天然紫草萘醌类化合物与苯胺和苯硫酚的亲核反应

研究了天然紫草萘醌类化合物β-二甲基丙烯酰阿卡宁在没有还原剂和有还原剂存在下与亲核试剂的反应,合成了七个新的萘茜类衍生物.比较了β-二甲基丙烯酰阿卡宁与合成衍生物的生物活性.

HPLC法测定紫草中萘醌类成分

目的建立紫草中3种萘醌类成分的HPLC测定方法。方法采用流动相制备供试液;色谱柱为Kromasil100-5C18(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈-水-甲酸(700∶300∶0.5),流速为1.0 ml·min-1,检测波长为516 nm,柱温为室温。结果左旋紫草素、乙酰紫草素、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁分别在0.016～0.32、0.14～2.8、0.16～3.2μg范围内具良好线性关系,平均回收率为分别为102.57%、100.16%、97.99%;6批商品紫草饮片中3种萘醌类成分的含量波动较大。结论该方法简便易行,能同时测定紫草中3种萘醌类成分,可用于紫草的质量控制。

紫草中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁提取和含量测定及其稳定性研究

目的测定不同产地的紫草中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁(以下简称阿卡宁)的含量,比较不同溶剂对紫草中阿卡宁的提取率,并对阿卡宁的乙醇溶液稳定性进行考察。方法采用高效液相色谱法测定阿卡宁的含量,色谱柱为Dikma Diamonsil C18柱(200mm×4.6mm,5μm),以乙腈-水-甲酸(700:300:0.5)为流动相,流速1mL·min-1,检测波长275nm。测定了内蒙紫草、新疆紫草和云南紫草中阿卡宁的含量,考察了75%乙醇、乙醇、石油醚和液体石蜡对紫草中阿卡宁的提取率;将阿卡宁0.1mg·mL-1乙醇溶液于冰箱4℃存放,定期进样测定,并与新配制时测定的峰面积比较。结果测定的三种紫草中,以新疆紫草含量最高;乙醇和石油醚对阿卡宁的提取率高而75%乙醇和液体石蜡的提取率低;阿卡宁的乙醇溶液随存放时间的增加而峰面积变小。结论提取溶剂对紫草中阿卡宁提取率影响较大;由于阿卡宁溶液的不稳定性,选择阿卡宁作为评价含紫草药材制剂的指标成分并不合适。

紫草药材化学成分的测定

目的建立用高效液相色谱法同时测定中药材紫草中左旋紫草素和β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁含量。方法色谱柱为Hypersil BDS C18柱(250mm×4．6mm),室温,流动相为乙腈-水-甲酸为(680:320:5),流速为1．0mL·min-1,检测波长为516nm。结果左旋紫草素在0．0711～14．255μg的范围内线性关系良好(r=0．9999),β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁在8．71～174．5βg范围内线性关系良好(r=0.9999),两个成分平均回收率均在95～105％之间。结论该方法快速、简便,分离度好,能同时测定中药材紫草中左旋紫草素和β,β－二甲基内炳酰阿卡宁含量,可用于紫草的质量控制。

滇紫草愈伤组织中的紫草色素

滇紫草(Onosma paniculatum Bur.et Franch)的幼嫩根茎经二步法诱导产生的愈伤组织.含有较原植物较高的紫草色素。经薄层层析鉴定,此种紫草色素由6种单体组成,其 Rf 值与原植物中的紫草色素各类衍生物非常近似。进一步采用硅胶 H 柱层析进行分离,最后得到4种单体。经结构分析证明它们是:去氧紫色素(deoxyshikonin)、β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁(β,β-dimethylacrylalkannin)、乙酰阿卡宁(acetylakannin)和β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁(β-acetoxyisovalerylalkannin)。

紫草中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量测定及不同来源药材质量评价的初步研究

目的:建立HPLC法测定紫草中β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量,并对药材质量进行初步评价方法:色谱柱:Cosmosil 5C_(18)-MS-II(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水-甲酸(430:570:0.5);检测波长:275nm;流速:1.0 ml·min对8批紫草药材进行定量测定,并提取特征图谱信息,进行聚类分析和主成分分析。结果:各紫草样品中β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量均大于3 mg·g^(-1),符合现行标准规定,但成分谱存在一定的差异。通过多变量统计分析,试验样品可分为新疆紫草、未知品种的进口紫草与滇紫草;除β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁外,其他成分对其质量评价也起着重要作用。结论:目前市售紫草药材的基原与质量均有较大差异,本方法准确、可靠,可用于其综合评价研究。

