整合素相关蛋白α2β与ανβ3在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的 研究整合素相关蛋白α2β与ανβ3在宫颈鳞癌组织中的水平表达,并探讨其对疾病进展的意义。方法 收集2017年11月至2018年10月住院且手术切除的68例宫颈鳞癌患者的组织石蜡标本作为观察组,同时期住院行全子宫切除的52例子宫肌瘤患者的正常宫颈组织石蜡标本作为对照组。通过免疫组织化学法检测2组细胞膜上整合素相关蛋白α2β与ανβ3的表达水平,分析宫颈鳞状细胞癌的生物学行为与宫颈鳞状细胞癌细胞膜上α2β、ανβ3表达的关系。联合2个指标探讨整合素相关蛋白与宫颈癌临床分期及淋巴结转移的相关性。结果 观察组细胞膜上整合素α2β和ανβ3蛋白阳性表达率均显著高于对照组(P<0.05);2组细胞膜上整合素相关蛋白(α2β和ανβ3)表达在组织学分类、临床分期、淋巴结转移和浸润深度方面差异有统计学意义(P<0.05),在肿瘤大小方面差异无统计学意义(P>0.05)。α2β联合ανβ3阳性表达率与宫颈癌临床分期及淋巴结转移均呈正相关(r=0.941、0.931,P<0.05)。结论 整合素相关蛋白α2β与ανβ3表达在宫颈鳞状细胞癌组织患者标本中呈异常升高,其在疾病的发生发展中可能具有一定作用。同时,整合素相关蛋白与宫颈鳞状细胞癌的临床分期和淋巴结转移密切相关,可作为宫颈鳞癌局部浸润、远处转移的预测因素。

人脑胶质瘤中VEGF和整合素ανβ3的表达及相关性研究

目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)和整合素ανβ3 (INTανβ3)在不同病理级别人脑胶质瘤中的表达,并探讨两者之间的关系。方法 采用免疫组化SABC法和图像分析技术检测 65 例不同病理级别人脑胶质瘤标本中 VEGF 和 INTανβ3 的表达水平。结果 VEGF 在不同级别胶质瘤中表达的平均光密度值(ALD)分别为0.05177±0.019683,0.07399±0.02798和0.09168±0.03671,INTανβ3 在不同级别胶质瘤中表达的平均光密度值(ALD)分别为0.04872±0.01869,0.06065±0.02998和0.08189±0.03953,差异均有显著性意义(P< 0.05),二者的表达水平呈正相关(r= 0.835,P< 0.01)。结论 VEGF和 INTανβ3在人脑胶质瘤中的表达水平与胶质瘤的恶性程度密切相关,两者之间呈正相关,提示二者在人脑胶质瘤的恶性生物学行为中起重要作用。

宫腔粘连患者子宫内膜整合素ανβ3的表达

目的:通过检测宫腔粘连患者子宫内膜整合素ανβ3的表达,探讨宫腔粘连患者子宫内膜容受性的改变。方法:选择经宫腔镜诊断宫腔粘连的患者35例(研究组),因男性不育于我院行人工授精治疗的患者30例作为对照组,于"种植窗期"检测两组患者血清雌激素(E2)及孕酮(P)水平,同时免疫组化SP法检测两组患者子宫内膜组织中整合素ανβ3的表达水平。结果:两组患者"种植窗期"血清E2及P水平差异无统计学意义(P>0.05);研究组子宫内膜整合素ανβ3表达水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),重度宫腔粘连患者整合素ανβ3表达水平明显低于轻、中度宫腔粘连患者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:宫腔粘连患者子宫内膜整合素ανβ3的异常表达,可能导致子宫内膜容受性下降,并引起不孕、流产。

左归丸含药血清对ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/FasL、IDO在人早孕绒毛膜组织中表达的影响

