牛乳中αs-、β-酪蛋白组分的分离

以新鲜脱脂牛乳为原料,在碱性条件下添加钙盐进行选择性沉淀分离αs-、β-酪蛋白组分,并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定分离效果。从CaCl2溶液终浓度、冷却温度和反复溶解﹑沉淀次数三个方面对αs-、β-酪蛋白的分离效果进行研究。结果表明:CaCl2溶液终浓度0.065mol/L,冷却温度2℃,经3次反复溶解﹑沉淀,分离得到的αs-酪蛋白组分纯度较高,可达83.33%,β-酪蛋白组分纯度为109.53%。

奶牛α_s-酪蛋白多克隆抗体的制备、纯化及鉴定

本试验旨在制备高纯度和特异性的奶牛αs-酪蛋白多克隆抗体,为鉴定奶牛乳腺合成的αs-酪蛋白提供试验材料。选用4只健康新西兰大白兔,每2周免疫1次奶牛αs-酪蛋白,待血清达到抗体效价后,对兔进行颈动脉放血并分离血清,利用饱和硫酸铵法和蛋白A树脂纯化抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)法分别用于鉴定纯化后抗体的纯度和特异性。结果表明,经过饱和硫酸铵法和蛋白A树脂2步纯化后得到了纯度较高的抗体,同时可以特异性结合奶牛αs-酪蛋白。本试验制得的抗体可以用于鉴定奶牛乳腺合成的αs-酪蛋白,为进一步研究奶牛αs-酪蛋白合成的调控提供了有效的科研材料。

基于α_s-酪蛋白特异性的牛乳总蛋白质ELISA定量检测方法的建立

本研究旨在建立牛乳中总蛋白质的ELISA定量检测方法,并评价该方法在牛乳掺假辨识中的应用效果。首先用αs-酪蛋白标准品免疫新西兰白兔,制备αs-酪蛋白特异性抗血清,并建立αs-酪蛋白的间接ELISA检测方法,结果显示血清效价为1∶640,αs-酪蛋白检测的线性范围是25-600 ng/ml,R2=0.999 5,回收率是96.6%-105.2%。再应用乳成分分析仪,凯氏定氮法和所建立的ELISA法测定8份来源不同的原料乳中总蛋白和αs-酪蛋白含量,结果显示不同牛乳中总蛋白质含量在0.029 2-0.029 8 g/ml,αs-酪蛋白含量在0.008 4-0.009 2 g/ml,占牛乳总蛋白质的比例恒定,平均为0.3,并用该系数建立牛乳中总蛋白质的定量方法。最后对5份人为兑水稀释、添加尿素、BSA和三聚氰胺的模拟掺杂牛乳样品进行检测,测定结果表明基于αs-酪蛋白的ELISA方法比乳成分分析仪法和凯氏定氮法具有更高的灵敏性和特异性,含氮添加物对测定结果无显著影响（P〉0.05）,更适合于作为原料乳及含乳产品中牛乳蛋白质的定量分析。

酪蛋白三种组分的酶解特性研究

酪蛋白由3种成分组成,即αs-酪蛋白,β-酪蛋白,κ-酪蛋白。本文对酪蛋白的三种组分进行分离,用SDSPAGE电泳进行检测,得到相对纯度分别为89.50%、96.51%、90.99%。酪蛋白三种组分用胰蛋白酶进行酶解,对酶解物的水解度和粒度分布进行测定,酶解物的粒度分布用激光粒度分析仪测定。得到的结论是:在三种组分的酶解物中,αs-酪蛋白酶解物的水解度最高,随着酶解时间的延长,αs-酪蛋白酶解物中的粒径越来越小。β-酪蛋白酶解物在前12h水解度增加最少,β-酪蛋白酶解物在前6h粒度变化也不明显。κ-酪蛋白酶解物的水解度以线性形势增加,且κ-酪蛋白酶解10min内,粒径变化明显。

