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意大利蜜蜂幼虫防御素Defensin-2在吡虫啉胁迫下的表达分析
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作者 王远晨 王悦弟 +2 位作者 陈兰春 秦启倩 李治 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期1603-1614,共12页
防御素在昆虫免疫抵抗农药危害中具有重要作用,但蜜蜂防御素Defensin在幼虫抵御吡虫啉毒性中的作用鲜有报道。生物信息学鉴定意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica防御素Defensin-2,分析其在吡虫啉暴露下蜜蜂幼虫中的表达模式,探讨其在... 防御素在昆虫免疫抵抗农药危害中具有重要作用,但蜜蜂防御素Defensin在幼虫抵御吡虫啉毒性中的作用鲜有报道。生物信息学鉴定意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica防御素Defensin-2,分析其在吡虫啉暴露下蜜蜂幼虫中的表达模式,探讨其在幼虫抵御吡虫啉中的作用。生物信息学方法分析Defensin-2的氨基酸序列特征、功能域、高级结构、互作靶标、系统进化聚类关系;RT-qPCR分析幼虫口服暴露吡虫啉后Defensin-2基因的表达特征。结果显示,Defensin-2蛋白由104个氨基酸残基组成,相对分子质量为11.9 kDa,等电点PI为8.54,具有信号肽和跨膜结构域。多重序列比对显示Defensin-2属于防御素样超家族。系统进化分析表明,Defensin-2聚类于蜜蜂家族;RT-qPCR分析表明,在半致死浓度吡虫啉暴露下,Defensin-2基因在24 h时显著上调表达后在72 h时下调表达,但在环境浓度吡虫啉暴露后72 h,Defensin-2表达量呈显著上调。Defensin-2可能在意大利蜜蜂幼虫抵御吡虫啉毒性中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 吡虫啉 意大利蜜蜂幼虫 defensin-2 生物信息学
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CGD-1, a defensin-related peptide derived from marine Chinese medicine Ostreae concha, inhibits the Gram-negative bacteria by membrane attack
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作者 Wei-Tao Wang Qing-Zhou Meng +7 位作者 Long-Fen Li Wei-Yi Meng Xin Yin Pei-Pei Zhao Meng-Meng Wang Jing-Li Ren Xue-Kui Xia Chun-Lei Li 《TMR Pharmacology Research》 2023年第2期38-45,共8页
There is an increasing interest in discovering new antibacterial agents derived from nature to enhance the treatment of various bacterial infections.Defensins and their derived peptide fragments exhibit significant an... There is an increasing interest in discovering new antibacterial agents derived from nature to enhance the treatment of various bacterial infections.Defensins and their derived peptide fragments exhibit significant antibacterial activity without any cytotoxic effects,making them attractive features for potential novel antibacterial therapeutics.Crassostrea gigas,a traditional seafood that has been used worldwide for centuries,has its shells applied in Chinese medicine as Ostreae concha.In this study,bioinformatics analysis was used to obtain a novel antibacterial peptide,CGD-1,derived from marine