目的探讨左归丸对体外人早孕绒毛膜组织ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO基因表达的影响。方法对体外培养的人早孕绒毛膜组织加入2%、5%或10%的鼠左归丸含药血清培养24-72 h。同时,在组织培养中加入孕酮作为阳性对照而仅有基础培养基为空白对照。采用Q-PCR技术检测ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO mRNA的表达。采用特异ELISA试剂盒检测定量分析ανβ3和HLA-G的蛋白表达。结果 5%含药血清处理的绒毛膜组织的ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L、IDO基因表达均显著高于阳性对照组及空白组(P<0.05)。5%含药血清处理的绒毛膜组织的ανβ3蛋白标点及2%含药血清处理的绒毛膜组织的HLA-G蛋白表达明显高于阳性对照组及空白组(P<0.05)。结论左归丸可能具有增加ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO基因表达的作用,可能是该中药复方治疗不孕症分子生物学机理之一。

补肾活血方对骨髓间充质干细胞移植治疗薄型子宫内膜大鼠子宫内膜CD34、整合素ανβ3、LIF表达的影响

目的探讨补肾活血方对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMSCs)移植治疗薄型子宫内膜模型大鼠子宫内膜血管内皮细胞标志蛋白CD34、子宫内膜容受性标志物整合素ανβ3、白细胞抑制因子(LIF)表达的影响。方法从6~8周龄雄性SD大鼠股骨骨髓中分离提取BMSCs,采用全骨髓贴壁法将其纯化,实验选用纯度较高的第3代细胞,分别采用尾静脉(IV)和宫腔注射(IU)的方法移植到雌性SD大鼠体内;给予雌性SD大鼠宫腔灌注95%无水乙醇及灌胃羟基脲加尾静脉注射高分子右旋糖苷,建立肾虚血瘀薄型子宫内膜模型;将实验大鼠分为正常组、模型组、阳性对照组、BMSCs+IV组、BMSCs+IU组、BMSCs+IV+中药组、BMSCs+IU+中药组;各干预组分别给予BMSCs静脉或宫腔移植并联合中药干预后经过大鼠3个动情周期,处死取材。免疫组化、Western blot检测子宫内膜中CD34、整合素ανβ3及LIF的表达情况。结果 BMSCs+IV组、BMSCs+IU组、BMSCs+IV+中药组、BMSCs+IU+中药组均能一定程度地增加子宫内膜CD34、整合素ανβ3、LIF的表达(P <0.05);在免疫组化检测整合素ανβ3表达方面,BMSCs+IV组与BMSCs+IU组差异有统计学意义(P <0.01);BMSCs+IV+中药组与BMSCs+IV组,BMSCs+IU+中药组与BMSCs+IU组在免疫组化检测整合素ανβ3表达及Western blot检测整合素ανβ3、LIF表达方面差异有统计学意义(P <0.05)。结论尾静脉注射BMSCs增加整合素ανβ3表达优于宫腔注射BMSCs,加用补肾活血方后能更好地增加整合素ανβ3和LIF的表达。

骨桥蛋白、整合素ανβ3及ILK表达异常在子宫内膜癌中的相关性研究

目的探讨骨桥蛋白(OPN)、整合素ανβ3和ILK在子宫内膜癌的表达情况以及三者表达的相互关系。方法采用免疫组织化学SP法,检测正常子宫内膜组织(NE)、子宫内膜不典型增生组织(AH)及子宫内膜腺癌组织(EC)中的OPN、整合素ανβ3及ILK表达。结果在NE、AH、EC组织中,OPN、整合素ανβ3及ILK的阳性表达率分别为30%、45%、86.7%;15%、40%、75.6%;20%、25%、71.1%。三者的表达从NE到EC逐渐增高(p<0.01),随EC恶性程度的增高,其表达均显著增加,三者在EC中的表达呈正相关性。结论:OPN、整合素ανβ3及ILK在EC中表达均呈阳性,与肿瘤恶性程度呈明显正相关;EC中三者表达呈正相关性,同时检测三者表达水平可能提高子宫内膜癌的检出率及综合预测预后。

