尼古丁对人牙周膜细胞基质金属蛋白酶-1、3表达的影响

目的:探讨尼古丁对体外培养人牙周膜细胞(hPDLCs)基质金属蛋白酶-1、3(MMP-1、3)表达的影响及可能机制。方法:采用原代组织块法培养hPDLCs,应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测尼古丁单独及联合应用α7亚型乙酰胆碱受体特异性拮抗剂α-银环蛇毒素(α-BTX)作用下,hPDLCs中MMP-1、3表达的变化。结果:尼古丁(10-4mol/L)作用于hPDLCs,其MMP-1、3mRNA及蛋白表达均有升高(P<0.05),此作用可被α-BTX(1.25×10-9mol/L)拮抗。结论:尼古丁可使体外培养的hPDLCs中MMP-1、3表达升高,此过程可能由α7nAChR通路介导。

银环蛇蛇毒毛细管电泳分离与鉴定

采用自制的毛细管电泳装置在 2 4m in内分离并测定了湖南银环蛇蛇毒 ,证明银环蛇蛇毒中含有 α-银环蛇毒素(α-BTX)和 β-银环蛇毒素 (β-BTX) 。

蛋白Ⅲ-α-银环蛇毒素融合蛋白表达质粒的构建及表达

目的构建适合选择感染性噬菌体(Selectivelyinfectivephage,SIP)技术筛选的蛋白Ⅲ-α-银环蛇毒素(α-Bungarotox-ins,α-BTXs)融合蛋白表达质粒。方法从银环蛇毒腺中提取总RNA,RT-PCR扩增α-BTXs基因,插入表达载体pTTMIN,转化E.coli XL1-Blue,IPTG诱导表达。经SDS-PAGE、Western blot及竞争抑制ELISA法检测融合蛋白的表达。结果获得的α-BTXs基因序列与相关报道完全一致;融合蛋白表达质粒构建正确;融合蛋白的表达量可达菌体总蛋白的20%,可与抗蛇毒素血清发生特异性反应,且保持了α-BTXs的抗原性。结论成功构建了蛋白Ⅲ-α-BTXs融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌中表达了融合蛋白,为利用SIP技术筛选抗α-BTXs人源抗体奠定了基础。