Chinese medicine Ostreae concha.The physicochemical characterization and circular dichroism analysis results demonstrated that CGD-1 assembled into anα-helical structure in a simulated membrane environment,and it displayed antibacterial action against Gram-negative bacteria.The minimal inhibitory concentrations against both Pseudomonas aeruginosa ATCC27853 and Escherichia coli ATCC25922 were 25μM.CGD-1 was able to efficiently permeate the cell membrane.Changes in bacterial cell morphology were evaluated using a field emission scanning electron microscope.The results suggested that CGD-1 exerted its antibacterial activity through permeabilizing and disrupting the bacterial cell membrane.Therefore,CGD-1 may have potential applications in fighting against pathogenic bacteria such as P.aeruginosa and E.coli. 展开更多
关键词 defensin antibacterial activity HEMOLYMPH Crassostrea gigas Ostreae concha
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血清HBD-3、DCR3对复杂性肾结石患者经皮肾镜碎石术后尿路感染的预测价值
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作者 魏峰 周广军 +2 位作者 李双辉 王艳艳 季智杰 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2024年第4期342-346,共5页
目的分析血清β-防御素-3(HBD-3)、诱骗受体3(DCR3)对复杂性肾结石患者经皮肾镜碎石术后尿路感染的预测价值。方法选取2020年1月—2022年12月河北省沧州中西医结合医院收治的112例复杂性肾结石患者为研究对象进行回顾性研究,所有患者均... 目的分析血清β-防御素-3(HBD-3)、诱骗受体3(DCR3)对复杂性肾结石患者经皮肾镜碎石术后尿路感染的预测价值。方法选取2020年1月—2022年12月河北省沧州中西医结合医院收治的112例复杂性肾结石患者为研究对象进行回顾性研究,所有患者均行经皮肾镜碎石术(PCNL),根据术后感染情况将患者分为非尿路感染组52例、尿路感染组60例。比较两组一般资料及HBD-3、DCR3水平。受试者工作特征(ROC)曲线分析C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、HBD-3、DCR3水平对术后尿路感染的预测价值。结果与非尿路感染组比较,尿路感染组的HBD-3[(0.77±0.08)ng/mL vs.(1.36±0.25)ng/mL,P=0.001]、DCR3[(4.68±0.53)ng/mL vs.(13.21±0.28)ng/mL,P=0.001]水平较高。多因素logistics回归分析显示,泌尿道手术史、术前尿路感染、手术时间、导尿管留置时间、结石负荷、抗菌药物种类、合并肾功能障碍、术中通道类型CRP、PCT、HBD-3、DCR3为患者术后尿路感染的影响因素(P<0.05)。ROC曲线显示,CRP、PCT、CRP联合PCT准确度分别为70.54%、72.32%、78.57%;HBD-3、DCR3、HBD-3联合DCR3准确度分别为69.64%、75.89%、86.61%。结论复杂性肾结石患者术后尿路感染与多种因素相关,且术后尿路感染患者HBD-3、DCR3表达水平较高,联合检测对术后尿路感染具有较高的预测价值。 展开更多
关键词 复杂性肾结石 经皮肾镜碎石术 β-防御素-3 诱骗受体3 尿路感染 C反应蛋白 降钙素原
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糖尿病大鼠肝脏β-defensins表达及血清炎症因子的变化 被引量:7
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作者 蒙广星 袁强 +2 位作者 王毅军 孟化 白飞虎 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第7期591-594,共4页