益气血补肝肾方对整合素ανβ3在早孕小鼠子宫内膜中表达的影响

目的观察益气血补肝肾方对整合素ανβ3在早孕小鼠子宫内膜中表达的影响。方法采用免疫组织化学定位观察整合素ανβ3在早孕小鼠子宫内膜中的表达;采用实时荧光定量PCR在mRNA水平上检查整合素ανβ3在早孕小鼠子宫内膜中的表达。结果免疫组化结果显示,整合素ανβ3蛋白在妊娠早期小鼠表达于子宫内膜腔上皮、腺上皮细胞的细胞膜及胞浆中,呈棕黄色颗粒状。D1、D2表达最弱,D4表达明显增加,D5表达最强,D6表达减弱;实时荧光定量PCR结果显示,整合素ανβ3在中药组和对照组早孕小鼠子宫内膜中的表达随妊娠天数呈规律变化,在中药组的表达高于对照组,但差异无统计学意义。两组中D4和D5表达最强,与D1、D2、D6比较差异具有显著性(P<0.05),整合素αν在D5的表达显著高于D4(P<0.01)。结论益气血补肝肾方可改善子宫内膜的容受性,促进胚胎与子宫内膜发育的同步性,从而在胚胎着床过程中发挥重要作用。

整合素ανβ3和血管内皮生长因子在子宫内膜异位症中的临床研究

目的通过检测子宫内膜异位症患者整合素ανβ3和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨其在子宫内膜异位症的发病机制。方法采用免疫组化方法检测40例异位内膜、在位内膜中整合素ανβ3和VEGF的表达,并和30例正常子宫内膜作对照。结果异位内膜组整合素ανβ3阳性表达率为80%,在位内膜为62.5%,正常内膜组为16.67%;异位内膜VEGF阳性表达率为82.5%,在位内膜为50%.正常对照组为20%。异位内膜组整合素ανβ3和VEGF高于在位内膜组,在位内膜组二者水平则高于正常内膜组,差异有统计学意义(P<0.05)。异位内膜整合素ανβ3与VEGF表达呈正相关。结论整合素ανβ3与VEGF在异位内膜和在位内膜的异常表达,在子宫内膜异位症的发病过程中起着重要作用,二者可能存在协同作用,促进病变的进一步发展。

孕激素与子宫内膜胞饮突、整合素ανβ3及LIF的关系

月经周期的分泌期,孕激素将雌激素激活的子宫内膜由非容受态转入容受态。近年认为胞饮突、整合素ανβ3、白血病抑制因子(LIF)可做为子宫内膜具有容受性的标志。月经周期分泌中期,孕激素水平达高峰,胞饮突于此时充分表达,整合素ανβ3及细胞因子白血病抑制因子也极量表达。目前对于孕激素与胞饮突、整合素ανβ3、及白血病抑制因子关系的研究存在不一致的结果,体内外研究也未发现胞饮突、整合素ανβ3及白血病抑制因子与孕激素绝对值具有相关性,结果表明胞饮突、整合素ανβ3及白血病抑制因子表达调节复杂,尚需深入研究。

骨碎补及其主要成分对小鼠子宫内膜同源盒基因10 mRNA、白血病抑制因子和整合素ανβ3的影响

目的:探索骨碎补及其主要成分对胚泡着床障碍模型小鼠子宫内膜的影响。方法:实验动物分为7组:空白组、模型组、西药组I(补佳乐组)、西药组II(阿司匹林组)、骨碎补组、骨碎补总黄酮组、骨碎补柚皮苷组,以GnRHa+HMG+HCG方法造模,干预后检测各组相关指标的表达量。结果:骨碎补组及总黄酮组小鼠子宫内膜同源盒基因10(HOXA-10)mRNA表达明显增加(P<0.05);骨碎补组、总黄酮组及柚皮苷组白血病抑制因子(LIF)表达明显增加(P<0.05);骨碎补组整合素ανβ3表达明显增加(P<0.05),总黄酮组差异无统计学意义(P>0.05),但积分光密度值明显增加(P<0.05)。结论:骨碎补可能通过调节胚泡着床期子宫内膜HOXA 10、LIF、整合素ανβ3的表达,有利于胚泡对子宫内膜的黏附,从而改善子宫内膜容受性。总黄酮作为骨碎补药材的主要活性成分,亦可改善子宫内膜容受性。

