明显。2组干预后生化指标得到改善,干预后观察组IFN-γ水平(43.96±3.18)低于对照组(52.58±3.63,P<0.05),观察组IL-4水平(36.89±6.39)高于对照组(31.11±6.42,P<0.05),观察组TGF-β水平高于对照组(41.43±3.91,P<0.05)。不良反应发生率观察组(10.42%)较对照组(6.25%)无统计学差异(P>0.05)。结论他克莫司联合激素治疗MG患者效果显著,能提高日常生活质量,降低MG-ADL及QMGS评分,改善生化指标水平,且治疗安全性较高。

银甲丸加减方对衣原体持续性感染输卵管炎模型小鼠输卵管病理及炎性因子的影响

目的:观察银甲丸加减方对生殖道衣原体(CT)持续性感染输卵管炎小鼠输卵管病理、CT清除率及炎性因子IL-10、IFN-γ和TGF-β的调节作用。方法:36只BALB/c小鼠随机分为6组,除空白组以外,其余组小鼠阴道内均接种衣原体建立CT持续性感染模型。造模成功后分组给药,第28天处死,HE染色观察小鼠上生殖道组织病理改变,q RT-PCR测定小鼠生殖道CT含量,ELISA检测小鼠血清IL-10、IFN-γ和TGF-β表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组CT基因表达量显著增高(P<0.01)。与模型组比较银甲丸加减方中、高剂量组和阳性药物(阿奇霉素)对照组CT基因表达显著降低(P<0.05)。IL-10、IFN-γ含量显著上调(P<0.05),TGF-β含量显著下降(P<0.05)。结论:银甲丸加减方有助于缓解衣原体生殖道感染模型小鼠的输卵管炎病理状态,促进持续性感染CT的清除,其机制可能是通过调节细胞因子IL-10、IFN-γ和TGF-β的表达来实现。

西藏羊和白-藏杂交羊外周血IFN-α、IgG和IL-2的研究

为了解西藏羊和白萨福克羊与西藏羊的杂交后代羊生长发育中免疫因子的分泌特点和免疫学特征,以西藏羊和白-藏杂交羊为研究对象,应用ELISA方法检测0.5、1和1.5岁外周血中干扰素(IFN-α)、免疫球蛋白G(IgG)和白细胞介素-2(IL-2)的质量浓度,分析其变化规律。结果表明:随年龄的增长,藏公羊IL-2呈逐渐降低的趋势,而藏母羊呈逐渐升高的趋势(P<0.05);藏杂交公羊和藏母羊IgG含量都呈逐渐降低趋势,藏公羊下降较明显(P<0.05);藏公羊IFN-α的含量逐渐降低,0.5岁与1岁之间下降趋势明显(P<0.05),而藏母羊变化不大。随年龄的增长,白-藏杂交羊公羊和母羊IL-2含量先降低再升高;白-藏杂交羊公羊IgG含量变化不大,母羊则是先升高后下降趋势,且1岁和1.5岁之间下降明显(P<0.05);白-藏杂交羊公羊IFN-α的含量逐渐降低,而母羊是先升高后下降。

糖皮质激素对哮喘控制作用的实验研究

目的:探讨糖皮质激素对哮喘的控制作用。方法:将30只大鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)及地塞米松干预组(DXM组),观察其临床表现,比较三组大鼠血嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)、血清中IgE、VEGF、IL-4、IFN-γ的水平变化,并留取肺做组织病理学检查。结果:从临床表现上看糖皮质激素对哮喘具有控制作用,三组大鼠IgE、EOS、VEGF、IL-4、IFN-γ水平差异均具有统计学意义(F值分别为1014.726、894.408、38.693、308.489和2546.543,P<0.001);B组与A组相比较,IgE、EOS、VEGF、IL-4水平升高、IFN-γ水平降低(P<0.001);DXM组与B组相比较,IgE、EOS、VEGF、IL-4水平降低、IFN-γ水平升高(P<0.001);DXM组与A组相比较,IgE、EOS、VEGF、IL-4水平升高、IFN-γ水平降低(P<0.001)。大鼠肺组织病理示:B组见明显的炎性改变和气道重塑,DXM组炎性改变和气道重塑较B组减轻。结论:糖皮质激素可通过上调IFN-γ,下调IgE、EOS、VEGF、IL-4,减轻炎性改变和气道重塑控制哮喘。