目的:观察糖尿病大鼠病程中肝脏β-defensins的表达和血清炎症因子的变化,探讨在糖尿病状态时两者之间可能存在的影响.方法:实验大鼠分为普通饲料组、高糖饲料组、糖尿病4wk组和12wk组,采集血液检测血清炎症因子TNF-α,IL-1β及IL-10和... 目的:观察糖尿病大鼠病程中肝脏β-defensins的表达和血清炎症因子的变化,探讨在糖尿病状态时两者之间可能存在的影响.方法:实验大鼠分为普通饲料组、高糖饲料组、糖尿病4wk组和12wk组,采集血液检测血清炎症因子TNF-α,IL-1β及IL-10和血糖、胰岛素、三酰甘油等相关生化指标;收集肝脏标本,RT-PCR及Western Blot方法检测β-defensins的表达.结果:与对照组相比,糖尿病大鼠整个病程中都存在致炎因子TNF-α,IL-1β激活及抗炎因子IL-10的削弱.肝脏中表达β-defensins1(rBD-1)和β-defensins2(rBD-2).rBD-1呈少量表达,糖尿病病程中rBD-2表达呈减少趋势.高血糖或糖基化反应可能干扰rBD-2的组成性表达及炎症因子产生的诱导性表达.结论:糖尿病大鼠病程中存在慢性炎症,高血糖或糖基化反应干扰了炎症刺激重要的小分子抗菌肽β-defensins在肝脏表达的信号通路,使其表达下调. 展开更多
关键词 Β-防御素2 糖尿病 实验性 炎症因子 实时定量PCR 大鼠
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黄芪甲甙对吸烟大鼠气道-defensin 2表达的影响 被引量:5
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作者 孙贝贝 文富强 +5 位作者 王海霞 陈磊 王洵 李继琼 汪涛 徐丹 《西部医学》 2008年第3期482-484,共3页
目的了解熏烟对大鼠肺组织β-防御素2(β-defensin2)表达的影响,黄芪甲甙对β-defensin2表达的调控作用及其可能的机制。方法大鼠接受染毒柜被动吸烟三周,建立熏烟模型。分别给于黄芪甲甙1.2mg/kg·d,2.4mg/kg·d,3.6mg/kg... 目的了解熏烟对大鼠肺组织β-防御素2(β-defensin2)表达的影响,黄芪甲甙对β-defensin2表达的调控作用及其可能的机制。方法大鼠接受染毒柜被动吸烟三周,建立熏烟模型。分别给于黄芪甲甙1.2mg/kg·d,2.4mg/kg·d,3.6mg/kg·d灌胃。提取肺组织和支气管肺泡灌洗液,采用免疫组化、RT-PCR等方法检测β-defensin 2的表达水平。结果吸烟可以使气道上皮β-defensin 2表达升高,使BALF中炎细胞总数,中性粒细胞,巨噬细胞,淋巴细胞数增高。黄芪甲甙可以降低吸烟诱导的β-defensin 2的高表达,减少支气管肺泡灌洗液白细胞及中性粒细胞,淋巴细胞的数量。结论黄芪甲甙下调吸烟诱导的气道上皮β-defensin 2的高表达,减轻气道炎症。 展开更多
关键词 Β-防御素 黄芪甙 吸烟 肺部感染
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家蝇幼虫抗菌肽Defensins基因的克隆与序列分析 被引量:10
6
作者 许琴英 金小宝 +1 位作者 徐建华 朱家勇 《热带医学杂志》 CAS 2004年第5期513-517,共5页
目的克隆家蝇幼虫的抗菌肽defensins基因并对其进行序列分析。方法提取家蝇幼虫总RNA,根据家蝇成虫defensins基因cDNA序列设计一对引物,RT-PCR扩增目的基因片段,T-A克隆后测序,应用相关生物信息学软件对该序列进行分析。结果RT-PCR扩增... 目的克隆家蝇幼虫的抗菌肽defensins基因并对其进行序列分析。方法提取家蝇幼虫总RNA,根据家蝇成虫defensins基因cDNA序列设计一对引物,RT-PCR扩增目的基因片段,T-A克隆后测序,应用相关生物信息学软件对该序列进行分析。结果RT-PCR扩增出一条约310bp的目的片段,序列分析表明,其与家蝇成虫防御素基因同源性高达97%,核酸序列变异主要发生在信号肽区域。结论成功克隆及分析了家蝇幼虫防御素基因全长编码区cDNA序列,为其下一步的重组表达和生物活性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 家蝇幼虫 defensins基因 序列分析 克隆
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家蝇抗菌肽Defensin基因同向串联表达载体的构建和鉴定 被引量:9
7
作者 王婷婷 金小宝 +1 位作者 朱家勇 刘雷山 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第2期3-5,共3页