整合素ανβ_3在肿瘤中的研究进展

整合素是细胞表面重要的黏附分子,介导细胞与胞外基质的相互作用,在肿瘤的发生、侵袭、转移以及肿瘤血管的形成过程中发挥重要的作用。随着对整合素的深入了解,很多整合素分子在肿瘤中的作用也被逐渐地认识,目前采用针对整合素不同分子的克隆抗体、整合素靶向用药及多种方法联合治疗等,通过调节整合素的生物学作用,促进肿瘤细胞凋亡,阻断肿瘤细胞侵袭迁移,抑制肿瘤血管的生成,从而达到治疗肿瘤的目的。这些研究发现对开拓肿瘤治疗新方案有着重要的意义。

抗人整合素ανβ_3 单抗E10鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体的构建和表达

为构建抗人整合素ανβ3单抗E10鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,并在噬菌体表面表达,采用PCR方法从整合素ανβ3单抗E10ScFv载体中,扩增重链可变区VH和轻链可变区VL基因。将VH基因与人重链恒定区CH1基因连接,VL基因与人CK基因连接,分别构建了鼠/人嵌合重链FD基因和轻链基因,将其克隆入pComb3,构建了鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,用辅助噬菌体VCSM13超感染,间接ELISA及竞争抑制ELISA检测鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体活性。结果成功构建了鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,并在噬菌体表面展示了可结合人整合素ανβ3抗原的鼠/人嵌合Fab抗体。

构建预设CDR3基因噬菌体抗体库筛选抗人整合素ανβ_3 mAb的人源化Fab

目的:构建预设CDR3基因的噬菌体抗体库,通过抗原表位导向选择方法筛选抗人整合素ανβ3单克隆抗体(mAb)人源化Fab。方法:将鼠mAbLCDR3重组到人轻链可变区文库中并与人/鼠嵌合重链Fd基因配对构建杂合噬菌体抗体库,用固相人整合素ανβ3抗原筛选人源化轻链基因。再用所获人轻链基因与移植有鼠mAbHCDR3的人重链Fd基因配对构建人源噬菌体抗体库,筛选人源化Fab。结果:分别构建了库容为2.1×106和2×107的杂合噬菌体抗体库和人源噬菌体抗体库,筛选到3株人源Fab克隆。经间接ELISA及竞争抑制ELISA证实,能特异结合整合素ανβ3抗原,其中人源D5株Fab克隆的基因序列表明,人轻链可变区基因属VKIII亚群,人重链可变区基因属VH1亚群。结论:利用噬菌体抗体库技术,成功地进行了鼠抗人整合素ανβ3mAbE10人源化的改造,为进一步临床应用奠定了基础。

整合素ανβ_3、紧密连接蛋白claudin-1在宫颈鳞癌中的表达及临床意义

目的:本文是从研究整合素ανβ3和claudin-1蛋白在宫颈鳞癌不同分化程度中的表达情况,有利于对揭示其在宫颈鳞癌发展中的作用以及判断宫颈鳞癌预后。方法:本实验采用免疫组化法检测整合素ανβ3和claudin-1蛋白在宫颈鳞癌高分化及低分化样本中的表达情况。结果:整合素ανβ3在低分化组的表达强度显著高于高分化组(P<0.05)。claudin-1蛋白在高分化组的表达强度显著高于低分化组(P<0.05)。结论:整合素ανβ3在宫颈鳞癌的表达与病理分化程度之间的呈负相关,随着病理分化程度的降低,整合素ανβ3呈表达上调。claudin-1蛋白在宫颈鳞癌的表达与病理分化程度之间的呈正相关,随着病理分化程度的降低,claudin-1蛋白呈表达下调。整合素ανβ3,claudin-1蛋白有可能对评价宫颈鳞癌患者预后有一定临床意义.