血清RAGE、HMGB1水平与重症肺炎急性呼吸窘迫综合征发病及IFN-γ/IL-4变化的关系

目的探究血清晚期糖基化终产物受体(RAGE)、高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)水平与重症肺炎(SP)急性呼吸窘迫综合征(ARDS)发病及γ-干扰素(IFN-γ)/白细胞介素4(IL-4)变化的关系。方法前瞻性选取2020年3月至2022年2月我院收治的100例SP患儿为研究对象,根据患儿是否发生继发性ARDS将患儿分为ARDS组(n=56)和对照组(n=44),收集患儿一般资料,采集外周血以酶联免疫吸附法进行RAGE、HMGB1、IFN-γ和IL-4表达水平检测,采用多因素logistic回归分析SP患儿继发ARDS的影响因素,采用Pearson相关性分析其与IFN-γ/IL-4的相关性,并采用受试者工作曲线(ROC)分析RAGE、HMGB1表达对SP患儿继发ARDS的预测价值。结果两组SP患儿性别、年龄、体温以及发病季节之间无显著差异,ARDS组致病菌种类多于对照组,PaO_(2)/FiO_(2)和APS评分、血清RAGE、HMGB1、IFN-γ和IL-4表达水平以及IFN-γ/IL-4比值均高于对照组(P<0.05)。经多因素logistic回归分析可知,致病菌种类、PaO_(2)/FiO_(2)、RAGE、HMGB1表达、IFN-γ、IL-4和IFN-γ/IL-4均为SP患儿继发ARDS的影响因素。经Pearson相关检验,SP患儿血清RAGE、HMGB1表达水平与IFN-γ、IL-4和IFN-γ/IL-4均呈正相关(P<0.05)。经ROC曲线分析可得,血清RAGE、HMGB1水平预测SP患儿发生ARDS的AUC分别为0.707和0.750,灵敏度分别为73.2%、64.3%,特异度分别为68.2%、77.3%,两者联合预测的AUC为0.848,灵敏度和特异度分别为80.4%和81.8%。结论SP继发ARDS患儿血清中RAGE、HMGB1表达水平较高,与IFN-γ/IL-4呈正相关,监测患儿血清RAGE、HMGB1表达对SP患儿继发ARDS的风险有一定的预测价值。

苍耳子散调控cGAS-STINS信号通路增强机体免疫抗过敏性鼻炎作用研究

目的探究苍耳子散抗过敏性鼻炎的作用机制。方法200例患者依据随机数字法分为对照组和治疗组两组,每组100例。治疗组采用经典护理疗法鼻腔填塞苍耳子散,对照组给药糠酸莫米松鼻喷雾剂喷鼻,两组疗程均28 d。观察两组治疗前后临床疗效、鼻部分类及症状视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分变化;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测患者鼻分泌物及血清中γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-12(IL-12)相关因子的表达水平;采用荧光定量PCR检测Caspase-1、Caspase-4、Caspase-5、Caspase-11、Caspase-12、环状GMP-AMP合成酶(cGAS)、解旋酶41(DDX41)、干扰素诱导蛋白16(IFI16)、TANK结合激酶1(TBK1)、干扰素基因激活蛋白(STING)表达水平。结果治疗后,治疗组与对照组相比,鼻分泌物中IFN-γ分泌水平降低;鼻分泌物中Caspase-1、Caspase-4、Caspase-5、Caspase-11和Caspase-12、cGAS、DDX41、IFI16、STING表达水平降低;在实验执行期间两组均未发现明显不良反应。结论苍耳子散可通过调控cGAS-STINS信号通路增强机体免疫治疗过敏性鼻炎。