酶联免疫法快速测定原料乳中α_s-酪蛋白质量浓度

用牛sα-酪蛋白纯品免疫新西兰白兔,制得兔抗牛sα-酪蛋白的多克隆抗体。以牛sα-酪蛋白包被抗原,自制抗体为一抗,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗,邻苯二胺(OPD)为底物,建立了牛乳中sα-酪蛋白的间接ELISA检测方法。检测的线性范围是25￣1200ng/mL,相关系数是0.9825,回收率在91.97%￣115.61%之间,证明可以用酶联免疫法简单快速地测定牛乳中的sα-酪蛋白,因为该蛋白在酪蛋白中质量浓度稳定,所以可以计算出牛乳中酪蛋白的质量浓度。显然该方法可以用于牛乳掺杂使假的鉴别和原料奶酪蛋白质量浓度是否合格的快速检测。

干酪素中α_s-酪蛋白组分分离

以干酪素为原料,以αs-酪蛋白的得率和纯度为指标,对传统Urea体系、Ca2+-低温体系分离αs-酪蛋白的方法进行比较分析,并综合两者的特点,建立Ca2+-Urea体系分离αs-酪蛋白的方法。Ca2+-Urea体系先采用pH值为7.0,Ca2+浓度0.05 mol/L条件处理去除原料中的κ-Cn;再用pH值为4.6,浓度为3.3 mol/L尿素溶液处理,去除β-和γ-Cn。结果表明,Ca2+-Urea提系优于Urea体系和Ca2+-低温体系,最终αs-酪蛋白的得率为38.3%,纯度为97.8%。

α_s-酪蛋白酶法水解制备阿片肽的工艺研究

以αs-酪蛋白为原料,采用酶解法提取具有高纯度和高活性的阿片肽,采用正交试验优化提取工艺,确定最佳酶水解操作参数。试验表明:αs-酪蛋白在复合蛋白酶作用下,有较高水解度,其水解的最佳条件为:温度50℃,pH8.0,底物浓度3%,反应时间3h,酶用量2%。

水解牛乳蛋白技术及其产物的功能特性

牛乳含有丰富的蛋白质,是人类食品中重要的营养成份来源。然而与人乳相比,牛乳中酪蛋白含量比例较高,而且牛乳中的αs-酪蛋白(αs-CN)和β-乳球蛋白(β-LG)是人乳中没有的,因此以牛乳直接喂养的婴儿可能会出现消化不良和过敏症状。对牛乳蛋白进行水解的研究消除过敏引起了人们极大的关注。牛乳蛋白的水解主要是通过各种酶,此外还有化学水解(如酸水解),物理水解(如加热、高压)等方法。蛋白质水解后易产生苦味,通过控制水解度或包埋等方法可将苦味降低到不易感觉到的水平。本文还描述了牛乳蛋白水解率测定方法、牛乳蛋白水解产物分析技术,水解牛奶蛋白产物的功能特性及在婴儿配方产品及功能食品中的应用前景。

测定三种乳蛋白抗原性间接竞争ELISA法的建立

为检测牛乳中主要致敏蛋白的抗原性,以商业兔抗αs-酪蛋白、兔抗β-乳球蛋白、兔抗牛血清白蛋白（BSA）多克隆抗体为一抗,标记HRP的羊抗兔Ig G为二抗,TMB为底物,对牛乳中主要致敏蛋白：αs-酪蛋白、β-乳球蛋白、BSA建立间接竞争ELISA（ic ELISA）。结果表明,αs-酪蛋白、β-乳球蛋白及BSA抗原包被质量浓度分别为5,2和2μg/m L。一抗最佳稀释倍数分别为1∶800,1∶400和1∶300。建立的三种蛋白的ic ELISA的线性检测范围分别为15.625~1 000 ng/m L、31.25~1 000 ng/m L和62.5~2 000 ng/m L。三种乳蛋白包被条件均为4℃,12 h,酶标二抗的最佳稀释倍数为1∶1 200,以1%的明胶作为封闭液。三种乳蛋白ic ELISA的3个浓度添加试验的批内及批间最大变异率分别为5.16%,7.46%,6.6%和6.78%,6.81%,6.06%,三种蛋白建立的ic ELISA回收率在94.34%~109.92%。表明所建立的方法重复性好,灵敏度高,可用于牛乳中此三种蛋白致敏性的测定。