小干扰RNA沉默白血病抑制因子基因对整合素ανβ_3表达的影响

目的白血病抑制因子(leukemia inhibitor factor,LIF)及整合素ανβ3被认为是子宫内膜容受性的标记分子。探讨小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对LIF的抑制效应及该效应对整合素ανβ3表达的影响。方法化学合成3条LIF siRNA(LIFsiRNA-1、LIFsiRNA-2和LIFsiRNA-3),用脂质体法转染到小鼠子宫内膜细胞中,实时荧光定量PCR筛选出最佳干扰片段和最优转染浓度,RT-PCR检测整合素ανβ3mRNA的表达水平,ELISA法检测细胞培养液中LIF蛋白,Western blot检测整合素ανβ3蛋白,从蛋白水平进行相关性分析。结果 siRNA转染后,LIFsiRNA-1 mRNA表达下调最明显(0.26±0.09),差异有统计学意义(P<0.01),且在一定范围内呈剂量依赖性,选择最优转染浓度70 nmol/mL,整合素ανβ3mRNA表达明显下降(0.53±0.23),差异有统计学意义(P<0.01);LIF蛋白[(2.47±0.03)ng/mL]及整合素ανβ3蛋白[(0.16±0.08)ng/mL]表达较对照组显著下调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 LIFsiRNA-1可很好地抑制LIF的表达,而LIF的沉默表达能有效抑制整合素ανβ3的表达,LIF和整合素ανβ3具有显著正相关性(P<0.01)。

种植窗期人子宫内膜LIF及整合素ανβ_3的表达及其与胚胎种植成功率的关系

目的探讨白血病抑制因子(LIF)与整合素ανβ3(Integrinανβ3)在子宫内膜的表达及其与人胚胎种植的关系。方法对42例拟行体外授精-胚胎移植(IVF-ET)妇女在IVF-ET前1周期采用免疫组化SP法和组织学积分H-score法对LIF和整合素ανβ3在种植窗期子宫内膜中的表达进行定位和半定量分析。按IVF-ET后是否妊娠将42例不孕患者分为2组:妊娠组和非妊娠组。结果种植窗期LIF和整合素ανβ3免疫组化H-score积分妊娠组分别为1.58±0.41和1.67±0.18,与非妊娠组(1.32±0.32和1.39±0.26)相比,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论种植窗期子宫内膜LIF和整合素ανβ3的表达减弱,会降低IVF-ET周期中胚胎种植的成功率。种植窗期子宫内膜LIF和整合素ανβ3的表达强弱可作为预测IVF-ET是否成功的指标之一。

二补助育汤及改良方对小鼠子宫内膜整合素ανβ3、SCF mRNA及HOXA-10 mRNA表达的影响

目的:观察二补助育汤及改良方对胚泡着床障碍模型小鼠子宫内膜整合素ανβ3、干细胞因子(SCF)mRNA及同源盒基因10(HOXA-10)mRNA表达的影响。方法:实验动物分为6组:空白组、模型组、补佳乐组、阿司匹林组、二补助育组、改良方组。建立小鼠胚泡着床障碍模型,于造模的同时给药,其后处死小鼠,检测小鼠子宫内膜各指标的表达量。结果:模型组小鼠子宫内膜整合素ανβ3、SCF mRNA、HOXA-10 mRNA表达均明显低于空白组(P<0.01);与模型组比较,改良方组、二补助育组小鼠子宫内膜整合素ανβ3、SCF mRNA、HOXA-10 mRNA表达均明显增加(P<0.01,P<0.05)。结论:二补助育汤及改良方均可提高子宫内膜容受性,其可能机制为通过上调整合素ανβ3、SCF mRNA及HOXA-10 mRNA的表达,从而改善子宫内膜容受性以利于胚泡对子宫内膜的黏附。