高脂肪饮食促进TLR2的表达促进3T3L1脂肪细胞分泌IFN-γ诱导胰岛素抵抗的发生及发展

目的:探讨高脂饮食诱导胰岛素抵抗的机制,以及了解高脂饮食诱导胰岛素抵抗的脂肪细胞的表型变化。方法:雄性C57 BL/6 J小鼠,给予正常饮食和高脂饮食。从正常饮食或高脂饮食喂养2周的小鼠中分离附睾脂肪组织。实时荧光定量RT-PCR检测γ-干扰素(Interferonγ,IFN-γ)和toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)mRNA的表达。流式细胞术来检测表达TLR2或IFN-γ的脂肪细胞的数量。苏木精-伊红染色分析胰腺组织。免疫组化分析脂肪组织中TLR2和IFN-γ的表达。FFA或Zymosan A处理3T3-L1脂肪细胞,并通过实时荧光定量RT-PCR检测IFN-γ和TLR2 mRNA的表达。结果:对脂肪细胞中基因表达谱的分析表明,高脂肪摄入诱导了IFN-γ和TLR2的表达提高。流式细胞术分析显示存在共表达TLR2和IFN-γ的脂肪细胞(TLR2/IFN-γ脂肪细胞),与皮下脂肪组织相比,高脂肪摄入增加了内脏脂肪组织中TLR2/IFN-γ脂肪细胞的数量。游离脂肪酸通过TLR2信号增加3T3-L1脂肪细胞中IFN-γ的表达。结论:TLR2/IFN-γ脂肪细胞可能通过诱导内脏脂肪组织IFN-γ的表达,参与高脂诱导的胰岛素抵抗的发生。

γ干扰素与脓毒性休克患者严重程度的相关性及对预后的评估价值

目的探讨γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)的表达水平和脓毒性休克(septic shock)患者病情严重程度的相关性及其对预后的评估价值。方法收集96例脓毒性休克患者的临床资料及血清,并按28 d结局分为存活组和死亡组;同时收集同期健康体检人群的30例血清作为对照组。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测3组的IFN-γ的表达水平,分析组间IFN-γ的表达水平及各项临床资料。结果脓毒性休克患者血清的IFN-γ表达水平较健康体检人群低[212.80(151.11,255.79)ng/L vs.343.37(314.5,427.95)ng/L,P<0.01]。96例脓毒性休克中有54例存活组,42例死亡组,比较两组的临床资料,两组患者的性别、吸烟史、SBP、DBP、SI、Lac、IL-6、IFN-γ、PCT、SOFA评分、APACHEⅡ评分比较差异有统计学意义(P<0.01)。logistic回归分析显示提示Lac、IFN-γ表达下降、APACHEⅡ评分是脓毒性休克患者死亡的独立危险因素[优势比(OR)和95%置信区间(95%CI)分别为6.491(1.404~30.004)、0.954(0.954~0.999)、3.476(1.210~9.984),P<0.05]。INF-γ和Lac、APACHEⅡ的Spearman相关性分析呈负相关,相关系数分别为-0.38、-0.35。绘制Lac、IFN-γ、APACHEⅡ的ROC曲线,三者的AUC分别为0.847、0.869、0.833,三者联合预测的AUC为0.978,三者联合预测的价值优于单一指标(P<0.001)。结论IFN-γ表达水平下降与脓毒性休克患者的严重程度呈正相关,对预后有较好的评估价值。