不同市场紫草相关质量的比较研究

目的研究不同市场紫草的相关质量。方法收集10个市场紫草,采用Agilent ZORBAX Extend-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水-甲酸(70∶30∶0.05)为流动相,检测波长275 nm,柱温25℃,1 ml/min,测定不同市场紫草β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量;采用冷浸法,以95%乙醇为溶剂,测定不同市场紫草浸出物的含量。结果 10个不同市场紫草β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁和浸出物含量差异明显,且只有两个市场紫草β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量>0.30%。结论当前市售紫草质量不一,而且很多市场紫草质量令人担忧。

正交试验法优选青紫消斑颗粒的醇提工艺

目的优选青紫消斑颗粒中青黛、紫草、丹参的醇提工艺。方法以β,β-二甲基丙烯酰胺阿卡宁转移率为考察指标,采用L_9(3~4)正交试验优选紫草等醇提工艺。采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatogra-phy,HPLC)测定阿卡宁含量,流动相乙腈∶水∶甲酸(70∶30∶0.05),检测波长:275 nm。结果最佳提取工艺为95%乙醇,40℃温浸2次,第1次加10倍量,第2次加8倍量,每次24 h。结论该工艺稳定可行,适用于青紫消斑颗粒的工业化生产。

不同产地蒙紫草中左旋紫草素和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁含量测定及质量标准研究

目的建立测定蒙药蒙紫草中左旋紫草素和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁含量的方法,并制订其质量标准。方法采用显微鉴别法,对药材样品的横切面和粉末进行鉴别;采用薄层色谱法对药材样品中左旋紫草素和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁进行定性分析;测定药材样品中水分、灰分、浸出物的含量;采用紫外分光光度法测定药材样品中左旋紫草素的含量,检测波长为516 nm;采用高效液相色谱法测定药材样品中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量,色谱柱为Thermo Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%甲酸水溶液(70∶30,V/V),流速为1.0 m L/min,检测波长为275 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。结果药材样品横切面和粉末显微特征明显;薄层色谱图中可见左旋紫草素和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的特征斑点,且斑点分离清晰。左旋紫草素质量浓度在5~50μg/m L(R^(2)=0.9999)范围内与吸光度线性关系良好,β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的质量浓度在10~200μg/m L(R^(2)=0.9996)范围内与峰面积线性关系良好;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2.00%;左旋紫草素和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的平均加样回收率分别为101.23%和100.16%,RSD分别为2.01%和2.88%(n=9)。根据1-7号批次药材拟订蒙紫草的质量标准,羟基蒽醌总色素(以左旋紫草素计)含量不得低于1.00%,β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁含量不得低于0.15%;蒙紫草中水分含量不得超过12.00%,总灰分含量不得超过8.00%,酸不溶性灰分含量不得超过2.00%,水溶性浸出物含量不得低于30.00%,醇溶性浸出物含量不得低于10.00%。结论该方法操作简便,结果准确,重复性高,稳定性好,可用于蒙药蒙紫草中左旋紫草素和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量测定和质量控制。

紫草醇提工艺优化研究

目的优选紫草的醇提工艺,确定最佳提取工艺参数。方法采用HPLC法,以β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁为检测指标,用正交实验法考察了4种因素(乙醇浓度、乙醇用量、温浸时间、温浸次数)对其含量的影响。结果紫草的最佳提取工艺条件为加10倍量95%乙醇,于50℃温度下搅拌浸泡3次,每次60 min。结论 制备工艺合理,便于生产,可推广应用。