目的:构建家蝇抗菌肽Defensin基因多拷贝串联体,并克隆到甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K上。方法:PCR法扩增家蝇抗菌肽Defensin基因成熟肽片断,目的片断的上游5′端带有EcoRⅠ和NheⅠ位点,下游5′端带有NotⅠ和XbaⅠ位点,目的片断首先克隆... 目的:构建家蝇抗菌肽Defensin基因多拷贝串联体,并克隆到甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K上。方法:PCR法扩增家蝇抗菌肽Defensin基因成熟肽片断,目的片断的上游5′端带有EcoRⅠ和NheⅠ位点,下游5′端带有NotⅠ和XbaⅠ位点,目的片断首先克隆入pMD18-T载体,利用pMD18-T载体的NdeⅠ位点和目的片断上的一对同尾酶(NheⅠ和XbaⅠ),多次酶切连接,串联成多拷贝的Defensin成熟肽基因,再用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,最后克隆入甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K。结果:PCR鉴定、酶切鉴定和DNA测序证明多拷贝基因重组质粒构建成功。结论:该方法能方便高效地获得所需的多拷贝基因,为进一步进行高效表达打下基础。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 defensin基因 同向串联 多拷贝
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家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的增殖、凋亡和周期的影响 被引量:4
8
作者 程璟侠 焦莉萍 +3 位作者 赵瑞君 原发家 杜斌 王文建 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2014年第2期97-103,共7页
采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法,分析家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2体外生长增殖与凋亡的影响,用倒置光学显微镜检测defensin对人肝癌细胞HepG2和人正常心肌细胞H9C2生长增殖情况的影响,并采用流式细胞术检测defensin对... 采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法,分析家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2体外生长增殖与凋亡的影响,用倒置光学显微镜检测defensin对人肝癌细胞HepG2和人正常心肌细胞H9C2生长增殖情况的影响,并采用流式细胞术检测defensin对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响。结果显示,家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的生长有抑制作用,对人正常心肌细胞H9C2无抑制作用。通过显微镜观察HepG2细胞凋亡的形态变化,MTT检测发现defensin对肿瘤细胞的增殖抑制率呈剂量反应关系和时间反应关系。defensin能诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡,并且影响人肝癌细胞HepG2的细胞周期。家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2具有增殖抑制作用及凋亡作用,对正常人心肌细胞H9C2基本无抑制作用。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 defensin 增殖 凋亡
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中国南方汉族人β-defensin-1基因多态性与慢性阻塞性肺疾病易感性的关系 被引量:1
9
作者 周敏 黄绍光 +4 位作者 万欢英 李彪 程齐俭 戎霞君 邓伟吾 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期888-890,共3页
目的 探讨中国南方汉族人 β- defensin- 1基因多态性与慢性阻塞性肺疾病 (COPD)易感性的关系。方法 采用限制性片段长度多态性 (RFLP)技术检测 β defensin -1外显子 2基因型在 12 0例COPD吸烟患者和10 8例非COPD吸烟者中的频率。结... 目的 探讨中国南方汉族人 β- defensin- 1基因多态性与慢性阻塞性肺疾病 (COPD)易感性的关系。方法 采用限制性片段长度多态性 (RFLP)技术检测 β defensin -1外显子 2基因型在 12 0例COPD吸烟患者和10 8例非COPD吸烟者中的频率。结果 COPD组同源野生型 (G/G)、杂合型 (G/A)和同源突变型 (A/A)频率分别为 82 .5 0 %、10 .83%和 6 .6 7% ,非COPD组的频率分别为 95 .37%、3.70 %和 0 .93% ,两组基因频率分布的差异有显著性 (P <0 .0 1)。两组等位基因的分布差异也有显著性 (等位基因G频率分别为 87.92 %∶97.2 2 % ;等位基因A频率分别为 12 .0 8%∶2 .78% ;P <0 .0 1) ;G→A的突变率随COPD病情的严重度增加而上升。结论 β defensin 1基因外显子 2的 16 5 4位多态性与中国南方汉族人群COPD易感性可能有关 ,而且可能还影响COPD的进展。 展开更多
