重组人降钙素基因相关肽融合表达及纯化初步研究

采用大肠杆菌偏爱的密码子人工合成hαCGRP基因,构建了原核融合表达载体,对融合蛋白成功地进行了表达、纯化,Western免疫印迹验证该蛋白具有αCGRP抗原性,为下一步hαCGRP纯品的获得及动物实验的研究奠定基础。

重组人α降钙素基因相关肽的克隆与表达(英文)

通过PCR方法从人类基因组中扩增出编码hαCGRP的片段,将该片段定向克隆到pET-32a(+)载体上,构建pET-hαCGRP重组质粒。转化E.coli JM109菌株,利用酶切和测序方法筛选后,经IPTC诱导再转化E.coli BL21trxB(DE3)pLYsS菌株。SDS-PAGE和Western Blot分析表达产物,最后通过扩张蟾蜍肠系膜微循环血管实验来检测重组hαCGRP扩张血管的活性。结果表明,重组质粒含hαCGRP成熟肽编码基因序列(111bp),符合预想结果;表达出21 kD的融合蛋白,且主要以可溶性形式存在,其粗提物具有扩张血管能力。重组hαCGRP的成功表达为下一步纯化及研制基因工程药物奠定了重要基础。