蓝蓟滇紫草的质量标准研究

目的 制定蓝蓟滇紫草的质量标准。方法 采集16批不同来源的蓝蓟滇紫草样品,对其进行外观性状观察、粉末显微鉴别和薄层色谱(TLC)鉴别,并对药材杂质、水分、总灰分、酸不溶性灰分进行检查。采用紫外-可见分光光度法测定药材中羟基萘醌总色素的含量;采用高效液相色谱法测定药材中左旋紫草素和β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量。结果 蓝蓟滇紫草药材及其粉末呈紫红色,显微可见非腺毛单细胞、栓化细胞、薄壁细胞和网纹导管等。TLC结果显示供试品色谱与对照品色谱相应位置上的斑点颜色及显色变化一致。暂定蓝蓟滇紫草药材水分、总灰分及酸不溶性成分分别不得过13.0%、18.0%、6.0%;羟基萘醌总色素含量不得少于0.80%,左旋紫草素含量不得少于0.06 mg/g,β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁含量不得少于0.60 mg/g。结论 所建标准可为科学评价蓝蓟滇紫草药材的质量提供参考。

基于新疆紫草中β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁含量变化的浓缩工艺研究

目的探索新疆紫草中以β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁为指标的制剂浓缩工艺的稳定性研究。方法采用动态平行取样,HPLC检测法,以β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁为考察指标,系统考察其热稳定性规律,用于浓缩过程中工艺参数的确定。结果当温度在60~80℃时,随加热温度升高,紫草提取液中阿卡宁的保留率降低;在固定温度下,随加热时间的延长,阿卡宁的保留率降低;当乙醇浓度为10%~80%时,在含醇量一定的条件下,随加热时间的延长,阿卡宁的保留率降低;当乙醇浓度低于30%时,阿卡宁在溶液中极不稳定。结论紫草药材提取后进行浓缩时,温度应控制在65℃以下,采用少量、短时间的方式进行浓缩。

基于“辨色论质”的新疆紫草质量评价研究

目的:测量紫草的色泽,测定紫草中6个主要紫色素类成分(乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素)的含量,研究新疆紫草色泽与6个主要紫色素成分含量的相关性。方法:采用分光测色仪测定样品粉末的L、a、b值用于表征紫草的色泽。国际照明委员会(CIE)制定了Lab颜色模型,是人类视觉的数字化描述,L值越大表示亮度越大,a值增大表示偏红减小表示偏绿,b值增大表示偏黄减小表示偏蓝;采用高效液相色谱法(HPLC)测定紫色素类成分的含量,使用SPSS软件计算L、a、b值与6个主要紫色素含量的相关程度。结果:135批样品乙酰紫草素的含量为0.01%~3.39%,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁含量为0.00%~1.95%,去氧紫草素含量为0.00%~0.23%,异丁酰紫草素含量为0.01%~1.13%,异戊酰紫草素含量为0.02%~2.88%,β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁含量为0.01%~2.17%。紫草药材的L(黑_白)色度值与乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁和异丁酰紫草素3个成分的含量呈显著负相关关系,斯皮尔曼相关系数在-0.138和-0.222之间;a(绿_红)色度值与β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰阿卡宁的含量均呈现显著的正相关,斯皮尔曼相关系数在0.176和0.355之间;b(蓝-黄)色度值与乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰阿卡宁均呈现显著的相关性,其中,与β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁呈正相关,系数为0.290,与其余4个成分呈负相关,系数在-0.325和-0.633之间。结论:建议紫草(新疆紫草)的含量测定项修订为β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁不得少于0.30%并且异丁酰紫草素不得少于0.29%。

新疆紫草野生品与栽培品的质量比较研究

目的:对新疆紫草野生品与栽培品的质量进行比较研究,包括性状对比和结合化学计量学分析新疆紫草野生品与3个不同地区栽培品的差异性成分。方法:分别采集新疆紫草野生品与栽培品,对其性状进行对比;采用Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-0.05%甲酸水为流动相,检测波长275 nm,流速0.2 mL·min^(-1),对48批野生品和栽培品中的右旋紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、异丁酰紫草素、β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁和异戊酰紫草素6个成分进行含量测定,并结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)分析野生品和栽培品中的差异性成分。结果:新疆紫草野生品与栽培品在性状上存在较大差异,建立的含量测定方法线性关系良好,r>0.999,平均加样回收率93.4%~102.9%,RSD<3.0%,不同批次新疆紫草中6个成分含量差异较大,其中野生品中右旋紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁含量均明显高于栽培品,说明野生品与栽培品还存在一定的差异;建立的PCA模型可区分野生品和栽培品,且通过OPLS-DA确定了异丁酰紫草素和β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁是野生品和栽培品中的2个差异性成分。结论:通过对比野生品和栽培品的木心大小、栓皮卷曲程度以及特异性气味,可对二者进行初步鉴别;建立的含量测定方法重复性好,专属性强,稳定可行;确定了新疆紫草野生品与3个不同地区栽培品的差异性成分,为新疆紫草的质量控制提供依据,为扩大紫草药源提供了思路。