关键词 COPD 易感性 基因多态性 慢性阻塞性肺疾病 汉族人群 外显子2 等位基因 中国南方 RFLP 限制性片段长度多态性
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白纹伊蚊和埃及伊蚊defensin A基因克隆及序列分析 被引量:6
10
作者 刘先凯 赵彤言 +2 位作者 朱礼华 董言德 陆宝麟 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2002年第4期216-221,共6页
应用PCR技术从白纹伊蚊和埃及伊蚊基因组中扩增出defensinA基因 ,并与文献报道的defensinA的5个型的cDNA序列进行同源性比较 ,发现此两序列中存在内元 ;从埃及伊蚊体内扩增的片段为蚊虫defen sinAl的前体AaDefAl;从白纹伊蚊体内扩增的... 应用PCR技术从白纹伊蚊和埃及伊蚊基因组中扩增出defensinA基因 ,并与文献报道的defensinA的5个型的cDNA序列进行同源性比较 ,发现此两序列中存在内元 ;从埃及伊蚊体内扩增的片段为蚊虫defen sinAl的前体AaDefAl;从白纹伊蚊体内扩增的片段为defensinA的 1个新型 ,命名为DefA6。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 埃及伊蚊 defensin A 基因克隆 序列分析 昆虫防御素 CDNA序列
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家蝇抗菌肽Defensin在毕赤酵母中的表达及活性鉴定 被引量:3
11
作者 金小宝 王婷婷 +4 位作者 朱家勇 李小波 马艳 褚夫江 卢雪梅 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期194-197,共4页
拟通过酵母系统表达家蝇抗菌肽Defensin基因,并初步鉴定其抗菌活性。采用限制性内切酶SacⅠ将分泌型重组表达质粒pPIC9K/Defensin线性化后,运用氯化锂转化法将其转入巴斯德毕赤酵母GS115中,行G418加压筛选和PCR鉴定;所得阳性转化子转至... 拟通过酵母系统表达家蝇抗菌肽Defensin基因,并初步鉴定其抗菌活性。采用限制性内切酶SacⅠ将分泌型重组表达质粒pPIC9K/Defensin线性化后,运用氯化锂转化法将其转入巴斯德毕赤酵母GS115中,行G418加压筛选和PCR鉴定;所得阳性转化子转至摇瓶,28℃条件下0.5%甲醇诱导表达,连续诱导培养4 d后,上清液进行Tricine-SDS-PAGE检测表达效果,并采用琼脂糖孔穴扩散法检测表达产物对大肠杆菌E.coliK12D31的抑制作用。结果显示,家蝇抗菌肽Defensin在毕赤酵母中得到了成功表达,表达产物对大肠杆菌E.coliK12D31的生长有抑制作用。说明酵母系统适合抗菌肽的表达。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 defensin 毕赤酵母 表达
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鱼源β-防御素的生物信息学分析 被引量:1
12
作者 仇梓颖 马运琪 《国外医药(抗生素分册)》 CAS 2024年第2期136-144,I0001,共10页
鱼源β-防御素是抗菌肽家族的重要成员,具有广谱抗菌、不损伤真核细胞、不易产生耐药性等特点,可应用于渔业养殖和临床医学等方面,但目前面临着提取工艺复杂、含量较低、提取所用蛋白酶需求量大及以生产成本高等问题。因此分析其理化性... 鱼源β-防御素是抗菌肽家族的重要成员,具有广谱抗菌、不损伤真核细胞、不易产生耐药性等特点,可应用于渔业养殖和临床医学等方面,但目前面临着提取工艺复杂、含量较低、提取所用蛋白酶需求量大及以生产成本高等问题。因此分析其理化性质、结构和杀菌功能,对构造便捷和低廉的衍生肽具有重要的意义。本研究结合生物信息学软件和工具预测分析其理化性质、二级结构、磷酸化和糖基化位点、疏水性、细胞内定位和信号肽。结果提示鱼源β-防御素均为疏水性阳离子型抗菌肽。β-防御素抗菌肽通过C端亲水作用与细菌膜结合,引导N端氨基酸的疏水作用插入膜磷酸二酯键中改变细胞膜的通透性使细菌生物膜破裂而死亡,其中AJA33388.1(红牙鳞鲀)破膜杀菌能力最强。经检测发现β-防御素耐热性,稳定性相对较好,尤其是ACO88907.1(鳜鱼)和QNV47918.1(条石鲷)具有极高耐热性,可将其应用于杀菌以外的多方面领域。其二级结构以α螺旋为主,具有一定的刚性结构,且均具有3~4个磷酸化位点,分布于细胞外,具有19~20个氨基酸的信号肽序列,指导其在胞外蛋白产物的分泌等。通过预测分析结构,可为β-防御素的深入研究和应用以及多领域的抗菌肽衍生物设计提供思路。 展开更多