CD4^(+)T细胞相关细胞因子在人兽共患寄生虫感染中的作用研究进展

CD4^(+)T细胞亚群及其分泌的细胞因子在寄生虫感染过程中发挥着极其重要的调控作用,与寄生虫感染的发生、发展、预后密切相关。已知CD4^(+)T细胞亚群包括Th1细胞、Th2细胞、Treg细胞、Th17细胞、Th9细胞以及Tfh细胞等,机体的Th1/Th2、Th17/Treg细胞处于动态平衡,但在特异性抗原刺激下,这种动态平衡会被打破。目前可用来预防或治疗寄生虫病的疫苗和药物较少,主要原因是对寄生虫病致病机制的认识有限。研究表明,寄生虫感染导致宿主炎症以及刺激宿主细胞介导的免疫反应有关。论文主要阐述与CD4^(+)T细胞亚群相关细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17、IL-9及IL-21在寄生虫感染中的作用,以期为探索和研究寄生虫病的发病机制及寄生虫在宿主体内的免疫逃逸机制提供参考。

血红素加氧酶-1通过诱导抗病毒蛋白的表达增强IFN-α抗HBV效应

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对HBV复制的作用及HO-1联合α-干扰素(IFN-α)的抗病毒效应。方法以HepG2.2.15细胞和HBV 1.3质粒转染HepG2细胞即HepG2-HBV1.3为HBV复制细胞模型;血红素(Hemin)分别处理HepG2.2.15和HepG2-HBV1.3细胞,诱导HO-1表达;CCK-8评估Hemin对HepG2、HepG2.2.15的毒性作用;化学发光法分析Hemin处理组及si-HO-1等实验组上清液中HBsAg、HBeAg;RT-qPCR分析HO-1、IFN-β、HBV-DNA;Western blot分析IRF-3、JAK/STAT信号通路中相关分子的表达;Hemin联合IFN-α处理HepG2.2.15,监测HO-1是否具有协同IFN-α抗病毒效应。结果Hemin剂量依赖性诱导HO-1,HO-1被诱导后发挥显著的抗HBV效应,同时IFN-β、IRF-3及JAK/STAT信号通路中IRF-9、MxA的表达均增加。沉默HO-1表达能逆转Hemin诱导组的抗病毒效应,同时I型干扰素IFN-β也呈现低表达,JAK/STAT信号通路中的IRF-9、MxA的表达也被抑制。Hemin联合IFN-α发挥更强的抗病毒作用。结论HO-1能够发挥抗HBV效应,这种效应可能是增加IRF-3的磷酸化诱导I型干扰素表达来激活JAK/STAT信号通路发挥抗病毒效应;HO-1可以协同IFN-α发挥抗病毒作用。