整合素αvβ3-RGDS位点相互作用介导纤维蛋白所致的肾小球内皮细胞表型变化

观察了体外培养的人类肾小球内皮细胞（ＧＥＣ）在纤维蛋白凝胶上的生长状态，以及在ＧＥＣ表面覆盖纤维蛋白凝胶对ＧＥＣ表型的影响，并进行了干预试验。结果发现，ＧＥＣ在纤维蛋白凝胶包被的细胞培养板上培养可以自发地形成典型的血管样结构。αｖβ３整合素单抗２３Ｃ６可以显著促进纤维蛋白介导的血管样结构的形成，而精氨酰－甘氨酰－天门冬氨酰－丝氨酸（ＲＧＤＳ）四肽、放线菌酮、放线菌素Ｄ对血管样结构的形成具有抑制作用（Ｐ＜０．００１）。在融合态ＧＥＣ细胞单层表面原位形成ｄｅｓ－ＡＡ－纤维蛋白或ｄｅｓ－ＡＡＢＢ－纤维蛋白凝胶均可引起ＧＥＣ单层结构破坏，肝素、放线菌酮、放线菌素Ｄ、非免疫小鼠ＩｇＧ以及精氨酰－甘氨酰－甘氨酰－丝氨酸（ＲＧＧＳ）四肽不能阻断纤维蛋白诱导的ＧＥＣ单层结构破坏，而２３Ｃ６、ＲＧＤＳ四肽可以完全阻断上述改变。说明αｖβ３整合素－ＲＧＤＳ位点相互作用介导了纤维蛋白所致ＧＥＣ单层结构破坏和血管样结构形成，ＲＧＤＳ四肽防治纤维蛋白所诱发的ＧＥＣ表型变化可能具有潜在的价值。

资冲颗粒含药血清对ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/FasL、IDO在人早孕绒毛膜组织中表达的影响

目的:探讨资冲颗粒对体外人早孕绒毛膜组织ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO基因表达的影响。方法:对体外培养的人早孕绒毛膜组织加入2%、5%、10%的鼠资冲颗粒含药血清培养24-72h。同时,在组织培养中加入孕酮作为阳性对照组而仅有基础培养基为空白组。采用Q-PCR技术检测ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO m RNA的表达。采用特异ELISA试剂盒定量检测ανβ3和HLA-G的蛋白表达。结果:10%含药血清处理的绒毛膜组织的ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L、IDO基因表达均显著高于阳性对照组及空白组(P<0.05)。10%含药血清处理的绒毛膜组织的ανβ3和HLA-G蛋白表达显著高于阳性对照组及空白组(P<0.05)。结论:资冲颗粒具有增加ανβ3、HLA-G、HOXA10、Fas/Fas L和IDO基因表达的作用,可能是该中药复方治疗不孕症分子生物学机制之一。

骨桥蛋白、整合素ανβ3在子宫内膜癌中的表达及意义

目的:探讨骨桥蛋白(OPN)、整合素ανβ3在子宫内膜癌的发生、发展中的作用。方法:采用免疫组织化学SP染色法。对20例正常增生期子宫内膜组织(NE)、20例子宫内膜不典型增生组织(AH)及45例子宫内膜腺癌组织(EC)中的OPN、整合素ανβ3表达进行检测,并评价其与子宫内膜腺癌临床病理特征的关系。结果:OPN和整合素ανβ3在NE、AH、EC中的阳性表达率分别为30.0%、45.0%、86.7%;15.0%、40.0%、75.6%;二者的表达从NE到EC的发展过程中逐渐增高;二者的表达随着子宫内膜腺癌的分化降低而增加,随临床分期、肌层浸润及淋巴结转移等方面的发展,其表达均显著增加,二者在EC中的表达呈正相关性。结论:①OPN和整合素ανβ3在EC中呈明显阳性表达,二者的表达与肿瘤的恶性程度呈明显的正相关。②EC中OPN、ανβ3表达呈正相关,同时检测OPN和整合素ανβ3有望提高子宫内膜癌的检出率及预测预后。