关键词 Β-防御素 生物信息学 理化性质 二级结构
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β-防御素在子宫内膜癌及孕激素调控下癌细胞中的表达及意义
13
作者 王福生 吴思楠 +4 位作者 陈雪晶 苏佳佳 李媛 李晶晶 李晓丹 《现代医药卫生》 2024年第18期3061-3066,共6页
目的 探究β-防御素(DEFB)1、DEFB4A差异表达在子宫内膜癌(EC)发展预测中的价值,以及是否参与孕激素对EC的抑制。方法 利用TIMER、GEPIA2平台172例EC患者转录组测序数据进行DEFB1、DEFB4A差异表达及生存分析。EC Ishikawa细胞采用不同... 目的 探究β-防御素(DEFB)1、DEFB4A差异表达在子宫内膜癌(EC)发展预测中的价值,以及是否参与孕激素对EC的抑制。方法 利用TIMER、GEPIA2平台172例EC患者转录组测序数据进行DEFB1、DEFB4A差异表达及生存分析。EC Ishikawa细胞采用不同浓度孕酮进行处理,比较分析各浓度组DEFB1、DEFB4A表达情况。结果 EC组织DEFB1、DEFB4A表达水平均显著高于正常组织,约40个月后,DEFB1、DEFB4A高、低表达组患者的生存率差异均加大。孕酮处理后,10~(-6) mol/L组DEFB1 mRNA和蛋白水平在24、48 h后均较对照组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05),10~(-6) mol/L组DEFB1表达在48 h后较24 h无显著变化,差异无统计学意义(P>0.05)。各浓度组DEFB4A变化不显著,差异均无统计学意义(P>0.05)。孕酮作用下EC Ishikawa细胞活性与DEFB1表达呈显著负相关(P<0.05)。结论 DEFB1可能是预测EC发展的关键因子,可提示孕激素治疗的复发风险或将成为EC的抑制靶点。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 孕激素 Β-防御素 调控 预测 抑制
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犬β防御素CBD122原核表达及其抗病毒活性研究
14
作者 任艳蓉 李传峰 +3 位作者 孟春春 朱杰 赵建军 刘光清 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期135-143,共9页
防御素为抗菌肽家族成员,且具有良好的抗菌抗病毒功能。由于抗生素的大量使用其作用已大大降低,而防御素具有良好的抗病毒应用前景,因此本研究将犬β防御素CBD122利用大肠杆菌表达重组蛋白rCBD122,经纯化后在体外细胞上进行抗重组水泡... 防御素为抗菌肽家族成员,且具有良好的抗菌抗病毒功能。由于抗生素的大量使用其作用已大大降低,而防御素具有良好的抗病毒应用前景,因此本研究将犬β防御素CBD122利用大肠杆菌表达重组蛋白rCBD122,经纯化后在体外细胞上进行抗重组水泡性口炎病毒(recombinant Vesicular stomatitis virus expressing green fluorescent protein,rVSV-GFP)和犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)活性测定,从而评价重组蛋白抗病毒效果。研究结果显示,37℃诱导5 h,IPTG浓度为0.5 mmol/L时rCBD122表达量较高,且大量表达于菌体破碎后菌液上清液,纯化后表达量为0.22 mg/mL。rCBD122抗rVSV-GFP和CDV感染活性测定结果显示,rCBD122抗VSV-GFP病毒效价为1.17×10^(4)IU/mL;rCBD122抗CDV感染效价为2.34×10^(4)IU/mL。rCBD122可在24 h特异性抑制CDV野毒株SD(14)7在易感细胞上的复制水平(P<0.01),与病毒感染组相比,病毒RNA载量下降16.31倍。因此,本研究应用大肠杆菌表达系统成功表达了重组蛋白rCBD122,且其具有较好的抗病毒活性,为后续防御素作用机制研究以及新型抗病毒治疗药物研发奠定了基础。 展开更多
关键词 犬防御素 原核表达 大肠杆菌 抗病毒 活性
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大劣按蚊感染约氏疟原虫defensins基因的克隆及生物信息学分析 被引量:1
15
作者 张锡林 王英 +1 位作者 陈继德 宋蓓 《成都医学院学报》 CAS 2011年第2期94-98,共5页