牙髓牙周病变患者感染根管的主要致病菌及其影响因素分析

目的探讨牙髓牙周病变患者感染根管的主要致病菌及其影响因素分析。方法选取2020年2月—2021年8月成都大学附属医院收治的88例牙周牙髓病变患者,根据是否根管感染分组为感染组(38例)和未感染组(50例)。分析感染患者病原菌的分布构成,采用单因素和多因素一般Logistic回归分析影响感染的危险因素。比较两组患者血清和龈沟液白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)水平,并采用受试者工作特征曲线分析IL-1β、IFN-γ水平对根管感染的诊断效能。结果88例患者中感染38例(43.18%),共检出46株病原菌,其中革兰阳性菌28株(60.87%),包括葡萄球菌属(21.74%)、微单胞菌(17.39%)、粪肠球菌(13.04%)、放线菌(4.35%)及其他革兰阳性菌(4.35%);革兰阴性菌18株(39.13%),包括中间普氏菌(15.22%)、福塞类杆菌(10.87%)、牙龈卟啉单胞菌(4.35%)、产黑普雷沃菌(4.35%)及其他革兰阴性菌(4.35%)。两组患者性别构成、年龄、体重指数、收缩压、舒张压比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。感染组刷牙时间<3 min、刷牙次数1次、喜食甜食、龋牙占比高于未感染组,血清和龈沟液中IL-1β和IFN-γ水平高于未感染组(P<0.05)。多因素一般Logistic回归分析结果显示:刷牙时间<3 min[O^R=1.950(95%CI:1.116,3.410)]、刷牙次数1次[O^R=2.192(95%CI:1.100,4.371)]、喜食甜食[O^R=1.754(95%CI:1.081,2.847)]、龋牙[O^R=2.252(95%CI:1.166,4.352)]、血清IL-1β≥7.69 ng/mL[O^R=1.842(95%CI:1.195,2.841)]、龈沟液IL-1β≥22.59 ng/mL[O^R=1.519(95%CI:1.032,2.235)]、血清IFN-γ≥11.73 ng/mL[O^R=1.701(95%CI:1.147,2.522)]、龈沟液IFN-γ≥8.33 ng/mL[O^R=1.495(95%CI:1.032,2.165)]均是根管感染的危险因素(P<0.05)。龈沟液IL-β为22.59 ng/mL时曲线下面积最高,为0.850(95%CI:0.763,0.937),血清IL-β为7.69 ng/mL时敏感性最高,为86.8%(95%CI:0.826,0.908),龈沟液IL-β为22.59 ng/mL时特异性最高,为92.0%(95%CI:0.895,0.937)。结论牙髓牙周病变患者根管感染病原菌主要为革兰阳性菌,刷牙时间、刷牙次数、喜食甜食、龋牙、血清IL-1β≥7.69 ng/mL、龈沟液IL-1β≥22.59 ng/mL、血清IFN-γ≥11.73 ng/mL、龈沟液IFN-γ≥8.33 ng/mL均是根管感染的影响因素,其中感染患者的血清和龈沟液IL-1β、IFN-γ均处于高表达状态,对于根管感染具有良好的诊断效能。

结核分枝杆菌潜伏感染抗原Rv2628c-Rv1737c融合蛋白的原核表达与免疫原性分析

目的原核系统表达、纯化结核分枝杆菌潜伏感染抗原Rv2628c-Rv1737c融合蛋白,并检测其能否被结核感染者外周血PBMC细胞识别,通过小鼠模型判定其免疫原性。方法按照原核系统密码子特点,全基因合成Rv2628c-Rv1737c表达核酸序列,构建表达质粒pET24a-Rv2628c-Rv1737c,原核细胞内诱导表达、亲和层析纯化Rv2628c-Rv1737c蛋白;分离不同患者样本PBMC细胞,抗原刺激后,通过q-PCR分析IFN-γmRNA表达差异,判定融合蛋白能否被TB感染者识别;联合融合佐剂DMT免疫BALB/c小鼠,检测体液免疫应答水平。结果原核克隆的重组表达质粒pET24a-Rv2628c-Rv1737c测序正确,融合蛋白以包涵体表达形式存在,经复性、亲和纯化后,分子量为57 kDa,纯度90%以上。以Rv2628c-Rv1737c融合蛋白刺激TB感染者,尤其TB潜伏感染(LTBI)者,外周血PBMC细胞IFN-γmRNA水平高于健康对照者(P<0.05);同时,BCG+Rv2628c-Rv1737c/DMT诱导小鼠能产生高水平的IgG抗体。结论原核重组可获得高纯度Rv2628c-Rv1737c融合蛋白,其作为潜伏感染抗原,可被TB感染者PBMC细胞识别,具有较强的免疫原性,是具有潜力的TB候选亚单位疫苗靶抗原,可用于TB感染尤其是潜伏感染的预防及实验室诊断。