紫草油的质量标准改进研究

目的：提升紫草油的质量标准。方法：采用薄层色谱（TLC）法对紫草进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁（以下简称阿卡宁）进行含量测定。结果：TLC斑点清晰,分离度好,阴性对照无干扰;阿卡宁的检测浓度在12.225-195.600μg·ml^-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r=0.999 7）,平均回收率为99.80%（RSD=1.05%,n=6）。结论：提升后的标准可以用于紫草油的质量控制。

HPLC法测定紫草中β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量

目的:建立测定紫草中β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁含量的方法。方法:采用改进后的高效液相色谱法,以流动相制备供试品溶液。色谱柱为Kromasil100-5C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水-甲酸(700∶300∶0.5),流速为1.0mL·min-1,检测波长为275nm。结果:β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的进样量在0.16～3.20μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9999);平均回收率为99.46%,RSD=1.90%(n=6)。结论:该方法简便、易行,方法验证符合要求,可用于紫草的含量测定。

紫草总萘醌的闪式提取工艺优选

目的:优选紫草中总萘醌的闪式提取工艺。方法:以紫草总萘醌和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁转移率为指标,采用L9(34)正交试验考察溶剂用量、提取时间、提取电压对闪式提取工艺的影响,并与渗漉法进行比较。结果:最佳提取工艺为分别加14,8倍量95%乙醇于140 V电压下提取2次,每次2 min;总萘醌和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁平均转移率分别为90.72%,70.68%。渗漉法中总萘醌和β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁平均转移率分别为79.03%,65.43%。结论:闪式提取法优于渗漉法,前者适用于紫草总萘醌的提取,优选的工艺稳定可行,具有良好的应用前景。

藏紫草的生药学研究及其含量测定

目的建立藏紫草的质量标准。方法考证文献、鉴别与测定含量。结果确定了藏紫草为紫草科植物长花滇紫草Onosma hookeri Clarke var.longiflorum Duthie和细花滇紫草Onosma hookeri C.B.Clarke的干燥根,建立了藏紫草TLC鉴别和HPLC测定含量的方法,初步设定了藏紫草所含β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量限度。结论所用方法可显著地提高藏紫草质量的可控性。

不同医疗机构紫草饮片质量评价

目的:调查不同医疗机构的紫草饮片的质量。方法:参照中国药典2010年版的方法,用薄层色谱法对购自不同医疗机构的紫草进行鉴别,采用紫外分光光度法、高效液相色谱法对上述紫草饮片进行含量测定。结果:通过对紫草饮片样品与对照品的薄层色谱比较,确定紫草饮片的薄层色谱中含有与对照品相同斑点,用紫外分光光度法测定出左旋紫草素成分含量均符合中国药典规定,但含量差异很大;β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁的线性方程为Y=23 372 X+77 437,r=0.999 7,β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁在7.5～500.0μg.mL-1范围内线性关系良好,平均回收率为98.39%,RSD为1.09%。用高效液相色谱法测定出7个紫草样品中有6个β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁成分含量高于中国药典2010年版规定的最低限量。结论:紫草饮片含量差异很大。.1345.

复方紫草油的质量标准改进研究

目的:改进复方紫草油的质量标准。方法:采用薄层色谱(TLC)法对紫草进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定β,β二甲基丙烯酰阿卡宁的含量。结果:TLC斑点清晰,分离度好,阴性对照无干扰;β,β-二甲基丙烯酰阿卡宁的检测浓度在2.345～28.140μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率为99.95%,RSD=1.11%(n=9)。结论:改进的标准可用于复方紫草油中紫草的质量控制。