目的为探讨大劣按蚊对约氏疟原虫侵入的免疫反应,克隆大劣按蚊的抗菌肽defensins基因并对基因序列进行生物信息学分析。方法分别提取感染疟原虫的大劣按蚊的蚊胃总RNA,根据冈比亚按蚊defensins基因设计、合成简并引物,进行RT-PCR扩增目... 目的为探讨大劣按蚊对约氏疟原虫侵入的免疫反应,克隆大劣按蚊的抗菌肽defensins基因并对基因序列进行生物信息学分析。方法分别提取感染疟原虫的大劣按蚊的蚊胃总RNA,根据冈比亚按蚊defensins基因设计、合成简并引物,进行RT-PCR扩增目的片段,TA克隆后测序并进行序列分析。结果用简并引物的RT-PCR扩增出约氏疟原虫感染的大劣按蚊的189bp目的片段,序列分析表明与冈比亚按蚊defensins有87%同源性,与白蚊伊蚊defensinsD有88%同源性,为大劣按蚊的defensins基因。结论成功克隆并分析了大劣按蚊抗菌肽defensins基因,为进一步的重组表达和研究按蚊抗菌肽的生物活性奠定基础。 展开更多
关键词 大劣按蚊 defensins基因 克隆 序列分析
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家蝇防御素defensin cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达 被引量:9
16
作者 金丰良 许小霞 +2 位作者 赵士炜 古德祥 张文庆 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期86-89,共4页
提取家蝇总RNA,RT-PCR扩增编码家蝇防御素defensin的cDNA,克隆并测定了其序列,将该cDNA序列与酵母表达载体pPICZαA重组,构建酵母分泌型表达载体pPICZα-de,电激法转化毕赤酵母(Pichia pasto-ris)受体菌GS115。经表型筛选和PCR鉴定证明... 提取家蝇总RNA,RT-PCR扩增编码家蝇防御素defensin的cDNA,克隆并测定了其序列,将该cDNA序列与酵母表达载体pPICZαA重组,构建酵母分泌型表达载体pPICZα-de,电激法转化毕赤酵母(Pichia pasto-ris)受体菌GS115。经表型筛选和PCR鉴定证明目的片段已稳定整合到酵母染色体基因组中。在含不同浓度的Zeoc in平板上筛选到高拷贝整合的转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达,用Tric ine-SDS-PAGE确定了表达产物的正确性,琼脂孔穴平板扩散法、比浊法测定了表达产物的活性,对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus具有一定的杀菌活性。 展开更多
关键词 家蝇 防御素 毕赤酵母 诱导表达 活性测定
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Defensin抗菌肽的序列特性分析 被引量:6
17
作者 孙雁霞 邬晓勇 +2 位作者 何钢 宋芹 王跃华 《成都大学学报(自然科学版)》 2010年第2期101-103,共3页
对defensin抗菌肽进行了生物信息学分析.一级结构表明其具有典型的昆虫防御素特征.二级结构分析表明defensin抗菌肽中主要的结构元件为α-螺旋,但有例外.信号肽及导肽分析结果显示defensin抗菌肽均属于分泌型蛋白.通过对不同物种defensi... 对defensin抗菌肽进行了生物信息学分析.一级结构表明其具有典型的昆虫防御素特征.二级结构分析表明defensin抗菌肽中主要的结构元件为α-螺旋,但有例外.信号肽及导肽分析结果显示defensin抗菌肽均属于分泌型蛋白.通过对不同物种defensin抗菌肽的分析结果表明,非阳离子抗菌肽的作用机制可能是疏水作用力起主导作用或者是对细菌胞内酶结构与功能、对细菌胞内信号转导的影响有关. 展开更多
关键词 defensin类抗菌肽 序列特性 作用机制
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家蝇抗菌肽Defensin基因在COS-7细胞中的瞬时表达 被引量:4
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作者 金小宝 朱家勇 +1 位作者 马艳 刘雷山 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第4期10-11,共2页
目的:研究家蝇抗菌肽Defensin cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达情况,并对表达产物的抗菌作用进行初步检测。方法:以Defensin基因为模板设计特异性引物,扩增在C端含6×His标签的Defensin开放阅读框序列,将此序列与真核表达载体p... 目的:研究家蝇抗菌肽Defensin cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达情况,并对表达产物的抗菌作用进行初步检测。方法:以Defensin基因为模板设计特异性引物,扩增在C端含6×His标签的Defensin开放阅读框序列,将此序列与真核表达载体pcDNA3.1(+)进行重组,构建重组质粒pcDNA3.1(+)/Defensin-His 6。以阳离子脂质体LipofectamineTM2000为载体,对宿主细胞COS-7进行重组质粒pcDNA3.1(+)/Defensin-His 6和空载体pcDNA3.1(+)的转染,72h后收集细胞培养上清液,表达产物经His-Trap HP亲合层析柱分离纯化和Western blotting鉴定后,进行杀菌活性的初步检测。结果:重组质粒pcDNA3.1(+)/Defensin-His 6组细胞培养上清液的纯化物,行Western blotting得到了分子量大小约为10.0kD的单一目的条带,与预期相符;杀菌活性试验中发现:该纯化物对大肠杆菌E.coliK12D31具有一定的杀菌活性。结论:家蝇抗菌肽Defensin基因在宿主细胞COS-7中得到了正确表达。 展开更多