鸡γ-干扰素的原核表达及其单克隆抗体制备与鉴定

【目的】通过原核表达系统表达鸡γ-干扰素(chicken interferon-gamma,ChIFN-γ),并制备其单克隆抗体,为建立检测天然ChIFN-γ的免疫学方法提供试验材料。【方法】将密码子优化的ChIFN-γ基因克隆至原核表达载体pET-21a(+)中,构建重组质粒pET21a-ChIFN-γ;重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,利用IPTG诱导表达重组蛋白;用该纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫合格的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合;用建立的ELISA方法筛选分泌针对ChIFN-γ蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞,并制备腹水,Protein A/G纯化腹水获得特异性抗体;对单克隆抗体的类和亚类进行鉴定;Western blotting和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测单克隆抗体的反应性、亲和力和特异性交叉反应;用辣根过氧化物酶标记单克隆抗体,用两两配对的方法进行抗体配对。【结果】成功制备可溶性重组ChIFN-γ蛋白;Western blotting结果显示,ChIFN-γ与相应抗体结合呈现特异性条带(16 ku);获得7株针对ChIFN-γ的特异性杂交瘤细胞株:3E8、5F8、2G12、5A10、3D8、3B5、3G2。Western blotting和IFA结果显示,7株单克隆抗体反应性良好,均能特异性识别真核表达的ChIFN-γ;单克隆抗体的类和亚类鉴定结果显示,3E8、5F8、3D8、3B5和2G12重链均为IgG1,5A10重链为IgG2a,3G2重链为IgM,7株单克隆抗体的轻链均为Kappa型;所获得的7株单克隆抗体解离常数(dissociation constant,Kd)在1.04~58.33 nmol/L之间,为高亲和力抗体,并获得5组配对抗体。【结论】本研究成功制备了ChIFN-γ蛋白及其单克隆抗体,为进一步开展ChIFN-γ在禽类免疫学、病毒学及疫苗效果评价等相关研究奠定基础。

下调Socs3表达增加肾癌细胞对干扰素α敏感性的实验研究

目的探索抑制细胞因子信号转导SOCS蛋白是否可以降低肾细胞癌的IFN抗性及可能机制。方法培养人肾癌ACHN细胞并转染SOCS3 siRNA,采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blotting检测SOCS家族的mRNA、蛋白表达;采用MTT法检测细胞增殖活性;建立小鼠肾癌肺转移模型,记录小鼠的生存情况。结果与对照组比较,IFN-α处理组SOCS3 mRNA表达显著增加(4.96±0.21 vs.103.22±0.24,P<0.001)。MTT法结果显示,与阴性对照组(转染NC-siRNA)比较,5.0、12.5、25.0、50 nmol/L SOCS3 siRNA可显著降低IFN-α处理组ACHN细胞增殖率(P<0.05)。Western blotting结果显示,与阴性对照组比较,SOCS3 siRNA组中p-STAT1及p-STAT3表达明显升高(p-STAT1:1.87±0.07 vs.1.02±0.01,P<0.001;p-STAT3:1.35±0.24 vs.1.12±0.03,P<0.05)。敲低SOCS3表达可增强IFN-α治疗肾癌肺转移小鼠的生存。结论下调SOCS3表达增强了STAT1激活和IFN-α的体外和体内抗肿瘤活性。基于SOCS3在介导对IFN-α免疫疗法的耐药性中发挥的作用,使用靶向SOCS3的siRNA和IFN-α的联合疗法可能是治疗肾癌及肾癌肺转移癌的有吸引力的候选药物。

牛IFN-γ真核表达系统的构建及单克隆抗体的制备与鉴定

为构建牛γ干扰素(IFN-γ)真核表达系统并制备单克隆抗体,将IFN-γ的基因克隆至pFastBacl载体上,构建pFastBacl-IFN-γ重组质粒,转化到DH10Bac后形成重组Bacmid,经过蓝白斑筛选将重组杆粒转染到Sf9细胞,经鉴定,获得了表达IFN-γ的重组杆状病毒;通过感染处于对数生长期的Sf9细胞,纯化细胞培养液上清获得了真核表达的牛IFN-γ蛋白。用纯化的IFN-γ蛋白免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术获得4株能稳定分泌的抗牛IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经双抗夹心ELISA方法检测,结果显示4C3和4H11具有较好的夹心效果,为后续牛结核病IFN-γ体外释放ELISA检测试剂盒的研发奠定了基础。