免疫调节剂CH2b对葡萄糖-6-磷酸异构酶混合肽段诱导的类风湿性关节炎小鼠的影响

目的:探究前期合成的含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂CH2b对葡萄糖-6-磷酸异构酶(Glucose-6-phosphate isomerase,GPI)混合肽段诱导的类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)小鼠发病的影响。方法:h GPI325-339、h GPI469-483多肽片段与完全弗氏佐剂充分乳化后,于DBA/1小鼠尾根部多点皮下注射,并用百日咳毒素加强免疫。然后分别用α-半乳糖神经酰胺(α-Gal Cer)和CH2b对模型小鼠进行干预,监测各组小鼠体重变化和足踝关节肿胀变化情况,关节组织苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色法观察炎细胞浸润情况,流式细胞技术(Fluorescence-activated cell sorting,FACS)检测全血中i NKT细胞频率变化,微量样本多指标流式蛋白定量技术(Cytometric bead array,CBA)检测血清中细胞因子TNF-α、IL-6、IL-4、IFN-γ水平。结果:与GPI混合肽段诱导的模型组相比,α-Gal Cer和免疫调节剂CH2b均可显著改善模型小鼠的体重增长缓慢、关节肿胀情况(P<0.05);炎性细胞浸润减少;且二者均可以显著提高RA小鼠体内i NKT细胞的频率,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05);α-Gal Cer、CH2b组可以降低模型小鼠炎症高峰期TNF-α、IL-6、IFN-γ水平,两组结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论:免疫调节剂CH2b通过激活i NKT细胞影响炎性细胞因子的分泌,缓解GPI混合肽段诱导的关节炎。

α-半乳糖神经酰胺负载DC促进CIK细胞对肝癌细胞的杀伤效应

目的:研究负载α-半乳糖神经酰胺(alpha-galactosylceramide,α-Gal Cer)的DC功能与成熟度的改变情况,探讨α-Gal Cer-DC与CIK共培养对CIK细胞表型、增殖活性及杀伤肝癌细胞效率的影响。方法:采用密度梯度离心法从人外周血中分离出单个核细胞,悬浮细胞诱导培养CIK细胞,贴壁细胞诱导培养DC;流式细胞仪检测α-Gal Cer负载DC的表型,Real-time PCR检测DC相关基因的mRNA表达改变。将α-Gal Cer-DC与CIK细胞共培养,流式细胞仪检测DC与CIK细胞表面标志物;锥虫蓝染色法检测CIK细胞的增殖倍数;Real-time PCR检测CIK细胞功能相关基因的表达情况;CCK-8试剂盒检测α-Gal Cer-DC对CIK杀伤Hep G2细胞的影响。结果:经过多种细胞因子诱导,可获得CIK细胞和成熟的DC;α-Gal Cer负载可促进DC成熟,DC表面标志物CD80、CD86、CD83和CD11c的阳性率均升高(P<0.05或P<0.01),表面趋化因子受体CCR-7、IL-12、IL-10的mRNA水平升高(P<0.05)。α-Gal Cer-DC与CIK共培养,可显著提高CIK细胞CD3+CD56+的表达和增殖活性(P<0.05或P<0.01),并显著提高INF-γ、IL-12、穿孔素和颗粒酶素B的mRNA表达水平(P<0.05或P<0.01);CIK、DC-CIK、α-Gal Cer-DC-CIK细胞对Hep G2细胞的杀伤作用随效靶比的升高而增强,在同一效靶比时α-Gal Cer-DC-CIK细胞对靶细胞的杀伤作用最强(P<0.05)。结论:α-Gal Cer负载可促进DC成熟,α-Gal Cer-DC与CIK共培养能促进后者增殖和成熟,能显著增强其对肝癌细胞的杀伤活性,为DC-CIK在肿瘤免疫治疗中的应用提供了实验依据。