关键词 天蚕素 真核表达 转染 杀菌活性
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白纹伊蚊和埃及伊蚊防御素(defensin)成熟肽基因克隆及结构推测 被引量:5
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作者 刘先凯 赵彤言 +2 位作者 朱礼华 董言德 陆宝麟 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2003年第1期30-34,共5页
应用PCR技术从白纹伊蚊和埃及伊蚊基因组中扩增出defensin成熟肽基因并对其分子生物学特性进行分析 ,发现埃及伊蚊 (BoraBora株、海口株 )、白纹伊蚊 (成都株、宜兴株、广州株 )推导的氨基酸序列与埃及伊蚊defensinA相同 ;通过Chou Fas... 应用PCR技术从白纹伊蚊和埃及伊蚊基因组中扩增出defensin成熟肽基因并对其分子生物学特性进行分析 ,发现埃及伊蚊 (BoraBora株、海口株 )、白纹伊蚊 (成都株、宜兴株、广州株 )推导的氨基酸序列与埃及伊蚊defensinA相同 ;通过Chou Fasman预测法对defensinA成熟肽的二级结构进行预测 ,可以看出在defensin成熟肽氨基酸序列的 15~ 2 3位有一个α 螺旋 ,35~ 39位有一个 β 折叠 ,32~ 34位有一个转角 ; 展开更多
关键词 白纹伊蚊 埃及伊蚊 防御素 成熟肽基因 蚊虫 昆虫防御素 克隆 二级结构 三级结构
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猪β-防御素-2在黄曲霉毒素B1致小鼠肠道炎症损伤中的作用
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作者 张曼 王坤丽 +4 位作者 王艳慧 李庆豪 李明 边思琦 皇甫和平 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第7期36-43,共8页
旨在探究猪β-防御素-2(pBD-2)在黄曲霉毒素B1(AFB1)致鼠肠道损伤中的作用。本试验以4周龄KM小鼠为研究对象,将体重相近的30只健康小鼠随机均分为5组,分别为空白对照组(不做任何处理)、DMSO组(1%DMSO灌胃)、AFB1组(0.3 mg/kg AFB1灌胃)... 旨在探究猪β-防御素-2(pBD-2)在黄曲霉毒素B1(AFB1)致鼠肠道损伤中的作用。本试验以4周龄KM小鼠为研究对象,将体重相近的30只健康小鼠随机均分为5组,分别为空白对照组(不做任何处理)、DMSO组(1%DMSO灌胃)、AFB1组(0.3 mg/kg AFB1灌胃)、pBD-2组(0.03 mg/kg pBD-2灌胃)和AFB1+pBD-2组(0.3 mg/kg AFB1灌胃28 d后再用0.03 mg/kg pBD-2灌胃28 d),试验持续56 d,通过观察小鼠肠道结构的变化以及采用qPCR和免疫荧光的方法检测炎症相关因子的表达水平。结果:与对照组相比,AFB1组小鼠的平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI)均呈现显著下降趋势(P<0.05),料重比(F/G)降低,但差异不显著(P>0.05),而小鼠饲喂pBD-2以后ADG和ADFI均较AFB1组显著增加(P<0.05);HE染色结果显示,AFB1导致小鼠空肠黏膜显著损伤,并伴有严重的肠壁变薄,肠绒毛萎缩、稀疏,肠绒毛高度与隐窝深度之比、相对肠绒毛数量及肠壁厚度均显著降低(P<0.05),而使用pBD-2处理小鼠损伤模型,肠道结构可见显著恢复(P<0.05);qPCR和免疫荧光染色结果表明,AFB1处理小鼠可显著上调白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),但对白细胞介素-8(IL-8)的表达水平出现了下调趋势,而用pBD-2处理小鼠损伤模型后可显著下调炎症因子的表达水平,说明pBD-2对AFB1造成的肠黏膜炎症具有缓解作用。本研究结果为AFB1中毒的防控及pBD-2在畜牧生产中的应用提供了科学依据。 展开更多
关键词 猪β-防御素-2 黄曲霉毒素B1 肠道炎症 小鼠
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